Avaliação da biocompatibilidade de uma membrana de pericárdio bovino acelular e seu potencial como carreador de osteoblastos / Evaluation of the biocompatibility of an acellular bovine pericardium membrane and its potential as an osteoblast scaffold

A biocompatibilidade de uma membrana de pericárdio bovino foi avaliada em tecido subcutâneo de camundongos 3,7, 15, 30 e 60 dias após a implantação. Os componentes celulares da resposta inflamatória, a degradação da membranae as características do colágeno foram analisadas em cortes histológicos corados pela hematoxilina-eosina, tricrômico de Masson e Picro-Sírius, respectivamente. Para verificar seu potencial como carreador celular, osteoblastos humanos(hFOB1.19, ATCC) foram semeados sobre a membrana e mantidos em DMEM/F12 por 7 dias. Os resultados in vitro mostraram que os osteoblastos proliferaram em monocamada na superfície da membrana, mas sem penetrar em seu interior. A análise dos cortes histológicos demonstrou 3 dias após a implantação apenas a formação da rede de fibrina. Aos 7 dias, o material implantado estava circundado por células inflamatórias mononucleares, com pouca penetração celular no seu interior. Após 15 dias foi observado um intenso infiltrado inflamatório em contato e dentro do material,bem como sinais de degradação interna e externa. No período de 30 dias, o material, em processo bastante avançado de absorção, estava totalmente tomado por fibroblastos e macrófagos. Aos 60 dias pós-implantação, o material não foi maisdetectado em quaisquer dos animais e a tecido subcutâneo apresentava-se normal. Os cortes corados com Picro-Sírius e observados sob luz polarizada mostraram o remodelamento tecidual. Em conclusão, a membrana de pericárdio é bioabsorvívele biocompatível, porém, in vitro, não proporciona uma adequada matriz tridimensional para osteoblastos.

The biocompatibility of a pericardium membrane was evaluated in the subcutaneous tissue of mouse killed 3, 7, 15, 30 and 60 days post implantation. The cellular components of inflammatory infiltrate, the membrane degradation, and the collagen characteristic were analyzed in histological sections stained with hematoxilyn and eosin, Tricromic of Masson and Sirius Red, respectively. The potential features as a tissue engineering scaffold was tested in vitro using human osteoblasts (h.Fob 1.19, ATCC) seeded over the membrane and maintained for 7 days in DMEM/F12. We observed in vitro the monolayer proliferation of osteoblasts, but without penetrating in the membrane. The histological sections showed after 3 days of implantation only the presence of a fibrin net. At the 7-day period, mononuclear inflammatory cells were observed around the implant, but a few one were observed inside the membrane. After 15 days the inflammatory infiltrate was more intense than in the previous period and the cells were inside and in close contact to the material showing evident signs of internal and external degradation. The implant degradation was intense after 30 days and theresidual material was fulfilled of fibroblasts and macrophages. No signs of membrane were observed after 60 days in any animals and the subcutaneous tissue presented normal aspect. Sirius Red staining at polarized light had evidenced the tissue remodeling throughout the experimental periods. In conclusion, the pericardium membrane is bioabsorbable and biocompatible, but, in vitro, do not fulfill the requirements as a tridimensional scaffold to osteoblast.

Purification and characterization of a low-molecular-weight bovine kidney acid phosphatase

A relative low molecular mass bovine kidney acid phosphatase was purified 1,640-fold to homogeneity, with 7 percent recovery. The purified enzyme (specific activity 100 mumol min-1 mg-1) was electrophoretically homogeneous with a relative molecular massa of 17.8 kDa, as determined by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. A broad pH optimum of 4.0-5.5 and a maximal enzyme activity at 60 degrees Celsius were determined for the p-nitrophenyl phosphate hydrolysis. Apparent Km values of 0.14 mM, 0.4 mM, 0.3 mM and 7.9 mM were obtained, at 37 degrees Celsius and pH 5.0, for the best substrates p-nitrophenyl phosphate, beta-naphtyl-phosphate, flavin mononucleotide and tyrosine-phosphate, respectively. The enzyme activity was enhanced by guanosine but inhibited by ZnCl2 and CuSO4, p-cloromercuribenzoate and ammonium molybdate. Vanadate (Ki 0.47 muM), pyridoxal 5'-phosphate (Ki 2.2 muM), inorganic phosphate (Ki 0.77 mM) are competitive inhibitors. Both glycerol and methanol increased significantly the acide phosphatase activity, acting as good phosphate acceptors in the transphosphorylation reaction.

Threonyl-tRNA synthetase from bovine liver: purification and kinetic properties in the ATP-pyrophosphate exchange reaction

Treonil-RNA sintetase (E.C. 6.1.1.3) foi purificada quase à homogeneidade de fígado bovino cerca de 500 vezes com um rendimento de 48%. Duas bandas de pesos moleculares 90.000 e 82.000, respectivamente, foram obtidas por eletroforese em gel em presença de dodecil sulfato de sódio. A enzima tem um ponto isoelétrico de 5,2 por eletroforese em gel de poliacrilamida contendo anfoline. Utilizando-se a reaçäo de intercâmbio ATP-PPi foram determinadas as condiçöes ótimas de ensaio e os valores aparentes de Km. através da mesma reaçäo foram também observados efeitos de cátions divalentes e diaminas em substituiçäo ao Mg2+ e efeitos de reagentes sulfidrílicos