Panorama da qualidade biológica da água destinada ao tratamento dialítico em pacientes sob cuidados críticos em Unidades de Terapia Intensiva / Overview of the biological quality of water intended for dialysis treatment in patients under critical care in Intensive Care Units

A incidência da lesão renal aguda caracteriza-se como evento frequente em pacientes críticos internados em Unidades de Terapia Intensiva e está associada ao aumento de mortalidade, causando grande impacto à Saúde Pública. As intercorrências clínicas são minimizadas com intervenções dialíticas, acarretando a exposição do paciente a volumes expressivos de água tratada durante a terapia renal em leito. As análises microbiológicas e de determinação de endotoxinas bacterianas em amostras de água tratada e em soluções de dialisato foram executadas em dois hospitais públicos do município de São Paulo, seguindo metodologias analíticas preconizadas em compêndios oficiais. A avaliação demonstrou que a porcentagem de resultados satisfatórios no período de 2010 a 2022 variou entre 35,2 a 100% e de 40 a 100% para as unidades hospitalares I e II para a água tratada, respectivamente; e, 100% para as soluções de dialisato para a unidade hospitalar I. A eficácia de ações delineadas pelas equipes técnicas das unidades hospitalares, na adequação da água destinada à terapia dialítica, aponta para a importância em estimular outras instituições hospitalares na padronização e implantação de melhoria contínua de seus sistemas de tratamento de água para uso em procedimento dialítico, prevenindo riscos adicionais aos pacientes expostos à terapia renal.

The incidence of acute kidney is high among critically ill patients admitted to Intensive Care Units and is associated with increased mortality, having a major impact on public health. Clinical complications are minimized with dialysis interventions, which expose patients to significant volumes of treated water during in-bed renal therapy. Microbiological analyzes and determination of bacterial endotoxins were performed on treated water samples and dialysate solutions in two public hospitals in São Paulo city, using analytical methodologies recommended in official compendia. The evaluation showed that the percentage of satisfactory results for treated water ranged from 35.2% to 100% in Hospital Unit I and from 40% to 100% in Hospital Unit II between 2010 and 2022. For dialysate solutions in Hospital Unit I, the percentage of satisfactory results was 100% during the same period. The effectiveness of actions implemented by the technical hospital teams, in adapting water for dialysis therapy, points to the importance of encouraging other hospital institutions to standardize and implement a program of continuous improvement for their water treatment systems used in dialysis procedures. This will help to prevent additional risks to patients exposed to renal therapy.

Panorama da qualidade biológica da água destinada ao tratamento dialítico em pacientes sob cuidados críticos em Unidades de Terapia Intensiva / Overview of the biological quality of water intended for dialysis treatment in patients under critical care in Intensive Care Units

A incidência da lesão renal aguda caracteriza-se como evento frequente em pacientes críticos internados em Unidades de Terapia Intensiva e está associada ao aumento de mortalidade, causando grande impacto à Saúde Pública. As intercorrências clínicas são minimizadas com intervenções dialíticas, acarretando a exposição do paciente a volumes expressivos de água tratada durante a terapia renal em leito. As análises microbiológicas e de determinação de endotoxinas bacterianas em amostras de água tratada e em soluções de dialisato foram executadas em dois hospitais públicos do município de São Paulo, seguindo metodologias analíticas preconizadas em compêndios oficiais. A avaliação demonstrou que a porcentagem de resultados satisfatórios no período de 2010 a 2022 variou entre 35,2 a 100% e de 40 a 100% para as unidades hospitalares I e II para a água tratada, respectivamente; e, 100% para as soluções de dialisato para a unidade hospitalar I. A eficácia de ações delineadas pelas equipes técnicas das unidades hospitalares, na adequação da água destinada à terapia dialítica, aponta para a importância em estimular outras instituições hospitalares na padronização e implantação de melhoria contínua de seus sistemas de tratamento de água para uso em procedimento dialítico, prevenindo riscos adicionais aos pacientes expostos à terapia renal. (AU)

The incidence of acute kidney is high among critically ill patients admitted to Intensive Care Units and is associated with increased mortality, having a major impact on public health. Clinical complications are minimized with dialysis interventions, which expose patients to significant volumes of treated water during in-bed renal therapy. Microbiological analyzes and determination of bacterial endotoxins were performed on treated water samples and dialysate solutions in two public hospitals in São Paulo city, using analytical methodologies recommended in official compendia. The evaluation showed that the percentage of satisfactory results for treated water ranged from 35.2% to 100% in Hospital Unit I and from 40% to 100% in Hospital Unit II between 2010 and 2022. For dialysate solutions in Hospital Unit I, the percentage of satisfactory results was 100% during the same period. The effectiveness of actions implemented by the technical hospital teams, in adapting water for dialysis therapy, points to the importance of encouraging other hospital institutions to standardize and implement a program of continuous improvement for their water treatment systems used in dialysis procedures. This will help to prevent additional risks to patients exposed to renal therapy. (AU)

Evaluación in vivo de la pirogenicidad de bioproductos fúngicos con potencial prebiótico / In vivo pyrogenicity evaluation of fungal bioproducts with prebiotic potential / Avaliação in vivo da pirogenicidade de bioprodutos fúngicos com potencial prebiótico

RESUMEN Introducción: Los productos naturales con actividad farmacológica requieren de evaluaciones preclínicas que justifiquen su empleo sobre una base científica. El ensayo de pirógenos es una prueba dentro de la Farmacología de Seguridad que se realiza para determinar la presencia de endotoxinas y constituye un método valioso, para demostrar la seguridad de bioderivados con potencial prebiótico en el campo de la inmunonutrición. Objetivo: Evaluar la pirogenicidad de bioproductos fúngicos de Pleurotus ostreatus (extractos acuosos del micelio y cuerpos fructíferos) y un biopreparado de levadura Kluyveromyces marxianus, empleando el ensayo de pirógenos en conejos Nueva Zelanda. Método: Se ensayaron concentraciones de 1,0 y 10,0 mg/mL de cada muestra por vía endovenosa en dosis de 0,5 y 5,0 mg/kg de peso. El diseño experimental cumplió las buenas prácticas de laboratorio según lo establecido por el International Council for Laboratory Animals Science y se realizó de acuerdo a los procedimientos normalizados de trabajo del Centro de Toxicología y Biomedicina, Santiago de Cuba. Resultados: Los extractos de Pleurotus ostreatus y el biopreparado de levadura (0,5 mg/kg) no mostraron signos de pirogenicidad. En los resultados del biopreparado (5,0 mg/kg), los valores de temperatura caen en un rango de incertidumbre, según la Farmacopea de Estados Unidos (USP) y se sugirió repetir el estudio. Conclusiones: Los extractos de Pleurotus ostreatus y el biopreparado de Kluyveromyces marxianus (0,5 mg/kg) no indujeron un aumento de temperatura significativo en los animales, lo cual sugiere que en estos bioproductos no existen niveles de endotoxinas que puedan provocar pirogenicidad.

ABSTRACT Introduction: Natural products with pharmacological activity require preclinical evaluations to justify their uses scientifically. The pyrogen assay is a safety pharmacology test performed to determine the presence of endotoxins and it is a valuable method to demonstrate the bio-derivative products safety and their prebiotic potential in the field of immunonutrition. Objective: To evaluate the pyrogenicity of fungal bioproducts from Pleurotus ostreatus (aqueous extracts from mycelium and fruiting bodies) and a biopreparation from Kluyveromyces marxianus yeast, using a pyrogen assay in New Zealand rabbits. Method: Concentrations of 1.0 and 10.0 mg/mL of each sample were tested intravenously at doses of 0.5 and 5.0 mg/kg body weight. The experimental design complied with good laboratory practices as established by the International Council for Laboratory Animal Science and was carried out according to the standard work procedures of the Centro de Toxicología y Biomedicina, Santiago de Cuba. Results: Pleurotus ostreatus extracts and the yeast biopreparation (0.5 mg/kg) showed no signs of pyrogenicity. In the biopreparation results (5.0 mg/kg), temperature values fall in the uncertainty range according to the United States Pharmacopoeia (USP), and therefore it was suggested to repeat the study. Conclusions: Pleurotus ostreatus extracts and Kluyveromyces marxianus biopreparation (0.5 mg/kg) did not induce a significant temperature increase in the animals, thereby suggesting that there are no endotoxin levels in such bioproducts that could cause pyrogenicity.

RESUMO Introdução: Produtos naturais com atividade farmacológica requerem avaliações pré-clínicas que justifiquem seu uso em bases científicas. O ensaio de pirogênio é um teste dentro da Farmacologia de Segurança que é realizado para determinar a presença de endotoxinas e é um método valioso para demonstrar a segurança de bioderivados com potencial prebiótico no campo da imunonutrição. Objetivo: Avaliar a pirogenicidade de bioprodutos fúngicos de Pleurotus ostreatus (extratos aquosos do micélio e corpos de frutificação) e de uma biopreparação da levedura Kluyveromyces marxianus, utilizando o ensaio pirogênico de coelho da Nova Zelândia. Método: Concentrações de 1,0 e 10,0 mg/mL de cada amostra foram testadas por via intravenosa nas doses de 0,5 e 5,0 mg/kg de peso. O desenho experimental obedeceu às boas práticas laboratoriais estabelecidas pelo Conselho Internacional para a Ciência dos Animais de Laboratório e foi realizado de acordo com os procedimentos de trabalho padrão do Centro de Toxicologia e Biomedicina, Santiago de Cuba. Resultados: Os extratos de Pleurotus ostreatus e a biopreparação de leveduras (0,5 mg/kg) não apresentaram sinais de pirogenicidade. Nos resultados da biopreparação (5,0 mg/kg), os valores de temperatura estão dentro de uma faixa de incerteza, segundo a Farmacopeia dos Estados Unidos (USP) e foi sugerido repetir o estudo. Conclusões: Os extratos de Pleurotus ostreatus e a biopreparação de Kluyveromyces marxianus (0,5 mg/kg) não induziram um aumento significativo da temperatura nos animais, o que sugere que não há níveis de endotoxinas nesses bioprodutos que possam causar pirogenicidade.

Efetividade do tratamento endodôntico em sessão única x múltiplas sessões na periodontite apical pós-tratamento: sinais e sintomas; carga microbiana; níveis de endotoxinas e ácido lipoteicóico e volumetria da destruição óssea periapical por TCFC / Effectiveness of one-visit and two-visits endodontic treatment in posttreatment apical periodontitis: signs and symptoms; microbial load; endotoxin and lipoteichoic acid levels and bone destruction analysis by CBCT in 18-months follow-up

Os objetivos deste estudo foram: a) avaliar o sucesso clínico e por tomografia computadorizada de feixe cônico (TCFC) após 18 meses do retratamento em sessão única (RU) e múltiplas sessões (RM); b) monitorar carga (UFC/mL) e perfil microbiano; níveis de endotoxinas (EU/mL) e de ácido lipoteicóico [LTA (pg/mL)] em dentes com periodontite apical pós-tratamento (PAPT) submetidos a RU e RM; c) comparar a sintomatologia pós-operatória pela escala visual analógica de dor (EVA) em RU e RM; d) comparar os tratamentos quanto à redução de UFC/mL, EU/mL, LTA (pg/mL) e a volumetria da lesão periapical (LP) e) avaliar as correlações e associações entre os dados obtidos no estudo. Seguindo critérios de inclusão e não-inclusão, foram selecionados 40 dentes com PAPT, divididos em dois grupos: RM e RU. Os pacientes foram submetidos à TCFC. Foram realizadas coletas do conteúdo do canal radicular: após remoção do material obturador (S1), após preparo biomecânico (PBM) (S2) e após MIC (S3). Ao final da sessão, foi fornecida a EVA para avaliação da sintomatologia dolorosa apresentada nos períodos de 24hs, 48hs e 7 dias. O conteúdo dos canais radiculares foi avaliado por cultura microbiológica, perfil microbiano por Checkerboard DNA-DNA hybridization, níveis de endotoxinas pelo teste Lisado Amebócito de Limulus e de ácido lipoteicóico pelo ensaio de ELISA. Foi realizada a volumetria da destruição óssea periapical inicial e final por TCFC pelo software ITK snap. Os dados foram analisados estatisticamente. Os níveis de UFC/mL, EU/mL e LTA (pg/mL) diminuíram após o PBM, havendo a manutenção dos mesmos após o uso de MIC (p>0,05). As coletas apresentaram valores iniciais (S1) maiores que os residuais (antes da obturação) para os parâmetros avaliados. Quanto aos valores residuais, foram encontrados maiores valores de UFC/mL em RM e menores valores de LTA no mesmo grupo (p<0,05); porém sem diferença entre os grupos RU e RM quanto aos valores residuais de EU/mL. Os micro-organismos Gram-negativos mais encontrados foram o F. nucleatum, C. rectus, C. gingivalis, P. gingivalis, P. intermedia e L. buccalis, sendo os Gram-positivos: E. faecalis, E. faecium, S. constellatus e S. mitis. Não houve diferença entre os grupos RU e RM quanto à sintomatologia pósoperatória (p>0,05) pela EVA. O volume inicial das LP variou de 10 a 470 mm³, sendo que o final variou de 0 a 48 mm³. Houve redução da média dos volumes de 84,71% em RU e de 90.56% em RM, sendo esta redução significante em ambos os grupos (p< 0,0001), mas sem diferença estatística entre eles (p=0,9117). No período de 18 meses após o retratamento endodôntico não houve diferenças na regressão das lesões e análise dos demais sinais e sintomas entre RU e RM(AU)

This study aimed to: a) evaluate the success rates of one-visit (1-visit) and two-visit (2- visit) endodontic retreatment after 18 months by cone-beam computed tomography (CBCT) and analyze clinical signs and symptoms; b) monitor and compare the microbial load and profile; levels of endotoxins and lipoteichoic acid in teeth with posttreatment apical periodontitis (PTAP); c) compare the postoperative pain between the groups by the visual analog pain scale (VAS); d) correlate the variables with themselves. Forty teeth with PTAP were selected and submitted to CBCT. The sampling procedure was performed: after filling material removal (S1), after biomechanical preparation (S2), and after the intracanal medication placement (S3). VAS was provided for assessment of the postoperative pain at different time-points (24 h, 48 h, and 7 days). Root canal contents were submitted to microbiological assessment by culture technique (CFU/mL) and Checkerboard DNA-DNA hybridization, and the determination of LPS (UE/mL) and LTA (pg/mL) levels by Limulus amebocyte lysate and enzyme-linked immunosorbent assays, respectively. Periapical lesions volumes were obtained by the ITK snap program. Data were statistically analyzed. CFU/mL, UE/mL, and LTA (pg/mL) decreased after biomechanical preparation, with their maintenance after the use of intracanal medication (p>0.05). All root canal samples had their baseline values (S1) higher than those found before the root canal obturation (residual values) for all parameters. Regarding the residual values, higher values of CFU/mL and lower values of LTA were found in 2-visit groups (p<0.05). The most frequently Gram-negative microorganisms found during sampling procedures were F. nucleatum, C. rectus, C. gingivalis, P. gingivalis, P. intermedia and L. buccalis, the Gram-positive ones were E. faecalis, E. faecium, S constellatus and S. mitis. There was no difference between the 1 or 2-visit treatments regarding postoperative symptoms (p>0.05). The initial volume of the periapical lesions ranged from 10 to 470 mm³, and the final ones ranged from 0 to 48 mm³. A significant reduction of the periapical lesion was observed after 18-months in both groups (p<0.0001), but no statistical difference was found between them (p>0.05). No significant differences were observed in the outcome of the two modalities of endodontic retreatment(AU)

Níveis de endotoxina no sangue periférico não estão relacionados ao supercrescimento bacteriano intestinal em portadores de doença hepática gordurosa não alcoólica sem cirrose / Peripheral blood endotoxin levels are not associated with small intestinal bacterial overgrowth in nonalcoholic fatty liver disease without cirrhosis

ABSTRACT BACKGROUND: Nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD) is one of the most common forms of chronic liver disease worldwide. Approximately 20% of individuals with NAFLD develop nonalcoholic steatohepatitis (NASH), which is associated with increased risk of cirrhosis, portal hypertension, and hepatocellular carcinoma. Intestinal microflora, including small intestinal bacterial overgrowth (SIBO), appear to play an important role in the pathogenesis of the disease, as demonstrated in several clinical and experimental studies, by altering intestinal permeability and allowing bacterial endotoxins to enter the circulation. OBJECTIVE: To determine the relationship between SIBO and endotoxin serum levels with clinical, laboratory, and histopathological aspects of NAFLD and the relationship between SIBO and endotoxin serum levels before and after antibiotic therapy. METHODS: Adult patients with a histological diagnosis of NAFLD, without cirrhosis were included. A comprehensive biochemistry panel, lactulose breath test (for diagnosis of SIBO), and serum endotoxin measurement (chromogenic LAL assay) were performed. SIBO was treated with metronidazole 250 mg q8h for 10 days and refractory cases were given ciprofloxacin 500 mg q12h for 10 days. RESULTS: Overall, 42 patients with a histopathological diagnosis of NAFLD were examined. The prevalence of SIBO was 26.2%. Comparison of demographic and biochemical parameters between patients with SIBO and those without SIBO revealed no statistically significant differences, except for use of proton pump inhibitors, which was significantly more frequent in patients with positive breath testing. The presence of SIBO was also associated with greater severity of hepatocellular ballooning on liver biopsy. Although the sample, as a whole, have elevated circulating endotoxin levels, we found no significant differences in this parameter between the groups with and without SIBO. Endotoxin values before and after antibiotic treatment did not differ, even on paired analysis, suggesting absence of any relationship between these factors. Serum endotoxin levels were inversely correlated with HDL levels, and directly correlated with triglyceride levels. CONCLUSION: Serum endotoxin levels did not differ between patients with and without SIBO, nor did these levels change after antibacterial therapy, virtually ruling out the possibility that elevated endotoxinemia in non-cirrhotic patients with NAFLD is associated with SIBO. Presence of SIBO was associated with greater severity of ballooning degeneration on liver biopsy, but not with a significantly higher prevalence of NASH. Additional studies are needed to evaluate the reproducibility and importance of this finding in patients with NAFLD and SIBO.

RESUMO CONTEXTO: A doença hepática gordurosa não alcoólica (DHGNA) é uma das doenças hepáticas crônicas mais comuns em todo o mundo. Aproximadamente 20% dos indivíduos com DHGNA desenvolvem esteato-hepatite não alcoólica (EHNA) que está associada a maior risco de cirrose, hipertensão portal e/ou carcinoma hepatocelular. Alterações da microflora intestinal, incluindo o supercrescimento bacteriano intestinal (SBI), parecem ter um papel importante na patogênese da doença, como demonstrado em estudos clínicos e experimentais, pela alteração da permeabilidade intestinal e permitindo que endotoxinas bacterianas alcancem a circulação sanguínea. OBJETIVO: Determinar a relação entre o SBI e níveis de endotoxina sérica em pacientes não cirróticos com DHGNA, com os aspectos clínicos, laboratoriais e histopatológicos da doença e a relação entre SBI e níveis séricos de endotoxina antes e após tratamento com antibiótico. MÉTODOS: Foram incluídos pacientes maiores de 18 anos e com diagnóstico histológico de DHGNA, sem cirrose. Foram realizados: avaliação bioquímica geral, teste do H2 expirado com lactulose para diagnóstico de SBI e dosagem de endotoxina sérica - ensaio cromogênico para LAL. Para o tratamento do SBI utilizamos o metronidazol 250 mg de 8/8 horas por 10 dias e para os casos de retratamento foi utilizado ciprofloxacino 500 mg de 12/12 horas por 10 dias. RESULTADOS: Incluímos 42 pacientes com diagnóstico histopatológico de DHGNA. A prevalência de SBI foi de 26,2%. Quando comparamos o grupo dos pacientes com SBI com aquele sem SBI e analisamos suas variáveis demográficas e bioquímicas, não encontramos diferença estatisticamente significante entre elas, exceto pela utilização de inibidores de bomba de próton, que foi significantemente mais frequente nos pacientes com teste respiratório positivo. A presença de SBI também esteve associada à maior intensidade de balonização na biópsia hepática, quando comparados àqueles sem SBI. Embora o grupo como um todo apresentasse elevação dos níveis circulantes de endotoxinas, não pudemos encontrar diferenças estatísticas entre os grupos com e sem SBI. Os valores de endotoxinas pré e pós tratamento antibiótico não diferiram entre si, mesmo em análise pareada, sugerindo ausência de relação entre esses fatores. Os níveis de endotoxina sérica apresentaram correlação inversa com os níveis de HDL e correlação direta com os níveis de triglicerídeos. CONCLUSÃO: Níveis de endotoxinas séricas não diferiram entre os pacientes com e sem SBI, e que esses níveis não se modificaram após tratamento medicamentoso da proliferação bacteriana, praticamente excluindo a possibilidade de que os níveis elevados de endotoxemia estejam relacionados à SBI. A presença dessa proliferação bacteriana esteve associada à maior intensidade de balonização na biópsia hepática, mas não à maior prevalência de EHNA entre os portadores de SBI. Estudos complementares são necessários para avaliar a reprodutibilidade e a importância desse achado em portadores de DHGNA com SBI.

Validation and applicability of an alternative method for dialysis water and dialysate quality analysis / Validação e aplicabilidade de um método alternativo para análise da qualidade da água e do dialisato em diálise

ABSTRACT Introduction: In hemodialysis, patients are exposed to a large volume of water, which may lead to fatal risks if not meeting quality standards. This study aimed to validate an alternative method for monitoring microbiological quality of treated water and assess its applicability in dialysis and dialysate analysis, to allow corrective actions in real-time. Methods: Validation and applicability were analyzed by conventional and alternative methods. For validation, E. coli standard endotoxin was diluted with apyrogenic water in five concentrations. For the applicability analysis, treated water for dialysis was collected from different points in the treatment system (reverse osmosis, drainage canalization at the storage tank bottom, reuse, and loop), and dialysate was collected from four machines located in different rooms in the hemodialysis sector. Results: The validation results were in accordance with the Brazilian Pharmacopoeia acceptance criteria, except for the last two concentrations analyzed. In addition, the ruggedness criterion performed under the US Pharmacopoeia was in agreement with the results. Discussion: A limiting factor in the applicability analysis was the absence of the endotoxin maximum permitted level in dialysate by the Brazilian legislation. When comparing the analysis time, the alternative method was more time-consuming than the conventional one. This suggests that the alternative method is effective in the case of few analyses, that is, real-time analyses, favoring corrective actions promptly. On the other hand, it does not support the implementation of the alternative method in a laboratory routine due to the high demand for analyses.

RESUMO Introdução: Na hemodiálise, os pacientes são expostos a um grande volume de água, o que pode levar a riscos fatais se não cumprir com padrões de qualidade. Este estudo teve como objetivo validar um método alternativo para monitorar a qualidade microbiológica da água tratada e avaliar sua aplicabilidade em análises de diálise e dialisato, para permitir ações corretivas em tempo real. Métodos: A validação e aplicabilidade foram analisadas por métodos convencionais e alternativos. Para validação, a endotoxina padrão de E. coli foi diluída com água apirogênica em cinco concentrações. Para a análise de aplicabilidade, a água tratada para diálise foi coletada em diferentes pontos do sistema de tratamento (osmose reversa, canalização de drenagem no fundo do tanque de armazenamento, reutilização e circuito) e o dialisato foi coletado em quatro máquinas localizadas em diferentes salas do setor de hemodiálise. Resultados: Os resultados da validação obedeceram aos critérios de aceitação da Farmacopeia Brasileira, com exceção das duas últimas concentrações analisadas. Além disso, o critério de robustez realizado sob a Farmacopeia dos EUA estava de acordo com os resultados. Discussão: Um fator limitante na análise de aplicabilidade foi a ausência do nível máximo permitido de endotoxina no dialisato pela legislação brasileira. Ao comparar o tempo de análise, o método alternativo consumiu mais tempo que o convencional. Isso sugere que o método alternativo é eficaz no caso de poucas análises, ou seja, análises em tempo real, favorecendo ações corretivas imediatamente. Por outro lado, não suporta a implementação do método alternativo em uma rotina de laboratório devido à alta demanda por análises.

Clinical and microbiological effects of dialyzers reuse in hemodialysis patients / Efeitos clínicos e microbiológicos do reúso de dialisadores em pacientes em hemodiálise

Abstract Introduction: Chronic kidney disease (CKD) has a high prevalence and is a worldwide public health problem. Reuse of dialyzers is a cost reduction strategy used in many countries. There is controversy over its effects on clinical parameters and microbiological safety. Methods: In this clinical crossover study, 10 patients performed consecutive hemodialysis (HD) sessions divided in two phases: "single use" sessions (N = 10 HD sessions) followed by "dialyzer reuse" sessions (N = 30 HD sessions). Clinical, laboratory, and microbiological parameters were collected in the following time points: "single use", 1st, 6th, and 12th sessions with reuse of dialyzers, including bacterial cultures, endotoxins quantification in serum and dialyzer blood chamber, and detection of hemoglobin and protein residues in dialyzers. Results: Mean age of the sample was 37 ± 16 years, 6 (60%) were men, and 5 (50%) were white. CKD and HD vintage were 169 ± 108 and 47 (23-111) months, respectively. Serum C-reactive protein (CRP) [4.9 (2.1) mg/mL], ferritin (454 ± 223 ng/mL), and endotoxin levels [0.76 (0.61-0.91) EU/mL] were high at baseline. Comparison of pre- and post-HD variations of serum levels of CRP and endotoxins in the "single use" versus "reuse" phases did not result in differences (p = 0.8 and 0.4, respectively). Samples of liquid in the dialyzer inner chamber were negative for the growth of bacteria or endotoxins. There was no significant clinical manifestation within and between the phases. Conclusion: Dialyzers reuse was safe from a clinical, microbiological, and inflammatory point of view. The dialyzer performance remained adequate until the 12th reuse.

Resumo Introdução: A doença renal crônica (DRC) é um problema de saúde pública mundial de alta prevalência. O reúso de dialisadores é uma estratégia de redução de custos empregada em muitos países. Seus efeitos sobre parâmetros clínicos e de segurança microbiológica são alvo de controvérsia. Métodos: No presente estudo clínico cruzado, 10 pacientes realizaram sessões consecutivas de hemodiálise (HD) divididas em duas fases: a primeira com sessões de "uso único" (N = 10 sessões de HD) e a segunda com sessões com "reúso de dialisadores" (N = 30 sessões de HD). Parâmetros clínicos, laboratoriais e microbiológicos foram registrados nos seguintes momentos: "uso único", 1a, 6a e 12a sessões com reúso de dialisadores, incluindo culturas bacterianas, quantificação de endotoxinas no soro e na câmara interna do dialisador e detecção de hemoglobina e resíduos de proteína nos dialisadores. Resultados: A idade média da amostra foi de 37 ± 16 anos seis (60%) eram homens e cinco (50%) eram brancos. Os tempos com DRC e em HD foram de 169 ± 108 e 47 (23-111) meses, respectivamente. Os níveis séricos de proteína C-reativa (PCR) [4,9 (2,1) mg/mL], ferritina (454 ± 223 ng/mL) e endotoxinas [0,76 (0,61-0,91) UE/mL] estavam elevados no início do estudo. A diferença dos níveis séricos de PCR e endotoxinas pré e pós-HD nas fases de "uso único" e "reúso" não foi significativa (p = 0,8 e 0,4, respectivamente). As amostras de líquido retiradas da câmara interna do dialisador foram negativas para crescimento de bactérias e endotoxinas. Não houve registro de manifestações clínicas significativas nas fases do estudo. Conclusão: O reúso de dialisadores foi seguro dos pontos de vista clínico, microbiológico e inflamatório. O desempenho do dialisador permaneceu adequado até o 12º reuso.

Redução de bactérias cultiváveis, lipopolissacarídeos e colagenase/mmp-8 no tratamento endodôntico associado à ativação ultrassônica na infecção endodôntica primária: estudo clínico randomizado / Cultivable bacteria, lipopolysaccharides and neutrophil collagenase/mmp-8 reduction on the endodontic treatment associated to ultrasonic activation in primary endodontic infection: a randomized clinical trial

O objetivo desse estudo clínico randomizado foi avaliar em dentes com infecção endodôntica primária (IEP) os microrganismos anaeróbios cultiváveis (UFC/mL), níveis de endotoxinas (LPS) (EU/mL) e colagenase/MMP-8 da região periapical antes e durante o tratamento endodôntico utilizando diferentes protocolos de irrigação final: irrigação convencional (CNI), ativação ultrassônica passiva (PUA) e ativação ultrassônica continua (CUA). Quarenta e cinco dentes com IEP foram submetidos ao tratamento endodôntico utilizando NaOCl 2.5% como solução irrigadora seguido do uso de EDTA 17%. Os protocolos de limpeza final foram realizados com irrigação com agulha convencional (controle), PUA e CUA; na sequência os canais foram preenchidos com pasta de Ca(OH)2 + SS por 14 dias. Foram feitas coletas do conteúdo do canal radicular após abertura coronária (S1), após diferentes protocolos de irrigação final (S2) e após uso de medicação intracanal com pasta de hidróxido de cálcio [Ca(OH)2] (S3). O conteúdo coletado do canal foi submetido as análises por cultura microbiológica (UFC/mL) e níveis de endotoxinas (EU/mL) pelo Lisado de Amebócitos de Limulus (LAL). Após preparo dos canais e após medicação com Ca(OH)2 foram realizadas coletas do fluido periapical para análise da expressão de MMP-8 por ELISA. A análise estatística dos dados foi realizada pelo testes Kruskal-Wallis e Dunn para analise intergrupos de UFC/mL, LPS e MMP-8, todos eles com nível de significância de 5% (P<0.05). Microrganismos anaeróbios cultiváveis foram detectados em 100 % das amostras iniciais (S1) com valor médio de 1.18 x 105 CFU/mL (20 ­ 1.84 x 106 CFU/mL). CUA apresentou maior efetividade na redução de microrganismos anaeróbios cultiváveis em S3 (97.27%) seguido pela PUA (96.56%) e CNI (96.2%). Endotoxinas foram identificadas em 100% das amostras em S1 com valor médio de 538.10 EU/mL (0.017 x 6190 EU/mL), CUA mostrou uma maior redução nos níveis de LPS em S3 (97.75 %), seguido pela PUA (97.11%) e CNI (90.42%). O protocolo de irrigação final com ativação ultrassônica PUA e CUA favoreceu a redução de MMP-8 em comparação ao grupo CNI. Houve correlação estatística positiva entre os níveis de LPS e MMP-8. Conclui-se que o preparo biomecânico produz a maior redução no número de microrganismos anaeróbios e endotoxinas; O protocolo de irrigação final com PUA e CUA em associação ao preparo biomecânico produz maior redução nos níveis de Endotoxinas e MMP-8 em comparação com CNI. Existe correlação estatística positiva entre os níveis de LPS e MMP-8 presentes nas infecções endodônticas primárias, mostrando a associação do LPS com o processo de destruição tecidual(AU)

The aim of this randomized clinical trial was to evaluate in cultivated anaerobic microorganisms (CFU / mL), endotoxin levels (LPS) (EU / mL) and periapical collagenase / MMP-8 in teeth with primary endodontic infection (EPI) before and during Endodontic treatment using different final irrigation protocols: conventional irrigation (CNI), passive ultrasonic activation (PUA) and continuous ultrasonic activation (CUA). Forty-five teeth with IEP were submitted to endodontic treatment using 2.5% NaOCl as an irrigating solution followed by 17% EDTA. Final cleaning protocols were performed with conventional needle irrigation (control), PUA and CUA; The root canals were then filled with Ca (OH)2 paste for 14 days. Root canal contents were collected after coronary opening (S1), after root canal preparation (S2) and after intracanal calcium hydroxide paste [Ca (OH)2] (S3). Samples of the root canal content was performed to analysis by microbiological culture (CFU / mL) and endotoxin levels (EU / mL) by Limulus Amebocyte Lysate (LAL). After canal preparation and after Ca (OH)2 medication, periapical fluid samples were collected for analysis of MMP-8 expression by ELISA. Statistical analysis of the data was performed by Kruskal-Wallis and Dunn tests for intergroup analysis of CFU / mL, LPS and MMP-8, all with a significance level of 5% (P <0.05). Cultivable anaerobic microorganisms were detected in 100% of the initial samples (S1) with a mean value of 1.18 x 105 CFU / mL (20 - 1.84 x 106 CFU / mL). CUA showed greater effectiveness in reducing anaerobic microorganisms cultivable in S3 (97.27%) followed by PUA (96.56%) and CNI (96.2%). Endotoxins were identified in 100% of samples in S1 with a mean value of 538.10 EU / mL (0.017 x 6190 EU / mL), CUA showed a greater reduction in LPS levels in S3 (97.75%), followed by PUA (97.11%). and CNI (90.42%). The final irrigation protocol with ultrasonic activation PUA and CUA favored the reduction of MMP-8 compared to the CNI group. There was a positive statistical correlation between LPS and MMP-8 levels. It is concluded that the biomechanical preparation produces the greater reduction in the number of anaerobic microorganisms and endotoxins; The final irrigation protocol with PUA and CUA in combination with biomechanical preparation produces greater reduction in Endotoxin and MMP-8 levels compared to CNI. There is a positive statistical correlation between the levels of LPS and MMP-8 present in primary endodontic infections, showing the association of LPS with the tissue destruction process(AU)

Pesquisa de endotoxinas em água de hemodiálise / Research of endotoxins in hemodialysis water

Introdução: A doença renal crônica caracteriza-se pela perda da função dos rins levando a um desequilíbrio funcional, fisiológico e biológico. Um dos tratamentos necessários ao paciente renal crônico é a hemodiálise onde a qualidade da água é de fundamental importância para reduzir riscos aos pacientes. Através da Resolução RDC nº 11, de 13 março de 2014, a Agência Nacional de Vigilância Sanitária (Anvisa) estabeleceu a pesquisa de endotoxinas, cuja contaminação por via venosa poderá causar vários agravos à saúde dos pacientes. Objetivo: Identificar endotoxinas em água purificada para hemodiálise. Método: Trata-se de um estudo transversal descritivo quantitativo para verificação da presença de endotoxinas em 126 amostras de água, coletadas em dois pontos (pós-osmose reversa e sala de reúso) nas seis clínicas de terapia renal substitutiva, pela Vigilância Sanitária Estadual, analisadas no LACEN, em Campo Grande, Mato Grosso do Sul, 2016. Resultados: Das 68 amostras de água coletadas após o processo de osmose reversa, três (4,41%) e das 58 amostras coletadas na sala de reúso, seis (10,34%) apresentaram resultados de endotoxinas acima do valor permitido pela legislação (0,25 EU\mL). Conclusões: Os resultados encontrados indicam comprometimento da membrana do processo de osmose reversa e, ou presença de biofilme nas tubulações, ineficácia do processo de limpeza do reservatório, tubulações, e desinfecção das máquinas.

Introduction: Chronic kidney disease is characterized by loss of kidney function leading to a physiological and biological functional imbalance. One of the treatments necessary for the chronic renal patient is hemodialysis. Water quality is critical to reducing patient risk. Resolution RDC n. 11, of March 13th, 2014, from Brazilian Health Regulatory Agency (Anvisa) establishesd the search for endotoxins, as venous contamination by endotoxins may cause various problems in the patients' health. Objective: To identify endotoxins in purified water for hemodialysis. Method: This is a Quantitative Descriptive Cross-sectional Study to verify the presence of endotoxins in 126 water samples collected at two points (post-reverse osmosis and reuse room) at six renal substitution therapy clinics, by the State Sanitary Surveillance, and analyzed in the LACEN, in Campo Grande, MS, in 2016. Results: Of the 68 water samples collected after the reverse osmosis process, three (4.41%), and of the 58 samples collected in the reuse room, six (10.52%) presented endotoxin results above the amount allowed by the legislation (0.25 EU\mL). Conclusions: Results indicate membrane involvement of the reverse osmosis process, and, or presence of biofilm in the pipes, and inefficiency of the cleaning process of the reservoir, pipes, and machines disinfection process.

Tratamento endodôntico em sessão única x múltiplas sessões: correlação do sucesso após 1 ano de tratamento com níveis de endotoxinas, carga microbiana e sinais /sintomas / Single visit x multiple visit endodontic treatment: correlation of success after 1 year of treatment with endotoxin levels, microbial load and signs / symptoms

Os objetivos deste estudo foram: a) monitorar carga microbiana (UFC/mL) e níveis de endotoxinas (EU/mL) em dentes com infecção endodôntica primária submetidos a tratamento endodôntico em sessão única (SU) e múltipla sessões (SM); b) relacionar (EU/mL) e (UFC/mL) com sinais e sintomas clínicos, volume do canal radicular e da lesão periapical (mm³), através do uso de tomografia computadorizada de feixe cônico (TCFC); c) comparar o volume da lesão periapical (mm³) antes e após um ano de tratamento nos grupos SU e SM; d) comparar a redução do volume da lesão periapical (mm³) após um ano de tratamento com EU/mL e UFC/mL iniciais e antes da obturação; e) comparar taxa de sucesso encontrado após um ano de tratamento entre SU e SM. Foram selecionados vinte dentes com necrose pulpar e lesão periapical que foram submetidos à TCFC. Foram realizadas coletas do conteúdo do canal radicular: após abertura coronária (S1), após instrumentação com sistema reciprocante Reciproc® e irrigação com hipoclorito de sódio 2,5% (NaOCl) (S2), após uso de EDTA 17% (S3) e após medicação intracanal (MIC) a base de hidróxido de cálcio e solução salina fisiológica (S4). Os conteúdos foram avaliados quanto à atividade antimicrobiana por cultura microbiológica e quanto aos níveis de endotoxinas pelo teste Lisado Amebócito de Limulus. Foi realizada a volumetria dos canais radiculares e da destruição óssea periapical através da TCFC utilizando o software Nemotec®. Por fim, foi realizado controle do tratamento endodôntico, para comparar os tratamentos quanto ao processo de reparo da lesão periapical, relacionando o volume das lesões com os achados clínicos, radiográficos e da tomografia inicial. Os dados foram analisados estatísticamente. Os níveis de UFC/mL e EU/mL diminuíram após o PBM, porém a MIC e o EDTA 17% não interferiram nos resultados; UFC/mL e EU/mL não foram relacionadas a sinais/sintomas e volume da lesão periapical; porém houve correlação entre o volume da lesão periapical e os sinais e sintomas; não houve diferença estatística entre os tratamentos SU e SM na redução das lesões periapicais após um ano e não houve relação entre UFC/mL e EU/mL com a regressão da lesão. Conclue-se, portanto, que o tipo de intervenção (SU x SM) não influenciou no sucesso do tratamento endodôntico.

Anti-inflammatory effect of lycopene on endotoxin-induced uveitis in rats / Efeito anti-inflamatório do licopeno na uveíte induzida por endotoxina em ratos

ABSTRACT Purpose: We evaluated the efficacy of lycopene, a dietary carotenoid and potent antioxidant, against ocular inflammation and oxidative stress in an experimental uveitis model. Methods: Endotoxin-induced uveitis (EIU) was induced in Sprague-Dawley rats by a single subcutaneous injection of 200 μg lipopolysaccharide (LPS). Induction of EIU was preceded by daily intraperitoneal injection of 10 mg/kg lycopene for three consecutive days (Lycopene + LPS group) or equivolume vehicle (Vehicle + LPS group). A positive control group received 1 mg/kg dexamethasone pretreatment (DEX + LPS), and a negative control group received daily vehicle injection but no LPS (Vehicle Control). Twenty-four hours after LPS or final vehicle administration, eyes were enucleated, and aqueous humor was collected for measurement of the number of infiltrating cells, total protein concentration, and levels of nitric oxide (NO), tumor necrosis factor-α (TNF-α), interleukin-6 (IL-6), and oxidative stress markers. Inflammatory response severity was compared among groups clinically and histopathologically. Results: Infiltrating cell number, total protein concentration, and NO, TNF-α, and IL-6 levels were significantly elevated in the aqueous humor of Vehicle + LPS group rats compared to Vehicle Controls. Compared to the Vehicle + LPS group, lycopene pretreatment significantly reduced aqueous humor concentrations of oxidative stress markers, NO (0.29 ± 0.1 μM vs. 0.19 ± 0.1 μM, p=0.003), TNF-α (71.0 ± 22.3 ng/ml vs. 50.1 ± 2.1 ng/ml, p=0.043), and IL-6 (121.6 ± 3.0 pg/ml vs. 111.1 ± 5.6 pg/ml, p=0.008). Inflammatory score was also reduced (2.0 ± 0.0 vs. 0.4 ± 0.5, p=0.001). Lycopene reduced the infiltrating cell count and protein concentration, but differences did not reach significance. Most lycopene effects were equivalent to dexamethasone. Conclusions: Lycopene may aid in the clinical management of uveitis by suppressing inflammation and oxidative stress.

RESUMO Objetivo: Avaliamos o efeito do licopeno, um carotenóide dietético e um potente anti-oxidante, sobre a inflamação ocular e estresse oxidativo em modelo de uveíte experimental. Métodos: Uveíte foi induzida por endotoxina (EIU) em ratos Sprague-Dawley por uma única injeção subcutânea de 200 ug de lipopolissacárido (LPS). A indução de EIU foi precedida por injeção intraperitoneal de licopeno em uma dose de 10 mg/kg (grupo LPS + Licopeno) ou veículo de mesmo volume (grupo LPS + Veículo), durante 3 dias consecutivos. O grupo controle positivo recebeu uma dose de 1 mg/kg de Dexametasona (grupo DEX + LPS) e o grupo controle negativo recebeu doses diárias de veículo mas sem LPS (grupo Controle Veículo). Vinte e quatro horas após a administração do LPS, os olhos foram enucleados, humor aquoso foi recolhido, e o número de células infiltrativas, a concentração de proteína, assim como os níveis de óxido nítrico (NO), fator de necrose tumoral α (TNF-α), interleucina-6 e marcadores de estresse oxidativo foram determinados no humor aquoso. Além disso, a resposta inflamatória foi avaliada clinicamente e histologicamente. Resultados: As células infiltrativas, concentração de proteína, o NO, TNF-α, interleucina-6 foram significativamente elevados no humor aquoso de ratos do grupo Grupo LPS + Veículo quando comparados ao Grupo Controle Veículo. O tratamento com licopeno diminuiu significativamente estes aumentos. Comparado ao Grupo LPS + Veículo, o licopeno reduziu significativamente as concentrações no humor aquoso dos marcadores de estresse oxidativo e NO (de 0,29 ± 0,1 μM para 0,19 ± 0,1 μM, p=0,003), o TNF-α (de 71,0 ± 22,3 ng/ml para 50,1 ± 2,1 ng/ml, p=0,043), interleucina-6 (de 121,6 ± 3,0 pg/ml para 111,1 ± 5,6 pg/ml, p=0,008). Do mesmo modo, o aumento do número de células infiltrativas no tecido uveal em seções histológicas foi significativamente inibido pelo licopeno, a pontuação inflamatória diminuiu de 2,0 ± 0,0 para 0,4 ± 0,5, p=0,001. Embora, não tenha sido estatisticamente significativo, o licopeno reduziu a contagem de células infiltrativas e a concentração de proteínas no humor aquoso. Conclusões: Estes resultados sugerem que o licopeno pode ter efeitos benéficos no tratamento da inflamação ocular, através dos seus efeitos anti-inflamatórios e antioxidantes.

Endotoxins in surgical instruments of hip arthroplasty / Endotoxinas en instrumentales quirúrgicos de artroplastia de la cadera / Endotoxinas em instrumentais cirúrgicos de artroplastia do quadril

Abstract OBJECTIVE To investigate endotoxins in sterilized surgical instruments used in hip arthroplasties. METHOD A descriptive exploratory study conducted in a public teaching hospital. Six types of surgical instruments were selected, namely: acetabulum rasp, femoral rasp, femoral head remover, chisel box, flexible bone reamer and femoral head test. The selection was based on the analysis of the difficulty in removing bone and blood residues during cleaning. The sample was made up of 60 surgical instruments, which were tested for endotoxins in three different stages. The EndosafeTM Gel-Clot LAL (Limulus Amebocyte Lysate method) was used. RESULT There was consistent gel formation with positive analysis in eight instruments, corresponding to 13.3%, being four femoral rasps and four bone reamers. CONCLUSION Endotoxins in quantity ≥0.125 UE/mL were detected in 13.3% of the instruments tested.

Resumen OBJETIVO Investigar las endotoxinas en instrumentales quirúrgicos esterilizados empleados en artroplastias de la cadera. MÉTODO Estudio exploratorio, descriptivo, desarrollado en un hospital público de enseñanza. Fueron seleccionados seis tipos de instrumentales, a saber: raspa de acetábulo, raspa femoral, sacacorchos (para extraer la cabeza femoral), gubia quirúrgica, fresa femoral y cabeza femoral de prueba. La selección se hizo desde el análisis de la dificultad para la retirada de residuos de sangre y hueso durante la limpieza. La muestra estuvo constituida de 60 instrumentales quirúrgicos, que fueron puestos a prueba para endotoxinas en tres momentos diferentes. Se utilizó el método de gelificación (Gel-clot) Lisado de Amebocitos de Limulus (LAL) Endosafe(tm). RESULTADO Hubo formación de gel consistente con análisis positivo en ocho instrumentos, lo que corresponde a el 13,3%, siendo cuatro raspas femorales y cuatro fresas femorales. CONCLUSIÓN Fueron detectadas endotoxinas en cantidad ≥0,125 UE/mL en el 13,3% de los instrumentos probados.

Resumo OBJETIVO Investigar endotoxinas em instrumentais cirúrgicos esterilizados empregados em artroplastias do quadril. MÉTODO Estudo exploratório, descritivo, desenvolvido em um hospital público de ensino. Foram selecionados seis tipos de instrumentais, a saber: raspa acetabular, raspa femural, saca-cabeça de fêmur, formão box, fresa de fêmur e cabeça de prova de fêmur. A seleção foi feita a partir da análise da dificuldade para a remoção de resíduos de sangue e osso durante a limpeza. A amostra foi constituída por 60 instrumentais cirúrgicos, que foram testados para endotoxinas em três momentos distintos. Foi utilizado o método de gel-clot pelo Limulus Amebócito Lisado (LAL) Endosafe(tm). RESULTADO Houve formação de gel consistente com análise positiva em oito instrumentais, o que corresponde a 13,3%, sendo quatro raspas de fêmur e quatro fresas de fêmur. CONCLUSÃO Foram detectadas endotoxinas em quantidade ≥0,125 UE/mL em 13,3% dos instrumentais testados.

Membrane adsorber for endotoxin removal

ABSTRACT The surface of flat-sheet nylon membranes was modified using bisoxirane as the spacer and polyvinyl alcohol as the coating polymer. The amino acid histidine was explored as a ligand for endotoxins, aiming at its application for endotoxin removal from aqueous solutions. Characterization of the membrane adsorber, analysis of the depyrogenation procedures and the evaluation of endotoxin removal efficiency in static mode are discussed. Ligand density of the membranes was around 7 mg/g dry membrane, allowing removal of up to 65% of the endotoxins. The performance of the membrane adsorber prepared using nylon coated with polyvinyl alcohol and containing histidine as the ligand proved superior to other membrane adsorbers reported in the literature. The lack of endotoxin adsorption on nylon membranes without histidine confirmed that endotoxin removal was due to the presence of the ligand at the membrane surface. Modified membranes were highly stable, exhibiting a lifespan of approximately thirty months.

RESUMO A superfície de membranas planas de nylon foi modificada utilizando-se bisoxirano como espaçador e poli(álcool vinílico) para recobrimento das membranas. O aminoácido histidina foi utilizado como ligante para endotoxinas, visando à sua aplicação na remoção de endotoxinas a partir de soluções aquosas. São discutidas as etapas de caracterização do adsorvedor com membranas, análise do procedimento de despirogenização e avaliação da eficiência de remoção em modo estático. A densidade de ligantes nas membranas foi em torno de 7 mg/g membrana (massa seca), permitindo uma remoção de endotoxinas de até 65%. O desempenho das membranas preparadas com nylon e recobertas com poli(álcool vinílico) contendo histidina como ligante foi superior ao de outros adsorvedores com membranas descritos na literatura. A ausência de adsorção de endotoxinas em membranas sem histidina confirma que a remoção das endotoxinas deve-se exclusivamente à presença do ligante na superfície da membrana. As membranas modificadas mostraram-se bastante estáveis, exibindo um tempo de vida superior a 30 dias.

Validación del método de formación de coágulo para la determinación de endotoxinas bacterianas en inmunoglobulinas (IgG) nacionales / Method validation clot formation for determining bacterial endotoxins national immunoglobulin (IgG)

Las endotoxinas bacterianas son lipopolisacáridos (LPS) localizados exclusivamente en la membrana externa de las bacterias gramnegativas, su ingreso al organismo a través de productos parenterales puede causar fiebre, taquicardia, aumento de presión sanguínea y en algunos casos ocasiona la muerte. Existen normativas internacionales acerca del límite de endotoxina para productos farmacéuticos inyectables, tal como las inmunoglobulinas (IgG), que pueden estar expuestas a contaminación durante el proceso de producción y por lo tanto es necesario realizar pruebas para la determinación de endotoxinas bacterianas. El método del lisado de amebocitos de Limulus (LAL) es una de ellas.Este método se fundamenta en la reacción del LAL, el cual es un extracto de células sanguíneas que interaccionan con endotoxinas, activando la cascada del proceso de coagulación y originando la formación de la coagulina. En diversas ocasiones algunas proteínas intervienen en la activación o desactivación de esta cascada, bien sea potenciando o inhibiendo la formación del coágulo. En el caso de la potenciación, el calentamiento es uno de los métodos recomendados por la farmacopea estadounidense (USP) para eliminar interferencias, puesto que desnaturaliza las proteínas que causan la potenciación sin pérdida de endotoxinas. En este trabajo se validó la determinación de endotoxinas bacterianas en IgG mediante el método LAL, el cual es un método rápido y de fácilejecución, por lo que puede implementarse como ensayo de rutina en control de calidad y por ende nos permite agilizar las Liberaciones de Lotes de estos productos.

Bacterial endotoxins are lipopolysaccharides (LPS) located exclusively in the outer membrane of gram-negative bacteria, their entry into the body through parenteral products can cause fever, tachycardia, increased blood pressure and in some cases cause death. There are international standards for endotoxin limit for injectable pharmaceuticals, such as immunoglobulins (IgG), which may be exposed to contamination during the production process and therefore it is necessary to test for determination of bacterial endotoxins. The method of the Limulus amebocyte lysate (LAL) is one of them. This method is based on the LAL reaction, which is an extract of blood cells which interact with endotoxin, triggering the cascade of the coagulation process and causing the formation of coagulin. On several occasions some proteins involved in the activation or deactivation of this waterfall, either by enhancing or inhibiting clot formation. In the case of empowerment, the warming is one of those recommended by the US Pharmacopoeia (USP) to eliminate interference, since denatures proteins that cause endotoxin enhancement lossless methods. In this paper the determination of bacterial endotoxins in IgG was standardized by the LAL method, which is quick and easy to implement method, which can be implemented as a routine test in quality control and thus allows us to streamline releases Lots of these products.

Effects of morphine on the expression of cytokines and inflammatory mediators in a rabbit model of endotoxin-induced experimental uveitis / Efeitos da morfina na expressão de citocinas e de mediadores inflamatórios em coelhos com uveítes experimental induzida por endotoxina

ABSTRACT Purpose: To evaluate the effects of 1% morphine instillation on clinical parameters, aqueous humor turbidity, and expression levels of tumor necrosis factor alpha (TNF-α), interleukin-1 beta (IL-1beta), prostaglandin E2 (PGE2), and myeloperoxidase (MPO) in rabbits with endotoxin-induced experimental uveitis. Methods: Twenty four New Zealand white rabbits were divided into four groups (n=6 each): control (CG), morphine (MG), naloxone (NG), and morphine-naloxone (MNG) groups. Under dissociative anesthesia, 0.1 mL of solution containing 0.2 µg of lipopolysaccharide (LPS) endotoxin from the Salmonella typhimurium cell wall was injected in the vitreous chamber. Clinical evaluations (conjunctical hyperemia, chemosis blepharospasm, and ocular discharge) and laser flaremetry were performed before (baseline), and 10 and 20 hours after induction of uveitis. Rabbits were subsequently euthanized and eyes were enucleated to quantify expression levels of TNF-α, IL-1 beta, PGE2, and MPO. Results: No significant differences in clinical parameters and flare values were observed between the study groups. TNF-α and IL-1 beta levels increased significantly in the CG, MG, NG, and MNG groups compared to baseline (P<0.05). Significant differences in PGE2 levels were observed between the MG and NMG groups (P<0.05). A trend toward increased MPO activity was observed in response to uveitis induction; however, this trend did not reach statistical significance (P>0.05). Conclusions: Morphine has no effect on clinical parameters, flare, or expression levels of inflammatory mediators in a rabbit model of uveitis induced by intravitreal injection of LPS.

RESUMO Objetivo: Estudaram-se os efeitos da instilação de morfina 1% sobre parâmetros clínicos, turbidez do humor aquoso e expressão de fator de necrose tumoral alfa (TNF-alfa), de interleucina-1 beta (IL-1beta), de prostaglandina E2 (PGE2) e de mieloperoxidase (MPO), em olhos de coelhos com uveíte induzida por endotoxina. Material e Métodos: Vinte e quatro coelhos da raça Nova Zelândia Branco foram distribuídos em quatro grupos (n=6, em cada): grupo controle (GC), morfina (GM), naloxona (GN) e morfina-naloxona (GMN). Sob anestesia dissociativa, injetou-se 0,1 mL de solução contendo 0,2 µg de lipossacarídeo (LPS) endotóxico da parede celular de Salmonella typhimurium na câmara vítrea. Realizou-se avaliação clínica (hiperemia conjuntival, quemose, blefaroespasmo e secreção ocular) e a flaremetria a “laser” antes (basal) e após 10 e 20 horas da indução da uveíte. No final, os coelhos foram submetidos à eutanásia e os olhos com uveíte foram enucleados para a quantificação dos níveis de TNF-alfa, IL-1 beta, PGE2 e MPO. Diferenças foram consideradas significativas quando p<0,05. Resultados: Os grupos da pesquisa não diferiram quanto aos parâmetros clínicos e os valores de “flare”. Observou-se elevação significativa nos níveis de TNF-alfa e de IL-1 beta, comparativamente ao basal, nos grupos GC, GM, GN e GMN (p<0,05). Valores de PGE2 variaram entre os grupos GM e GNM (p<0,05). A atividade de MPO aumentou após a indução da uveíte, porém, sem significância estatística (p>0,05). Conclusões: A morfina não atuou sobre parâmetros clínicos, “flare” e expressão dos mediadores inflamatórios estudados, quando instilada em olhos de coelhos com uveíte induzida por injeção intravítrea de LPS.

Role of endotoxin in the etiology of periapical lesions: molecular mechanisms involved in endotoxin's recognition and cell activation / Papel da endotoxina na etiologia da lesão periapical: mecanismos moleculares envolvidos no seu reconhecimento e na ativação celular

Periapical lesions are diseases resulting from contamination and necrosis of dental pulp and the progression of this infection toward the periapical tissues. Technological advances in microbiological culture and identification have shown that anaerobic microorganisms, especially Gram-negative, are predominate in root canals of teeth with pulp necrosis and chronic periapical lesions. Gram-negative bacteria not only have different factors of virulence and generate products and sub-products that are toxic to apical and periapical tissues, but also contain endotoxin in the outer membrane of their cell wall. This information is important because endotoxin is released during multiplication or bacterial death, causing a series of biological effects that lead to an inflammatory reaction and resorption of mineralized tissues. Thus, the aim of this work is to carry out a review of the literature on the role of bacterial endotoxin in the etiology of periapical lesions, its mechanism of action, and to elucidate molecular mechanisms involved in endotoxin's recognition by the immune system and cell activation.

As lesões periapicais são patologias resultantes da contaminação e necrose da polpa dental e progressão da infecção em direção aos tecidos periapicais. Os avanços tecnológicos na cultura e identificação microbiana demonstraram que, em canais radiculares de dentes portadores de necrose pulpar e lesão periapical crônica, predominam os microrganismos anaeróbios, particularmente os Gram-negativos. As bactérias Gram-negativas, além de possuírem diferentes fatores de virulência e gerarem produtos e subprodutos tóxicos aos tecidos apicais e periapicais, contêm a endotoxina em sua parede celular. Esse conhecimento é importante, uma vez que a endotoxina é liberada durante a multiplicação ou morte bacteriana, exercendo uma série de efeitos biológicos relevantes, que conduzem a uma reação inflamatória e à reabsorção dos tecidos mineralizados. Sendo assim, o objetivo deste trabalho foi efetuar uma revisão da literatura relativa ao papel da endotoxina bacteriana na etiologia das lesões periapicais, seu mecanismo de ação, bem como elucidar mecanismos moleculares envolvidos no seu reconhecimento pelo sistema imunológico e na ativação celular.

Purificación y caracterización de lipopolisacáridos de Eikenella corrodens 23834 y Porphyromonas gingivalis W83 / Purification and characterization of lipopolysaccharide from Eikenella corrodens 23834 and Porphyromonas gingivalis W83

La purificación de lipopolisacáridos (LPS) o endotoxinas y su caracterización es un aspecto esencial para estudios que buscan aclarar el papel de estas biomoléculas de bacterias Gram negativas presentes en la cavidad oral y su relación con enfermedades locales periodontales y sistémicas. Este estudio implementa una metodología para la extracción, purificación y caracterización de LPS a partir de bacteria completa de Eikenella corrodens 23834 y Porphyromonas gingivalis W83, utilizando técnicas previamente descritas. La extracción cruda de LPS se realizó con fenol-agua caliente; la purificación se realizó con tratamiento enzimático con nucleasas y proteasa, seguido de cromatografía de exclusión por tamaño (Sephacryl S-200 HR) con deoxicolato de sodio como fase móvil. La caracterización de los extractos purificados se realizó por barrido espectrofotométrico, pruebas bioquímicas de electroforesis SDS-PAGE, ensayo Purpald y la prueba cromogénica de LAL. Como control para la identificación y caracterización de los extractos purificados se utilizaron LPS comerciales de Escherichia coli, Salmonella typhimurium, Rodobacter sphaeroides y Porphyromonas gingivalis. La metodología implementada permitió la obtención de LPS de elevada pureza con la identificación de KDO o heptosas, un quimiotipo de LPS-S (liso) para E. corrodens y LPS-SR (semi-rugoso) para P. gingivalis W83. Ambos LPS purificados mostraron capacidad endotóxica a bajas concentraciones. La metodología implementada en este estudio para la purificación y caracterización de LPS a partir de bacteria completa fue eficiente al compararla con los LPS comerciales.

Purification of lipopolysaccharide (LPS) or endotoxins and its characterization is an important aspect for studies aimed at clarify the role of these biomolecules from Gram negative bacteria present in the oral cavity and its relationship with periodontal and systemic diseases. This study describes an extraction, purification and characterization method of LPS from Eikenella corrodens 23834 and Porphyromonas gingivalis W83. LPS extraction was performed by using hot phenol-water; the purification was done with nuclease and protease enzymatic treatment, followed by size-exclusion chromatography (Sephacryl S-200 HR) with sodium deoxycholate as mobile phase. The characterization of the purified extracts was performed by spectrophotometric scanning, SDS-PAGE biochemical tests, Purpald assay and chromogenic LAL test. As control, commercial LPS from Escherichia coli, Salmonella typhimurium, P. gingivalis, and Rodobacter sphaeroides were used. The methodology mentioned above had allowed obtaining high purity LPS by identifying KDO or heptoses, a chemotype S-LPS (smooth) to E. corrodens; SR-LPS (semi-rough) for P. gingivalis W83. Both purified LPS showed endotoxic capacity at low concentrations. The methodology used in this study for purification and characterization of LPS from the whole bacteria was efficient when it was compared with commercial LPS.

Quantificação de endotoxinas e sua relação com sinais /sintomas e volumetria da lesão periapical e do canal radicular em dentes com infecção endodôntica primária / Quantification of endotoxins and its relation with signals/symptoms and volume of periapical lesion and volume of the lumen of the canal in teeth with primary endodontic infection

Os objetivos do presente estudo foram: a) quantificar endotoxinas e cargamicrobiana nas infecções endodônticas primárias, antes e após o preparobiomecânico (PBM) e uso de diferentes medicações intracanais (MIC); b)relacionar níveis de endotoxinas e microrganismos cultiváveis com avolumetria da lesão periapical (VLP), através do uso de tomografiascomputadorizadas de feixe cônico (TCFC), verificando possíveis relaçõescom sinais e sintomas clínicos; c) relacionar os mesmos níveis com avolumetria dos canais radiculares (VCR); d) Comparar medidas das lesões utilizando radiografias periapicais (RP) e tomografias computadorizadas de feixe cônico (TCFC). Foram selecionados para o estudo trinta dentes com necrose pulpar e lesão periapical que foramsubmetidos a TCFC. Após abertura coronária, foi realizada coleta inicialpara verificação da presença de infecção nos canais radiculares. Após, procedeu-se o tratamento endodôntico utilizando solução de NaOCl 2,5% e divididos em 3 grupos de acordo com a MIC: Ca(OH)2 - hidróxido de cálcio P.A. + solução salina fisiológica; Ca(OH)2 + GEN - hidróxido de cálcio P.A. + extrato glicólico de gengibre 20% e Ca(OH)2 + CLX -hidróxido de cálcio P.A. + clorexidina gel 2%. Foram realizadas coletas docanal radicular após o PBM e após 14 dias de ação da MIC. Para todasas coletas foram realizados testes de atividade antimicrobiana por culturamicrobiológica e análise da quantificação de endotoxinas pelo lisado deamebócitos de Limulus. Foi realizada a VLP e a VCR através da TCFC; ecomparadas medidas de segmentação 2D das lesões periapicais das RP e das TCFC. Todos os dados foram analisados estatisticamente. Os resultados mostraram: a) presença de microrganismos na coleta inicialvariando de 0 – 8,16 x 106 UFC/mL e níveis de endotoxinas de 1,75 – 149EU/mL; havendo redução significante de seus níveis após PBM e uso de MIC; b) Houve correlação positiva entre a VLP com os níveis de endotoxinas e presença de dor prévia, além de forte...

The aims of the present study were: a) quantify endotoxins and bacterial CFU counts in primary endodontic infections before and after biomechanical preparation (BP) and after root canal medication (RCM); b) to correlate the levels of endotoxins and bacterial CFU counts with the volume of periapical bone destruction (VPBD) determined by Cone Beam Computed Tomography (CBCT) analysis as well as with the development of clinical signs and symptoms; c) to correlate the levels of endotoxins and bacterial CFU counts with the volume of the lumen of the canal (VLC); d) to correlate the size of periapical lesions determined by periapical radiographs images with the CBCT images. Thirty teeth with pulp necrosis and apical periodontitis were selected and submitted to CBCT analysis.After access to pulp cavity, a first root canal sampling was performed inorder to determine the presence of root canal infection. Afterwards, BP was performed using 2.5% NaOCl followed by the placement of RCM according to the selection group: Calcium Hydroxide [Ca(OH)2] – Ca(OH)2 + Saline Solution (SSL); Ca(OH)2 + Ginger – Ca(OH)2 + 20% glycolic Ginger extract ; Ca(OH)2 + Chlorhexidine (CHX). A second collect were made after the BP and then the third after 14-days of RCM. Cultureanalysis was performed in order to determine antimicrobial activity. Thelevels of endotoxins were determined by the Limulus Ameboyte Lysate assay. The VPBD and the VLC were determined by CBCT-analysis and compared to periapical radiographs. Data were typed on a spreadsheet and statistical analyzed. At the baseline samples, CFU counts and endotoxins levels ranged from 0 - 8.16 CFU/mL and 1.75 -149 EU/mL, respectively. Both contents were reduced after BP and after RCM. Positive correlations were found between the levels of endotoxins and VPBD as well as with previous episode of pain. Thereby, a positive correlation was found between the bacterial CFU counts with the endotoxins contents. ...

Quantificação de endotoxinas e sua relação com sinais /sintomas e volumetria da lesão periapical e do canal radicular em dentes com infecção endodôntica primária / Quantification of endotoxins and its relation with signals/symptoms and volume of periapical lesion and volume of the lumen of the canal in teeth with primary endodontic infection

Os objetivos do presente estudo foram: a) quantificar endotoxinas e cargamicrobiana nas infecções endodônticas primárias, antes e após o preparobiomecânico (PBM) e uso de diferentes medicações intracanais (MIC); b)relacionar níveis de endotoxinas e microrganismos cultiváveis com avolumetria da lesão periapical (VLP), através do uso de tomografiascomputadorizadas de feixe cônico (TCFC), verificando possíveis relaçõescom sinais e sintomas clínicos; c) relacionar os mesmos níveis com avolumetria dos canais radiculares (VCR); d) Comparar medidas das lesões utilizando radiografias periapicais (RP) e tomografias computadorizadas de feixe cônico (TCFC). Foram selecionados para o estudo trinta dentes com necrose pulpar e lesão periapical que foramsubmetidos a TCFC. Após abertura coronária, foi realizada coleta inicialpara verificação da presença de infecção nos canais radiculares. Após, procedeu-se o tratamento endodôntico utilizando solução de NaOCl 2,5% e divididos em 3 grupos de acordo com a MIC: Ca(OH)2 - hidróxido de cálcio P.A. + solução salina fisiológica; Ca(OH)2 + GEN - hidróxido de cálcio P.A. + extrato glicólico de gengibre 20% e Ca(OH)2 + CLX -hidróxido de cálcio P.A. + clorexidina gel 2%. Foram realizadas coletas docanal radicular após o PBM e após 14 dias de ação da MIC. Para todasas coletas foram realizados testes de atividade antimicrobiana por culturamicrobiológica e análise da quantificação de endotoxinas pelo lisado deamebócitos de Limulus. Foi realizada a VLP e a VCR através da TCFC; ecomparadas medidas de segmentação 2D das lesões periapicais das RP e das TCFC. Todos os dados foram analisados estatisticamente. Os resultados mostraram: a) presença de microrganismos na coleta inicialvariando de 0 – 8,16 x 106 UFC/mL e níveis de endotoxinas de 1,75 – 149EU/mL; havendo redução significante de seus níveis após PBM e uso de MIC; b) Houve correlação positiva entre a VLP com os níveis de endotoxinas e presença de dor prévia, além de forte...

The aims of the present study were: a) quantify endotoxins and bacterial CFU counts in primary endodontic infections before and after biomechanical preparation (BP) and after root canal medication (RCM); b) to correlate the levels of endotoxins and bacterial CFU counts with the volume of periapical bone destruction (VPBD) determined by Cone Beam Computed Tomography (CBCT) analysis as well as with the development of clinical signs and symptoms; c) to correlate the levels of endotoxins and bacterial CFU counts with the volume of the lumen of the canal (VLC); d) to correlate the size of periapical lesions determined by periapical radiographs images with the CBCT images. Thirty teeth with pulp necrosis and apical periodontitis were selected and submitted to CBCT analysis.After access to pulp cavity, a first root canal sampling was performed inorder to determine the presence of root canal infection. Afterwards, BP was performed using 2.5% NaOCl followed by the placement of RCM according to the selection group: Calcium Hydroxide [Ca(OH)2] – Ca(OH)2 + Saline Solution (SSL); Ca(OH)2 + Ginger – Ca(OH)2 + 20% glycolic Ginger extract ; Ca(OH)2 + Chlorhexidine (CHX). A second collect were made after the BP and then the third after 14-days of RCM. Cultureanalysis was performed in order to determine antimicrobial activity. Thelevels of endotoxins were determined by the Limulus Ameboyte Lysate assay. The VPBD and the VLC were determined by CBCT-analysis and compared to periapical radiographs. Data were typed on a spreadsheet and statistical analyzed. At the baseline samples, CFU counts and endotoxins levels ranged from 0 - 8.16 CFU/mL and 1.75 -149 EU/mL, respectively. Both contents were reduced after BP and after RCM. Positive correlations were found between the levels of endotoxins and VPBD as well as with previous episode of pain. Thereby, a positive correlation was found between the bacterial CFU counts with the endotoxins contents...