Sequenciamento total do exoma como ferramenta de diagnóstico de acidose tubular renal distal / Whole-exome sequencing as a diagnostic tool for distal renal tubular acidosis

Resumo Objetivo A acidose tubular renal distal (ATRd) é caracterizada por acidose metabólica devido à excreção renal de ácido prejudicada. O objetivo deste artigo é apresentar o diagnóstico genético de quatro crianças com ATRd com uso do sequenciamento total do exoma. Métodos Selecionamos duas famílias não relacionadas, quatro crianças com ATRd e seus pais, para fazer o sequenciamento total do exoma. A audição foi preservada em ambas as crianças da família um, porém em nenhuma criança da família dois, na qual um par de gêmeas teve perda auditiva severa. Fizemos o sequenciamento total do exoma em dois conjuntos de amostras e confirmamos os achados com o método de sequenciamento de Sanger. Resultados Duas mutações foram identificadas nos genes ATP6V0A4 e ATP6V1B1. Na família um, detectamos uma nova mutação no éxon 13 do gene ATP6V0A4 com uma alteração em um nucleotídeo único GAC → TAC (c.1232G>T) que causou substituição de ácido aspártico por tirosina na posição 411. Na família dois, detectamos uma mutação recorrente do homozigoto com inserção de um par de bases (c.1149_1155insC) no éxon 12 do gene ATP6V1B1. Conclusão Nossos resultados confirmam o valor do sequenciamento total do exoma para o estudo de nefropatias genéticas complexas e permitem a identificação de mutações novas e recorrentes. Adicionalmente, demonstramos claramente pela primeira vez a aplicação desse método molecular em doenças tubulares renais.

Abstract Objective Distal renal tubular acidosis (dRTA) is characterized by metabolic acidosis due to impaired renal acid excretion. The aim of this study was to demonstrate the genetic diagnosis of four children with dRTA through use of whole-exome sequencing. Methods Two unrelated families were selected; a total of four children with dRTA and their parents, in order to perform whole-exome sequencing. Hearing was preserved in both children from the first family, but not in the second, wherein a twin pair had severe deafness. Whole-exome sequencing was performed in two pooled samples and findings were confirmed with Sanger sequencing method. Results Two mutations were identified in the ATP6V0A4 and ATP6V1B1 genes. In the first family, a novel mutation in the exon 13 of the ATP6V0A4 gene with a single nucleotide change GAC → TAC (c.1232G>T) was found, which caused a substitution of aspartic acid to tyrosine in position 411. In the second family, a homozygous recurrent mutation with one base-pair insertion (c.1149_1155insC) in exon 12 of the ATP6V1B1 gene was detected. Conclusion These results confirm the value of whole-exome sequencing for the study of rare and complex genetic nephropathies, allowing the identification of novel and recurrent mutations. Furthermore, for the first time the application of this molecular method in renal tubular diseases has been clearly demonstrated.

Distúrbios ácido-base na leishmaniose visceral / Acid-base disorders in visceral leishmaniasis

Defeitos na capacidade de acidificação e concentração urinárias têm sido descritos em pacientes portadores de leishmaniose visceral. Foram avaliados os distúrbios do equilíbrio ácido-base presentes nos pacientes com calazar, bem como os fatores relacionados. Metodologia: Foram estudados 59 pacientes com formas crônicas de calazar e comparados a um grupo controle. A gasometria arterial foi colhida em jejum; o pH urinário, a acidez titulável e a amônia urinária foram determinadas em urinas colhidas sob óleo mineral. A amônia foi dosada pela técnica de Berthelot e a acidez titulável, pela técnica de Palmer. Resultados: Todos os pacientes tinham hipoalbuminemia, hipergamaglobulimenia e hiponatremia. O grupo I compreendeu 75,5% dos pacientes, que apresentaram quadro misto de alcalose respiratória e alcalose metabólica. Hipocloremia ocorreu em 37,6%; hipocalemia associada a um potássio urinário elevado foi observada em 24,8% dos casos. Hipomagnesemia com perda renal de magnésio e potássio foi detectada em 44% dos casos. O grupo II, constituído por 24,5% dos pacientes, apresentou quadro de acidose metabólica. A excreção urinária de H+, a acidez titulável e a amônia foram semelhantes nos dois grupos. Um elevado pH urinário e uma carga elétrica urinária positiva confirmaram no grupo II a presença de acidose tubular renal distal. O equilíbrio ácido-base, pelo modelo stewart-Figge, mostra diminuição da diferença de íons fortes (SIDa), elevação do SIG e diminuição da concentração de ácidos fracos. Conclusões: Alcalose respiratória crônica e alcalose metabólica associada 9grupo I) foram observadas em 75.5% dos casos e relacionaram-se com o quadro de pneumonite intersticial, anemia, febre e disfunção hepática. Hipomagnesemia com depleção de potássio e magnésio estava presente.

Defects in the ability of urinary acidification and concentration have been described in patients with visceral leishmaniasis. We assessed disorders present acid-base balance in patients with kala-azar, as well as the related factors. Methodology: We studied 59 patients with chronic forms of leishmaniasis and compared to a control group. The arterial blood gas was collected in fasting, urinary pH, titratable acidity and urinary ammonium were determined in urine collected under mineral oil. Ammonia was measured by the Berthelot technique and acidity, the technique of Palmer. Results: All patients had hypoalbuminemia, and hyponatremia hipergamaglobulimenia. Group I comprised 75.5% of patients, who had mixed picture of respiratory alkalosis and metabolic alkalosis. Hypochloremia occurred in 37.6%, hypokalemia associated with a high urinary potassium was observed in 24.8% of cases. Hypomagnesemia with renal loss of magnesium and potassium was detected in 44% of cases. Group II, consisting of 24.5% of patients presented with metabolic acidosis. The urinary excretion of H +, acidity and ammonia were similar in both groups. A high urinary pH and urinary a positive electric charge in the group II confirmed the presence of distal renal tubular acidosis. The acid-base balance by Stewart-Figge model shows decrease in strong ion difference (AIDS), an increase of GIS and decreased concentration of weak acids. Conclusions: Chronic respiratory alkalosis and metabolic alkalosis associated 9grupo I) were observed in 75.5% of cases and were related to the picture of interstitial pneumonitis, anemia, fever and liver dysfunction. Hypomagnesemia with depletion of potassium and magnesium was present. Metabolic acidosis (group II) was observed in 24.5% of patients presenting with.