Integrated optical density analysis of the immunohistochemical expression of the progesterone receptor in the uterine endometrium of prepubertal araucana sheep / Análisis por densidad óptica integrada de la expresión inmunohistoquímica del receptor de progesterona en el endometrio uterino de ovejas prepúberes de raza araucana

SUMMARY: Progesterone receptors are expressed in the reproductive organs of adult sheep, where they regulate morphofunctional and reproductive development. However, various studies have shown the presence of these receptors in the uterus of prepubertal females. It is not clear what role these receptors have at this level of development in uterine tissue. Therefore, it is relevant as a first step in the investigation, to determine the expression and histological distribution of the progesterone receptor in prepubertal sheep in order to determine possible functions at this level of reproductive development. Immunohistochemical analysis allows visualizing the specific presence of a protein in the cellular and histological context, however, the results displayed through digital images are qualitative data and subject to the observer's criteria. In this work, a quantitative analysis method of immunohistochemical expression of the progesterone receptor in ovine endometrium is presented, using digital analysis of images, by means of integrated optical density of digital photographs of histological sections processed with immunohistochemical methods. The results show the possibility of quantitatively evaluating the expression of progesterone receptors in the endometrial stroma and prepubertal endometrial glands by applying the integrated optical density analysis of digital images.

RESUMEN: Los receptores de progesterona se expresan en los órganos reproductores de ovejas adultas, donde regulan el desarrollo morfofuncional y reproductivo. Sin embargo, diversos estudios han demostrado la presencia de estos receptores en útero de hembras prepúberes. No está claro, el papel que estos receptores tienen en este nivel de desarrollo en tejido uterino. Por lo que, es relevante como primer paso en la investigación, determinar la expresión y distribución histológica del receptor de progesterona en ovejas prepúberes con el fin determinar posibles funciones en este nivel de desarrollo reproductivo. El análisis inmuno- histoquímico permite visualizar la presencia específica de una proteína en el contexto celular e histológico, sin embargo, los resultados visualizados a través de imágenes digitales, son datos cualitativos y sujeto al criterio del observador. En este trabajo se presenta un método de análisis cuantitativo de expresión inmunohistoquímica del receptor de progesterona en endometrio ovino, utilizando análisis digital de imágenes, mediante densidad óptica integrada de fotografías digitales de cortes histológicos procesados con métodos inmunohistoquímicos. Los resultados muestran la posibilidad de evaluar cuantitativamente la expresión de los receptores de progesterona en el estroma endometrial y las glándulas endometriales prepúberes aplicando el análisis de densidad óptica integrado de imágenes digitales.

Aumento de la temperatura de incubación en huevos de gallina araucana (Gallus inauris): efecto sobre la mortalidad embrionaria, tasa de eclosión, peso del polluelo, saco vitelino y de órganos internos / Increasing incubation temperature of Araucana hen eggs (Gallus inauris): effect on embryo mortality, hatchability, chick, yolk sac and internal organs weight

Se evaluó el efecto del incremento de la temperatura de incubación en huevos de gallina Araucana sobre la tasa de eclosión, la mortalidad embrionaria, el peso del polluelo, del saco vitelino y de los órganos internos. Los huevos (n= 426) fueron distribuidos al azar en: a) grupo Control (n=215), incubados a 37,5 °C por 21 días y b) grupo Experimental (n= 211), incubados a 39,5 °C, por 18 días, disminuyéndose a 37,5 °C los 3 días restantes. En ambos grupos la incubación se realizó con una humedad relativa constante del 55 %. La tasa de mortalidad embrionaria total fue significativamente menor (P 0,05) para el grupo Control (14,9 vs 44,1 %) y consecuentemente la tasa de eclosión fue significativamente mayor (P 0,05) en este mismo grupo (97,8 vs. 80,5 %). El peso promedio de los polluelos y del saco vitelino a las 36 h post eclosión fue significativamente diferente (P 0,05) entre ambos grupos (37,1 vs. 36,3 y 2,5 vs 6,2 g para el grupo Control y Experimental respectivamente). Por otra parte, el peso de todos los órganos internos fue menor (P 0,05) en polluelos del grupo Experimental. Se concluye que el uso de una temperatura de incubación de 39,5 C por 18 días en huevos de gallina araucana influye negativamente, aumentando la mortalidad embrionaria, disminuyendo la tasa de eclosión, el peso del polluelo y de los órganos internos, y aumentando el peso del saco vitelino.

The aim of this study was to evaluate the effect of increasing incubation temperature of Araucana hen eggs on embryo mortality, hatchability,chick, yolk sac and internal organs weight. Eggs (n= 426) were randomly distributed into: a) Control group (n= 215), which were incubated at 37.5 °C for 21 days or b) Experimental group (n= 211), which were incubated at 39.5 °C, for 18 days and then at 37.5 °C for the remaining 3 days. In both groups eggs were incubated with a relative humidity of 55 %. The embryo mortality rate was greater (P 0.05) for the experimental than the control group (44.1 vs. 14.9 % respectively). On the contrary, hatching rate was greater (P 0.05) for the control than the experimental group (97.8 vs. 80.5 % respectively). The average weight of chicks, at 36 h of age, was lower (P 0.05) for the experimental than control group (36.3 vs. 37.01 g respectively). Also, increasing incubation temperature reduced (P 0.05) internal organs weight of chicks in the Experimental compared to Control group. On the other hand, yolk sac weight was reduced (P <0.05; 2.5 vs. 6.2 g for Control and Experimental group respectively). We conclude that increasing the incubation temperature of Araucana hen eggs up to 39.5 °C for 18 days has a negative effect on embryo survival, hatchability, chick and internal organs weight and absorption of yolk.

Distribución de receptores de estrógenos beta en el ovario de ovejas prepúberes / Beta estrogen receptors distribution in the ovary of ewe lambs

Las hormonas esteroidales tienen un papel esencial en la fisiología reproductiva, actúan en el ovario estableciendo comunicación entre este y la glándula hipofisiaria y también en forma paracrina como reguladores locales. Se ha descrito expresión de receptores de estrógeno a nivel de ovarios fetales, neonatales y adulto, siendo necesario determinar cuales son los tipos celulares que expresan estos receptores. El ovario ovino es estereogénico activo desde la etapa fetal y por lo tanto los esteroides desempeñan un importante papel en el desarrollo gonadal. La regulación del crecimiento folicular está relacionado a varios factores por un lado la secreción de gonadotropinas por la hipófisis interviene durante el desarrollo folicular tardío, existiendo evidencias de una acción intra-ovárica directa de los estrógenos, en la regulación del crecimiento folicular temprano. Nuestro objetivo fue, evaluar la expresión y distribución de receptores de estrógeno b en las distintas poblaciones celulares del ovario de la oveja prepúber.

Steroid hormones play an essential role in reproductive physiology, acting in the ovary establishing communication between it and the pituitary gland as well as local paracrine regulators. Described estrogen receptor expression level fetal, neonatal and adult ovaries, which are necessary to determine the cell types that express these receptors. Sheep ovarian stereogenic is active from the fetal stage and therefore steroids play an important role in gonadal development. The regulation of follicle growth is related to several factors on the one hand the secretion of gonadotropins by the pituitary follicular development occurring during late, there was evidence of a direct intra-ovarian estrogen action in the early follicular growth regulation. Our objective was to evaluate the expression and distribution of estrogen receptor b in different cell populations of the ovary of prepubertal sheep.

Estudio inmunohistoquímico comparativo del receptor de estrógeno en tejido endometrial de ovejas razas Texel y Araucana / Comparative inmunohistochemical study of estrogen receptor in endometrial tissue from Texel and Araucana sheeps

La asociación de factores genéticos, nutricionales y ambientales afecta directamente la fertilidad de las ovejas sin embargo en condiciones de similitud ambiental, la raza es un factor determinante existiendo razas de alta fertilidad como por ejemplo Texel y Suffolk y otras de fertilidad estándar tales como Romney y Criolla Araucana. La fertilidad es modulada por las hormonas sexuales que actúan mediante la unión a receptores específicos. En ovinos el receptor de estrógeno alfa (ER-a) esta ampliamente distribuido en el sistema reproductivo y es responsable de la modulación de varios mecanismos asociados con la función del sistema reproductivo. Un factor posiblemente relacionado con la diferencia en la fertilidad entre razas de ovinos, es el nivel de expresión diferencial de estos receptores en el sistema reproductivo. En el presente estudio se realizo una comparación cuantitativa de la expresión inmunohistoquímica de ER-a se llevó en el endometrio de ovejas prepúberes de ovejas de alta fertilidad (Texel) y de fertilidad estándar (Araucana), mediante la medición de la densidad óptica integrada de la señal inmunohistoquímica en áreas específicas del endometrio. Los resultados indican una diferencia significativa entre la expresión del ER-a a favor de ovejas de raza Texel en todas las áreas de la raza del endometrio de ovejas prepúberes evaluadas. Esta expresión diferencial sugiere una posible relación entre la intensidad de la expresión de ER-a y la fertilidad en las razas ovinas estudiadas en este trabajo.

In breeding sheep high fertility rate is an important consideration factor. The association of genetic, nutritional and environmental conditions directly affects the fertility of ewes. There are high fertility sheep breeds (Texel, Suffolk) and other standard fertility breeds as (Romney, Criolla Araucana). Animal reproduction is modulated by sex hormones that act by binding to specific receptors. In sheep, alpha (ER-a) estrogen receptor is widely distributed in the reproductive system, modulating several mechanisms associated with reproductive system function. One factor possibly related to the difference in fertility between sheep breeds, is the differential expression level of these receptors in the reproductive system. In the present study a quantitative comparison of the immunohistochemical expression of ER-a was carried out in prepubertal sheep endometrium in high fertility (Texel) breed versus standard fertility (Araucana) breed, by measuring the integrated optical density in specific areas of the endometrium. Results indicate a significant difference between ER-a expression in endometrium off Texel breed ewes and Araucana breed ewes, and registered higher levels in all areas of evaluated Texel breed prepubertal ewes. This differential expression suggests a possible link between ER-a expression intensity and fertility in the breeds studied in this work.

Detección inmunohistoquímica del receptor de estrógeno en el endometrio de ovejas de alta prolificidad y de prolificidad estándar / Immunohistochemical detection of estrogen receptor in the endometrium of sheep high prolificacy and standard prolificacy

Uno de los factores que incide en la capacidad reproductiva de los ovinos es la presencia de receptores de estrógeno en el tracto genital, donde regulan la expresión de numerosos genes comprometidos en su desarrollo morfológico y funcional. Posiblemente el desempeño reproductivo de diferentes razas de ovejas podría estar determinado por la expresión diferencial de estos receptores. En el presente estudio, se evaluó comparativamente el nivel de expresión del receptor de estrógeno en tejido endometrial de ovejas prepúberes de alta prolificidad (raza Texel) y de prolificidad estándar (raza Araucana) mediante análisis inmunohistoquímico. Se concluye que el nivel de expresión del receptor de estrógeno en tejido estromal, epitelial, de revestimiento y glandular del endometrio de ovejas de raza Texel es significativamente mayor que en ovejas de raza Araucana. Esta diferencia en el nivel de expresión de estos receptores podría estar relacionado con la diferencia de prolificidad entre estas razas...

A factor that affects the reproductive capacity of sheep is the presence of estrogen receptors in the genital tract, where they regulate the expression of numerous genes involved in morphological and functional development. Possibly the reproductive performance of different breeds of sheep could be determined by the differential expression of these receptors. In the present study, we evaluated comparatively level of estrogen receptor expression in endometrial tissue ewe lambs high prolificacy (Texel) and standard prolificacy (Araucana) by immunohistochemical analysis. It is concluded that the level of estrogen receptor expression in stromal tissue, epithelial lining and endometrial glandular Texel Sheep is of greater intensity than in ewes Araucana, this difference in the expression level of these receptors could be related to the increased prolificacy of Texel breed...

Índices zoométricos en ovejas criollas araucanas / Zoometric indices in araucanas creole ewes

El ovino criollo Araucano presente en la región de La Araucanía, Chile, actualmente se encuentra amenazado por el mestizaje de su material genético con razas productoras de carne como la Suffolk. Con el objetivo de realizar su caracterización racial, se evaluaron 94 hembras provenientes de diferentes rebaños de la región de la Araucanía, Chile. Se determinó el peso vivo y 14 medidas morfológicas a partir de las cuales se calcularon 9 índices zoométricos: cefálico (ICE), pelviano (IPE), corporal (ICO), proporcionalidad (IPRO), profundidad relativa del tórax (IPRP), dáctilo torácico (IDT), pelviano transversal (IPET), pelviano longitudinal (IPEL) y espesor relativo de la caña (IERC). Además de cada animal se obtuvieron características morfológicas y fanerópticas. Del análisis estadístico descriptivo se observó que de las medidas zoométricas evaluadas presentaron un rango de variación entre 4,97 por ciento (para la ALC) y 14,9 por ciento (para el AGP), reflejando que la muestra evaluada presentó un grado medio a alto de homogeneidad. Respecto a los índices zoométricos las ovejas Araucanas se caracterizaron por ser brevilíneas (ICO=75,40 +/- 6,27), de formatos grandes de acuerdo al índice dáctilo-torácico (10,63 +/- 0,91) y presentan una grupa convexilínea (IPE<100). De acuerdo a los índices IPET e IPEL existe una tendencia al desarrollo del tejido muscular en la zona de cortes más valiosos. Respecto las características morfológicas y fanerópticas se destaca que los ovinos Araucanos son animales que presenta un perfil cefálico recto, mucosas generalmente negras, orejas medianas y horizontales, son animales ventrudos, de ubre pequeña sin pigmentación, y de extremidades con pezuñas oscuras. Los resultados obtenidos desprenden índices zoométricos elevados respecto a otros genotipos ovinos, presentando la oveja Araucana tendencia a la aptitud cárnica, capacidad que podría asegurar su conservación al permitir aplicar criterios selectivos que conduzcan a una menor...

The Araucano Creole sheep of the Araucanía region in Chile is currently threatened with the cross-breeding of its genetic material with meat-producing breeds like the Suffolk. In order to characterize the breed, 94 females from different flocks from the Araucanía region were evaluated. The live weight was determined, and 9 zoometric indices were calculated from 14 morphological measurements: cephalic (ICE), pelvic (IPE), corporal (ICO), proportionality (IPRO), relative depth of the thorax (IPRP), dactyl-thoracic (IDT), transversal pelvic (IPET), longitudinal pelvic (IPEL) and relative thickness of the cannon bone (IERC). In addition, the morphological and phaneroptic features were obtained from each animal. It was observed from the descriptive analysis that of the evaluated zoometric measurements, there was a range of variation between 4.97 percent (for the ALC) and 14.9 percent (for the AGP), reflecting that the sample evaluated presented a medium to high degree of homogeneity. With respect to the zoometric indices, the Araucano sheep were characterized as being brevilineal (ICO=75.40 +/- 6.27), large-sized according to the dactyl-thoracic index (10.63 +/- 0.91) and presented hindquarters with a convex curve (IPE<100). According to the IPET and IPEL indices, there is a tendency toward the development of muscle tissue in the area of the most valuable cuts. Of the morphological and phaneroptic features, it is noteworthy that Araucano sheep have a straight cephalic profile, generally black mucous membranes, medium-sized horizontal ears, are pot-bellied with a small udder without pigmentation and have extremities with dark hooves. The results obtained provide high zoometric indices with respect to other ovine genotypes, and the Araucano sheep has a tendency to meat aptitude, a capacity that could ensure its conservation when allowing selective criteria to be applied that lead to a lower variability in the ethnological and functional characters.

Estudio de la expresión de los receptores de progesterona y estrógeno en el endometrio de ovejas alimentadas con dieta normal y dieta suplementada / Study of the expression of progesterone receptors in the endometrium of ewes with normal and supplementary diet

La influencia de la nutrición sobre la reproducción en ovinos es compleja y los resultados observados son variables. Planes nutricionales bajos pueden ser causa de una reducción de la sensibilidad del endometrio a la progesterona lo que afecta el desarrollo morfofuncional del endometrio en estadios tempranos de la preñez y por lo tanto va en directo detrimento de la sobrevida del embrión. La progesterona y los estrógenos actúan a través de receptores intracelulares específicos que median su efecto fisiológico. Por lo tanto el nivel de expresión de estos receptores es fundamental para el efecto hormonal. El objetivo del presente estudio fue analizar en forma conjunta la expresión de receptores de progesterona (RP) y estrógeno (RE), en el endometrio de ovejas en ciclo alimentadas con dieta suplementada y dieta normal. La expresión de la proteína receptora como del transcrito de ambos receptores se detectó mediante análisis inmunohistoquímico y RT-PCR en Tiempo Real. Los resultados muestran expresión inmunohistoquímica contra ambos receptores en zonas glándulares y carunculares, destacándose una intensa inmunorreacción en núcleo de células estromales y del epitelio glandular. Se detectó mayor expresión del transcrito de ambos receptores en ovejas alimentadas con suplemento respecto a las que no recibieron suplemento alimenticio.

The influence of nutrition on reproduction in sheep is complex and the reported results are variable. Low nutritional programs can cause a reduction in the sensitivity of the endometrium to progesterone which affects morphofunctional development of the endometrium in early stages of pregnancy and therefore is in direct expense of the survival of the embryo. Progesterone and estrogens act through specific intracellular receptors that mediate its physiological effect. Therefore the level of expression of these receptors is essential for the hormonal effect. The aim of this study was to analyze the expression of progesterone receptors (PR) and estrogen (ER) in the endometrium of sheep supplemented diet cycle and fed normal diet. The expression of the receptor protein and the transcript of both receptors was detected by immunohistochemistry and RT-PCR Real Time. The results show immunohistochemical expression against both receptors in caruncular and glandular areas, highlighting an intense immunoreaction in the nucleus of stromal cells and glandular epithelium. Were detected increased expression of the transcript of both receptors in sheep fed on the supplement that did not receive food supplement. We discuss the possible use of this information for applications in breeding programs in sheep breeding.