RESUMEN
Regeneration is defined as tissue renewal and functional restoration process of the damaged parts of the body after an injury. Ambystoma mexicanum, commonly named the Axolotl, is one of the unique vertebrates, which has a remarkable ability to regenerate their extremities following the amputation. Although the process of regeneration includes several periods, it can be divided into two main phases; blastema formation and dedifferentiation. In the couple of hours following the amputation, wound closure occurs by migration of epithelial cells around the amputation site followed by macrophage infiltration and dedifferentiation of cells to turn into stem cells. Accumulated stem cells form a very authentic tissue type called blastema, which is crucial for successful regeneration. In order to evaluate this exceptional tissue and acquire high quality images, it is crucial to employ specific procedures to prepare the tissue for imaging. Here, in this study, we aimed to investigate success of various fixative solutions (Carnoy's, Bouin's, % 10 NBF, Clarke's, Alcoholic Formaline and AFA) to monitor the fixed blastema. Our data reveals that integrity of the blastema tissue differs among used fixatives and a significant difference is observed between the samples in terms of staining quality.
La regeneración se define como la renovación del tejido y el proceso de restauración funcional de las partes dañadas del cuerpo después de una lesión. Ambystoma mexicanum, comúnmente llamado Axolotl, es uno de los únicos vertebrados que tiene una notable capacidad para regenerar sus miembros después de una amputación. Aunque el proceso de regeneración incluye varios períodos, se puede dividir en dos fases principales: formación del blastema y desdiferenciación. En el par de horas después de la amputación, el cierre de la herida ocurre por la migración de células epiteliales alrededor del sitio de la amputación seguido por una infiltración de macrófagos y la desdiferenciación de las células para convertirse en células madre. Las células madre acumuladas forman un tipo de tejido muy diferenciado denominado blastema, que es crucial para una exitosa regeneración. Para evaluar este tejido y adquirir imágenes de alta calidad, es crucial emplear procedimientos específicos para la obtención de imágenes. En este estudio, se intentó investigar el éxito de varias soluciones fijadoras (Carnoy, Bouin, % 10 NBF, Clarke, Formalina Alcohólica y AFA) para monitorear la fijación del blastema. Nuestros datos revelan que la integridad del tejido del blastema difiere entre los fijadores utilizados y una diferencia significativa observada entre las muestras se da en términos de la calidad de tinción.
Asunto(s)
Animales , Ambystoma mexicanum/anatomía & histología , Fijación del Tejido/métodos , Ambystoma mexicanum/fisiología , RegeneraciónRESUMEN
In the present study we evaluated the effect of partial ventricular amputation (PVA) in the heart of the adult urodele amphibian (Ambystoma mexicanum) in vivo on spontaneous heart contractile activity recorded in vitro in association to the structural recovery at one, five, 30 and 90 days after injury. One day after PVA, ventricular-tension (VT) (16 ± 3%), atrium-tension (AT) (46 ± 4%) and heart rate (HR) (58 ± 10%) resulted lower in comparison to control hearts. On days five, 30 and 90 after damage, values achieved a 61 ± 5, 93 ± 3, and 98 ± 5% (VT), 60 ± 4, 96 ± 3 and 99 ± 5% (AT) and 74 ± 5, 84 ± 10 and 95 ± 10% (HR) of the control values, respectively. Associated to contractile activity recovery we corroborated a gradual tissue restoration by cardiomyocyte proliferation. Our results represent the first quantitative evidence about the recovery of heart contractile activity after PVA in an adult urodele amphibian, indicating that the heart of A. mexicanum restores its functional capacity concomitantly to the structural recovery of the myocardium by proliferation of cardiomyocytes after PVA. These properties make the heart of A. mexicanum a potential model to study the mechanisms underlying heart regeneration in adult vertebrates in vivo.
En el presente estudio evaluamos el efecto de la amputación parcial del ventrículo (APV) del corazón de un anfibio urodelo adulto (Ambystoma mexicanum) in vivo, sobre la actividad contráctil espontánea del corazón registrada in vitro, a diferentes tiempos después de APV, en asociación a su recuperación estructural. Un día después del daño, los valores de tensión ventricular (TV) (16 ± 3%), tensión auricular (TA) (46 + 4%) y frecuencia cardiaca (FC) (58 + 10%), resultaron ser menores respecto al control. En los días cinco, 30 y 90 después del daño, los valores alcanzaron 61 ± 5, 93 ± 3 y 98 ± 5% (TV), 60 ± 4, 96 ± 3 y 99 ± 5% (AT) y 74 ± 5, 84 ± 10 y 95 ± 10% (FC) de los valores control, respectivamente. Además de la recuperación de la actividad contráctil, corroboramos la recuperación estructural y gradual del tejido miocárdico por proliferación de cardiomiocitos. Nuestros resultados representan la primera evidencia cuantitativa de la recuperación de la actividad contráctil del corazón de un anfibio urodelo adulto después de APV; indicando que el corazón de A. mexicanum recupera su capacidad funcional concomitantemente con la recuperación estructural del miocardio por proliferación de cardiomiocitos. El corazón de A. mexicanum es un modelo potencial para el estudio de los mecanismos de la regeneración miocárdica de vertebrados adultos in vivo.