Resistome in gram-negative bacteria from soft cheese in Brazil / Resistoma em bactérias gram-negativas de queijo minas frescal no Brazil

Objective: evaluation of antibiotic resistance in Gram-negative microbiota from ready-to-eat cheese samples. Methodology: this research applied an adapted methodology to select from a food sample viable Gram-negative microbiota displaying antibiotic resistance. The selected food was a cheese that is commonly consumed without thermal processing, the Minas Frescal cheese. The evaluation was followed by a PCR screening in this resistant microbiota, for genes that provide resistance to antibiotics and also to the quaternary ammonium. Results: all cheese samples harbored a resistant microbiota. In 13.3% of the cheese samples analyzed, the resistance reached all ten different antibiotics tested and, in 80%, 8 to 10 different antibiotics. In antibiotics considered critics as the carbapenems: ertapenem presented resistant microbiota in 86.7% of the samples. In cephalosporins, the resistance reached 100% in the third generation (ceftazidime) and almost half of the samples (46.7%) in the fourth generation (cefepime). In genotypic research, seven different resistance genes were found in 69.2% of the bacterial pools, including the beta-lactamase-producing genes ctx, tem, shv, tetracycline-resistant genes, and a high rate of integrons class 1 and 2. Conclusion: the results indicate phenotypically and genotypically that the Minas Frescal cheese can harbor potential resistant microbiota. Therefore, the methodology used is a viable possibility and with a broader answer about the food microbiota role in resistance. This research corroborates the food area as an important sector to be managed to reduce the process of antibiotic resistance.

Objetivo: avaliação da resistência a antibióticos em microbiota Gram-negativa de amostras de queijo prontas para consumo. Metodologia: esta pesquisa aplicou uma metodologia adaptada para selecionar a microbiota Gram-negativa viável apresentando resistência a antibióticos em uma amostra de alimento. O alimento selecionado foi um queijo frequentemente consumido sem processamento térmico, o queijo Minas Frescal. A avaliação foi seguida de uma triagem por PCR, nesta microbiota resistente, para genes que fornecem resistência aos antibióticos e também ao quaternário de amônio. Resultados: todas as amostras de queijo apresentaram microbiota resistente. Em 13,3% dos queijos analisados essa resistência alcançou todos os 10 diferentes antibióticos testados e em 80% entre 8 e 10 antibióticos diferentes. Em antibióticos considerados críticos como os carbapenêmicos: ertapenem apresentou microbiota resistente em 86,7% das amostras. Nas cefalosporinas, a resistência atingiu 100% na terceira geração (ceftazidima) e quase a metade das amostras (46,7%) na quarta geração (cefepime). Na pesquisa genotípica, sete diferentes genes de resistência foram encontrados em 69,2% dos pools bacterianos, incluindo o genes produtores de beta-lactamase, genes de resistência à tetraciclina, ctx, tem, shv e uma alta taxa de integron classe 1 e 2. Conclusão: os resultados indicam fenotipicamente e genotipicamente que o queijo Minas Frescal pode apresentar uma potencial microbiota resistente. Portanto, a metodologia utilizada é uma possibilidade viável e com uma resposta mais ampla sobre o papel da microbiota na resistência. Esta pesquisa corrobora a área de alimentos como um setor importante a ser gerenciado para redução no processo de resistência a antibióticos.

Shock séptico de origen ginecológico por Pasteurella multocida / Septic shock of gynecological origin by Pasteurella multocida

La Pasteurella multocida es una gammaproteobacteria oportunista que produce una zoonosis caracterizada clínicamente por desarrollar cuadros mayoritariamente respiratorios como neumonía y rinitis atrófica, aunque las manifestaciones clínicas pueden derivar de la colonización de tejidos vascularizados y partes blandas de casi cualquier órgano, produciendo hemorragias, dermonecrosis, celulitis, meningitis, abscesos, septicemia, osteomielitis o endocarditis, entre otras. Este microorganismo se transmite a los humanos a través de mordeduras, arañazos o lesiones producidas por animales domésticos (especialmente gatos y perros), pero también salvajes. El diagnóstico es eminentemente clínico, apoyándose también en una anamnesis pormenorizada, y confirmándose mediante el crecimiento bacteriano en medios de cultivo como el agar sangre o el agar chocolate, de las muestras obtenidas de los pacientes afectados por esta rara infección. La antibioterapia con B-lactámicos durante 2 o 3 semanas, es la base terapéutica de este cuadro, aunque existe un alto porcentaje de pacientes con resistencia a los mismos, pudiendo necesitar terapias basadas en otros antibióticos como carbapenem, fluoroquinolonas o tetraciclinas. Las líneas de investigación más actuales están dando una gran importancia a los procedimientos de inmunización en animales domésticos, ya que por una parte son los principales vectores de transmisión y, por otro lado, la vacunación en humanos ha demostrado no ser efectiva, debido a la baja prevalencia de esta enfermedad en las personas expuestas. A continuación, presentamos el caso de una paciente con antecedentes de miomas uterinos y convivencia con gatos domésticos, que sufre un shock séptico por Pasteurella multocida, que tiene como principal foco infeccioso su útero miomatoso.

Pasteurella multocida is an opportunistic gammaproteobacteria which produces a zoonosis characterized clinically by developing majority respiratory pneumonia and atrophic rhinitis, even the clinical manifestations can be derived from the colonization of vascularized tissue and soft tissue of almost any organ, causing bleeding, dermonecrosis, cellulitis, meningitis, abscesses, sepsis, osteomyelitis or endocarditis, among others. This organism is transmitted to humans through bites, scratches or injuries caused by pets (especially cats and dogs), but also animals wild. The diagnosis is clinical, also leaning on a detailed anamnesis, and confirming through the bacterial growth in culture medium such as blood agar or chocolate agar samples from patients affected by this rare infection. With B-lactam antibiotic therapy for 2 or 3 weeks, is therapeutic base, although there is a high percentage of patients with resistance to them, and may need therapies based on other antibiotics as carbapenem, fluoroquinolones or tetracyclines. The lines of research are giving great importance to immunization procedures in domestic animals, since on the one hand are the main vectors of transmission and, on the other hand, vaccination in humans has proven to be not effective, due to the low prevalence of this disease in exposed persons. Then, present the case of a patient with a history of uterine fibroids and coexistence with domestic cats, suffering septic shock by Pasteurella multocida, which has as its main infectious focus your fibroid uterus.

Perfil de sensibilidade de células sésseis e planctônicas de Escherichia coli a antimicrobianos usados no tratamento da mastite bovina / Sensitivity profile of planktonic and sessile cells of Escherichia coli to antimicrobial used in the treatment of bovine mastitis

Escherichia coli é um micro-organismo altamente adaptativo e sua habilidade em formar biofilmes pode ser fundamental na resistência a tratamentos com antimicrobianos. A avaliação da concentração mínima inibitória (CMI) vem sendo utilizada para verificar a sensibilidade dos micro-organismos aos antimicrobianos. Entretanto, quando se avaliam células sésseis, a concentração do antimicrobiano requerido para erradicação do biofilme é maior do que a determinada pela CMI. Objetivou-se comparar as CMI com as concentrações mínimas de erradicação de biofilmes (CMEB) de antimicrobianos usados no tratamento da mastite em 27 isolados de E. coli produtores de biofilmes provenientes de mastite. Os isolados foram submetidos a testes de sensibilidade a antimicrobianos usados no tratamento da mastite, tanto para células planctônicas, por meio da CMI, quanto para células sésseis, pela avaliação da CMEB. Os resultados revelaram uma alta sensibilidade: apenas quatro (14,8%) isolados obtiveram valores da CMI elevados, variando de 4 a 10µg/mL, sendo classificados como resistentes. Para os demais isolados (85,2%), os valores foram menores, variando de 0,125 a 2µg/mL, classificados como sensíveis. A avaliação de CMEB indicou que a concentração dos antimicrobianos necessária para eliminar as células sésseis variou de 100µg/mL a 500µg/mL. Os valores de CMEB foram significativamente maiores nos isolados grandes e moderados produtores de biofilmes em relação aos isolados fracos produtores de biofilmes (p<0,001). Não houve correlação entre os valores de CMEB e CMI (p>0,05). A escolha da terapêutica antimicrobiana correta para o tratamento de infecções intramamárias em bovinos relacionadas com a produção de biofilmes parece exigir a aplicação de testes mais específicos. Testes de susceptibilidade antimicrobiana baseados apenas em valores de CMI mostraram-se ineficazes em determinar com precisão a susceptibilidade das células bacterianas sésseis.

Escherichia coli is a highly adaptive microorganism. Its ability to form biofilms may be critical for resistance to antimicrobial treatments. Evaluation of minimum inhibitory concentration (MIC) has been used to check the sensitivity of microorganisms to antibiotics, however, when evaluating sessile cells, the required antibiotic concentration to eradicate biofilm is greater than determined by MIC. This study aimed to compare MIC with minimum biofilm eradication concentration (MBEC) of antimicrobials used in mastitis treatment in 27 E. coli biofilm producers isolates from mastitis. Isolates were tested for sensitivity to antimicrobials used in mastitis treatment, for both planktonic cells (by CMI) and sessile cells (by MBEC). The results revealed high sensitivity: only four (14.8%) isolates showed high MIC values, ranging from 4 to 10g/mL and they were classified as resistant. All other isolates (85.2%) showed lower values, ranging from 0.125 to 2mg/mL, and they were classified as sensitive. Evaluation of MBEC indicated that concentration of antimicrobial needed to remove sessile cells ranged from 100mg/mL to 500mg/mL. MBEC values were significantly higher in large and moderate biofilm producers isolates regarding weak biofilm producers isolates (p<0.001). There was no correlation between MBEC and CMI values (p>0.05). The correct choice of antimicrobial therapy for treatment of mammary infections in cattle related to biofilm production seems to require application of more specific tests. Antimicrobial susceptibility testing based only on MIC values proved ineffectiveness to accurately determination the susceptibility of sessile bacterial cells.

Metalo beta lactamasas: el fin de los beta lactámicos? / Metallo beta lactamases: the end of beta lactams?

Uno de los grupos de antibióticos más importantes, es el grupo de los beta-lactámicos. Para ejercer su acción antimicrobiana los beta-lactámicos requieren penetrar la pared celular y atacar las Proteínas Ligadoras de Penicilinas (Penicilin Binding Proteins: PBP). El mecanismo más utilizado por los bacilos Gram negativos para adquirir resistencia a beta-lactámicos, es la inactivación de las drogas por las enzimas beta-lactamasas. La producción de beta-lactamasas tipo carbapenemasas es un mecanismo de resistencia de gran importancia. Estas enzimas, codificadas por genes que en su mayoría están localizados en elementos genéticos tales como los integrones o insertados en elementos móviles como transposones y plásmidos, se han extendido rápidamente entre los agentes patógenos de importancia clínica, como Enterobacterias, P. aeruginosa y A. baumanii. Las metalo-beta-lactamasas (MbetaL) pertenecientes al grupo B de Ambler y el grupo 3 de Bush, poseen cuatro características principales: (i) Poseen actividad contra los carbapenemes, (ii) No hidrolizan los monobáctamicos como el aztreonam, (iii) Son inhibidas por quelantes como el EDTA o el Mercapto acetato de Sodio; y (iv) Requieren cationes +2 divalentes, generalmente Zn como cofactor para su actividad catalítica. La aproximación de un disco conteniendo un agente quelante a uno que contiene un carbapeneme podría resultar una herramienta útil para la detección de MbetaLs. El efecto sinérgico entre los carbapenemes [imipenem (IPM) y/o meropenem (MEN)] y el agente quelante sería indicativo de la presencia de MbetaL. La aparición de metalo-beta-lactamasas como una amenaza sustancial a la salud debe impulsar a las autoridades de salud para formular un plan de contención, para su implementación a nivel nacional. Este plan debe asegurar la detección temprana de casos, la vigilancia permanente de brotes y una estrategia en entornos con presencia espor dica o ausencia completa de productores metalo-beta-lactamasa.

One of the most important groups of antibiotics, is the group of beta-lactams. To exert its antimicrobial action the beta-lactam require penetrate and attack the cell wall Penicillin Binding Proteins (PBP). The mechanism used by Gram negative bacilli to acquire resistance tobeta-lactams, is drug inactivation by beta-lactamase enzymes. The production of beta-lactamase carbapenemases is a resistance mechanism of great importance. These enzymes encoded by genes that are located mostly in genetic elements such as integrons or inserted in mobile elements such as transposons and plasmids, have spread rapidly among clinically important pathogens such as Enterobacteriaceae, P. aeruginosa and A. baumannii. The metallo-beta-lactamases (MbetaL) in group B and group 3 Ambler Bush, have four main characteristics: (i) possess activity against carbapenems, (ii) not hydrolyze monobactams like aztreonam, (iii) are inhibited by chelating agents such as EDTA or sodium acetate Mercapto and (iv) require divalent cations, usually Zn+2 cofactor for its catalytic activity. The approximation of a disc containing a chelating agent containing one carbapeneme could be a useful tool for detecting MbetaLs. The synergistic effect between carbapenems [imipenem (IPM) and/or meropenem (MEN)] and the chelating agent would be indicative of the presence of MbetaL. The emergence of metallo-beta-lactamase as a substantial threat to health should prompt health officials to develop a plan of containment, for implementation at the national level. This plan should ensure early case detection, continuous surveillance of outbreaks and strategy in environments with sporadic presence or complete absence of metallo-beta-lactamase.