Aislación y caracterización de las células epiteliales del amnios / Isolation and characterization of amniotic ephitelial cells

RESUMEN: Las células epiteliales del amnios (hAECs) son células madre pluripotenciales; tienen capacidad de diferenciarse en células de las tres capas embrionarias. Como tales, se utilizan en algunas terapias regenerativas en medicina. Este estudio tiene por objetivo describir un protocolo de aislación de las células epiteliales del amnios (hAECs) a partir de placentas humanas de partos por cesárea, así como su caracterización y comportamiento in vitro. Se aislaron hAECs de 20 placentas de partos por cesárea con un protocolo optimizado. Se caracterizaron las células mediante citometría de flujo, microscopia óptica y de fluorescencia, y se evaluó la proliferación de las células mediante MTT a los 1, 3, 5 y 7 días con y sin β-mercaptoetanol en el medio de cultivo. El análisis histológico del amnios mostró un desprendimiento prácticamente completo de las células después de la segunda digestión del amnios. El promedio de células obtenidas fue de 10.97 millones de células por gramo de amnios. Las hAECs mostraron una proliferación limitada, la cual no fue favorecida por la adición de β-mercaptoetanol en el cultivo. Se observó un cambio de morfología espontanea de epitelial a mesenquimal después del cuarto pasaje. Las células epiteliales del amnios pueden ser aisladas con un protocolo simple y efectivo, sin embargo, presentan escasa capacidad proliferativa. Bajo las condiciones de este estudio, la adición de β-mercaptoetanol no favorece la capacidad proliferativa de las células.

SUMMARY: human amnion epithelial cells (hAECs) are pluripotent stem cells; they have the ability to differentiate into cells of the three embryonic layers, and are used in various regenerative therapies in medicine. This study aims to describe a protocol for the isolation of amnion epithelial cells (hAECs) from human placentas from cesarean delivery, as well as their characterization and culture conditions in vitro. hAECs were isolated from 20 cesarean delivery placentas with an optimized protocol. The cells were characterized by flow cytometry, light and fluorescence microscopy, and the proliferation of the cells was evaluated by MTT at 1, 3, 5 and 7 days with and without β-mercaptoethanol in the culture medium. Histological analysis of the amnion showed a practically complete detachment of the cells of the underlying membrane after the second digestion. The average number of cells obtained was 10.97 million cells per amnion. The hAECs perform a limited proliferation rate, which was not favored by the addition of β-mercaptoethanol in the culture. A spontaneous morphology change from epithelial to mesenchymal morphology is exhibited after the fourth passage. The epithelial cells of the amnion can be isolated with a simple and effective protocol, however, they present little proliferative capacity. Under the conditions of this study, the addition of β-mercaptoethanol does not favor the proliferation of the cells.

Primary squamous cell carcinoma of the sigmoid colon: a case report and literature review

Primary squamous cell carcinoma of the colon is extremely rare. The etiology is poorly understood, and currently, there are different hypotheses about the origin of this malignant neoplasm. Here, we report a case of an 87-year-old male with a moderately-differentiated nonkeratinizing squamous cell carcinoma of the colon.

El carcinoma primario de células escamosas de colon es extremadamente raro. La etiología es poco conocida, y actualmente existen diferentes hipótesis sobre el origen de esta neoplasia maligna. A continuación, presentamos un caso de un hombre de 87 años con un carcinoma de células escamosas no queratinizante moderadamente diferenciado de colon.

Presencia de células tubulares renales reactivas en pacientes con enfermedad renal crónica / Presence of reactive renal tubular cells in patients with chronic kidney disease

Resumen En pacientes con enfermedad renal se ha reportado la presencia de células renales reactivas, cuyas alteraciones morfológicas severas dificultan su clasificación e interpretación. El conocimiento de las características morfológicas y los patrones de sedimentos en donde se presentan pueden ser de ayuda para su manejo en los departamentos médicos correspondientes. Aquí, nosotros reportamos la presencia de células agrupadas en acinos, con abundante citoplasma, cariomegalia, contornos nucleares irregulares y nucléolos prominentes, acompañados de cilindruria y cuerpos ovales grasos en el sedimento urinario de dos pacientes con diabetes mellitus, las cuales fueron sugestivas de células renales reactivas.

Abstract In patients with kidney disease, the presence of reactive renal cells has been reported. These cells show several morphological alterations that difficult their classification and interpretation. Therefore, the knowledge of its morphological characteristics and sediments patterns where they can be found will helpful for their correct management by medical departments. Here, we reported the presence of renal cells grouped in acinus with abundant cytoplasm, cariomegaly, irregular nuclear contours and prominent nucleoli, accompanied with cilindruria and fatty oval bodies in the urinary sediment of two patients with Diabetes Mellitus, these cells were named as reactive renal cells.

Utilidad de tinción de tricrómico de Masson en la cuantificación de densidad media vascular en mucosa oral normal, displasia epitelial y carcinoma oral de células escamosas / Utility of Masson's trichrome stain in the quantification of mean vascular density in normal oral mucosa, epithelial dysplasia and oral squamous cell carcinoma

RESUMEN: El objetivo de este estudio fue valuar la utilidad del uso de la tinción de Tricrómico de Masson (TM) en la cuantificación de la densidad media vascular (DMV) en Mucosa Oral Normal (MON), Displasia Epitelial Oral (DEO) y Carcinoma Oral de Células Escamosas (COCE). Estudio descriptivo de serie de casos. Se analizaron 17 muestras de MON, 15 muestras de DEO y 16 de COCE, teñidas con TM. Para determinar su utilidad, se compararon con las mismas muestras analizadas con técnica de inmunohistoquímica contra CD31. La cuantificación de la DMV se realizó en las 3 áreas de mayor vascularización de cada muestra. Se determinó la DMV según diagnóstico mediante la tinción TM e inmunohistoquímica contra CD31, y se calculó la correlación entre ambos. La DMV cuantificada con TM y contra CD31 difiere según el diagnóstico, observándose un aumento de la DMV al malignizarse el diagnóstico. No se encontraron diferencias al comparar la DMV cuantificada con TM y contra CD31. La correlación de la DMV analizado por TM y contra CD31 es significativa y moderada. La cuantificación de vasos sanguíneos es posible mediante la tinción de TM en muestras de MON, DEO y COCE, con una correlación moderada con la inmunohistoquímica contra CD31.

SUMMARY. The objective of this study was to evaluate the utility of Masson's Trichrome (TM) staining in the quantification of the mean vascular density (DMV) in samples of normal oral mucosa (MON), oral epithelial dysplasia (ODE) and oral squamous cell carcinoma (COCE). The design - a descriptive study of case series. We analyzed 17 samples of MON, 15 samples of DEO and 16 samples of COCE, stained with TM. To determine usefulness, we compared and analyzed the same samples, either stained with TM or with immunohistochemical technique against CD31. Quantification of the DMV was performed in the 3 areas of greatest vascularization in each sample. DMV was determined according to diagnosis by TM staining and immunohistochemistry against CD31, and the correlation between the two was then calculated. DMV quantified with TM and against CD31 differs according to the diagnosis, with an increase in DMV upon malignant diagnosis. No differences were found when comparing DMV quantified with TM and against CD31. The correlation of the DMV analyzed by TM and against CD31 is significant and moderate. Quantification of blood vessels is possible by TM staining in samples of MON, DEO and COCE. TM staining is moderately correlated with immunohistochemistry against CD31.

Ultrastructure of the secretory epithelial cells of the bulbo-urethral glands (Cowper's gland) in the Indian fruit bat, Rousettus leschenaulti (Desmarest) during the reproductive cycle / Ultraestructura de las células epiteliales secretoras de las glándulas bulbouretrales (glándula de Cowper) en el murciélago de la India, Rousettus leschenaulti (Desmarest) durante el ciclo reproductivo

The present paper describes the ultrastructural characteristics of the bulbo-urethral gland (Cowper' glands) of the Indian fruit bat, R. leschenaulti during sexually inactive-breeding cycle. Cyclic histological changes during the seasonal breeding quiescence cycle are not well marked. There are no marked differences. The ultrastructural characteristic of the secretory epithelial cells of Bulbo-Uretrhal Gland gland have been studied during different phases of reproductive cycle. The secretory epithelial cells are characterized by the well-developed rough endoplasmic reticulum, extensive developed complexus golgiensis (Golgi apparatus) and mitochondria. Mitochondria with lamellate cristae are dispersed in the cytoplasm. Three different types of secretory granules can be identified on the basis of electron density. These granules are not of different types but they represent the different stages of granule maturation. The secretory products of bulbo-urethral gland of bat are released into lumen both by apocrine and merocrine modes. The functional significance of the secretions of the bulbo-urethral glands in reproduction is discussed.

El presente trabajo describe las características ultraestructurales de las glándulas bulbouretrales (glándulas de Cowper) del murciélago de la fruta de la India, R. leschenaulti durante el ciclo inactivo de reproducción sexual. Los cambios histológicos cíclicos durante el ciclo de quiescencia estacional de la cría no están bien determinados. No hay diferencias marcadas. La característica ultra estructural de las células epiteliales secretoras de la glándula bulbouretral ha sido estudiada durante diferentes fases del ciclo reproductivo. Las células epiteliales secretoras se caracterizan por un retículo endoplasmático rugoso bien desarrollado, el complexus golgiensis (complejo de Golgi) y mitocondrias desarrollados extensamente. Las mitocondrias con crestas lamelares se encontraron dispersas en el citoplasma. Se pueden identificar tres tipos diferentes de gránulos secretores en base a la densidad de electrones. Estos gránulos no son de tipos diferentes, sino que representan las diferentes etapas de maduración del gránulo. Los productos secretores de las glándulas bulbouretrales de murciélagos son liberados en el lumen tanto por modos apócrinos como merócrinos. Se discute la importancia funcional de las secreciones de la glándula bulbouretral en la reproducción.

Evaluation of the Impact of Alveolar Bone Resorption on the Root Formation of Molars in Transgenic Mice with RANK Over-expression / Evaluación del Imapacto de la Resorción Ósea Alveolar sobre la Formación Radicular de Molares en Ratones Transgénicos con Sobreexpresión de RANK

Alterations in the balance of the osteoblastic-osteoclastic activity (osteopetrosis, osteolysis) have an impact on the dental development. The over activation of the osteoclastogenesis pathway RANK/RANKL/OPG in RANKTg mice produces an acceleration of tooth eruption and root elongation, suggesting this pathway could control the speed of tooth formation. Evaluate the effect of osteoclastic hyperactivity on the root formation of molars in RANKTg mice. Histologic study both descriptive and comparative of the impact of hyper-resorption of the alveolar bone in Hertwig's epithelial root sheath (HERS) of molars in both RANKTg mice and controls. This is done through the immuno-detection of matrical, epithelial and cellular proliferation proteins with histological, histoenzymology and inmunohistochemical techniques. Osteoclastic hiperactivity in alveolar bone does not alter the root structure and integrity of molars in RANKTg mice; the acceleration in root formation does not alter the HERS integrity. An area of cellular hyper-proliferation in the apical follicular tissue of HERS was found, which could regulate root growth in response to osteoclastic activity. The overexpressed RANK produces an inhibition of amelogenin expression at 5 days of age, suggesting an indirect regulation of these cells by RANK/RANKL. Exploring other molecular factors expressed in HERS, and the related engram, would make possible the use of new therapies for the control of osseous and inflammatory pathologies during root formation.

Las alteraciones en el balance de la actividad osteoblástica-osteoclástica (osteopetrosis, osteolisis) tienen un impacto en el desarrollo dental. La activación de la vía sobre la osteoclastogénesis RANK/RANKL/OPG en ratones RANKTg produce una aceleración de la erupción de los dientes y elongación de las raíces, lo que sugiere que esta vía podría controlar la velocidad de formación de los dientes. El objetivo de este estudio consiste en evaluar el efecto de la hiperactividad osteoclástica en la formación de las raíces de los molares en ratones RANKTg. Se realizó un estudio histológico descriptivo y comparativo del impacto de la hiper-reabsorción del hueso alveolar sobre la vaina epitelial radicular (de Hertwig - HERS) de molares en ratones RANKTg y controles. Se realizó la inmuno-detección de la proliferación matricial, epitelial y celular de proteínas, combinada con técnicas histológicas, inmunohistoquímicas e histoenzimológicas. La hiperactividad osteoclástica en el hueso alveolar no altera la estructura de la raíz dentaria y la integridad de los molares en ratones RANKTg; la aceleración de la formación de la raíz no altera la integridad de la misma. Se encontró un área de hiper-proliferación celular en el tejido folicular apical del HERS, que podría regular el crecimiento de la raíz en respuesta a la actividad osteoclástica. La sobreexpresión en los RANK produce una inhibición de la expresión de amelogenina a los 5 días de edad, lo que sugiere una regulación indirecta de estas células por RANK/RANKL. La exploración de otros factores moleculares expresados en HERS, y el engrama relacionado, haría posible el uso de nuevas terapias para el control de patologías óseas e inflamatorias durante la formación de la raíz dentaria.

Metotrexate como inductor en la producción de citocinas proinflamatorias en células epiteliales / Methotrexate as inducer of proinflammatory cytokines by epithelial cells

El metotrexate (MTX) es uno de los medicamentos frecuentemente utilizados en el cáncer infantil señalándose además, como agente citotóxico de la mucosa bucal, que puede desencadenar el proceso inflamatorio e incremento de la vascularidad en los tejidos epiteliales durante las fases iniciales de la mucositis oral. El presente trabajo tiene como objetivo determinar la producción de citocinas proinflamatorias IL-1b, IL-6 y TNF-a en cultivos de células epiteliales tratadas con MTX. Se realizaron cultivos de células epiteliales de laringe humana obtenidas de la línea celular Hep-2, con diferentes dosis de MTX en distintos tiempos de incubación, y a su vez se analizó la citotoxicidad del fármaco mediante el ensayo colorimétrico, el cual se basa en la reducción metabólica del bromuro de 3-(4,5- dimetiltiazol-2-ilo)-2,5-difeniltetrazol (MTT), y la producción de citocinas proinflamatorias mediante el ensayo inmuno enzimático indirecto (ELISA). En cuanto a los resultados se observó, que los cultivos de células Hep-2 presentaron aumento en la producción de las citocinas proinflamatorias a las 72 horas al utilizar las dosis de 0.32µM MTX. Estos resultados sugieren que la dosis y el tiempo de exposición del MTX alteran la fisiología de las células epiteliales humanas, lo cual podrían desempeñar un papel importante durante las fases de iniciación y de desarrollo de la mucositis oral.

Methotrexate (MTX), a drug commonly used in childhood cancer, has also been indicated as a cytotoxic agent of the oral mucosa, which can trigger the inflammatory process and increase the vascularity of epithelial tissues during the early stages of oral mucositis. The aim of this study was to determine the production of proinflammatory cytokines IL-1b, IL-6 y TNF-a in epithelial cell cultures treated with MTX. Epithelial cells of human larynx, obtained from the cell line Hep-2, were cultured with different doses of MTX during different incubation times. The drug cytotoxicity was analyzed by means of the colorimetric test, which is based on the metabolic reduction of the bromide of 3-(4, 5-dimetiltiazol-2-ilo)-2,5-difeniltetrazol (MTT); and the proinflammatory cytokines production by the test enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Cultures of HEp-2 cells showed increased production of proinflammatory cytokines at 72 hours with 0.32µM of MTX. These results suggest that depending on the dose and exposure time, MTX alters the physiology of human epithelial cells, which may play an important role during the phases of initiation and development of oral mucositis.

Anti-proliferative activities of centella asiatica extracts on human respiratory epithelial cells in vitro / Actividades antiproliferativas del extracto de centella asiatica sobre células epiteliales respiratorias humanas in vitro

Centella asiatica or "pegaga" is well known for its ability in promoting wound healing. This study focused on the effect of Centella asiatica on the proliferation of human respiratory epithelial (RE) cells. RE cells were cultured using co-culture techniques until first passage (P1). Viability cell test by tryphan blue dye exclusion assay showed that there was high percentage of cell viability at both P0 (74 percent) and P1 (91.61 percent). Triplicate MTT assays were carried out with different concentrations of C. asiatica from 15.6 ppm, 31.3 ppm, 62.5 ppm, 125 ppm, 250 ppm, 500 ppm, 1000 ppm, until 2000 ppm. The higher the concentration of C. asiatica, the more inhibitory effect was seen. C. asiatica aqueous extract at concentration 1000 ppm and 2000 ppm demonstrated a significant (p<0.05) inhibitory effect on human RE cells proliferation on day 4 and day 7 after treatment. This provides potential use of C. asiatica extract for the treatment of conditions with respiratory epithelial cells overgrowth.

La Centella asiatica o "pegaga" es conocida por su capacidad para promover la cicatrización de heridas. Este estudio se centró en el efecto de la Centella asiatica sobre la proliferación de las células del epitelio respiratorio (ER) humano. Las células del ER se cultivaron usando técnicas de co-cultivo hasta el primer paso (P1). La prueba la viabilidad celular mediante el ensayo de exclusión del colorante azul de tripano demostró un alto porcentaje de viabilidad celular tanto en P0 (74 por ciento) y P1 (91,61 por ciento). Ensayos de MTT por triplicado se llevaron a cabo con diferentes concentraciones de C. asiatica, desde 15,6 ppm, 31,3 ppm, 62,5 ppm, 125 ppm, 250 ppm, 500 ppm, 1000 ppm, hasta 2000 ppm. Con una mayor concentración de C. asiatica, se observó un mayor efecto inhibitorio. El extracto acuoso de C. asiatica a una concentración de 1000 ppm y 2000 ppm demostró un efecto inhibidor significativo (p<0,05) sobre la proliferación de células del ER humano los días 4 y 7 posterior al tratamiento. Esto proporciona el uso potencial del extracto de C. asiatica para el tratamiento de condiciones con crecimiento excesivo células epiteliales respiratorias.

Evaluation of three mathematical functions to describe the relationship between body weight, body condition and testicular dimensions in yankasa sheep / Evaluación de tres funciones matemáticas para describir la relación entre peso corporal, condición corporal y dimensión testicular en carneros yankasa

Body size and testicular measurements have been found to be important parameters utilized in breeding soundness evaluation. The present study therefore, aimed at determining the relationship between body weight (BW), body condition score (BCS), testicular length (TL), testicular diameter (TD) and scrotal circumference (SC) in 120 extensively reared Yankasa rams (approximately 30 months old) using linear, quadratic and cubic predictive models. Coefficient of determination (R2), Adjusted R2, the estimate of Mallows' Cp, RMSE (Root mean squares error) and the parsimony principle (p=number of parameters) were used to compare the efficiency of the different models. Strong Pearson's correlation coefficients (r = 0.83-0.94; P<0.01) were found between BW, TL, TD and SC. Spearman correlations between BCS and other variables were also highly significant (r = 0.78-0.85; P<0.01). SC was the sole variable of utmost importance in estimating BW, which was best predicted using the cubic model. However, the optimal model for BW prediction comprised TD, SC and BCS with p, R2, Adjusted R2, RMSE and Cp values of 4, 0.948, 0.946, 1.673 and 4.85, respectively. The present findings could be exploited in husbandry and selection of breeding stock for sustainable sheep production especially within the resource-poor farming system under tropical and subtropical conditions.

El tamaño corporal y las mediciones testiculares son importantes parámetros utilizados en la evaluación del buen estado de reproducción. El presente estudio, tuvo como objetivo determinar la relación entre el peso corporal (PC), score de condición corporal (SCC), longitud testicular (LT), diámetro testicular (DT) y la circunferencia escrotal (CE) en 120 carneros Yankasa criados extensivamente (aproximadamente 30 meses de edad), utilizando modelos predictivos lineales, cuadráticos y cúbicos. Se utilizaron el coeficiente de determinación (R2), R2 ajustado, estimación Cp de Mallows, ERCM (errores de raíz cuadrada media) y el principio de parsimonia (p = número de parámetros) para comparar la eficiencia de los diferentes modelos. Un fuerte coeficiente de correlación de Pearson (r= 0,83-0,94, p<0,01 ) se encontró entre PC, LT, DT y CE. Las correlaciones de Spearman entre SCC y otras variables también fueron altamente significativas (r= 0,78-0,85, p<0,01). La CE fue la única variable de suma importancia en la estimación de PC, que fue predicha de mejor manera utilizando el modelo cúbico. Sin embargo, el modelo óptimo para la predicción del PC comprendiendo DT, CE y SCC con valores p, R2, R2 ajustado, ERCM y Cp de Mallows de 4; 0,948; 0,946; 1,673 y 4,85, respectivamente. Los presentes hallazgos podrían ser explotados en la cría y selección del ganado de cría para la producción sostenible de ovejas, en especial dentro de sistemas con escasos recursos agrícolas bajo condiciones tropicales y subtropicales.

Parámetros morfométricos de la mucosa en pacientes portadores de leucoplasia bucal con displasia epitelial / Morphometric parameters of the mucosa in patients that carry oral leukoplakia with epithelial dysplasia

Fundamento: la leucoplasia bucal es la lesión premaligna más frecuente, puede presentarse con displasia epitelial, que es el rasgo más importante de sus diversos cambios histopatológicos. Los métodos morfométricos y estereológicos permiten complementar el análisis histopatológico convencional de la displasia epitelial. Objetivo: caracterizar las lesiones de la mucosa con leucoplasia bucal según grado de displasia epitelial a través de indicadores morfométricos y estereológicos. Método: se realizó un estudio observacional descriptivo. El universo lo conformaron 68 biopsias de pacientes con diagnóstico clínico e histopatológico de leucoplasia y la muestra fue de 15 biopsias de leucoplasias displásicas, en las que se analizaron parámetros morfométricos y estereológicos. Resultados: se encontró que la altura de las crestas epiteliales y la altura del epitelio aumentan a medida que avanza el grado de la displasia epitelial. El valor promedio y su desviación estándar del factor de forma en la displasia ligera fue de 0,86 ± 0,08, en la displasia moderada fue de 0,88 ± 0,09 y en la displasia severa fue de 0,85 ± 0,11. El promedio y la desviación estándar del volumen nuclear y la densidad de perfiles nucleares epiteliales descienden al aumentar la displasia. Conclusiones: a partir del análisis de las variables analizadas en esta investigación podemos sugerir el estudio y la evaluación de la posibilidad de la existencia de algún modelo de relación volumen nuclear-perfiles nucleares-altura del epitelio como instrumento para determinar el comportamiento de la displasia.

Background: oral leukoplakia is the most frequent premalignant lesion; it can appear with epithelial dysplasia that is the most important feature of its various histopathological changes. Morphometric and stereological methods allow complementing the conventional histopathological analysis of epithelial dysplasia. Objective: to characterize the lesions of the mucosa with oral leukoplakia according to the degree of epithelial dysplasia through morphometric and stereological indicators. Method: a descriptive, observational study was conducted. The universe was composed of 68 biopsies from patients with a histopathological and clinical diagnosis of leukoplakia; the sample was composed of 15 biopsies from patients with dysplastic leukoplakias in which morphometric and stereological parameters were analyzed. Results: it was found that as the degree of epithelial dysplasia becomes greater, the more the height of the epithelial crest and the height of the epithelium rise. The average value and its standard deviation of the shape factor in minor dysplasia was of 0.86 ± 0.08, in moderate dysplasia was of 0.88 ± 0.09, and in serious dysplasia was of 0.85 ± 0.11. As the dysplasia becomes greater, the average and the standard deviation of the nuclear volume and the density of epithelial nuclear profile decrease. Conclusions: from the analysis of the variables through this investigation, we can suggest the study and evaluation of the possibility of the existence of a model of nuclear volume-nuclear profile-height of the epithelium relation, as an instrument to determine the behavior of dysplasia.