Leptin and leptin receptor are expressed only in clear cells of rat epididymis epithelia / La leptina y el receptor de leptina se expresan solamente en células claras del epitelio epidídimario de rata

SUMMARY: Leptin is a 16 kilodaltons hormone secreted by adipose tissue and in the past few years it has been related to the reproductive system regulation. Leptin and its receptor (OBR) have been described in several reproductive organs and in different species but, in epididymis, there is still a lack of information. The aim of this work is to establish if leptin and its receptor are present on epididymis and where the production is occurring. At mRNA level the cauda portion showed a high expression of leptin (p<0.025) and OBRa (p<0.002) while at protein level the OBR expression was lower in cauda region (p<0.025) and leptin was not detected. The ratio between OBRa and OBRb was higher in both regions despite its total amount. By immunohistochemistry leptin and OBR were detected on epididymis epithelia, restricted to clear cells (CC). After efferent duct ligation (EDL) a decrease on leptin staining on CC was observed, suggesting that despite of epididymis production, most of leptin source may probably come from testis. Our results show that leptin and OBR, both mRNA and protein, are present on epididymis and exclusively in CC, suggesting that this tissue is responsive to the hormone and may have an important role on CC regulation.

RESUMEN: La leptina es una hormona de 16 kilodaltons secretada por el tejido adiposo y se ha relacionado en los últimos años con la regulación del sistema reproductivo. La leptina y su receptor (OBR) se han reportado en varios órganos reproductores y en diferentes especies sin embargo, en el epidídimo aún falta información. El objetivo de este trabajo fue establecer si la leptina y su receptor están presentes en el epidídimo y donde se produce. A nivel de ARNm la porción de cauda mostró una alta expresión de leptina (p <0,025) y OBRa (p <0,002) mientras que a nivel de proteína la expresión de OBR fue menor en la región de la cauda epididimaria (p <0,025) y no se detectó leptina. La relación entre OBRa y OBRb fue mayor en ambas regiones a pesar de su cantidad total. Por inmunohistoquímica se detectaron leptina y OBR en el epitelio del epidídimo restringido a células claras (CC). Después de la ligadura del conducto deferente (EDL) se observó una disminución en la tinción de leptina en CC, lo que sugiere que a pesar de la producción del epidídimo, la mayor parte de la fuente de leptina puede provenir probablemente del testículo. Nuestros resultados mostraron que la leptina y OBR, mRNA y proteína, están presentes en el epidídimo y exclusivamente en CC, lo que sugiere que este tejido es sensible a la hormona y puede tener un papel importante en la regulación CC.

Análise da expressão de RNAs não-codificadores intrônicos em câncer de rim / Expression analyses of intronic non-coding RNAs in renal cancer

O carcinoma de célula renal (RCC) subtipo célula clara é o câncer mais letal e prevalente do sistema urinário. O diagnóstico deste tipo de câncer frequentemente é tardio em conseqüência da falta de sintomas perceptíveis aos pacientes. Um dos objetivos deste trabalho é a identificação de novos marcadores moleculares para diagnóstico precoce, o que ajudaria a diminuir a mortalidade em função de complicações resultantes do avanço da doença. Outro objetivo é a identificação de um conjunto de marcadores moleculares de prognóstico, de modo à prever com acurácia a evolução clínica da doença e, por conseqüência, o tempo de sobrevida do paciente. As modificações transcricionais associadas à carcinogênese e à progressão do câncer de rim ainda não foram completamente elucidadas. Além dos oncogenes e genes supressores de tumor, RNAs não-codificadores (ncRNAs) recentemente foram apontados como importantes reguladores da expressão gênica em humanos, e podem ter um papel importante na transformação maligna do câncer de rim. Para analisar a expressão gênica de ncRNAs e de genes codificadores para proteína foram utilizados dois microarranjos desenvolvidos por nosso grupo, enriquecidos em sondas para ncRNAs. Uma das plataformas possui 4 mil sondas de cDNA, das quais 822 sondas são para ncRNAs mapeando em regiões intrônicas. Outra possui 44 mil elementos e combina sondas de oligonucleotídeos (60-mer) intrônicas e exônicas de um mesmo locus genômico. Análises estatísticas foram feitas com a ferramenta Significance Analysis of Microarrays (q ≤ 0,05) combinadas ou com a técnica de "patient leave-one-out" (genes com presença em 8 100% dos subconjuntos), ou alternativamente com o teste discriminante de Golub (p ≤ 0,01 ou p < 0,05). Com a plataforma de 4 mil sondas foram estudadas 30 amostras de tecido renal de 18 pacientes com RCC subtipo célula clara. Um conjunto de 36 ncRNAs foi identificado como diferencialmente expresso entre amostras tumorais e não-tumorais...

Renal cell carcinoma (RCC) is the most common malignancy of the adult kidney, and the clear cell subtype is the most prevalent and lethal cancer of the urinary system. Late diagnosis for this type of cancer is frequent, usually as a consequence of the lack of symptoms. One of the objectives of the present work is the identification of new molecular markers for the early diagnosis, which would help decrease mortality that develops as a function of disease progression. Another objective is the identification of a set of prognosis molecular markers, so as to accurately predict the clinical outcome of the disease, and consequently, patient survival. Transcriptional changes associated to carcinogenesis and to kidney cancer progression have not been entirely elucidated. Besides oncogenes and tumor suppressor genes, non-coding RNAs (ncRNAs) have been recently indicated as important regulators of gene expression in humans, and could have an important role in the malignant transformation in renal cancer. In order to measure ncRNA and protein-coding gene expression we have used two microarray platforms developed by our group, which are enriched in ncRNA probes. One of the platforms has 4 thousand cDNA probes, of which 822 are for ncRNAs that map to intronic regions. Another has 44 thousand elements and combines 60-mer oligonucleotide probes for intronic and exonic regions from the same genomic locus. Statistical analyses have been performed with the Significance Analysis of Microarrays tool (q ≤ 0.05) combined with a patient leave-one-out approach (genes present in 100% of the sub-sets), or alternatively with Golubs discriminant test (p ≤ 0.01 or p < 0.05). 11 With the 4-thousand probes platform we studied 30 samples from renal tissue of 18 RCC patients with clear cell subtype. A set of 36 ncRNAs has been identified as differentially expressed between tumor and non-tumor tissue...