Clinical studies using stem cells for treatment of retinal diseases: state of the art / Estudos clínicos com uso de células-tronco para tratamento de doenças da retina: estado da arte

ABSTRACT Degenerative retinal diseases such as retinitis pigmentosa, Stargardt's macular dystrophy, and age-related macular degeneration are characterized by irreversible loss of vision due to direct or indirect photoreceptor damage. No effective treatments exist, but stem cell studies have shown promising results. Our aim with this review was to describe the types of stem cells that are under study, their effects, and the main clinical trials involving them.

RESUMO As doenças degenerativas da retina, como retinose pigmentar, distrofia macular de Stargardt e degeneração macular relaciona à idade, são caracterizadas por perda irre versível da visão devido a danos diretos ou indiretos aos fotorreceptores. Não existem tratamentos eficazes, porém os estudos com células-tronco mostraram resultados promissores. Nosso objetivo com esta revisão foi descrever os tipos de células-tronco em estudo, seus efeitos e os principais ensaios clínicos que as envolvem.

Implicações bioéticas na pesquisa com células-tronco embrionárias / Implicaciones bioéticas en la investigación con células-tronco embrionarias / Bioethical implications of research on embryonic stem-cells

As células-tronco embrionárias são capazes de se diferenciar em vários tipos celulares e podem viabilizar, futuramente, o tratamento para patologias degenerativas e deficiências. Este estudo teve como objetivo analisar as principais implicações bioéticas envolvidas na pesquisa com células-tronco embrionárias e foi elaborado através do levantamento bibliográfico de artigos disponibilizados pela Biblioteca Virtual em Saúde e pelo Portal de Periódicos CAPES. A análise dos artigos utilizados neste estudo demonstrou que a ciência ainda não é capaz de estabelecer quando se inicia a vida humana, que o uso de embriões para a obtenção de células-tronco embrionárias não é consenso entre os pesquisadores e que tratamentos médicos com células-tronco embrionárias ainda não são realidade. Todavia, é importante a realização e o avanço das pesquisas com células-tronco, mas não se pode esquecer que tais avanços não significam aplicação imediata, que podem não corresponder às expectativas geradas e que necessitam de um controle social eficaz.

Las células tronco-embrionarias son capaces de diferenciarse en varios tipos celulares y pueden usarse, en el futuro, para el tratamiento para patologías degenerativas y deficiencias. Este estudio tuvo por objetivo analizar las principales implicaciones bioéticas involucradas en la investigación con células troncales embrionarias y fue elaborado a través de la revisión bibliográfica de artículos en la “Biblioteca Virtual em Saúde” y en el “Portal de Periódicos CAPES”. El análisis de los artículos utilizados en este estudio demostró que la ciencia todavía no es capaz de establecer cuando se inicia la vida humana, que el uso de embriones para la obtención de células troncales embrionarias no es consenso entre los investigadores y que tratamientos médicos con células troncales embrionarias todavía no son realidad. Con todo, es importante la realización y el avance de las investigaciones con células troncales, pero no se puede olvidar que tales avances no significan aplicación inmediata, que pueden no corresponder a las expectativas creadas y que necesitan un control social eficaz.

Embryonic stem-cells are capable of differentiation in diverse cellular types and be used, in the future, for treating degenerative pathologies and deficiencies. This study aimed at analyzing the main bioethical implications of research with embryonic stem cells and was based on a bibliographic revision of articles from the Virtual Health Library and the CAPES Portal de Periódicos. This analysis demonstrated that science is still incapable of establishing when human life begins, that the use of embryos for obtaining cells does not achieve consensus among researchers and that medical treatment based on stem cells are still not a reality. It is important to stress the importance of studies with embryonic stem cells but advances do not mean immediate application that may not correspond to expectations and need social control.

Diferenciação de células-tronco embrionárias murinas (mESCs) em células produtoras de insulina (IPCs) e caracterização funcional do gene Purkinje cell protein 4 (Pcp4) neste processo / Differentiation of murine embryonic stem cells (mESCs) into insulin-producing cells (IPCs) and functional characterization of the Purkinje Cell Protein 4 (Pcp4) gene in this process

Fontes alternativas de células ß têm sido estudadas para o tratamento de Diabetes mellitus tipo 1, dentre as quais a mais promissora consiste das células-tronco diferenciadas em células produtoras de insulina (IPCs). Alguns trabalhos demonstram a capacidade de células-tronco embrionárias murinas (mESCs) de formarem estruturas semelhantes a ilhotas pancreáticas, porém, os níveis de produção de insulina são insuficientes para a reversão do diabetes em camundongos diabetizados. Este trabalho visa desenvolver um protocolo adequado para geração de IPCs e contribuir para a identificação e caracterização funcional de novos genes associados à organogênese pancreática. Logo no início da diferenciação das mESCs em IPCs, foi possível verificar o surgimento de células progenitoras, evidenciado pela expressão de marcadores importantes da diferenciação beta-pancreática. Ao final do processo de diferenciação in vitro, ocorreu a formação de agrupamentos (clusters) semelhantes a ilhotas, corando positivamente por ditizona, que é específica para células ß-pancreáticas. Para avaliar seu potencial in vivo, estes clusters foram microencapsulados em Biodritina® e transplantados em camundongos diabetizados. Apesar dos níveis de insulina produzidos não serem suficientes para estabelecer a normoglicemia, os animais tratados com IPCs apresentaram melhores condições, quando comparados ao grupo controle, tendo melhor controle glicêmico, ganho de massa corpórea e melhor aparência da pelagem, na ausência de apatia. Além disso, análise dos clusters transplantados nestes animais indicou aumento da expressão de genes relacionados à maturação das células ß. Porém, quando estes clusters foram microencapsuladas em Bioprotect® e submetidos à maturação in vivo em animais normais, ocorreu um aumento drástico na expressão de todos os genes analisados, indicando sua maturação completa em células beta. O transplante destas células completamente maturadas em animais diabetizados, tornou-os normoglicêmicos e capazes de responder ao teste de tolerância à glicose (OGTT) de forma semelhante aos animais normais. A segunda parte do trabalho visou analisar genes diferencialmente expressos identificados em estudo anterior do nosso grupo, comparando, através de DNA microarray, mESCs indiferenciadas e diferenciadas em IPCs. Um dos genes diferencialmente expressos é aquele que codifica para a Purkinge cell protein 4 (Pcp4), sendo 3.700 vezes mais expresso em IPCs. Para investigar o possível papel do gene Pcp4 em células ß e no processo de diferenciação ß-pancreática, adotou-se o enfoque de genômica funcional, superexpressando e inibindo sua expressão em células MIN-6 e mESCs. Apesar da alteração na expressão de Pcp4 em células MIN-6 não ter interferido de forma expressiva na expressão dos genes analisados, quando inibido, modificou o perfil da curva de crescimento celular, aumentando seu tempo de dobramento de forma significativa e diminuindo da viabilidade celular em ensaios de indução de apoptose. Já na diferenciação de mESCs em IPCs, a superexpressão de Pcp4 interferiu de forma positiva apresentando uma tendência a aumentar a expressão dos genes relacionado à diferenciaçãoß-pancreática. Concluindo, desenvolvemos um novo protocolo de diferenciação de mESCs em IPCs as quais foram capazes de reverter o diabetes em camundongos diabetizados e descrevemos, pela primeira vez, o gene Pcp4 como sendo expresso em células ß-pancreáticas, podendo estar relacionado à manutenção da viabilidade celular e maturação destas células

New cellular sources for type 1 Diabetes mellitus treatment have been previously investigated, the most promising of which seems to be the insulin producing cells (IPCs), obtained by stem cells differentiation. Some reports show that murine embryonic stem cells (mESCs) are able to form islet-like structures, however, their insulin production is insufficient to render diabetic mice normoglycemic. This work aims at developing an adequate protocol for generation of IPCs and searching for new genes which could be involved in the pancreatic organogenesis process. Early on during mESCs differentiation into IPCs, we observed the presence of progenitor cells, which were able to express pancreatic ß-cell markers. At the end of the differentiation process, the islet-like clusters positively stained for the insulin-specific dithizone. These clusters were microencapsulated in Biodritin® microcapsules, and then transplanted into diabetized mice. Although the levels of insulin production were insufficient for the animals to achieve normoglycemia, those which received IPCs displayed improved conditions, when compared to the control group, as judged by a better glycemic control, body weight gain and healthy fur appearance, in the absence of apathy. In addition, when these transplantated clusters were retrieved, high levels of expression of the genes related to ß-cell maturation were detected. IPCs were also microencapsulated in Bioprotect® and subjected to in vivo maturation in normal animals. A dramatic increase of the analyzed genes expression was observed, indicating complete maturation of the differentiated cells. When these cells were transplanted into diabetized mice, these animals achieved normoglycemia and were able to display glucose tolerance test (OGTT) response very similar to that of normal mice. In the second part of this work, we analyzed upregulated genes described in previous work from our group, comparing undifferentiated mESCs to IPCs using a microarray platform. One of these genes is that coding for the Purkinje cell protein 4 (Pcp4), which is 3,700 more expressed than in undifferentiated mESC cells. We adopted a functional genomics approach to investigate the role played by the Pcp4 gene in ß-cells and in ß-cell differentiation, by inducing overexpression and knocking down this gene in MIN-6 and mESC cells. Although the differential expression of Pcp4 in MIN-6 was not able to interfere with the expression of the genes analyzed, we observed different cell growth rates, with increased doubling time and decreased cell viability when its expression was knocked down. In addition, overexpression of Pcp4 in mESCs subjected to differentiation into IPCs apparently increases the expression of genes related to ß-cell differentiation. In conclusion, we developed a new protocol for ESCs differentiation into IPCs, which is able to revert diabetes in diabetized mice, and we also describe here, for the first time, the Pcp4 gene as being expressed in pancreatic ß-cells and possibly being related to maintenance of cell viability and ß-cell maturation

Expression of progranulin during the first stages of liver development in rat Fischer 344 / Expressão da progranulina durante os primeiros estágios de desenvolvimento hepático em ratos Fischer 344

Transplants are the only effective therapy for the treatment of advanced liver diseases such as cirrhosis. Given the limited number of organ donors, regenerative medicine has sought for sources of cells and tissues for replacement therapy. Embryonic stem cells are a promising source of material for transplantation vecause of their exclusive property of being expanded indefinitely in culture, thus they are a source of replacement tissue. Morcover, they are capable of differentiating into practically all cell types, and may be utilized in replacement therapy in various diseases. The liver bud has bipotent stem cells that gave not yet differentiated into hepatocytes or bibliary duct-cells: however, they have great potential of proliferation and differentiation. Thus, the challenge is to identify methods that promote their differentiation tential of proliferation and and differentiation is specific and functional strains.

Os transplantes são a única terapia para o tratamento de doenças hepáticas avançadas como a cirrose. Dado o número limitado de doadores de orgões, á medicina regenerativa tem procurado fontes de células para a terapia de substituição. As células embrionárias são uma fonte promissora de matéria para o transplante devido à sua propriedade exclusiva de ser expandida indefinidamente em cultura, assim, elas são uma fonte de tecidos de substituição. Além disso, são capazes de se diferenciar em pratimcante todos os tipos celulares, e podem ser utilizadas na terapia de substituição em várias doenças. O broto hepático tem células tronco (CT) bipotenciais que ainda não se diferenciam em hepatócitos ou células do dueto biliar, contudo, elas têm um grande potencial de proliferação e de diferenciação.Desse modo, o desafio é identificar métidis que promovam sua diferenciação em linhagens específicas e funcionais.

What do we know about the neurogenic potential of different stem cell types? / O que sabemos sobre o potencial neurogênico de diferentes tipos de células-tronco?

Cell therapies, based on transplantation of immature cells, are being considered as a promising tool in the treatment of neurological disorders. Many efforts are being concentrated on the development of safe and effective stem cell lines. Nevertheless, the neurogenic potential of some cell lines, i.e., the ability to generate mature neurons either in vitro or in vivo, is largely unknown. Recent evidence indicate that this potential might be distinct among different cell lines, therefore limiting their broad use as replacement cells in the central nervous system. Here, we have reviewed the latest advancements regarding the electrophysiological maturation of stem cells, focusing our attention on fetal-derived-, embryonic-, and induced pluripotent stem cells. In summary, a large body of evidence supports the biological safety, high neurogenic potential, and in some diseases probable clinical efficiency related to fetal-derived cells. By contrast, reliable data regarding embryonic and induced pluripotent stem cells are still missing.

Terapias celulares, baseadas no transplante de células imaturas, têm sido consideradas ferramentas promissoras no tratamento de doenças neurológicas. Muitos esforços têm sido concentrados no desenvolvimento de linhas de células-tronco seguras e eficazes. No entanto, o potencial neurogênico de algumas linhagens celulares, ou seja, a habilidade de gerar neurônios maduros, in vitro ou in vivo, ainda é altamente desconhecida. Dados recentes sugerem que esse potencial é distinto entre diversos tipos celulares, o que limitaria o largo emprego como células restauradoras no sistema nervoso central. Neste relato, revisaram-se os avanços recentes relacionados à maturação eletrofisiológica de células-tronco, com foco em células derivadas de tecido fetal, células embrionárias e células pluripotentes induzidas. Em resumo, há evidências que apontam para segurança biológica de células fetais, com alto potencial neurogênico e, em se tratando de algumas doenças, provável eficiência clínica. Ao contrário, ainda não há dados confiáveis acerca de células embrionárias e pluripotentes induzidas.

Transplantation of mouse embryonic stem cell after middle cerebral artery occlusion / Transplante de células-tronco embrionárias de camundongo após a oclusão da artéria cerebral média

PURPOSE: Stem cell transplantation has been extensively studied as individual therapies for ischemic stroke. The present investigation is an initial effort to combine these methods to achieve increased therapeutic effects after brain ischemia. Cell transplantation may recover massive neuronal loss by replacing damaged brain cells. METHODS: Undifferentiated mouse embryonic stem (mES) cells were used to induce differentiation in vitro into neuron-like cells with good cell viability for use a graft. In this study, middle cerebral artery occlusion (MCAO) was induced in rats using intra-luminal vascular occlusion, and infused mES cells after MCAO. The animals were examined behaviorally using motor and sensory test with neurological assessment. RESULTS: Motor function of the recipients was gradually improved, whereas little improvement was observed in control rats. This result may suggest that the grafted cells have synaptic connection in the recipient brain. Our study revealed that stem cell transplantation can have a positive effect on behavioral recovery and reduction of infarct size in focal ischemic rats. Consequently after euthanasia, rats were histochemically investigated to explore graft survival with green fluorescent protein (GFP). CONCLUSION: The mouse embryonic stem cells may have advantage for use as a donor source in various neurological disorders including motor dysfunction.

OBJETIVO: O transplante de células-tronco tem sido extensivamente estudado como terapias individuais para o AVC isquêmico. A presente investigação é um esforço inicial para combinar estes métodos para alcançar aumento de efeitos terapêuticos após a isquemia cerebral. O transplante de células pode recuperar a perda neuronal intensa, substituindo as células do cérebro danificado. MÉTODOS: Células tronco embrionárias indiferenciadas de camundongo foram utilizadas para induzir in vitro a diferenciação de células como neurônio com boa viabilidade para utilizar como enxerto. Neste estudo foi induzida a oclusão da artéria cerebral média em camundongos, usando a oclusão vascular intraluminal e células embrionárias infundidas. Os animais foram examinados comportamentalmente utilizando motor e teste sensorial com avaliação neurológica. RESULTADOS: A função motora dos receptores melhorou gradualmente, ao passo que pouca melhora foi observada nos animais controle. Este resultado pode sugerir que as células enxertadas têm conexão sináptica no cérebro receptor. Nosso estudo revelou que o transplante de células-tronco pode ter um efeito positivo na recuperação do comportamento e na redução do tamanho do infarto na isquêmica focal em camundongos. Após a eutanásia foi realizada análise histoquímica para avaliar a sobrevida do enxerto com proteína fluorescente verde (GFP). CONCLUSÃO: As células embrionárias de camundongo podem ser utilizadas como enxerto em várias desordens neurológicas, incluindo disfunção motora.

Proposals for embryonic stem cell production without destroying human embryos: scientific and bioethical challenges / Propuestas de producción de células madre embrionarias sin destruir embriones humanos: retos científicos y bioéticos / Propostas de produção de células-tronco embrionárias sem destruir embriões humanos: desafios científicos e bioéticos

The possibility of using human embryonic stem cells (ESC) for therapeutic purposes raises serious ethical objections, the most fundamental one being that until recently the only way to obtain ESC was with procedures that necessarily destroyed living human embryos. Due to this, research in this field has been rejected by many scientists, bioeticists, and has been banned by law in several countries. Efforts have been made to find procedures to obtain ESC without destroying embyros or putting them at risk. This paper reviews the scientific, technical and ethical aspects of the different strategies developed for this purpose. Embryo biopsy, ESC obtained from "dead" embryos, ESC produced by "parthenogenetic embryos", ESC obtained by Altered Nuclear Transfer and induced pluripotent cells (iPSC) obtained by direct epigenetic reprogramming of somatic cells are the main five alternative reported in recent studies.

La posibilidad de usar células madre embrionarias humanas (ESC) para finalidades terapéuticas plantea graves objeciones éticas; la más fundamental es que, hasta hace poco, la única manera de obtener ESC era mediante procedimientos que destruían necesariamente embriones humanos vivos. Debido a esto, la investigación en este campo ha sido rechazada por muchos científicos, bioeticistas y ha sido prohibida por ley en varios países. Se han realizado esfuerzos para encontrar procedimientos que permitan obtener ESC sin destruir embriones o sin ponerlos en riesgo. En este documento examinamos los aspectos científicos, técnicos y éticos de las diferentes estrategias elaboradas para esta finalidad. La biopsia de embriones, ESC obtenidas de embriones "muertos"; ESC producidas por partenogénesis de embriones; ESC obtenidas mediante Transferencia Nuclear Alterada y células pluripotentes inducidas (iPSC), obtenidas mediante la reprogramación epigenética directa de las células somáticas, son las principales cinco opciones informadas en estudios recientes.

A possibilidade de se utilizar células-tronco embrionárias humanas (ESC) para finalidades terapêuticas apresenta graves objeções éticas, a mais fundamental é que, até recentemente, era a única maneira de obter ESC mediante procedimentos que destruíam necessariamente embriões humanos vivos. Devido a isso, a investigação neste campo tem sido recusada por muitos pesquisadores, bioeticistas e proibida por lei em vários paises. Esforços são realizados para encontrar procedimentos que permitam obter ESC sem destruir embriões ou colocá-los em risco. Neste documento examinamos os aspectos científicos, técnicos e éticos das diferentes estratégias elaboradas para esta finalidade. Biópsia de embriões, ESC obtidas de embriões "mortos"; ESC produzidas por partenogênese de embriões; ESC obtidas mediante Transferência Nuclear Alterada e células pluripotentes induzidas (iPSC), obtidas mediante a reprogramação epigenética direta das células somáticas, são as cinco principais opções informadas em estudos recentes.

Cenário internacional da pesquisa em células-tronco embrionárias / Escenario internacional de la pesquisa en células madre embrionarias / International perspective on embryonic stem cell research

OBJETIVO:Analisar comparativamente regulações governamentais entre países sobre pesquisa em células-tronco embrionárias. MÉTODOS:O estudo foi conduzido entre março e maio de 2008, por meio de busca eletrônica direta nas fontes oficiais sobre documentos legislativos de 25 países selecionados e confirmada, quando necessário, por consulta por e-mail a pesquisadores e autoridades desses países. RESULTADOS: Os resultados mostraram tendência a permitir a prática de pesquisas com células-tronco embrionárias, embora com rígidas restrições éticas. Dentre os países estudados, apenas Itália e Alemanha explicitamente condenam a extração de células-tronco e apenas Itália proíbe seu uso subseqüente. Decisões jurídicas brasileiras recentes são coerentes com o contexto regulatório internacional sobre pesquisa embrionária. CONCLUSÕES: A tendência observada representa a liberdade de pesquisa para a promoção do conhecimento como um bem público, reforçada pela expectativa de potencialidade terapêutica na pesquisa com células-tronco embrionárias para o tratamento e cura de doenças sem qualquer possibilidade de assistência médica.

OBJECTIVE:To comparatively analyze governmental regulations on embryonic stem cell research among countries. METHODS: The study was performed between March and May 2008, using a direct electronic search through official databases of legislative documents from 25 selected countries, confirmed by email consultation with researchers and authorities from these countries, when necessary. RESULTS: Results showed a trend to allow the practice of embryonic stem cell research, though with strict ethical restrictions. Among the countries analyzed, only Italy and Germany explicitly condemned the extraction of stem cells and only Italy prohibits their subsequent use. Recent judicial decisions in Brazil are in accordance with the international regulatory context of embryo research. CONCLUSIONS: The trend observed represents freedom of research to promote knowledge as a public good, emphasized by the expectation of therapeutic potentiality of embryonic stem cell research to treat and cure diseases without any medical care.

OBJETIVO: Analizar comparativamente regulaciones gubernamentales entre países sobre pesquisa en células madre embrionarias. MÉTODOS:El estudio fue conducido entre marzo y mayo de 2008, por medio de búsqueda electrónica directa en las fuentes oficiales sobre documentos legislativos de 25 países seleccionados y confirmada, cuando era necesario, por consulta por e-mail a investigadores y autoridades de esos países. RESULTADOS:Los resultados mostraron tendencia a permitir la práctica de pesquisas con células madre embrionarias, a pesar de que con rígidas restricciones éticas. Entre los países estudiados, apenas Italia y Alemania explícitamente condenan la extracción de células madre coherentes con el contexto regulatorio internacional sobre pesquisa embrionaria. CONCLUSIONES: La tendencia observada representa la libertad de pesquisa para la promoción del conocimiento como un bien público, reforzada por la expectativa de potencialidad terapéutica en la pesquisa con células madre embrionarias para el tratamiento y cura de enfermedades sin cualquier posibilidad de asistencia médica.

Células tronco embrionárias: relevâncias bioéticas e jurídicas / Embryonic stem cells: bioethics and juridical prominences

O Direito à vida, proteção contida na Constituição Federal, deve ser amplamente respeitado, independente de opiniões divergentes a respeito de seu marco inicial. Nunca se deve olvidar de que a vida é o maior bem que nos cerca. Considerando essa prerrogativa e frente ao avanço científico evidente e irremediável, o caminho viável foi o da regulamentação séria da pesquisa com embriões, para que a procura por tratamentos tão esperados e prometidos pelos cientistas seja realizada efetivamente e os seus resultados oferecidos a todos aqueles que desejam e necessitam de tais inovações. Contudo, é inegável o impacto desta pesquisa num contexto social que abrange crenças diversas e posicionamentos conflitantes. E, sendo a técnica de manipulação de embriões uma inovação, traz consigo todas as dúvidas e esperanças inerentes àquilo que é novo. Sendo assim, diante de questões tão controversas como a utilização de embriões humanos, a bioética é o instrumento apto a balizar a ciência e as condutas provenientes das pesquisas com células tronco. Nortear questões, repensando constantemente as práticas científicas, reformulando os modelos pertencentes não só à ciência, mas à sociedade é indispensável para a sobrevivência da prática de manipulação de embriões. É necessário promover a valorização da dignidade da pessoa humana, em respeito à Constituição, sendo a bioética um fundamental instrumento para que se atinja este objetivo.

The right to life, granted in the federal constitution, must be thoroughly respected, regardless of diverging opinions concerning its initial milestone. It must not be forgotten that life is the greatest good we have. Because scientific breakthroughs have promised to meet long-nurtured treatment expectations, it is only fair that embryonic research becomes the subject of serious legislation. Yet, it cannot be denied that such practices suffer influence from conflicting beliefs and platforms. Being an innovation, embryonic manipulation is both, fraught with doubts and full of hope. The situation calls for bioethics as a tool to provide moral guidance for science and the applications from stem-cell research. Embryonic manipulation can only survive if issues are constantly addressed, not only through a scientific approach but also through a societal one. If the federal constitution is to be obeyed, human dignity must be valued. Bioethics is paramount for this goal to be reached.

Avaliação do conhecimento sobre células-tronco observado em estudantes de graduação dos cursos da área da saúde da Universidade Estadual de Londrina: o que os alunos sabem e como se posicionam sobre o tema / Evaluación del conocimiento sobre células troncales de estudiantes de cursos graduados de la área de la salud de la Universidade Estadual de Londrina: qué saben los studiantes y cual son sus opiniones / Evaluation of the knowledge about stem-cells by undergraduate students of courses of the health area from Universidade Estadual de Londrina: what students know and what their opinions are

As células-tronco são consideradas neste início de século um marco histórico na medicina curativa e abre novos horizontes para o futuro da ciência. Mesmo considerando um avanço na ciência, o estudo apropriado dessas células leva à ambigüidade de valores. Se por um lado há a perspectiva de cura de doenças até então classificadas como “incuráveis”, por outro lado, o questionamento de sua eficácia e a utilização de embriões humanos. As informações correm em ritmo acelerado quando veiculados pela mídia, deixando a universidade como fonte secundária na busca destas informações. Este estudo teve por objetivo reconhecer o nível de conhecimento e informação dos alunos dos cursos da saúde da Universidade Estadual de Londrina acerca do tema proposto. Para tal, foram entrevistados 42 (quarenta e dois) alunos dos cursos de medicina, enfermagem, fisioterapia e farmácia. Constatouse que a maioria dos alunos ainda apresenta muita dificuldade para discorrer sobre a parte conceitual de células-tronco. Demonstraram-se, em sua maioria, contra a criação de uma lei para definir o início da vida humana e contrários à produção de embriões para finalidade de pesquisa. Acreditam que fatores culturais e religiosos devem ser considerados quando em discussões de embriões humanos congelados e avaliaram a disciplina de Bioéticacomo insuficiente e inócua durante os anos da graduação.

Stem-cells are considered in this beginning of century a historical landmark in the new curative medicine and opens horizons for the futureof science. Even taking into account advances in science, the appropriate study of these cells creates ambiguity regarding values. If on the one handthere is the prospect of curing diseases classified until recently as “incurable”, on the other hand, one questions its effectiveness and the use of humanembryos. The information runs in a sped up rhythm when propagated by the media, leaving the university as a secondary source in the search for thisinformation. This study had the aim of identifying the level of knowledge and information of pupils of the courses of the health area of State Universityof Londrina concerning the considered subject. For doing this, 42 (forty two) pupils of the medical and nursing course physiotherapy and pharmacywere interviewed. One evidenced that the majority of pupils still have much difficulty to discuss the conceptual aspects of stem-cells. Most of themshow to be against a law that defines the beginning of human life and to the production of embryos for research purposes. They believe that culturaland religious factors must be considered in discussions on frozen human embryos and had evaluated disciplines such as Bioethics as insufficient andinnocuous during undergraduate years.

A las células troncales se consideran en este principio de siglo una realización histórica en la nueva medicina curativa y se abren horizontes para el futuro de la ciencia. Incluso al considerar el avanzo de la ciencia, el estudio apropiado de estas células crea ambigüedad respecto a valores. Si deuna parte hay la perspectiva de curar enfermedades clasificadas hasta hace poco tiempo como "incurables", por otra parte emerge la cuestión acerca de su eficacia y del uso de embriones humanos. La información funciona en un ritmo acelerado cuando es propagada por los medios de comunicación,haciendo de la universidad una fuente secundaria en la búsqueda de esta información. Este estudio buscó identificar el nivel de conocimiento y deinformación de pupilas de los cursos del área de la salud de la Universidad Estadual de Londrina referente al tema considerado. Para hacer esto, 42(cuarenta dos) pupilos de los cursos de medicina, enfermería, fisioterapia y farmacia fueron entrevistados. Se evidenció que la mayoría de los pupilostodavía tiene mucha dificultad para discutir los aspectos conceptuales de las células troncales. La mayoría de ellos demuestra estar contra una ley quedefina el principio de la vida humana y contra la producción de embriones para los propósitos de investigación. Creen que los factores culturales yreligiosos se deben considerar en discusiones acerca de embriones humanos congelados y han evaluado disciplinas tales como la bioética como escasas e inútiles durante sus años de graduación.

In vitro differentiation of embryonic stem cells into cardiac-like and neuronal-like cells / Indução de diferenciação in vitro de células-tronco embrionárias em células de tecido cardíaco e nervoso

Embryonic stem cells are pluripotent cell lines with the capacity of self-renewal and a broad differentiation plasticity. They are isolated from preimplantation embryos and can be cultured in vitro for long time without losing their pluripotency. Embryonic stem cells can also differentiate in vitro with the proper combination of growth and differentiation factors, cells will differentiate into more advanced stages of embryogenesis generating different adult cell type. In the present study, we induced the in vitro differentiation of mouse embryonic stem cells (line R1) into cardiomyocytes and neuronal cells. These differentiations were evaluated by reverse transcription-polymerase chain reaction to verify presence of tissue-specific markers.

Células-tronco embrionárias são linhagens celulares pluripotentes capazes de se multiplicar indefinidamente e com grande capacidade de diferenciação celular. São isoladas de embriões em estágio pré-implantacional e podem ser cultivadas por longo tempo em laboratório sem perder sua pluripotencialidade. Células-tronco embrionárias podem, ainda, se diferenciar in vitro através da adição de fatores de crescimento e diferenciação ao meio de cultivo. As células se diferenciarão em estágios mais avançados de embriogênese, gerando tipos diferentes de células adultas. No presente estudo, induzimos a diferenciação in vitro de células-tronco embrionárias de camundongos (linhagem R1) em células de tecido cardíaco e nervoso. A diferenciação foi avaliada pela reação em cadeia da polimerase precedida de transcrição reversa para verificar a presença de marcadores tecido-específicos.