Rangelia vitalii and Hepatozoon canis coinfection in pampas fox Lycalopex gymnocercus from Santa Catarina State, Brazil / Infecção por Rangelia vitalii e Hepatozoon canis em Lycalopex gymnocercus proveniente do Estado de Santa Catarina, Brasil

Abstract Rangelia vitalii is a haemoparasite that infects erythrocytes, white blood cells and the cytoplasm of endothelial cells of blood capillaries of canids in South America, and has been detected in both domestic dogs and sylvatic canids. Hepatozoon canis is a parasite that infects neutrophils and monocytes of many mammalian hosts. This study reports the infection of Lycalopex gymnocercus from Santa Catarina, Brazil, with R. vitalii and H. canis. The piroplasm was observed on both blood smears and molecular tests. Many large piroplasms were detected inside the erythrocytes, with round, oval, or teardrop-shaped organism, that occurred singly or in pairs. They had an abundant, pale blue cytoplasm and decentral dark red small nucleus. The animal was also infected with H. canis that was detected only by molecular tests. The majority of haematological and biochemistry parameters were within the reference values for domestic dog and wild canids.

Resumo Rangelia vitalii é um hemoparasita que infecta eritrócitos, macrófagos e células endoteliais de canídeos na América do Sul, e vem sendo detectado tanto em cães domésticos quanto em canídeos silvestres. Hepatozoon canis é um parasita que infecta monócitos e neutrófilos de mamíferos. No presente estudo, é descrita a infecção de Lycalopex gymnocercus, proveniente de Santa Catarina, Brasil, por R. vitalii e H. canis. O piroplasma foi diagnosticado nos esfregaços sanguíneos e por técnicas moleculares. Nos eritrócitos foram observados vários merozoítos grandes, ovais, arredondados ou em forma de gota, ocorrendo isoladamente ou em pares. Estes piroplasmas apresentavam citoplasma abundante, corado em azul claro, com núcleo pequeno, avermelhado e descentralizado. O animal apresentou coinfecção com H. canis, que foi diagnosticado somente pelos testes moleculares. A maior parte dos parâmetros hematológicos e bioquímicos do animal estava dentro dos valores de referência para cães domésticos e canídeos silvestres.

Isolation of Clostridium perfringens and C. difficile in crab-eating fox ( Cerdocyon thous - Linnaeus 1776) from Northeastern Brazil / Isolamento de Clostridium perfringens e C. difficile em cachorro-do-mato (Cerdocyon thous - Linnaeus 1776) da região Nordeste do Brasil

The aim of the present study was to isolate Clostridium perfringens and C. difficile in crab-eating fox (Cerdocyon thous) from Northeastern Brazil. Stool samples of 18 captive crab-eating foxes from four states of Northeastern Brazil (Alagoas, Bahia, Paraíba e Pernambuco) were collected and subjected to C. perfringens and C. difficile isolation. Suggestive colonies of C. perfringens were then analyzed for genes encoding the major C. perfringens toxins (alpha, beta, epsilon and iota), beta-2 toxin (cpb2), enterotoxin (cpe), and NetB- (netB) and NetF- (netF) encoding genes. C. difficile strains were analyzed by multiplex-PCR for a housekeeping gene (tpi), toxins A (tcdA) and B (tcdB) and a binary toxin gene (cdtB). Unthawed aliquots of stool samples positive for toxigenic C. difficile were subjected to a commercial ELISA to evaluate the presence of A/B toxins. Clostridium perfringens (type A) was isolated from five (27%) samples, and only one sample was positive for beta-2 enconding gene (cpb2). Two (11%) stool samples were positive for C. difficile, but negative for A/B toxins. These two wild canids were also positive for C. perfringens type A. This is the first report of C. difficile in crab-eating fox.(AU)

O objetivo deste estudo foi isolar Clostridium perfringens e C. difficile em cachorro-do-mato (Cerdocyon thous) da região Nordeste do Brasil. Amostras de fezes de 18 cachorros-do-mato mantidos em cativeiro e oriundos de quatro estados da região Nordeste do Brasil (Alagoas, Bahia, Paraíba e Pernambuco) foram coletadas e submetidas a isolamento de C. perfringens e C. difficile. As colônias sugestivas de C. perfringens foram analisadas para os genes que codificam as principais toxinas de C. perfringens (alfa, beta, épsilon e iota), toxina beta-2 (cpb2), enterotoxina (cpe) e NetB- (netB) e NetF- (netF). As cepas de C. difficile foram analisadas por PCR-multiplex para o gene tpi, toxinas A (tcdA) e B (tcdB) e um gene de toxina binária (cdtB). Alíquotas de amostras de fezes positivas para C. difficile toxigênico foram submetidas a um ELISA comercial para avaliar a presença de toxinas A/B. Clostridium perfringens (tipo A) foi isolado de cinco (27%) amostras, e apenas uma amostra foi positiva para o gene da toxina beta-2 (cpb2). Duas (11%) amostras de fezes foram positivas para C. difficile, mas negativas para toxinas A/B. Estes dois canídeos silvestres também foram positivos para C. perfringens tipo A. Este é o primeiro relato de C. difficile em cachorro-do-mato.(AU)

Anatomo-pathological aspects of parasitism by nematodes of the superfamily Metastrongyloidea in wild crab-eating fox (Cerdocyon thous) in Midwestern Brazil / Aspectos anatomopatológicos do parasitismo por nematódeos da superfamília Metastrongyloidea em cachorro-do-mato (Cerdocyon thous) de vida livre no Centro-Oeste brasileiro

ABSTRACT: Nematodes of the superfamily Metastrongyloidea affect the respiratory, cardiovascular, and nervous systems of domestic carnivores and are uncommonly detected in wild animals. This report describes the lesions associated with pulmonary parasitism by nematodes of the superfamily Metastrongyloidea in a wild crab-eating fox ( Cerdocyon thous ) in the Federal District, Brazil. Grossly, there was pulmonary hyperemia, edema, and emphysema. Microscopically, there was granulomatous arteritis associated with intravascular metastrongylid. The anatomical location, characteristic lesion, and histological features of the parasite suggested that the nematode involved in this case is Angiostrongylus vasorum . This worm is frequently reported parasitizing pulmonary arteries of domestic canids but is uncommonly described in wild canids in Midwestern Brazil.

RESUMO: Nematódeos da superfamília Metastrongyloidea afetam o sistema respiratório, cardiovascular e nervoso de carnívoros domésticos e são incomuns em animais silvestres. Este trabalho descreve os achados anatomopatológicos de um caso de parasitismo pulmonar por nematódeos da superfamília Metastrongyloidea em um cachorro-do-mato ( Cerdocyon thous ) de vida livre no Distrito Federal. Macroscopicamente, o pulmão apresentou hiperemia, edema e enfisema e, no exame histológico, notou-se arterite granulomatosa associada à metastrongilídeos intravasculares. A localização anatômica, o tipo de lesão observada e os aspectos histológicos do parasito sugerem que o nematódeo, envolvido neste caso, seja o Angiostrongylus vasorum , que é frequentemente descrito parasitando artérias pulmonares de canídeos domésticos, porém, é incomumente descrito em canídeos silvestres, principalmente no Centro-Oeste brasileiro.

New-record of the bush dog speothos venaticus in a human-altered landscape in west Minas Gerais, Brazil / Novo registro do cachorro-vinagre speothos venaticus em uma paisagem antropizada no oeste de Minas Gerias, Brasil

The bush dog (Speothos venaticus) is a Neotropical canid with a wide geographic distribution. Although globally listed as Near Threatened, this species was listed as Vulnerable in a recent assessment by the Brazilian government. Few records of this mammal have been reported in the Brazilian Cerrado, and it is considered extinct in several localities as a result of human landscape fragmentation. The record presented here is the first evidence of bush dog presence in the West of Minas Gerais, Brazil, which augments the species distribution with expected occurrence for this region. The study site was a transitional area between the Cerrado and Atlantic Forest biomes, in the Triângulo Mineiro region, which is a highly fragmented landscape, dominated by cattle ranches with exotic pasture species and scattered natural patches. We recorded a single bush dog individual in our survey (4,036 camera trap/night), but our sampling success was expected compared with that of other previous mammal surveys using the camera trapping method, in part, because of the species' elusive behavior and low natural densities. This record enhances knowledge of the S. venaticus distribution. Potentially, we confirm the presence of the bug dog in a region that was regarded being environmentally suitable for this species occurrence, but where it has never been reported. Moreover, our result elucidates the potential of the natural remnants to harbor threatened species in highly human-influenced and non-protected landscapes, which is the dominant scenario found in West Minas Gerais, Brasil.

O cachorro-vinagre (Speothos venaticus) é um canídeo Neotropical com uma ampla distribuição geográfica. Embora seja listada globalmente como Quase Ameaçada, esta espécie foi classificada como Vulnerável em recente avaliação do governo brasileiro. Poucos registros para este mamífero foram reportados no Cerrado brasileiro, sendo considerado extinto em várias localidades como resultado da fragmentação da paisagem provocada pelo homem. O registro apresentado aqui é a primeira evidência de ocorrência do cachorro-vinagre no oeste de Minas Gerais, Brasil, o que confirma a distribuição da espécie com ocorrência esperada para esta região. O local de estudo é uma área transicional entre os biomas Cerrado e Mata Atlântica, na região do Triângulo Mineiro, sendo uma paisagem altamente fragmentada dominada por fazendas de criação de gado com pastagem exótica e fragmentos naturais dispersos. Nós registramos somente um único cachorro-vinagre na nossa amostragem (4.036 armadilhas fotográficas/noite), mas o nosso sucesso de amostragem foi esperado comparado com os resultados de outros levantamentos de mamíferos utilizando o método de armadilhamento fotográfico, em parte, devido ao comportamento alusivo e a baixa densidade natural da espécie. Este registro aumenta o conhecimento da distribuição de S. venaticus. Potencialmente, nós confirmamos a presença do cachorro-vinagre em uma região que foi considerada com adequabilidade ambiental para a ocorrência da espécie, mas onde ela não havia sido reportada até momento. Além disso, nosso resultado também reforça o potencial dos remanescentes naturais em abrigar espécies ameaçadas da fauna em paisagens altamente afetadas pelo homem e não protegidas, a qual representa o cenário dominante encontrado no oeste de Minas Gerais, Brasil.

Topografia da papila parotídea em Cerdocyon thous (Linnaeus, 1766) e Lycalopex gymnocercus (G. Fisher, 1814) / Topography of the parotid duct opening in Cerdocyon thous (Linnaeus, 1766) and Lycalopex gymnocercus (G. Fischer, 1814)

Objetivou-se determinar o local de desembocadura do ducto excretor da glândula salivar parótida nos canídeos silvestres Cerdocyon thous e Lycalopex gymnocercus e, assim, fornecer subsídios para procedimentos em medicina veterinária e estudos de anatomia comparada. Para tal, foram inspecionadas as papilas parotídeas de 28 cadáveres (56 hemiarcadas) recolhidos mortos em rodovias: C. thous (cinco machos e nove fêmeas) e L. gymnocercus (nove machos e cinco fêmeas). A partir da papila parotídea traçou-se uma linha imaginária vertical para determinar sua correspondência topográfica em relação aos dentes pré-molares (P) e molares (M). Dois cadáveres de cada espécie foram dissecados para determinação macroscópica da posição da glândula parótida e respectivo ducto. A glândula localizou-se ventralmente à cartilagem auricular e seu ducto apresentou trajeto sobre a face lateral do m. masseter, abrindo-se no vestíbulo oral. Quando consideradas as hemiarcadas, no C. thous houve predominância da abertura do ducto no nível entre P4 e M1 (53,6% dos casos), seguida pela abertura oposta a M1 (46,4%). Os machos de C. thous apresentaram local de desembocadura do ducto em nível significativamente (p-valor = 0,0006) mais caudal do que as fêmeas. No L. gymnocercus em metade das hemiarcadas a abertura ocorreu entre P4 e M1 e na outra metade opostamente a M1, não havendo diferença significativa entre sexos. Pode-se concluir que em ambas espécies a papila parotídea teve posição mais caudal em relação ao que é relatado para os cães domésticos.

This study aimed to determine point of opening of excretory parotid duct in the wild canids Cerdocyon thous and Lycalopex gymnocercus and compare the findings with those available for other carnivores. We analyzed 28 cadavers (56 hemiarcads) collected dead from highways, which included five males and nine females of C. thous and nine males and five females of L. gymnocercus. Thereafter, the parotid papilla was inspected and an imaginary vertical line was projected to determine its topography in relation to the premolars (P) and molars (M). Two cadavers of each species were macrodissected to determine the position of the salivary parotid gland and its duct. The parotid gland was located ventrally to the ear cartilage and its duct crossed on lateral surface of the masseter muscle, opening in the buccal region of the oral vestibule. When considered hemiarcades, the opening of the duct in C. thous predominated at the level between P4 and M1 (53.6% of cases), followed by opening opposite to the M1 (46.4%). Males of C. thous presented the duct opening in a significantly (p-value = 0.0006) caudally level when compared to females. In L. gymnocercus half of hemiarcades showed the opening at the level between P4 and M1 and the other half opposed to M1, with no significant difference between genders. It could be concluded that these two species have parotid papilla in a caudal position in relation to the reports concerning domestic dogs.

Topografia da papila parotídea em Cerdocyon thous (Linnaeus, 1766) e Lycalopex gymnocercus (G. Fisher, 1814)

Objetivou-se determinar o local de desembocadura do ducto excretor da glândula salivar parótida nos canídeos silvestres Cerdocyon thous e Lycalopex gymnocercus e, assim, fornecer subsídios para procedimentos em medicina veterinária e estudos de anatomia comparada. Para tal, foram inspecionadas as papilas parotídeas de 28 cadáveres (56 hemiarcadas) recolhidos mortos em rodovias: C. thous (cinco machos e nove fêmeas) e L. gymnocercus (nove machos e cinco fêmeas). A partir da papila parotídea traçou-se uma linha imaginária vertical para determinar sua correspondência topográfica em relação aos dentes pré-molares (P) e molares (M). Dois cadáveres de cada espécie foram dissecados para determinação macroscópica da posição da glândula parótida e respectivo ducto. A glândula localizou-se ventralmente à cartilagem auricular e seu ducto apresentou trajeto sobre a face lateral do m. masseter, abrindo-se no vestíbulo oral. Quando consideradas as hemiarcadas, no C. thous houve predominância da abertura do ducto no nível entre P4 e M1 (53,6% dos casos), seguida pela abertura oposta a M1 (46,4%). Os machos de C. thous apresentaram local de desembocadura do ducto em nível significativamente (p-valor = 0,0006) mais caudal do que as fêmeas. No L. gymnocercus em metade das hemiarcadas a abertura ocorreu entre P4 e M1 e na outra metade opostamente a M1, não havendo diferença significativa entre se

Teste de ELISA indireto para diagnóstico sorológico de leishmaniose visceral em canídeos silvestres / Indirect ELISA for the serological diagnosis of visceral leishmaniasis in wild canids

Na América do Sul, alguns canídeos silvestres são considerados reservatórios naturais da Leishmania chagasi. A resposta imunológica desses animais à Leishmania é pouco conhecida, havendo a necessidade de métodos diagnósticos adequados para esse fim. No presente estudo, é descrita a padronização do ensaio imunoenzimático indireto (ELISA) para o diagnóstico sorológico de leishmaniose visceral em canídeos silvestres brasileiros. Foram estudadas amostras de soro e plasma de 12 canídeos cativos: sete lobos-guará (Chrysocyon brachyurus), três raposinhas (Lycalopex vetulus) e dois cachorros-do-mato (Cerdocyon thous). As amostras de um C. brachyurus e uma L. vetulus, cativos em área endêmica para LV, que apresentavam doença clínica e positividade em testes de Imunofluorescência Indireta e Reação em Cadeia de Polimerase, foram utilizadas como controles positivos. Foram comparados os conjugados anti-IgG de cão e proteína A, ambos ligados a peroxidase, cujos testes detectaram quatro (04/12) e três (03/12) C. brachyurus soropositivos para anticorpos anti-Leishmania sp., respectivamente. As médias das densidades ópticas (DOs) das amostras negativas foram nitidamente mais baixas do que as médias das DOs dos positivos tanto no ELISA com anti-IgG de cão (4,8 vezes) como com proteína A (15,5 vezes). Os soros de três C. brachyurus positivos no ELISA indireto foram avaliados por Western blotting e identificaram 22 bandas, sendo imunodominantes as de peso molecular de 19, 22, 24, 45 e 66 kDa. Os testes ELISA com a proteína A e o conjugado anti-IgG de cão apresentaram respectivamente concordância excelente (Kappa = 1; p<0,001) e moderada (Kappa = 0,8; p<0,0015), com o Western blotting. Ambos foram, portanto, considerados adequados a avaliações de triagem de animais cuja resposta humoral de anticorpos indica contato com o parasito, úteis para subsidiar estudos para adequação de metodologias específicas para os canídeos silvestres.

In South America, some wild canids are considered natural reservoirs of Leishmania chagasi. The immunological response of wild canids to Leishmania is not well understood, and the development of diagnostic methods is necessary for such purpose. In the present study, the standardization of an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the serodiagnosis of visceral leishmaniasis (VL) in Brazilian species of wild canids is described. Serum and plasma samples from 12 captive wild canids were studied: seven from maned wolves (Chrysocyon brachyurus), three from hoary foxes (Lycalopex vetulus), and two from crab-eating foxes (Cerdocyon thous). Samples from C. brachyurus and L. vetulus, both captive in an endemic area for VL, presenting clinical disease and positivity in Indirect Immunofluorescence Reaction and Polymerase Chain Reaction tests were used as positive controls. The antibody anti-dog IgG and Protein A, both conjugated with horseradish peroxidase, were compared in indirect ELISA tests which detected four (04/12) and three (03/12) seropositive C. brachyurus for anti-Leishmania antibodies, respectively. The ELISA tests were able to clearly distinguish negative from positive samples, as the mean optical density (OD) of the negative samples was 4.8 and 15.5 times lower than those of the positive ones either using anti-dog IgG and Protein A, respectively. Samples from three ELISA - positive C. brachyurus were analyzed by Western blotting and identified immunodominant bands of 19, 22, 24, 45 and 66 kDa, among 22 protein bands detected. The ELISAs with protein A and anti-dog IgG showed respectively excellent (Kappa = 1.0; p<0.001) and moderate (Kappa = 0.8; p<0.0015) agreement with the Western blotting assay. The ELISA tests showed to be adequate for screening studies to identify antibody responses, thus indicating contact with Leishmania infection by wild canids.

Anticorpos anti Brucella abortus, anti Brucella canis e anti Leptospira spp. em raposas (Pseudalopex vetulus) do semiárido paraibano, Nordeste do Brasil / Detection of anti Brucella abortus, anti Brucella canis and anti Leptospira spp. Antibodies in hoary foxes (Pseudalopex vetulus) from semi-arid of Paraiba state, Northeastern region of Brazil

O objetivo do presente trabalho foi determinar a ocorrência de anticorpos anti Brucella abortus, anti Brucella canis e anti Leptospira spp. em raposas (Pseudalopex vetulus). Para tanto, foram utilizadas 60 raposas atropeladas em rodovias no semiárido da Paraíba, Nordeste do Brasil. Para a detecção de anticorpos anti Brucella abortus, o teste do antígeno acidificado tamponado (AAT) foi empregado como teste de triagem, e a prova do 2-mercaptoetanol foi empregada como método confirmatório. Para o diagnóstico sorológico das infecções por Brucella canis e Leptospira spp., foram utilizados os testes de imunodifusão em gel de agar (IDGA) e soroaglutinação microscópica, respectivamente. Todas as amostras foram negativas na pesquisa de anticorpos anti Brucella canis e anti Leptospira spp. Das 60 raposas testadas, 16 (26,6 por cento) foram positivas para anticorpos anti Brucella abortus no teste de AAT, e quatro (6,7 por cento) amostras foram confirmadas no teste de 2-mercaptoetanol, sendo duas amostras com título 100 e duas com título 50.

The aim of this research was to determine the occurrence of anti Brucella abortus, anti B. canis and anti Leptospira spp. antibodies in foxes (Pseudalopex vetulus). Sixty road-killed wild foxes from semi-arid of Paraiba state, Northeastern region of Brazil, were used. For the detection of anti B. abortus antibodies, the buffered plate agglutination test (BPAT) was applied as a screening method and the 2-mercaptoethanol test as a confirmatory method. For serological diagnosis of infections by B. canis and Leptospira spp., the agar gel immunodiffusion test (AGID) and the microscopic agglutination test (MAT) were used, respectively. All samples were negative for anti B. canis and anti Leptospira spp. antibodies. Of the 60 foxes tested, 16 (26.6 percent) were positive for anti B. abortus antibodies at BPAT, four (6.7 percent) samples were confirmed in the 2-mercaptoethanol test, and two samples presented titer 100 and two titer 50.