A purple non-sulfur bacterium producing polyhydroxybutyrate and the conserved region of pha synthase gene / Bactéria púrpura não sulfurosa produtora de polihidroxibutirato e a região conservada do gene pha sintase

This study aimed to screen purple non-sulfur bacteria capable of accumulating granules or polyhydroxybutyrate (PHB) inside the cells, identify the potent strain, assay the enzyme or PHA synthase, and compare the PHB synthase gene with that of related strains. A total of 58 strains of purple non-sulfur bacteria were isolated from 108 samples of chicken feces in the chicken-egg farm of the Department of Animal Science, Faculty of Natural Resources at Prince of Songkla University, Hat Yai, Thailand. After cultivating the bacteria in glutamate malate (GM) medium without added glutamic acid under light (3,000 Lux) at 35oC for 5 days, the intracellular biopolymer granules of the bacteria were observed by using a Confocal Laser Scanning Microscope (CLSM) with excitation and emission wavelength of 530 and 605 nm, respectively. Gas chromatography (GC) was carried out for quantitative analysis of PHB. There were five strains, CH12, CH52, CH72, CH90 and CH92, showed biopolymer granules under CLSM, and accumulated PHB 5, 1.7, 1.5, 1.4 and 1.8% (w w-1) of the cell dry weight (CDW), respectively. The 16S rDNA sequence analysis of CH12 strain showed a high homology of 100% correlation to that of Rhodopseudomonas palustris strain NCIB8288. Regarding the taxonomic characteristics and 16S rDNA sequence analysis, CH12 strain was identified as Rps. palustris NCIB8288. The PHA synthase activity of the crude extract from CH12 strain was 25 units/mL. The conserved regions could be aligned and selected among 5 strains of Rhodopseudomonas palustris (strains BisA53, TIE-1, CGA009, HaA2 and BisB18). The purified PCR product was obtained for further studies.

Este estudo teve como objetivo rastrear bactérias púrpuras não sulfurosas capazes de acumular grânulos ou polihidroxibutirato (PHB) dentro das células, identificar a estirpe potente, ensaiar a enzima ou PHA sintaxe, e comparar com o gene PHB sintase com aquele de estirpes relacionadas. Um total de 58 estirpes de bactérias púrpuras não sulfurosas foram isoladas a partir de 108 amostras de fezes de galinhas na granja produtora de ovos do Departamento de Ciência Animal, Faculdade de Recursos Naturais da Universidade Prince of Songkla, Hat Yai, Tailândia. Depois de cultivar as bactérias em um substrato de glutamato/malato (GM), sem ácido glutâmico adicionado, sob luz (3000 lux) a 35 ºC durante 5 dias, os grânulos de biopolímeros intracelulares das bactérias foram observados utilizando um microscópio confocal (do inglês Confocal Laser Scanning Microscope - CLSM) com comprimentos de onda de excitação e emissão de 530 e 605 nm, respectivamente. A cromatografia gasosa (do inglês Gas chromatography - GC) foi realizada para uma análise quantitativa de PHB. Havia 5 estirpes, CH12, CH52, CH72, CH90 e CH92, que mostraram grânulos biopoliméricos quando submetidos ao CLSM, e PHB-5 acumulado de 1.7, 1.5, 1.4 and 1.8% (w w-1) do peso celular seco (do inglês cell dry weight - CDW), respectivamente. A análise da sequência do rDNA 16S da estirpe CH12 demonstrou uma alta correlação de homologia de 100% para aquela da estirpe NCIB8288 da Rhodopseudomonas palustris. Em relação às características taxonômicas e da análise da sequência do rDNA 16S, a estirpe CH12 foi identificada como Rps. palustris NCIB8288. A atividade da PHA sintase do extrato bruto da estirpe CH12 foi de 25 unidades/mL. As regiões conservadas puderam ser alinhadas e selecionadas entre 5 estirpes de Rhodopseudomonas palustris (BisA53, TIE-1, CGA009, HaA2 e BisB18). O produto purificado da reação em cadeia da polimerase - PCR foi obtido para estudos futuros.

Ocorrência de Campylobacter em carne de frango, fezes de frango e humanas e pesquisa dos genes cdt / Occurrence of Campylobacter in poultry, meat chicken and human feces, and cdt GENES research

Foram coletadas 100 amostras de conteúdo fecal de aves de corte, 100 de produtos de frango (coxa, sobrecoxa, asa, dorso, carne moída e fígado) e 100 de fezes de humanos, e analisadas para pesquisa de Campylobacter. Realizou-se a determinação da espécie e da presença dos genes cdt, responsáveis pela codificação da toxina citoletal distensiva (CDT), através da técnica da PCR. A bactéria foi isolada de 61% das amostras de fezes de frango, 20% de produtos de frango e 3% de fezes de humanos. A maioria dos isolados foi determinada como C. jejuni . Destes, 93,5% apresentaram os genes para a toxina CDT. Apesar de a ocorrência de Campylobacter em fezes de humanos ter sido baixa, a prevalência em frangos de corte e produtos de frango foi elevada, fato que, aliado à presença dos genes cdt na maioria dos isolados, representa risco potencial para os consumidores. Esses resultados são indicativos da necessidade de medidas preventivas no sistema de produção e de boas práticas de fabricação na indústria, de forma a minimizar a contaminação dos produtos e diminuir o risco para os consumidores.

A hundred chicken fecal samples, a hundred samples of retail poultry products and a hundred samples of human feces were collected and tested for the presence of Campylobacter. The species identification and the analysis for the presence of cdt genes, responsible for encoding the cytolethal distending toxin, were performed by PCR. Campylobacter was found in 61% of the chicken fecal samples, in 20% of the poultry products and in 3% of the human feces. Most isolates were identified as C. jejuni. In 93.5% of these isolates, the cdt genes have been detected. Despite the occurrence of Campylobacter in feces of humans has been low, the prevalence in broilers and poultry products was high, which, combined with the presence of cdt genes in most isolates, represents a potential risk to consumers. These results suggest there is a need for preventive measures in the production system and good manufacturing practices in the industry so as to minimize contamination of products and reduce the risk to consumers.