Comparative study of the oil repellent activity of Copaifera officinalis Linnaeus and Copaifera reticulata Ducke front nymphs of Periplaneta americana Linnaeus

Abstract To control urban pests, especially cockroaches of the Periplaneta americana species, various pesticides have been developed that are increasingly potent and effective. However, the unrestrained application of pesticides has had negative consequences, such as the disappearance of some useful insect species and, consequently, the appearance of new pests, both in the countryside and cities. Due to the current scenario, it was necessary to search for new alternatives for the control of these insects. Among the species studied, Copaíba stood out. The oils were analyzed using GC-MS, b-caryophyllene and a-bergamotene being the predominant compounds. Repellency tests were performed with three different concentrations of C. officinalis and C. reticulata, 500 μg/mL, 250 μg/mL and 125 μg/mL, in triplicate. It can be observed that the oil of C. officinalis was more repellent to the nymphs at concentrations of 500 μg/mL and 250 μg/mL, however, when the behavior in nymphs exposed to the concentration of 125 μg/mL was compared, it was noted that C. reticulata oil was more repellent at this concentration. Copaifera has shown promising activity as a repellent against arthropods owing to the complex chemical composition of its oils.

Bovine digital dermatitis in the Brazilian Amazon biome and topical treatment with Copaifera reticulata oil / Dermatite digital bovina no bioma amazônico brasileiro e tratamento tópico com óleo de Copaifera reticulata

Bovine Digital Dermatitis (BDD) was studied in crossbred dairy cows grazing in Rondon do Pará, in the state of Pará, as well as in Açailândia and Cidelândia, in the state of Maranhão, Brazilian Amazon biome. The digits inspection from the dairy cows during milking was performed in ten farms comprising four visits (August and November 2016; April and July 2017). The cows were kept all year in pastures, and were mechanically milked on concrete floors and the animals were protected against the rains in eight farms, maintaining a daily cleaning, however, it could not be found a concrete floor in pre- or post-milking to ensure milking parlor on three farms. Manual milking on no concrete floors was performed in two farms. No preventive measures against hoof lesions were adopted. The BDD prevalence was 1.3% (22/1664), and no statistical difference among rainy or no rainy season was obtained (p = 0.72). The BDD lesions were classified according to "M system" (M0 = no lesion, M1 = active ulceration <2cm, M2 = active ulceration >2cm, M3 = healing stage, M4 = chronic stage, M4.1 = M4 with active ulceration). Regarding the 22 BDD lesions observed, 22.7% (5/22) were M1 stage, 36.4% (8/22) M2, 22.7% (5/22) M3, 13.6% (3/22) M4 and 4.5 (1/22) M4.1. Hypertrophic hairs at the edges of the lesions caused by fly larvae of genus Cochliomyia spp. as well as alterations on the hoof were also observed. Topical treatment was performed in six BDD lesions with a raw extract from trees of the genus Copaifera reticulata (Copaiba oil) and compared with the treatment of salicylic acid paste in five BDD lesions. The lesions were protected with a bandage for seven days and followed weekly until recovery. The complete therapeutic responses were 83.4% (5/6) and 75% (3/4), respectively, with an average time of seven weeks. The BDD in the Amazon biome occurs in low prevalence, not seasonal, and presents macro and microscopic features similar to BDD lesions from dairy cattle kept in free-stall housing. The treatment with copaiba oil showed similar results to the treatment of salicylic acid paste and can be used in control measures to BDD in the Amazon biome.(AU)

A dermatite digital bovina (DDB) foi estudada em vacas mestiças leiteiras nos municípios de Rondon do Pará no Pará, Açailândia e Cidelândia no Maranhão, bioma amazônico brasileiro. Para tanto, foram realizadas quatro visitas a 10 propriedades, nos meses de agosto e novembro em 2016 e abril e julho em 2017, e realizada a inspeção dos dígitos de 1.664 vacas em lactação durante a ordenha. Nestas propriedades as vacas eram criadas a pasto durante todo o ano e ordenhadas mecanicamente em oito propriedades. As quais, as salas de ordenha tinham piso concretado, com proteção contra as chuvas e era realizada a limpeza diariamente. No entanto, em três dessas propriedades, as salas de pré ou pós ordenha tinham piso não concretado e em duas, a ordenha era manual em piso de chão batido. Em todas elas não havia medidas profiláticas para afecções podais. A prevalência de DDB foi de 1,3% (22/1.664) e não se obteve diferença estatística entre os períodos chuvoso e não chuvoso (P = 0,72). As lesões observadas foram classificadas de acordo com o sistema M (M0-sem lesão; M1-lesão ulcerada <2cm; M2-lesão ulcerada >2cm; M3-lesão em cicatrização; M4-lesão crônica; M4.1- M4 com área ulcerada). De 22 lesões observadas, 22,7% (5/22) apresentavam-se em estágio M1, 36,4% (8/22) em M2, 22,7% (5/22) em M3, 13,6% (3/22) em M4 e 4,5% (1/22) em M4.1. Pelos hipertrofiados nos bordos das lesões, larvas de moscas do gênero Cochliomyia spp. e alterações no tecido córneo também foram observados. Nas lesões de 11 bovinos, em seis, foi realizado o tratamento tópico com extrato bruto de Copaifera reticulata (óleo de copaíba) e em cinco, com a pasta de ácido salicílico a 660mg/g e ambos os tratamentos foram protegidos com bandagem por sete dias. Após, as lesões foram acompanhadas semanalmente até a cura e obteve-se um índice de 83,4% (5/6) e 75% (3/4) de cura com esses tratamentos, respectivamente, com uma média de 7 semanas. Conclui-se que no bioma amazônico a DDB ocorre em baixa prevalência, não sazonal e com características macroscópicas semelhantes às lesões de vacas leiteiras criadas em sistema free stall. O tratamento com o óleo da copaíba apresentou resultados semelhante ao ácido salicílico e pode ser uma alternativa como medida de controle da DDB no bioma amazônico.(AU)

Estudo comparativo da ação anti-inflamatória do óleo-resina da Copaifera reticulata em modelos farmacológicos experimentais em camundongos / Comparative study of oleoresin of copaiba species Copaifera reticulata as antiinflammatory in experimental models in mice

Na Região Amazônica o uso do óleo das árvores copaibeiras é tão extenso, que a copaíba se destaca como a planta medicinal mais utilizada e conhecida pela população amazônica. Existem diversas indicações para a utilização do óleo-resina de copaíba com pouco respaldo científico. Avaliar a ação do óleo-resina de copaíba da espécie Copaifera reticulata como antiinflamatório em modelos experimentais de reação inflamatória aguda foi o objetivo desta pesquisa. Para isso, foram utilizados 4 grupos de 7 camundongos da linhagem Swiss Webster, que receberam tratamento veiculado com o ultrassom, e o óleo-resina extraído de árvore da espécie Copaífera reticulata. O modelo de inflamação aguda bolsa de ar (air pouch) induzida por carragenina foi utilizado para avaliar o efeito anti-inflamatório do óleo-resina de copaíba (in natura). As análises ocorreram no exsudato que foi avaliado quanto ao conteúdo total de proteínas, número total de leucócitos e análise celular. Para análise estatística foi eleito o teste de Kruskal-Wallis com nível de significância alfa = 0,05. As células totais e as mononucleares não mostraram diferenças estatisticamente significantes entre si nem em relação ao grupo copaíba. A comparação do nível de proteínas apresentou diferença significativa (p-valor < 0,01) entre o grupo controle (0,2608 ± 0,1557) e o grupo tratado por carragenina (0,597 ± 0,152). Foi observada diferença real (1,4 neutrófilos) entre os grupos carragenina (2,0079 ± 1,5231) e o grupo copaíba (0,6063 ± 0,32). Conclui-se que a atividade anti-inflamatória do óleo-resina é potencialmente importante como fonte de princípios ativos e que o ultrassom proporcionou a facilitação e aceleração da penetração transcutânea do óleo-resina de copaíba, favorecendo o seu uso tópico. (AU)

In the Amazon region the use of oil of copaibeira trees is so extensive that the copal stands out as the most known medicinal plant used by Amazonian population. There are several indications for the use oleoresin of copaiba with little scientific backing. The aim of this study was to evaluate the effects of oleoresin of copaiba species Copaifera reticulata as antiinflammatory in experimental models of acute inflammatory reaction. For this, we used 28 mice of Swiss Webster strain, who received treatment with ultrasound aired, and oleoresin extracted from Copaifera reticulata. The model of acute inflammation air pouch induced by carrageenan was used to evaluate the anti-inflammatory effect of oleoresin of copaiba (fresh). The analysis occurred in the exudate analyzed for total protein content, total number of leukocytes and cell analysis. For statistical analysis was elected the Kruskal-Wallis test with significance level alpha = 0.05. Total cells and mononuclear cells showed no statistically significant differences among themselves or in relation to the group copal. The comparison of protein level showed a significant difference (p-value < 0.01 *), saline was lower (0.2608 ± 0.1557) than carrageenan (0.597 ± 0.152). Real difference was observed (1.4 neutrophils) between groups carrageenan (2.0079 ± 1.5231) and the group copaíba (0.6063 ± 0:32). We concluded that the antiinflammatory activity of the oleoresin is potentially important as a source of active ingredients and provided that ultrasound facilitation and acceleration of transcutaneous penetration of the copaiba oil, favoring its topical use. (AU)

Atividade larvicida do ácido 3-B-acetoxylabdan-8(17)-13-dien-15-óico isolado da planta medicinal copaifera reticulata (leguminosae) sobre aedes aegypti (diptera, culicidae) evidenciada pelas alterações morfohistológicas / Larvicidal activity of 3-Beta-acetoxylabdan-8(17)-13-dien-15-oic acid isolated from the medicinal plant Copaifera reticulata against Aedes aegypti shown by morphohistological changes

O principal mecanismo de controle do dengue tem sido por meio da eliminação do Aedes aegypti, seu transmissor mais competente. Este mecanismo consiste, principalmente, na destruição dos criadouros potenciais, na educação sanitária e no uso de inseticidas sintéticos. Estes inseticidas apresentam eficiência, mas são altamente tóxicos aos vertebrados e ao meio ambiente. Com o aparecimento da resistência dos mosquitos a essas substâncias, abre-se uma oportunidade aos inseticidas de origem botânica. Neste estudo, apresentam-se os mecanismos da atividade larvicida do ácido 3-Beta-acetoxylabdan-8(17)-13-dien-15-oico, extraído da planta medicinal Copaifera reticulata Ducke (Leguminosae), sobre larvas de terceiro estádio de Ae. aegypti. As larvas foram submetidas a uma solução do ácido a 9ppm, por até 24 horas. Aquelas que atingiram estado letárgico foram coletadas e fixadas em paraformaldeído a 4 por cento, em tampão cacodilato de sódio 0.1M pH 7.2, incluídas em resina, e as lâminas, coradas pela técnica de hematoxilina-eosina e analisadas por microscopia de luz. O ácido causou a morte das larvas pela destruição celular do intestino médio, por meio de vacuolização citoplasmática, hipertrofia celular e nuclear, degeneração do bordo em escova, formação vesicular apical com liberação de conteúdo citoplasmático, estratificação do epitélio e dobras na matriz peritrófica.

The main mechanism of control of dengue has been through the fight against Aedes aegypti, the most competent vector. The fight primarily consists of elimination of its potential breeding sites, health education and use of synthetic insecticides. These insecticides are effective but are highly toxic to vertebrates and the environment. With the emergence of resistance of mosquitoes to them, insecticides of botanical origin are being explored. This study looks at the larvicidal activity of a solution of a solution of 3-Beta-acetoxylabdan-8(17)-13-dien-15-óico acid extracted from the medicinal plant Copaifera reticulata Ducke (Leguminosae) on the 3rd stage larvae of Ae. aegypti. Larvae were subjected to 9 ppm acid for up to 24 h. Those that reached lethargic state were collected and fixed in 4 percent paraformaldhyde in 0.1 M sodium cacodilate buffer, pH 7.2, included in resin and the slides stained with the hematoxylin-eosin technique and examined by light microscopy. This acid caused the death of the Ae. aegypti larvae by cell destruction in the midgut, by the high cytoplasmic vacuolation, cell and nuclear hypertrophy, degeneration of the brush edge, apical vesicular formation with release of cytoplasmic contents of cells, stratification of the epithelium and folds in the peritrophic matrix.

Atividade antimicrobiana do oleorresina de copaíba (Copaifera reticulata) frente a Staphylococcus coagulase positiva isolados de casos de otite em cães / Antimicrobial activity of copaiba oil (Copaifera reticulata) against coagulase positive Staphylococcus of canine otitis

The aim of this study was to investigate the antimicrobial activity of the oleoresin Copaifera reticulata Ducke against Staphylococcus coagulase positive (SCP) isolated from otitis externa in dogs. The minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC) of the oleoresin were determined by broth microdilution method. In addition, we verified the antimicrobial susceptibility profile of the isolates of SCP by agar diffusion method. Eight classes of antimicrobial were used to calculate the multidrug resistance. The chemical composition of the oleoresin was performed by gas chromatography coupled to the mass spectrometry (GC/MS), and β-caryophyllene, β-bisabolene, and (E)-α-bergamotene were the main compounds found. The copaiba oleoresin showed a MIC90 of 0.164mg/mL and a CBM90 of 1.3mg/mL. The multidrug resistance was found in 27% of the strains tested. The results suggest that copaiba oleoresin has bacteriostatic and bactericidal activity even in multidrug-resistant coagulase-positive strains.

O objetivo do presente trabalho foi investigar o potencial antimicrobiano do oleorresina de Copaifera reticulata Ducke em isolados de Staphylococcus coagulase positiva (SCP) provenientes de casos de otite externa em cães. O método de microdiluição em caldo foi utilizado para determinação da concentração inibitória mínima (CIM) e concentração bactericida mínima (CBM) de oleorresina de copaíba. Em adição, foi determinado o perfil de suscetibilidade aos antimicrobianos dos isolados de SCP pelo método de difusão em ágar. Oito classes de antimicrobianos foram usadas para o cálculo de multirresistência antimicrobiana. A determinação da composição química do oleorresina de copaíba foi realizada por cromatografia em fase gasosa acoplada à espectrometria de massas (GC/MS), sendo que β-cariofileno, β-bisaboleno e (E)-α-bergamoteno foram os compostos majoritários. O oleorresina de copaíba demonstrou CIM90 de 0,164mg/mL e CBM90 de 1,31mg/mL. A multirresistência foi verificada em 27% das cepas testadas. Os resultados sugerem que o oleorresina de copaíba exerceu atividade bacteriostática e bactericida mesmo em cepas multirresistentes de Staphylococcus coagulase-positiva.

Alterações ultraestruturais em larvas de Aedes aegypti submetidas ao diterpeno labdano, isolado de Copaifera reticulata (Leguminosae), e à uma fração rica em taninos de Magonia pubescens (Sapindaceae) / Ultrastructural alterations in larvae of Aedes aegypti subject to labdane diterpene isolated from Copaifera reticulata (Leguminosae) and a fraction enriched with tannins of Magonia pubescens (Sapindaceae)

INTRODUÇÃO: Dengue é um importante problema de saúde pública, em vários países, e tem como principal vetor o Aedes aegypti, mosquito mais adaptado às áreas urbanizadas. Apresenta-se, pela primeira vez, as alterações ultraestruturais em larvas de 3º estádio, desse mosquito, causadas pelos larvicidas naturais, um diterpeno labdano, extraído de Copaifera reticulata, e uma fração rica em taninos catéquicos, extraída de Magonia pubescens, evidenciando o mecanismo de ação dessas substâncias. MÉTODOS: Os experimentos foram realizados com larvas de 3º estádio em solução de 0,9ppm, do diterpeno (3-β-acetoxylabdan-8(17)-13-dien-15-óico) e de 3,7ppm, da fração majoritária de tanino catéquico de massa molecular 864Da. Obtiveram-se as substâncias através de fracionamentos cromatográficos sucessivos, identificadas por ressonância magnética nuclear de hidrogênio e espectrometria de massas. As larvas que atingiram estado letárgico foram coletadas e dissecadas e seus tubos digestórios fixados, desidratados, emblocados e polimerizados. Cortes ultrafinos foram feitos e contrastados com acetato de uranila 3 por cento e citrato de chumbo, posteriormente, levados ao microscópio eletrônico. RESULTADOS: As principais alterações ultraestruturais provocadas pelos diterpeno e tanino sobre larvas de Aedes aegypti foram vacuolização citoplasmática, desorganização e degeneração celular, mudança estrutural dos microvilos e deslocamento das células da lâmina basal. CONCLUSÕES: O diterpeno e a fração rica em taninos catéquicos provocaram a morte das larvas de Aedes aegypti através da destruição celular no intestino médio.

INTRODUCTION: Dengue is an important public health problem in many countries and its main vector Aedes aegypti, is the mosquito most adapted to urban areas. For the first time, the mechanism of action of labdane diterpenoid extracted from Copaifera reticulata and the fraction enriched of catechin tannins extracted from Magonia pubescens is demonstrated through ultrastructural alterations of Aedes aegypti larvae. METHODS: Experiments were performed using a 0.9ppm solution of diterpenoid and 3.7ppm of the fraction as the main catechin tannin of molecular mass 846Da. The compounds were obtained by thin layer chromatography and identified by nuclear magnetic resonance of hydrogen and mass spectrometry. Larvae that achieved lethargic state were collected and dissected. Next, they were contrasted with 1 percent uranyl acetate, dehydrated, embedded and polymerized. Ultrathin sections were made, mixed with 3 percent uranyl acetate and lead citrate and placed in an electron microscope. RESULTS: The main ultrastructural alterations caused by the diterpenoid and by tanins in larvae of Aedes aegypti were: cytoplasmic vacuolation, alteration of microvilli, cellular aging, cell disruption and degeneration, formation of secretion vesicles and structural changes in microvilli, irregular nuclei and displacement of cells in the basal lamina. CONCLUSIONS: The fraction containing tannins and the diterpenoid caused the death of Aedes aegypti larvae by cell destruction in the midgut.

Atividade anti-inflamatória do óleo-resina da Copaífera reticulata em modelo inflamatório de edema de pata / Anti-inflammatory activity of the oil-resin Copaífera reticulata of model inflamatory paw edema

Objetivo: avaliar a ação do óleo-resina de copaíba da espécie copaifera reticulata como anti-inflamatório em modelos experimentais de reação inflamatória aguda. Método: o estudo experimental foi realizado no Laboratório de Imunofarmacologia da Fundação Instituto Oswaldo Cruz ? FIOCRUZ/RJ, foram utilizados 30 (trinta) camundongos da linhagem Swiss Webster (SW). O óleo-resina de copaíba utilizada foi extraído de árvore da espécie Copaífera reticulata. O modelo de inflamação aguda induzida por carragenina foi utilizado para avaliar o efeito anti-inflamatório das concentrações, foi utilizado o teste estatístico de Kruskal-Wallis para comparar os valores medianos conforme os grupos com nível de significância alfa = 0,05. Resultados: no grupo C500 ocorreu significativa redução do volume no instante T3; somente os grupos Indo e C10 apresentaram significativa redução do volume em T6. Não houve diferença estatisticamente significante no Índice de Inibição do Edema nos grupos (Indo, C10, C100 e C500) nos intantes T1, T3 e T6. Conclusão: a atividade anti-inflamatória do óleo-resina foi confirmada pelo modelo do edema de pata induzido por carragenina através da redução do volume deslocado.

Objective: To evaluate the action of the oil-resin of Copaiba Copaifera reticulata as anti-inflammatory effect in experimental models of acute inflammatory reaction. Method: A total of 30 (thirty) mice of Swiss strain Webster (SW). The oil-resin of Copaiba used was extracted from tree species Copaifera reticulata. The model of acute inflammation induced by carrageenan was used to evaluate the anti-inflammatory effect of the extracts, we used the statistical test of Kruskal-Wallis test to compare the median values for the different groups with a significance level alpha = 0.05. Results: The group C500 was a significant reduction in the volume at time T3, only the Indus and C10 groups showed significant reduction in volume at T6. There was no statistically significant difference in the Index of Inhibition of edema in groups (Indo, C10, C100 and C500), in the instant, T1, T3 and T6. Conclusion: The anti-inflammatory activity of oil-resin was confirmed by the model of paw edema induced by carrageenan by reducing the volume displaced.

Diterpenoids from Copaifera reticulata Ducke with larvicidal activity against Aedes aegypti (L. ) (Diptera, Culicidae) / Diterpenos de Copaifera reticulata Ducke com atividade larvicida contra Aedes aegypti (L. ) (Diptera, Culicidae)

The objective of this study was to evaluate the larvicidal activity of diterpenoids obtained from the oil-resin of Copaifera reticulata against Aedes aegypti larvae, the principal vector of dengue and urban yellow fever. Four diterpenes were obtained from oil-resin extraction with organic solvents and subsequent chromatographic and spectroscopic procedures allowed to isolation and identification of these compounds as 3-b-acetoxylabdan-8(17)-13-dien-15-oic acid (1), alepterolic acid (2), 3-b-hidroxylabdan-8(17)-en-15-oic acid (3), and ent-agatic acid (4). Each compound was previously dissolved in dimethylsulphoxide, and distilled water was added to obtain the desired concentrations. Twenty larvae of third instars were placed into plastic beckers, containing the solution test (25 mL), in a five repetitions scheme, and their mortality, indicated by torpor and darkening of the cephalic capsule, was recorded after 48h. Probit analyses were used to determine lethal concentrations (LC50 and LC90) and their respective 95 percent confidence intervals. This study showed that only diterpenoids 1 and 2 exhibited larvicidal properties with LC50 of 0.8 ppm and 87.3 ppm, respectively, revealing the former as the most toxic compound against third instars of Ae. aegypti. Therefore, this compound seems to be an interesting source for new metabolite to be exploited.

O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade larvicida de diterpenos isolados do óleo-resina de Copaifera reticulata sobre Aedes aegypti, principal vetor de dengue e febre amarela urbana. Quatro diterpenóides foram obtidos a partir da extração do óleo-resina com solventes orgânicos e, subseqüentes procedimentos cromatográficos e espectroscópicos permitiram o isolamento e a identificação desses compostos como ácido 3-b-acetoxylabdan-8(17)-13-dien-15-óico (1), ácido alepterólico (2), ácido 3-b-hidroxylabdan-8(17)-en-15-óico (3) e ácido ent-agático (4). Cada um desses compostos foi previamente solubilizado em dimetilsulfóxido, acrescentando-se água, até se obterem as concentrações desejadas. Em cada bioensaio foram utilizadas 20 larvas de 3° estádio de Ae. aegypti colocadas em 25 mL da solução-teste. Foram feitas cinco repetições, e a mortalidade avaliada 48 h após a exposição, indicada pela ausência de movimentos e escurecimento da cápsula cefálica. Os dados obtidos da mortalidade x concentração (ppm) foram analisados, em gráfico de Probit para avaliar as concentrações letais (CL50 e CL90). Este estudo revelou que os diterpenóides 1 e 2 mostraram atividade larvicida com CL50 de 0,8 e 87,3 ppm, respectivamente, sendo o diterpeno 1 o composto mais promissor a ser usado como larvicida para o controle de Ae. aegypti.

Larvicidal activity of oil-resin fractions from the Brazilian medicinal plant Copaifera reticulata Ducke (Leguminosae-Caesalpinoideae) against Aedes aegypti (Diptera, Culicidae)

Oil-resin fractions from Copaifera reticulata Ducke (Leguminosae-Caesalpinoideae) were evaluated for larvicidal activity on third larval instars of Aedes aegypti, in searching for alternative control methods for this mosquito. The bioactive fractions were chemically monitored by thin-layer chromatography, ¹H and 13C nuclear magnetic resonance and mass spectrometry. Bioassays were performed using five repetitions, at a temperature of 28 ± 1°C, relative humidity of 80 ± 5 percent and light and dark cycles of 12h. Mortality was indicated by darkening of the cephalic capsule after 24h of exposure of the larvae to the solutions. The most active fractions were CRM1-4 (sesquiterpenes) and CRM5-7 (labdane diterpenes), which showed LC50 values of 0.2 and 0.8ppm, respectively.

A atividade larvicida das frações do óleo-resina de Copaifera reticulata Ducke (Leguminosae-Caesalpinoideae) foi avaliada em larvas de 3° estádio de Aedes aegypti, na busca de alternativas para o controle desse mosquito. As frações bioativas foram monitoradas quimicamente através de cromatografia de camada delgada, analisada por ressonância magnética nuclear de hidrogênio (¹H e 13C) e espectrometria de massas. Os bioensaios foram realizados à temperatura de 28±1°C, 80±5 por cento de umidade relativa e fotofase de 12h, com cinco repetições. A mortalidade foi determinada através do escurecimento da cápsula cefálica, após 24h de exposição das larvas às soluções. As frações mais ativas foram CRM1-4 (sesquiterpenos) e CRM5-7 (diterpeno labdano), que mostraram os valores de CL50 de 0,2 e 0,8ppm, respectivamente.