Histopathology and microscopic morphology of protozoan and metazoan parasites of free ranging armadillos in Brazil

ABSTRACT: This study assessed microscopic morphology of protozoan and metazoan parasites, as well as parasite-associated histopathologic changes in five Brazilian free-ranging armadillos. Three armadillos had intra sarcolemmal cysts of Sarcocystis sp. in skeletal muscles without microscopic changes. One Dasypus novemcinctus was found parasitized with a nematode morphologically compatible with an oxyurid in the small intestine. One Dasypus sp. had neutrophilic enteritis associated with adult and larval stages of Strongyloides sp. and one D. novemcinctus had multiple embryonated eggs free in the lumen of the small intestine with mild neutrophilic enteritis. These findings represent a contribution for expanding our knowledge on parasitic diseases of armadillos.

RESUMO: Este estudo avaliou a morfologia microscópica de parasitos protozoários e metazoários, bem como lesões associadas ao parasitismo em cinco tatus de vida livre no Brasil. Três tatus tinham cistos de Sarcocystis sp. Intra-sarcolemal em músculos esqueléticos sem alterações microscópicas. Um Dasypus novemcinctus estava parasitado com um nematodo morfologicamente compatível com oxiurideo no intestino delgado. Um Dasypus sp. apresentou enterite neutrofílica associada com estágios larvais de Strongyloides sp. e um D. novemcinctus apresentou múltiplos ovos embrionados livres no lúmen do intestino delgado, associado a enterite neutrofílica discreta. Estes achados representam uma contribuição para a expansão do conhecimento sobre doenças parasitárias de tatus.

Histopathology and microscopic morphology of protozoan and metazoan parasites of free ranging armadillos in Brazil / Histopatologia e morfologia microscópica de parasitos protozoários e metazoários de tatus de vida livre no Brasil

This study assessed microscopic morphology of protozoan and metazoan parasites, as well as parasite-associated histopathologic changes in five Brazilian free-ranging armadillos. Three armadillos had intra sarcolemmal cysts of Sarcocystis sp. in skeletal muscles without microscopic changes. One Dasypus novemcinctus was found parasitized with a nematode morphologically compatible with an oxyurid in the small intestine. One Dasypus sp. had neutrophilic enteritis associated with adult and larval stages of Strongyloides sp. and one D. novemcinctus had multiple embryonated eggs free in the lumen of the small intestine with mild neutrophilic enteritis. These findings represent a contribution for expanding our knowledge on parasitic diseases of armadillos.(AU)

Este estudo avaliou a morfologia microscópica de parasitos protozoários e metazoários, bem como lesões associadas ao parasitismo em cinco tatus de vida livre no Brasil. Três tatus tinham cistos de Sarcocystis sp. Intra-sarcolemal em músculos esqueléticos sem alterações microscópicas. Um Dasypus novemcinctus estava parasitado com um nematodo morfologicamente compatível com oxiurideo no intestino delgado. Um Dasypus sp. apresentou enterite neutrofílica associada com estágios larvais de Strongyloides sp. e um D. novemcinctus apresentou múltiplos ovos embrionados livres no lúmen do intestino delgado, associado a enterite neutrofílica discreta. Estes achados representam uma contribuição para a expansão do conhecimento sobre doenças parasitárias de tatus.(AU)

Parasitismo por Amblyomma ovale e Amblyomma fuscum (Acari: Ixodidae) em Dasypus novemcinctus (Xenarthra: Dasypodidae) no Brasil / Parasitism by Amblyomma ovale and Amblyomma fuscum (Acari: Ixodidae) on Dasypus novemcinctus (Xenarthra: Dasypodidae) in Brazil

Carrapatos são ectoparasitos hematófagos importantes para a saúde pública e animal por transmitirem agentes infecciosos durante a hematofagia, bem como causarem injúrias a seus hospedeiros. A ocorrência dos carrapatos Amblyomma ovale e Amblyomma fuscum é registrada, pela primeira vez, para o Brasil, parasitando tatu-galinha (Dasypus novemcinctus).(AU)

Ticks are important bloodsucking ectoparasites for public and animal health for transmitting infectious agents during blood feeding and causing injuries to their hosts. The authors report the occurrence of Amblyomma ovale and Amblyomma fuscum for the first time in Brazil, parasitizing the nine-banded armadillo (Dasypus novemcinctus).(AU)

Mycobacterium leprae in six-banded (Euphractus sexcinctus) and nine-banded armadillos (Dasypus novemcinctus) in Northeast Brazil

Human beings are the main reservoir of the causative agent of leprosy, Mycobacterium leprae. In the Americas, nine-banded armadillos (Dasypus novemcinctus) also act as a reservoir for the bacillus. In the state of Ceará (CE), which is located in Northeast Brazil and is an endemic area of leprosy, there are several species of armadillos, including D. novemcinctus and Euphractus sexcinctus (six-banded armadillo). Contact between humans and armadillos occur mainly through hunting, cleaning, preparing, cooking and eating. This study identified M. leprae DNA in the two main species of armadillos found in Northeast Brazil. A total of 29 wild armadillos (27 D. novemcinctus and 2 E. sexcinctus) were captured in different environments of CE countryside. Samples from the ear, nose, liver and spleen from each of these animals were tested by a nested M. leprae-specific repetitive element polymerase chain reaction assay. The samples that tested positive were confirmed by DNA sequencing. M. leprae was detected in 21% (6/29) of the animals, including five D. novemcinctus and one E. sexcinctus. This is the first Brazilian study to identify the presence of a biomarker of M. leprae in wild armadillos (D. novemcinctus and E. sexcinctus) in a leprosy hyperendemic area where there is continuous contact between humans and armadillos.

Search for Mycobacterium leprae in wild mammals

Leprosy is still a worldwide public health problem. Brazil and India show the highest prevalence rates of the disease. Natural infection of armadillos Dasypus novemcinctus with Mycobacterium leprae has been reported in some regions of the United States. Identification of bacilli is difficult, particularly due to its inability to grow in vitro. The use of molecular tools represents a fast and sensitive alternative method for diagnosis of mycobacteriosis. In the present study, the diagnostic methods used were bacilloscopy, histopathology, microbiology, and PCR using specific primers for M. leprae repetitive sequences. PCR were performed using genomic DNA extracted from 138 samples of liver, spleen, lymph nodes, and skin of 44 D. novemcinctus, Euphractus sexcinctus, Cabassous unicinctus, and C. tatouay armadillos from the Middle Western region of the state of São Paulo and from the experimental station of Embrapa Pantanal, located in Pantanal da Nhecolândia of Mato Grosso do Sul state. Also, the molecular analysis of 19 samples from internal organs of other road killed species of wild animals, such as Nasua nasua (ring-tailed coati), Procyon cancrivoros (hand-skinned), Cerdocyon thous (dog-pity-bush), Cavia aperea (restless cavy), Didelphis albiventris (skunk), Sphigurrus spinosus (hedgehog), and Gallictis vittata (ferret) showed PCR negative data. None of the 157 analyzed samples had shown natural mycobacterial infection. Only the armadillo inoculated with material collected from untreated multibacillary leprosy patient presented PCR positive and its genomic sequencing revealed 100 percent identity with M. leprae. According to these preliminary studies, based on the used methodology, it is possible to conclude that wild mammals seem not to play an important role in the epidemiology of leprosy in the Middle Western region of the São Paulo state and in the Pantanal of Mato Grosso do Sul state.

The Effect of Human Development on Mammal Populations of the Punta Leona Private Wildlife Refuge, Costa Rica

The effect of human development on six diurnal mammal species was studied using transects in the Punta Leona Private Wildlife Refuge, Puntarenas, Costa Rica during the dry season months of March and April 2006. Individuals/km was recorded for each species in more developed (MD) (near paved roads, buildings, construction, or deforested trees) and less developed areas (LD) (secondary forest). The white-faced apuchin monkey (Cebus capucinus) (n = 233), coatimundi (Nasua narica) (n = 46), and Central American spider monkey (Ateles geoffroyi) (n = 36) demonstrated a preference for less-developed habitats. The nine-banded armadillo (Dasypus novemcinctus) (n = 4), tamandua (Tamandua mexicana) (n = 2) and variegated squirrel (Sciurus variegatoides) (n = 5) were observed infrequently. White-faced monkeys avoided construction areas, but received artificial food daily in developed areas. Coatimundis also received artificial foods daily and showed aggression towards guests. Rev. Biol. Trop. 57 (1-2): 441-449. Epub 2009 June 30.

Se estudiaron seis especies de mamíferos mediante transectos durante la estación seca tardía (marzo y abril) de 1996 en el Refugio de Vida Silvestre de Punta Leona, Puntarenas, Costa Rica. Se registró la cantidad de animales por km en lugares con mucho efecto humano (cerca del caminos pavimentados, edificios, construcción, y deforestación) y lugares con menos efecto. El mono carablanca (Cebus capucinus) (n = 233), el pizote (Nasua narica) (n = 46), y el mono araña centroamericano (Ateles geoffroyi) (n = 36) prefirieron lugares con menos efecto. Se observó pocos armadillos (Dasypus novemcinctus) (n = 4), osos hormigueros (Tamandua mexicana) (n = 2), y ardillas (Sciurus variegatoides) (n = 5). Los monos carablancas y pizotes aceptan alimentos artificiales y los pizotes fueron agresivos con los turistas. Los carablancas evitan los lugares con construcciones y los caminos pavimentados.

The effect of iron supplementation in the diet of Dasypus novemcinctus (Linnaeus, 1758) armadillos in captivity

Armadillos of the species Dasypus novemcinctus have been used as an experimental model of leprosy. Besides non-human primates, they are the only species naturally infected with Mycobacterium leprae and when experimentally inoculated, reproduce the lepromatous form of the disease producing large quantities of bacilli. This species has been maintained in captivity by numerous researchers and specific housing and feeding requirements have been developed to guarantee their survival during long experimental periods. In the "Lauro de Souza Lima" Institute, armadillos receive dog food, ground beef, boiled eggs and vitamin C. However, despite the balanced diet, anemia has been observed in some captive animals, especially in armadillos inoculated with M. leprae in advanced stages of infection. Thus, the objective of the present study was to evaluate the effect of iron sulfate supplementation in the feed provided for armadillos, both inoculated and non-inoculated with M. leprae, by means of the evaluation of their hematological profile. Fourteen armadillos received 10 mg/animal of iron sulfate (Hematofer®) diluted in sterile water mixed with their daily feed for 50 days. Hemograms and serum iron dosages for each armadillo were performed before and after supplementation. The hematocrit values increased significantly after iron supplementation, both in armadillos inoculated and non-inoculated with M. leprae. It is possible that the amount of iron in the feed is insufficient for the formation of hemoglobin, leading to microcytic anemia. Dietary supplementation with iron sulfate reversed this state, showing the importance of understanding the metabolism of exotic species for their maintenance in captivity, and thus ensuring their well-being.

O tatu da espécie Dasypus novemcinctus tem sido utilizado como modelo experimental para a hanseníase. Eles são a única espécie, além de primatas não humanos, que se apresentam naturalmente infectados pelo Mycobacterium leprae. Estes tatus, quando experimentalmente inoculados, reproduzem a forma virchoviana da hanseníase produzindo grandes quantidades de bacilos. Esta espécie tem sido mantida em cativeiro por vários pesquisadores, no entanto, alguns cuidados são necessários para garantir a sobrevivência destes por longos períodos experimentais, tais como alojamento e alimentação. No Instituto Lauro de Souza Lima, os animais em cativeiro recebem ração canina, carne bovina, ovos cozidos e vitamina C, mesmo assim, tem-se observado o desenvolvimento de quadros de anemia nestes animais, principalmente nos inoculados com o M. leprae, em estados avançados da infecção. Sendo assim, o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da suplementação com sulfato ferroso na alimentação fornecida aos tatus, inoculados e não inoculados com M. leprae, por meio de avaliação de seu perfil hematológico. Foram utilizados 14 animais que receberam 10 mg/animal de sulfato ferroso (Hematofer®) diluídos em água estéril e misturados diariamente à ração por 50 dias. Foram feitos hemograma e dosagem de ferro sérico de cada animal antes e após a suplementação. Os valores de hematócrito aumentaram significativamente após a suplementação, tanto nos animais inoculados como nos não inoculados com M. leprae. É possível que a quantidade de ferro na alimentação seja insuficiente para a formação da hemoglobina, levando a um quadro de anemia microcítica. A suplementação da dieta com sulfato ferroso reverteu este quadro, mostrando a importância de se conhecer o metabolismo de espécies exóticas para manutenção destas em cativeiro, assegurando seu bem estar.

The effect of iron supplementation in the diet of Dasypus novemcinctus (Linnaeus, 1758) armadillos in captivity / O efeito da suplementação com ferro na dieta de tatus Dasypus novemcinctus (Linnaeus, 1758) em cativeiro

Armadillos of the species Dasypus novemcinctus have been used as an experimental model of leprosy. Besides non-human primates, they are the only species naturally infected with Mycobacterium leprae and when experimentally inoculated, reproduce the lepromatous form of the disease producing large quantities of bacilli. This species has been maintained in captivity by numerous researchers and specific housing and feeding requirements have been developed to guarantee their survival during long experimental periods. In the "Lauro de Souza Lima" Institute, armadillos receive dog food, ground beef, boiled eggs and vitamin C. However, despite the balanced diet, anemia has been observed in some captive animals, especially in armadillos inoculated with M. leprae in advanced stages of infection. Thus, the objective of the present study was to evaluate the effect of iron sulfate supplementation in the feed provided for armadillos, both inoculated and non-inoculated with M. leprae, by means of the evaluation of their hematological profile. Fourteen armadillos received 10 mg/animal of iron sulfate (Hematofer®) diluted in sterile water mixed with their daily feed for 50 days. Hemograms and serum iron dosages for each armadillo were performed before and after supplementation. The hematocrit values increased significantly after iron supplementation, both in armadillos inoculated and non-inoculated with M. leprae. It is possible that the amount of iron in the feed is insufficient for the formation of hemoglobin, leading to microcytic anemia. Dietary supplementation with iron sulfate reversed this state, showing the importance of understanding the metabolism of exotic species for their maintenance in captivity, and thus ensuring their well-being.

O tatu da espécie Dasypus novemcinctus tem sido utilizado como modelo experimental para a hanseníase. Eles são a única espécie, além de primatas não humanos, que se apresentam naturalmente infectados pelo Mycobacterium leprae. Estes tatus, quando experimentalmente inoculados, reproduzem a forma virchoviana da hanseníase produzindo grandes quantidades de bacilos. Esta espécie tem sido mantida em cativeiro por vários pesquisadores, no entanto, alguns cuidados são necessários para garantir a sobrevivência destes por longos períodos experimentais, tais como alojamento e alimentação. No Instituto Lauro de Souza Lima, os animais em cativeiro recebem ração canina, carne bovina, ovos cozidos e vitamina C, mesmo assim, tem-se observado o desenvolvimento de quadros de anemia nestes animais, principalmente nos inoculados com o M. leprae, em estados avançados da infecção. Sendo assim, o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da suplementação com sulfato ferroso na alimentação fornecida aos tatus, inoculados e não inoculados com M. leprae, por meio de avaliação de seu perfil hematológico. Foram utilizados 14 animais que receberam 10 mg/animal de sulfato ferroso (Hematofer®) diluídos em água estéril e misturados diariamente à ração por 50 dias. Foram feitos hemograma e dosagem de ferro sérico de cada animal antes e após a suplementação. Os valores de hematócrito aumentaram significativamente após a suplementação, tanto nos animais inoculados como nos não inoculados com M. leprae. É possível que a quantidade de ferro na alimentação seja insuficiente para a formação da hemoglobina, levando a um quadro de anemia microcítica. A suplementação da dieta com sulfato ferroso reverteu este quadro, mostrando a importância de se conhecer o metabolismo de espécies exóticas para manutenção destas em cativeiro, assegurando seu bem estar.

Diversidade genética e filogeografia molecular de Euphractus sexcinctus e Dasypus novemcinctus (Mammalia: Xenarthra) através de ADN mitocondrial (citocromo b) / Genetic diversity and molecular phylogeography of Euphractus sexcinctus and Dasypus novemcinctus (Mammalia: xenarthra) through the mitochondrial DNA (Cytocrome b)

Para este estudo foi sequenciado o gene mitocondrial Citocromo b (1140pb) em amostras de ADN de 12 exemplares de Euphractus sexcinctus e 67 exemplares de Dasypus novemcinctus. Análises filogenéticas (distância, máxima parcimônia e máxima vesossimilhança) e populacionais (median-joining) foram realizadas com objetivo de estudar a variação genética e a filogeografica destas duas espécies. Também foi avaliada a posição filogenética de outros Dasypodidae (Dasypus kappleri, Cabassous unicinctus, C. tatouay e Tolypeutes tricinctus). Os resultados confirmaram a monofilia de Dasypodidae, Dasypodinae, Euphractinae e Tolypeutinae, assim como a relação maior entre as duas últimas sub-famílias. Em E. sexcinctus foram identificados 11 haplótipos e em D. novemcinctus 49. As análises mostraram o alto polimorfismo do gene Citocromo b, a falta de estruturação genética das populações, uma baixa divergência genética (distância p) entre os haplótipos e mostraram que o Rio São Francisco não constitui uma barreira ao fluxo gênico nestas duas espécies, uma vez que o mesmo haplótipo ocorreu em suas duas margens. Três haplótipos de E. sexcinctus formaram em todas as análises um grupo que se distribui na região da Caatinga do extremo nordeste do Brasil, ao norte do Rio São Francisco. As análises mostraram quatro grupos entre os haplótipos de D. novemcinctus (49 deste estudo e 26 do Genbank), com uma clara separação entre o haplótipo norte-americano de todos os demais sul-americanos. Entre os sul-americanos existem três grupos, um formado por 65 haplótipos que se distribuem no Brasil, Argentina e Paraguai. Os outros dois grupos são menores, um ocorrendo na região Norte do Brasil (Amazonas e Pará) com três haplótipos e outro formado por seis haplótipos que ocorrem na Bahia, Rio de Janeiro e Rondônia. Embora suas características morfológicas sejam compatíveis com as descrições de D. novemcinctus, exemplares destes dois últimos grupos mostraram diferenças morfológicas em seus crânios...

DNA samples of 12 specimens of Euphractus sexcinctus and 67 specimens of Dasypys novemcinctus had the mitochondrial gene Cytochrome b (1140pb) amplified and sequenced. Phylogenetic (distance, maximum parsimony and maximum likelihood) and population (median-joining) analyses were carried out in order to study the genetic variation and phylogeography of these two species. It was also assessed the phylogenetic position of other Dasypodidae: Dasypus kappleri, Cabassous unicinctus, C. tatouay and Tolypeutes tricinctus. The results confirmed the monophyly of Dasypodidae, Dasypodinae, Euphractinae and Tolypeutinae, as well as the relationship between the two largest sub-families. In E. sexcinctus 11 haplotypes and in D. novemcinctus 49, were identified. The analyses showed the high polymorphism of the gene Cytochrome b, a lack of population genetic structure, a low genetic divergence (p distance) between haplotypes and that Rio São Francisco is not a barrier to gene flow in these two species, once the same haplotype occur in both margins. Three haplotypes of E. sexcinctus formed, in all analyses, a group that is distributed in the region of Caatinga, the extreme northeastern Brazil, north of Rio São Francisco. Analyses were congruent in showing four groups among D. novemcinctus haplotypes (49 of this study and 26 of Genbank), with a clear separation between United States haplotype and all other South American ones. Among South American haplotypes there are three groups, one is formed by 65 haplotypes distributed in Brazil, Argentina and Paraguay. The other two groups are smaller, one occurring in northern Brazil (Para and Amazonas) with three haplotypes, and another formed by six haplotypes occurring in Bahia, Rio de Janeiro and Rondônia. Although morphologic characteristics are compatible with the descriptions of D. novemcinctus, the latter two groups showed some morphologic differentiation in their skulls that corroborate molecular data and suggest...