Contrasting roles of donor and recipient TGFB1 and IFNG gene polymorphic variants in chronic kidney transplant rejection / Papéis contrastantes das variantes polimórficas dos genes TGFB1 e IFNG do doador e do receptor na rejeição crônica de transplantados renais

Objective: To assess the long-term impact (minimum of 3 years follow-up) of polymorphisms in cytokine genes in donor: recipient pairs on the results of the transplant. Methods: We compared genetic cytokine polymorphisms and the primary factors of risk for the development of chronic rejection in paired groups of renal transplant patients with and without chronic allograft nephropathy [CAN]. Results: Multivariate analysis indicated that the presence of the high-production TT genotype (codon 10) of the transforming growth factor beta-1 (TGFB1) was protective in receptors (p=0.017), contrasting with the increased risk when present in donor samples (p=0.049). On the other hand, in the case of the gamma interferon studied, the greater frequency of the high production allele was protective in the analysis of the donor group (p=0.013), increasing the risk of chronic nephropathy of the allograft when present in the recipients (p=0.036). Conclusion: Our results highlight the importance of TGFB1 genotyping in donors, and indicate that polymorphisms in the gene of this cytokine in donor cells might contribute to the development of chronic allograft nephropathy.

Objetivo: Avaliar o impacto de longo prazo (com seguimento mínimo de 2 anos) de polimorfismos em genes de citocinas em pares doador:receptor sobre os resultados do transplante. Métodos: Comparamos os polimorfismos genéticos das citocinas e os principais fatores de risco para o desenvolvimento de rejeição crônica em grupos pareados de pacientes transplantados renais com e sem nefropatia crônica do aloenxerto [CAN]. Resultados: A análise multivariada indicou que a presença do genótipo TT (códon 10) de alta produção do fator de crescimento transformador beta-1 (TGFB1) era protetor nos receptores (p=0,017), em contraste com o risco aumentado quando presente nas amostras de doadores (p=0,049). Por outro lado, no caso do interferon gama estudado, a maior frequência do alelo de alta produção foi protetora na análise do grupo de doadores (p=0,013), mas aumentava o risco de nefropatia crônica do aloenxerto quando presente nos receptores (p=0,036). Conclusão: Nossos resultados ressaltam a importância da genotipagem de TGFB1 também em doadores, e indicam que polimorfismos no gene desta citocina em células do doador podem contribuir no desenvolvimento da nefropatia crônica do aloenxerto.

Aberrant signaling pathways in medulloblastomas: a stem cell connection / Vias de sinalização aberrantes no meduloblastoma: uma conexão com célula-tronco

Medulloblastoma is a highly malignant primary tumor of the central nervous system. It represents the most frequent type of solid tumor and the leading cause of death related to cancer in early childhood. Current treatment includes surgery, chemotherapy and radiotherapy which may lead to severe cognitive impairment and secondary brain tumors. New perspectives for therapeutic development have emerged with the identification of stem-like cells displaying high tumorigenic potential and increased radio- and chemo-resistance in gliomas. Under the cancer stem cell hypothesis, transformation of neural stem cells and/or granular neuron progenitors of the cerebellum are though to be involved in medulloblastoma development. Dissecting the genetic and molecular alterations associated with this process should significantly impact both basic and applied cancer research. Based on cumulative evidences in the fields of genetics and molecular biology of medulloblastomas, we discuss the possible involvement of developmental signaling pathways as critical biochemical switches determining normal neurogenesis or tumorigenesis. From the clinical viewpoint, modulation of signaling pathways such as TGFβ, regulating neural stem cell proliferation and tumor development, might be attempted as an alternative strategy for future drug development aiming at more efficient therapies and improved clinical outcome of patients with pediatric brain cancers.

Meduloblastoma é um tumor maligno do sistema nervoso central (SNC). Na infância, representa o tumor sólido mais frequente e a principal causa de morte relacionada ao câncer. Tratamentos atuais incluem cirurgia, quimioterapia e radioterapia, que podem trazer prejuízos cognitivos e desenvolvimento de tumores secundários. Novas perspectivas terapêuticas surgem com a identificação de células-tronco em gliomas, as quais apresentam alto potencial tumorigênico e maior resistência à radioterapia e quimioterapia. A hipótese das células-tronco tumorais sugere que a transformação de células-tronco e/ou progenitores neurais do cerebelo está envolvida no desenvolvimento do meduloblastoma. Portanto, analisar alterações genéticas e moleculares envolvidas nesse processo é de grande importância na pesquisa básica e aplicada ao câncer. Nesse sentido, discutimos o possível envolvimento de vias de sinalização bioquímica críticas a ambos os processos de neurogênese normal ou tumorigênese, com base em evidências atuais na área de genética e biologia molecular dos meduloblastomas. Do ponto de vista clínico, a modulação de vias de sinalização como a do TGFβ, regulando proliferação de célula-tronco neural e desenvolvimento tumoral, pode ser uma estratégia alternativa para o desenvolvimento de novos medicamentos objetivando-se terapias mais eficientes e melhora do prognóstico dos pacientes pediátricos com câncer de SNC.

Expressão do fator de crescimento transformador-beta em mucosa oral submetida à radioterapia: uma revisão crítica da literatura / Expression of transforming growth factor: beta in oral mucosa submitted to radiotherapy. a critical literature review

A radiação ionizante é uma das terapias utilizadas para o tratamento de neoplasias malignas de cabeça e pescoço. Todavia, pode causar complicações agudas, como mucosite, e complicações crônicas, como fibrose tecidual. A radioterapia promove aumento na deposição de colágeno e incrementa a expressão e ativação precoce do fator de crescimento transformador ­ beta, que pode culminar nessa fibrose. O fator de crescimento transformador - beta é uma citocina multifuncional, excretada sob forma latente, com importante função na modulação do sistema fibroblasto-fibrócito, estimulando a síntese e depósito de colágeno, atuando no reparo tecidual, e diminuindo a sua degradação, especialmente em tecido irradiado. A presente revisão de literatura tem como objetivo esclarecer a relação da expressão do fator de crescimento transformador - beta em tecidos submetidos à radiação ionizante utilizada para tratamento antineoplásico, em especial na mucosa oral e reparo tecidual em lesões do tipo mucosite, realizando uma análise crítica dos trabalhos avaliados.

Ionizing radiation is a form of therapy used for the treatment of malignancies of head and neck. However, it can cause acute complications such as mucositis, and chronic complications, such as tissue fibrosis. Radiation promotes increase in collagen deposition and increases the expression and activation of the Transforming Growth Factor - beta, which may result in this fibrosis. The transforming growth factor - beta is a multifunctional cytokine, excreted latent, with an important role in the modulation of the fibroblasts- fibrocytes, stimulating synthesis and deposition of collagen, acting on tissue repair and decreasing its degradation, especially in tissue irradiated. This literature review aims to clarify the relationship between the expression of transforming growth factor - beta in tissues submitted to ionizing radiation used for anticancer treatment, particularly in the oral mucosa and wound repair in lesions with mucositis, performing a critical analyses of the assessed work.

Associação entre os polimorfismos dos genes MBL2, TGF-beta1 e CD14 com a gravidade da doença pulmonar na fibrose cística / Association of MBL2, TGF-beta1 and CD14 gene polymorphisms with lung disease severity in cystic fibrosis

OBJETIVO: Verificar a correlação entre os polimorfismos dos genes MBL2, TGF-β1 e CD14 com a gravidade da doença pulmonar em pacientes com fibrose cística (FC), bem como correlacionar a presença dos alelos ΔF508 com a gravidade da doença naqueles pacientes. MÉTODOS: Estudo clínico-laboratorial, de corte transversal, com 105 pacientes fibrocísticos de um hospital universitário em 2005-2006. Foram analisados 202 doadores de sangue saudáveis como controles para a pesquisa dos polimorfismos no gene TGF-β1 e CD14. A análise de polimorfismos nos genes MBL2 e TGF-β1 no códon 10, posição +869, foi realizada pela técnica da PCR alelo-específica. A genotipagem do polimorfismo C-159T no gene CD14 foi realizada através de PCR e digestão enzimática. RESULTADOS: Dos 105 pacientes com FC avaliados, 67 apresentavam doença pulmonar grave segundo o escore de Shwachman. Os polimorfismos do gene MBL2 não foram associados com a gravidade da doença nos fibrocísticos. A análise do polimorfismo T869C no gene TGF-β1 mostrou somente uma associação entre o heterozigoto TC com doença pulmonar leve. Para o polimorfismo C-159T no gene CD14, obtivemos um predomínio de pacientes com o genótipo TT, mas não houve diferença significativa com relação à gravidade do quadro pulmonar. CONCLUSÕES: Houve associação entre o genótipo TC do polimorfismo T869C (TGF-β1) e o quadro pulmonar leve nos fibrocísticos. No gene CD14, o genótipo TT parece ser um fator de risco para o quadro pulmonar, mas não um fator modulador da gravidade. Não existiu associação entre pacientes homozigotos para a mutação ΔF508 e a gravidade do quadro pulmonar.

OBJECTIVE: To identify associations between genetic polymorphisms (in the MBL2, TGF-β1 and CD14 genes) and the severity of the lung disease in patients with cystic fibrosis (CF), as well as between the presence of ΔF508 alleles and lung disease severity in such patients. METHODS: This was a cross-sectional cohort study, based on clinical and laboratory data, involving 105 patients with CF treated at a university hospital in the 2005-2006 period. We included 202 healthy blood donors as controls for the determination of TGF-β1 and CD14 gene polymorphisms. Polymorphisms in the MBL2 and TGF-β1 genes at codon 10, position +869, were genotyped using the allele-specific PCR technique. The C-159T polymorphism in the CD14 gene was genotyped using PCR and enzymatic digestion. RESULTS: Of the 105 CF patients evaluated, 67 presented with severe lung disease according to the Shwachman score. The MBL2 gene polymorphisms were not associated with disease severity in the CF patients. Analysis of the T869C polymorphism in the TGF-β1 gene showed an association only between TC heterozygotes and mild pulmonary disease. Although patients presenting the TT genotype of the C159T polymorphism in the CD14 gene predominated, there was no significant difference regarding lung disease severity. CONCLUSIONS: There was an association between the TC genotype of the T869C polymorphism (TGF-β1) and mild pulmonary disease in CF patients. In the CD14 gene, the TT genotype seems to be a risk factor for pulmonary disease but is not a modulator of severity. We found no association between being a ΔF508 homozygote and presenting severe lung disease.

Efeitos do tamoxifeno sobre a expressão das proteínas TGF-β e p27 em pólipos e endométrio adjacente de mulheres após a menopausa / Effects of tamoxifen on the expression of TGF-β and p27 proteins in polyps and adjacent endometrium in postmenopausal women

OBJETIVO:avaliar os efeitos do uso do tamoxifeno sobre a expressão das proteínas TGF-β e p27 em pólipos e endométrio adjacente de mulheres após a menopausa. MÉTODOS: estudo prospectivo, com 30 mulheres, após a menopausa com diagnóstico de câncer de mama, usuárias de tamoxifeno (20 mg/dia), que apresentavam diagnóstico de pólipo endometrial suspeito por meio de ultrassonografia transvaginal, submetidas à histeroscopia diagnóstica e cirúrgica para retirada dos pólipos e do endométrio adjacente. Realizado estudo imunoistoquímico para verificar a expressão das proteínas TGF-β e p27 nos pólipos e no endométrio adjacente. A quantificação dessas proteínas foi realizada por morfometria. RESULTADOS: a média de idade foi 61,7 anos; média da idade na menopausa, 49,5 anos; e o tempo médio de uso do tamoxifeno, de 25,3 meses. A concentração média de células positivas para proteína TGF-β no pólipo epitélio glandular e estroma foi 62,6±4,5 células/mm². Para a p27, no pólipo epitélio glandular, foi de 24,2±18,6 cel/mm² e estroma 19,2±15,2 cel/mm². Não houve diferença significante entre a expressão do TGF-β e p27 nos epitélios glandulares dos pólipos e do endométrio adjacente. A expressão das proteínas do pólipo e endométrio adjacente com os seus respectivos epitélios glandular e estromal apresentou diferença significativa para a proteína p27 (r=0,9, p<0,05). CONCLUSÕES: concluímos que a expressão do TGF-β não está relacionada ao efeito do tamoxifeno sobre o crescimento dos pólipos endometriais, mas a ausência de malignização dos pólipos induzida pelo tamoxifeno pode ser explicada pela alta expressão da proteína p27 no seu epitélio glandular.

PURPOSE: to evaluate the effects of tamoxifen on the expression of TGF-β and p27 proteins in polyps and adjacent endometrium of women after menopause. METHODS: prospective study with 30 post-menopausal women with diagnosis of breast cancer, taking tamoxifen (20 mg/day), presenting diagnosis of suspect endometrial polyps through transvaginal ultrasonography, and submitted to diagnostic and surgical hysterectomy to withdraw the polyps and adjacent endometrium. A immunohistochemical study has been done to verify the expression of the TGF-β and p27 proteins in the polyps and adjacent endometrium. These proteins' quantification has been done by morphometry. RESULTS: the patients' average age was 61.7 years old; their average age at the menopause onset was 49.5; and the average of using tamoxifen was 25.3 months. The average concentration of positive cells for TGF-β protein in the glandular and stroma polyp epithelium was 62.6±4.5 cells/mm². For the p27, in the glandular polyp epithelium, it was 24.2±18.6 cells/mm² and for the stroma, 19.2±15.2 cells/mm². There was no significant difference between the expression of TGF-β and p27 in the glandular epithelial form the polyps and the adjacent endometrium. The expression of proteins in the polyp and adjacent endometrium with its respective glandular and stroma epithelium showed a significant difference for the p27 protein (r=0.9, p<0.05). CONCLUSIONS: we have concluded that the TGF-β expression is not related to the effect of tamoxifen on the growing of endometrial polyps, but the absence of polyps' malignization by tamoxifen may be explained by the high expression of p27 protein in its glandular epithelium.

Análise ultraestrutural e de fatores de crescimento de diferentes métodos de preservação da membrana amniótica utilizada em cirurgia ocular / Ultrastructural and growth factor analysis of amniotic membrane preserved by different methods for ocular surger

OBJETIVO: Comparar, por microscopia eletrônica, a integridade anatômica e a presença de fatores de crescimento e citocinas da membrana amniótica preservada com glicerol/MEM (1:1) e dimetilsulfóxido puro. MÉTODOS: As membranas amnióticas preservadas em glicerol/MEM (1:1) ou dimetilsulfóxido puro foram processadas para microscopia eletrônica de transmissão e varredura. Como controle, membrana amniótica fresca foi imediatamente fixada após coleta e processada para microscopia eletrônica. As citocinas e os fatores de crescimento avaliados foram: TGF-beta- fator transformador de crescimento beta; TGF-beta ativ- fator transformador de crescimento beta ativado; EGF- fator recombinante de crescimento epitelial humano; FGF-4- fator de crescimento fibroblástico 4; FGF-beta- fator de crescimento fibroblástico básico; IL-4- interleucina 4; PGE2- prostaglandina E2; IL-10- interleucina 10; KGF- fator de crescimento de queratinócito; HGF- fator de crescimento de hepatócito. RESULTADOS: As membranas amnióticas do grupo controle apresentavam epitélio íntegro, com microvilos na superfície e complexos juncionais entre as células e a membrana basal. As membranas amnióticas preservadas em glicerol/MEM tinham aspecto semelhante às do controle, com maior altura das células epiteliais. Já as membranas amnióticas preservadas em dimetilsulfóxido mostraram redução das junções intercelulares e destacamento do epitélio da membrana basal. As citocinas e fatores de crescimento não apresentaram diferenças entre os grupos, exceto FGF-4, FGF-beta, PGE2 e KGF. CONCLUSÕES: A membrana amniótica preservada em meio glicerol/MEM apresentou melhor integridade tecidual, com menor desprendimento do epitélio da membrana basal, em comparação com a preservada no dimetilsulfóxido puro. Os fatores de crescimento e citocinas estavam, em sua maior parte, preservados com as duas técnicas de preservação.

PURPOSE: To compare the anatomical structure and the presence of growth factors and cytokines of amniotic membrane preserved in glycerol/MEM (1:1) or undiluted dimethyl sulfoxide through electron microscopy. METHODS: Amniotic membrane preserved in glycerol/MEM (1:1) or undiluted dimethyl sulfoxide were processed for transmission and scaning electron microscopy. As control, freshly collected amniotic membrane was fixed and processed for electron microscopy. The cytokines and growth factors assessed were: TGF-beta (transforming growth factor beta); TGF-b activ (activated transforming growth factor beta); EGF (epidermal growth factor); FGF-4 (fibroblast growth factor 4); bFGF (basic fibroblast growth factor); IL-4 (interleukin 4); PGE2 (prostaglandin E2); IL-10 (interleukin 10); KGF (keratinocyte growth factor); HGF (hepatocyte growth factor). RESULTS: Amniotic membrane from the control group showed intact epithelium, with surface microvilli and junctional complexes between the cells and the basal membrane. Glycerol/MEM preserved amniotic membrane had similar aspect to the control, with higher epithelial cells. Those amniotic membranes preserved in dimethyl sulfoxide disclosed less intercellular junction and detachment of the epithelium from the basal membrane. The cytokines and growth factors did not disclose significant differences, except for FGF-4, bFGF, PGE2 and KGF. CONCLUSIONS: Amniotic membrane preserved in glycerol/MEM showed a better tissue structure, with less detachment of the epithelium from the basal membrane, in comparison to undiluted dimethyl sulfoxide. The majority of the growth factors and cytokines were kept with both techniques of preservation.