Molecular characterization of Aeromonas hydrophila isolates from diseased fishes in district Kasur, Punjab, Pakistan

Abstract Pakistan is an agricultural country and fisheries play a very important role in the economic development of the country. Different diseases are prevalent in Pakistani fish but information related to the causative agents is not well-known. Keeping in view the significance of bacterial pathogens as the causative agents of multiple fish diseases, the present study was conducted for identification, characterization and analysis of virulence genes of Aeromonas spp. isolated from diseased fishes. A total of fifty fish samples having multiple clinical indications were collected from different fish farms of district Kasur, Punjab Pakistan. For isolation of Aeromonas spp. samples were enriched and inoculated on Aeromonas isolation medium. Isolates were identified and characterized by different biochemical tests, Analytical Profile Index (API) 20E kit and Polymerase Chain Reaction (PCR) assays. All isolates were screened for three putative virulence genes including aerolysin (aer), haemolysin (hyl) and heat labile cytotonic enterotoxin (alt). Seven isolates of Aeromonas (A.) hydrophila were retrieved and identified based on API 20E. These isolates were further confirmed as A. hydrophila on the basis of PCR assays. Three isolates were detected positive for the presence of virulence genes (alt and hyl). Whereas aerolysin (aer) gene was not present in any of A. hydrophila isolates. The present study confirmed A. hydrophila as the causative agent of epizootic ulcerative syndrome and motile Aeromonas septicemia in fish farms of district Kasur, Punjab Pakistan. Moreover, detection of two virulence genes (alt and hyl) in A. hydrophila isolates is a threat for fish consumers of study area.

Resumo O Paquistão é um país agrícola, onde a pesca desempenha um papel muito importante para o desenvolvimento econômico. Diferentes doenças são prevalentes em peixes do Paquistão, mas as informações relacionadas aos agentes causadores não são bem conhecidas. Tendo em vista a importância dos patógenos bacterianos como agentes causadores de múltiplas doenças em peixes, o presente estudo foi conduzido para identificação, caracterização e análise de genes de virulência de isolados de Aeromonas spp. de peixes doentes. Foram coletadas 50 amostras de peixes com múltiplas indicações clínicas em diferentes fazendas do distrito de Kasur, Punjab, Paquistão. Para isolar Aeromonas spp., as amostras foram enriquecidas e inoculadas em meio de isolamento. Os isolados foram identificados e caracterizados por diferentes testes bioquímicos, kit Analytical Profile Index (API) 20E, e ensaios de reação em cadeia da polimerase (PCR). Todos os isolados foram selecionados para três genes de virulência putativos, incluindo aerolisina (aer), hemolisina (hyl) e enterotoxina citotônica termolábil (alt). Sete isolados de Aeromonas hydrophila foram recuperados e identificados com base no API 20E. Esses isolados foram posteriormente confirmados como A. hydrophila de acordo com ensaios de PCR. Três isolados indicaram a presença de genes de virulência (alt e hyl), enquanto o gene aerolisina (aer) não esteve presente em nenhum dos isolados de A. hydrophila. O presente estudo confirmou A. hydrophila como o agente causador da síndrome ulcerativa epizoótica e septicemia móvel por Aeromonas em fazendas de peixes, no distrito de Kasur, Punjab, Paquistão. Além disso, a detecção de dois genes de virulência (alt e hyl) em isolados de A. hydrophila é uma ameaça para os consumidores de peixes da área de estudo.

Molecular characterization of Aeromonas hydrophila isolates from diseased fishes in district Kasur, Punjab, Pakistan / Caracterização molecular de isolados de Aeromonas hydrophila de peixes doentes no distrito de Kasur, Punjab, Paquistão

Abstract Pakistan is an agricultural country and fisheries play a very important role in the economic development of the country. Different diseases are prevalent in Pakistani fish but information related to the causative agents is not well-known. Keeping in view the significance of bacterial pathogens as the causative agents of multiple fish diseases, the present study was conducted for identification, characterization and analysis of virulence genes of Aeromonas spp. isolated from diseased fishes. A total of fifty fish samples having multiple clinical indications were collected from different fish farms of district Kasur, Punjab Pakistan. For isolation of Aeromonas spp. samples were enriched and inoculated on Aeromonas isolation medium. Isolates were identified and characterized by different biochemical tests, Analytical Profile Index (API) 20E kit and Polymerase Chain Reaction (PCR) assays. All isolates were screened for three putative virulence genes including aerolysin (aer), haemolysin (hyl) and heat labile cytotonic enterotoxin (alt). Seven isolates of Aeromonas (A.) hydrophila were retrieved and identified based on API 20E. These isolates were further confirmed as A. hydrophila on the basis of PCR assays. Three isolates were detected positive for the presence of virulence genes (alt and hyl). Whereas aerolysin (aer) gene was not present in any of A. hydrophila isolates. The present study confirmed A. hydrophila as the causative agent of epizootic ulcerative syndrome and motile Aeromonas septicemia in fish farms of district Kasur, Punjab Pakistan. Moreover, detection of two virulence genes (alt and hyl) in A. hydrophila isolates is a threat for fish consumers of study area.

Resumo O Paquistão é um país agrícola, onde a pesca desempenha um papel muito importante para o desenvolvimento econômico. Diferentes doenças são prevalentes em peixes do Paquistão, mas as informações relacionadas aos agentes causadores não são bem conhecidas. Tendo em vista a importância dos patógenos bacterianos como agentes causadores de múltiplas doenças em peixes, o presente estudo foi conduzido para identificação, caracterização e análise de genes de virulência de isolados de Aeromonas spp. de peixes doentes. Foram coletadas 50 amostras de peixes com múltiplas indicações clínicas em diferentes fazendas do distrito de Kasur, Punjab, Paquistão. Para isolar Aeromonas spp., as amostras foram enriquecidas e inoculadas em meio de isolamento. Os isolados foram identificados e caracterizados por diferentes testes bioquímicos, kit Analytical Profile Index (API) 20E, e ensaios de reação em cadeia da polimerase (PCR). Todos os isolados foram selecionados para três genes de virulência putativos, incluindo aerolisina (aer), hemolisina (hyl) e enterotoxina citotônica termolábil (alt). Sete isolados de Aeromonas hydrophila foram recuperados e identificados com base no API 20E. Esses isolados foram posteriormente confirmados como A. hydrophila de acordo com ensaios de PCR. Três isolados indicaram a presença de genes de virulência (alt e hyl), enquanto o gene aerolisina (aer) não esteve presente em nenhum dos isolados de A. hydrophila. O presente estudo confirmou A. hydrophila como o agente causador da síndrome ulcerativa epizoótica e septicemia móvel por Aeromonas em fazendas de peixes, no distrito de Kasur, Punjab, Paquistão. Além disso, a detecção de dois genes de virulência (alt e hyl) em isolados de A. hydrophila é uma ameaça para os consumidores de peixes da área de estudo.

Characterization of Enterococcus spp. isolated from a fish farming environment in southern Brazil / Caracterização de Enterococcus spp. isolado de um ambiente de piscicultura no sul do Brasil

Abstract The aim of present study is to characterize the resistance and virulence profile of enterococci isolated from aquaculture excavated ponds and masonry tanks (6 samples) in southern Brazil. Samples were cultured in selective medium, 10 colonies were randomly selected from each sample, which were identified by MALDI-TOF and tested against 13 antimicrobials. The presence of resistance (tetL, tetM, tetS, ermB and msrC) and virulence (ace, esp, agg, cylA and gelE) genes were determined by PCR. A total of 79 enterococci were identified, and Entecococcus faecalis (44.3%) and E. casseliflavus (36.7%) were the most prevalent species isolated. Sixty-five strains (82.3%) were resistant to at least one of the antimicrobials tested, whereas 27 (34.2%) strains were multiresistant. The overall percentages of antimicrobial resistant isolates were: 58.2% to rifampicin, 40.5% to fluoroquinolones, 36.7% to erythromycin and 30.4% to tetracycline. The tetL and tetM genes were found in 57.7% of the tetracycline-resistant strains; and msrC in 31.01% of erythromycin-resistant strains. The most frequently detected virulence factors were ace and gelE genes. Although limited to a single farm, these data suggest that aquaculture may be a reservoir of resistant and virulent enterococci. This study is the first step towards enhancing our understandingof distribution, resistance and virulence profile in enterococci isolated from fish farming environments in the south Brazil.

Resumo O objetivo do estudo apresentado é caracterizar o perfil de resistência e virulência de enterococos isolados de viveiros escavados e tanques de alvenaria (6 amostras) de uma pisicultura no Sul do Brasil. As amostras foram cultivadas em meio seletivo, 10 colônias foram selecionadas aleatoriamente de cada amostra, que foram identificadas por MALDI-TOF e testadas contra 13 antimicrobianos. A presença de genes de resistência (tetL, tetM, tetS, ermB e msrC) e virulência (ace, esp, agg, cylA e gelE) foi determinada por PCR. Foram identificados 79 enterococos, sendo Entecococcus faecalis (44,3%) e E. casseliflavus (36,7%) as espécies mais frequentes isoladas. Sessenta e cinco cepas (82,3%) eram resistentes a pelo menos um dos antimicrobianos testados, enquanto 27 (34,2%) eram multirresistentes. As porcentagens gerais de isolados resistentes a antimicrobianos foram: 58,2% para rifampicina, 40,5% para fluoroquinolonas, 36,7% para eritromicina e 30,4% para tetraciclina. Os genes tetL e tetM foram encontrados em 57,7% das cepas resistentes à tetraciclina; e msrC em 31,01% das cepas resistentes à eritromicina. Os fatores de virulência mais comumente detectados foram ace e gelE. Embora limitados a uma única fazenda, esses dados indicam que a aquicultura pode ser uma fonte de enterococos resistentes e virulentos. Este estudo é o primeiro passo para melhorar nosso entendimento da distribuição, resistência e perfil de virulência em enterococos isolados de ambientes de piscicultura no sul do Brasil.

PREX2 gene's expression in gastric antral epithelial cells of patients with H. pylori infection / Expressão do gene PREX2 em células epiteliais antrais gástricas em pacientes com infecção por H. pylori

ABSTRACT BACKGROUND: The Prex2 protein is a member of the Rac family proteins that belongs to small G proteins with a critical role in cell migration, cell proliferation, and apoptosis through its effects on PI3K cell signaling pathway and phosphatase activity of PTEN protein. The effect of PREX2 gene expression has been shown in some cancer cells. A survey of PREX2 gene expression in gastric antral epithelial cells of gastric cancer patients with Helicobacter pylori various genotypes infection can conduct to better understanding H. pylori infection's carcinogenesis. METHODS: In a case-control study, PREX2 gene expression was evaluated in gastric antral biopsy samples on four groups of patients referred to Sanandaj hospitals, including gastritis with (n=23) and without (n=27) H. pylori infection and gastric cancer with (n=21) and without (n=32) H. pylori infection. Each gastric biopsy sample's total RNA was extracted and cDNA synthesized by using Kits (Takara Company). The PREX2 gene expression was measured using the relative quantitative real-time RT-PCR method and ΔΔCt formula. RESULTS: The PREX2 gene expression increased in gastric antral biopsy samples of gastritis and gastric cancer patients with H. pylori infection (case groups) than patients without H. pylori infection (control groups) 2.38 and 2.27 times, respectively. The patients with H. pylori vacA s1m1 and sabB genotypes infection showed a significant increase of PREX2 gene expression in gastric cancer antral epithelial cells. CONCLUSION: H. pylori vacA s1m1 and sabB genotypes have the positive correlations with PREX2 gene expression in gastric antral epithelial cells of gastritis and gastric cancer patients.

RESUMO CONTEXTO: A proteína Prex2 é membro das proteínas da família Rac que pertencem a pequenas proteínas G com um papel crítico na migração celular, na proliferação celular e na apoptose através de seus efeitos na via de sinalização celular PI3K e atividade fosfatase da proteína PTEN. O efeito da expressão genética PREX2 tem sido mostrada em algumas células cancerosas. Um levantamento da expressão genética PREX2 em células epiteliais antrais gástricas de pacientes infectados com vários genótipos de Helicobacter pylori pode conduzir a um melhor entendimento da carcinogênese da infecção por H. pylori. MÉTODOS: Em estudo de caso-controle, a expressão genética PREX2 foi avaliada em amostras de biópsia antral gástrica em quatro grupos de pacientes encaminhados aos hospitais de Sanandaj, incluindo gastrite com (n=23) e sem (n=27) infecção por H. pylori e de câncer gástrico com (n=21) e sem (n=32) infecção por H. pylori. O RNA total de cada amostra de biópsia gástrica foi extraído e cDNA sintetizado por meio de kits (Takara Company). A expressão genética PREX2 foi medida utilizando-se o método RT-PCR em tempo real quantitativo relativo e a fórmula ΔΔCt. RESULTADOS: A expressão genética PREX2 aumentou em amostras de biópsia antral gástrica de pacientes com gastrite e câncer gástrico com infecção por H. pylori (grupos de casos) em relação aos sem infecção por H. pylori (grupos de controle) 2,38 e 2,27 vezes, respectivamente. Os pacientes com infecção por genótipos H. pylori vacA s1m1 e sabB apresentaram um aumento significativo da expressão genética PREX2 em células epiteliais antrais de câncer gástrico. CONCLUSÃO: Os genótipos H. pylori vacA s1m1 e sabB têm correlações positivas com a expressão genética PREX2 em células epiteliais antrais gástricas de pacientes com câncer gástrico e gastrites.

Virulence genotyping and antimicrobial resistance profiles of Yersinia enterocolitica isolated from meat and meat products in Egypt / Genotipagem de virulência e perfis de resistência antimicrobiana de Yersinia enterocolitica isolados de carne e derivados no Egito

Pathogenic Yersinia enterocolitica (Y. enterocolitica) is one of the food-borne entero-pathogen responsible for yersiniosis in humans. The purpose of this research was to survey the prevalence, virulence-associated genes, and antimicrobial resistance of Y. enterocolitica isolated from meat and meat product samples in Egypt. Forty-one (5.9%) out of 700- samples of chicken meat, beef, ground beef, and sausage were positive Y. enterocolitica with a high prevalence in chicken meat (12%). Five virulence genes (ail, inv, ystA, ystB, and yadA) were characterized among 41 Y. enterocolitica isolates with variable frequencies. Among the strains tested, the ystB gene was detected with a high percentage (78.1%), followed by inv gene (70.7%), ail gene (14.6%), ystA gene (12.2%), and yadA gene (2.4%). A high resistance rate was estimated to amoxicillin-clavulanic acid (100%), followed by cefazolin (95%), ampicillin (65.9%), and doxycycline (51.2%), whilst a high sensitivity rate was observed to gentamicin and ciprofloxacin (97.6% each). Interestingly, the multidrug resistance was specified in the 70.7% of strains and showing 13 resistance patterns. Based on nucleotide sequence analysis of the 16s rRNA gene, the phylogenetic tree showed the genetic relatedness amongst Y. enterocolitica isolates. These findings highlighted the emergence of virulent and multidrug-resistant pathogenic Y. entrocolitica in retailed meat and meat products in Egypt.

A Yersinia enterocolitica patogênica (Y. enterocolitica) é um dos enteropatógenos de origem alimentar responsáveis pela yersiniose no ser humano. O objetivo desta pesquisa foi avaliar a prevalência, genes associados à virulência e resistência antimicrobiana de Y. enterocolitica isolada de amostras de carne e produtos à base de carne no Egito. Quarenta e um (5,9%) de 700 amostras de carne de frango, carne bovina, moída e linguiça foram Y. enterocolitica positivas, com alta prevalência em carne de frango (12%). Cinco genes de virulência (ail, inv, ystA, ystB e yadA) foram caracterizados entre 41 isolados de Y. enterocolitica com frequências variáveis. Entre as cepas testadas, o gene ystB foi detectado com uma alta porcentagem (78,1%), seguido pelo gene inv (70,7%), ail genes (14,6%), gene ystA (12,2%) e gene yadA (2,4%). Foi estimada uma alta taxa de resistência ao ácido amoxicilina-clavulânico (100%), seguida de cefazolina (95%), ampicilina (65,9%) e doxiciclina (51,2%), enquanto uma alta taxa de sensibilidade foi observada para gentamicina e ciprofloxacina (97,6% cada). Curiosamente, a resistência a múltiplas drogas foi especificada em 70,7% das cepas e mostrando 13 padrões de resistência. Com base na análise da sequência nucleotídica do gene rRNA 16s, a árvore filogenética mostrou a relação genética entre isolados de Y. enterocolitica. Esses achados destacaram o surgimento de Y. entrocolitica patogênica virulenta e multirresistente em carnes e produtos à base de carne no Egito.

Distribución de grupos filogenéticos, factores de virulencia y susceptibilidad antimicrobiana en cepas de Escherichia coli uropatógena / Distribution of phylogenetic groups, virulence factors and antimicrobial susceptibility in strains of uropathogenic Escherichia coli

Resumen Introducción: La diferencia entre los aislados patógenos y comensales de Escherichia coli se fundamenta en sus antecedentes filogenéticos. En Venezuela son escasos los estudios que describen el potencial patogénico de los grupos filogenéticos en E. coli. Objetivo: Relacionar la susceptibilidad antimicrobiana, distribución de los grupos filogenéticos y genes de virulencia en cepas de E. coli uropatógena (ECUP) aisladas de pacientes con infección del tracto urinario. Materiales y Métodos: Se estudiaron 17 cepas de ECUP, aisladas de pacientes adultos hospitalizados en dos instituciones de salud. La susceptibilidad frente a ocho antimicrobianos se determinó por el método de microdilución en caldo (MDC). Las β-lactamasas de espectro extendido (BLEE) y carbapenemasas fueron detectadas fenotípicamente. Los grupos filogenéticos y la detección de los genes de virulencia se determinaron por reacción de polimerasa en cadena. Resultados: Todas las cepas sintetizaban BLEE y de éstas, 41% se asoció a la producción de una carbapenemasa (KPC o MBL). El filogrupo B2 (41%) fue predominante. Los genes de virulencia más frecuentes fueron fimH y fyuA con 82% cada uno. Sólo un aislado clasificado en el filogrupo F fue positivo al conjunto de seis genes estudiados. Discusión: La diversidad de asociaciones entre genes de virulencia y perfiles de resistencia, en las cepas ECUP evolucionan continuamente. Además, su distribución en los distintos grupos filogenéticos depende en gran medida de las características clínico epidemiológicas de los grupos de estudios.

Abstract Background: The difference between the pathogenic isolates and commensals of Escherichia coli is based on their phylogenetic antecedents. In Venezuela there are few studies that describe the pathogenic potential of phylogenetic groups in E. coli. Aims: Relate antimicrobial susceptibility, distribution of phylogenetic groups and virulence genes in strains of uropathogenic E. coli (ECUP) isolated from patients with UTI. Methods: We studied 17 ECUP strains, isolated from adult patients hospitalized in two health institutions. The susceptibility to 8 antibiotics was determined by the broth microdilution (MDC) method. Extended spectrum β-lactamases (ESBL) and carbapenemases were phenotypically detected. The phylogenetic groups and the detection of the virulence genes were determined by PCR. Results: All strains synthesized ESBL and of these, 41% were associated with the production of a carbapenemases (KPC or MBL). The phylogroup B2 (41%) was the most predominant. The most frequent virulence genes were fimH and fyuA with 82% each. Only one strain from group F was positive to the 6 genes studied. Discussion: The diversity of associations between virulence genes and resistance profiles in the ECUP are evolving continuously, their distribution in the different phylogenetic groups depends to a large extent on the clinical epidemiological characteristics of the study groups.

Bovine abortion associated with Staphylococcus aureus infection - characterization of S. aureus strain isolated from fetal tissues / Aborto bovino associado à infecção por Staphylococcus aureus - caracterização da cepa de S. aureus isolada a partir de tecidos fetais

ABSTRACT: Staphylococcus aureus is a gram-positive bacterium, commonly found colonizing the skin and mucous membranes of humans and animals. This report describes a case of fetal loss associated with S. aureus infection in a cow. A six-month old, crossbred male bovine fetus from a beef farm was submitted for necropsy. At gross examination fibrinous pleuropneumonia was observed. Histologically, lesions were restricted to the lungs and consisted of marked multifocal to coalescing areas of inflammatory infiltrate of neutrophils, abundant fibrin exudation, necrosis of bronchiolar epithelium and numerous aggregates of coccoid bacteria. Lung and abomasal fluid bacterial culture yielded pure culture of S. aureus, which was characterized as a multidrug resistant strain. Molecular analysis indicated that the studied strain presented several genes of virulence factors including toxic shock syndrome toxin-1 (tst), staphylococcal enterotoxin type A (sea), Panton-Valentine leukocidin (pvl), alpha-hemolysin (hla) and delta-hemolysin (hld). This report documents an infrequent case of fetal loss in cattle due to infection with a highly virulent S. aureus strain.

RESUMO: Staphylococcus aureus é uma bactéria gram-positiva, comumente encontrada colonizando a pele e as membranas mucosas de humanos e animais. O presente relato descreve um caso de aborto bovino associado à infecção por S. aureus. Um feto bovino, macho, cruzado, com seis meses de idade gestacional proveniente de uma fazenda de gado de corte foi submetido para a necropsia. Pleuropneumonia supurativa foi observada na avaliação macroscópica. Histologicamente as lesões encontravam-se restritas aos pulmões e eram representadas por infiltrado inflamatório acentuado, multifocal a coalescente de neutrófilos, acentuada exsudação de fibrina, necrose do epitélio bronquiolar e numerosos agregados bacterianos cocoides. A cultura bacteriana de fragmento de pulmão e líquido do abomaso revelou o crescimento puro de S. aureus, que foi caracterizado como uma cepa multirresistente a drogas. Análises moleculares indicaram que a cepa estudada apresentava vários fatores de virulência, incluindo toxina 1 da síndrome do choque tóxico (TSST-1), enterotoxina estafilocócica tipo A (sea), leucocidina Panton-Valentine (pvl), hemolisina alfa (hla) e hemolisina delta (hld). O presente relato documenta um caso infrequente de aborto bovino devido à infecção por uma cepa altamente virulenta de S. aureus.

Campylobacter jejuni and Campylobacter coli originated from chicken carcasses modulate their transcriptome to translate virulence genes in human cells / Campylobacter jejuni e Campylobacter coli originadas de carcaças de frango modulam seu transcriptoma para traduzir genes de virulência em células humanas

The aim was to determine the spread of genetically similar profiles of Campylobacter in chicken carcasses and evaluate their ability to produce transcripts for ciaB, dnaJ, p19 and sodB genes, before and after cultivation in Caco-2 cells. The strains used were isolated from 420 samples of chicken carcasses chilled and frozen ready for marketing. The species were identified by PCR-multiplex, the phylogeny was determined by RAPD-PCR and the presence of transcripts was performed by RT-PCR. We identified 74 (17.6%) of Campylobacter strains, being 55 (74.3%) C. jejuni and 19 (25.7%) C. coli. The phylogenetic relationship demonstrated heterogeneity between isolates of the same species, with absence of clones, indicating the high level of diversity of circulating genotypes. The gene transcription showed conflicting results before and after the culture in Caco-2 cell, so that before cultivation isolates showed greater capacity to transcribe genes related to survival and after the interaction with human cells, the strains showed higher potential to transcribe genes associated with virulence. The result of this study contributes to the understanding of how these seemingly fragile microorganisms are the most prevalent bacterial agents in human gastroenteritis.(AU)

O objetivo foi determinar a disseminação de perfis geneticamente semelhantes de Campylobacter em carcaças de frango e avaliar sua capacidade de produzir transcritos para os genes ciaB, dnaJ, p19 e sodB, antes e após o cultivo em células Caco-2. As cepas utilizadas foram isoladas de 420 amostras de carcaças de frango resfriadas e congeladas prontas para comercialização. As espécies foram identificadas por PCR-multiplex, a filogenia foi determinada por RAPD-PCR e a presença de transcritos foi realizada por RT-PCR. Identificamos 74 (17,6%) das cepas de Campylobacter, sendo 55 (74,3%) C. jejuni e 19 (25,7%) C. coli. A relação filogenética demonstrou heterogeneidade entre isolados da mesma espécie, com ausência de clones, indicando o alto nível de diversidade dos genótipos circulantes. A transcrição gênica mostrou resultados conflitantes antes e após a cultura em células Caco-2, de modo que, antes do cultivo, os isolados apresentaram maior capacidade de transcrever genes relacionados à sobrevivência e após a interação com células humanas, as linhagens apresentaram maior potencial para transcrever genes associados à virulência. O resultado deste estudo contribui para a compreensão de como esses microrganismos aparentemente frágeis são os agentes bacterianos mais prevalentes na gastroenterite humana.(AU)

Características de virulência de Salmonella Heidelberg isoladas na cadeia avícola brasileira / Virulence characteristics of Salmonella Heidelberg isolated in the Brazilian poultry chain

S. Heidelberg é frequentemente isolada em produtos avícolas e associada a infecções alimentares humanas. Objetivou-se determinar a presença de genes de virulência em 62 cepas de S. Heidelberg isoladas na cadeia de produção avícola brasileira e inferir o seu potencial em causar infecções em humanos. Foi avaliado, por PCR, a presença dos genes avrA, invA, lpfA, agfA, sefA, luxS e sodC. Houve 100% de positividade para os genes avrA e invA, 98,4% para agfA, 96,8% para sodC, 87,1% para lpfA, 77,4% para luxS e ausência d o gene sefA. Os genes de virulência encontrados nas amostras alertam para a possível gravidade das infecções causadas por este sorovar. Estes resultados são importantes para maior compreensão dos perfis de patogenicidade de cepas circulantes de S. Heidelberg nos sistemas de produção avícola brasileiros.

Detection of Enterobacteriaceae, antimicrobial susceptibility, and virulence genes of Escherichia coli in canaries (Serinus canaria) in northeastern Brazil / Detecção de enterobactérias, sensibilidade antimicrobiana e genes de virulência de Escherichia coli em canários belgas (Serinus canaria) da região Nordeste do Brasil

This study aimed to verify the presence of members from the Enterobacteriaceae family and determine antimicrobial susceptibility profiles of the isolates in canaries bred in northeastern Brazil; in addition, the presence of diarrheagenic Escherichia coli (DEC) and avian pathogenic Escherichia coli (APEC) was also verified in these birds. Samples were collected during an exhibition organized by the Brazilian Ornithological Federation in July 2015 in Fortaleza, Brazil. A total of 88 fecal samples were collected and submitted to pre-enrichment step using buffered peptone water, followed by enrichment with the following broths: brain-heart infusion, Rappaport-Vassiliadis, and Selenite-Cystine. Subsequently, aliquots were streaked on MacConkey, brilliant green and salmonella-shigella agar plates. Colonies were selected according to morphological characteristics and submitted to biochemical identification and antimicrobial susceptibility tests with disk-diffusion technique. E. coli strains were evaluated for the presence of eight DEC genes and five APEC genes through conventional polymerase chain reaction (PCR) screening. The most frequent species observed were Pantoea agglomerans (25%), Serratia liquefaciens (12.5%), and Enterobacter aerogenes (9.1%). A single rough strain of Salmonella enterica subsp. enterica was identified in one sample (1.1%). High resistance rates to amoxicillin (78.7%) and ampicillin (75.4%) were identified. Polymyxin B (9.8%), gentamycin (6.6%), and enrofloxacin (6.6%) were the most efficient antibiotics. The total number of multidrug-resistant strains (isolates resistant to more than three antimicrobial classes) was 23 (37.7%). Four E. coli strains were tested for the virulence genes, and two were positive for APEC virulence genes: one strain was positive for iutA and the other for hlyF. In conclusion, canaries in northeastern Brazil participating in exhibitions may present Salmonella spp., Escherichia coli and other enterobacteria in the intestinal microbiota with antimicrobial resistance. These results indicate that, although the E. coli strains recovered from canaries in this study have some virulence genes, they still do not fulfill all the requirements to be considered APEC.(AU)

O objetivo deste trabalho foi verificar a presença de enterobactérias e determinar o perfil de sensibilidade aos antimicrobianos dos isolados oriundos de canários belgas criados em cativeiro do Nordeste do Brasil, adicionalmente verificou-se a presença de Escherichia coli diarreiogênicas (DEC) e E. coli patogênica aviária (APEC) nesses animais. A colheita das amostras ocorreu durante uma exposição de canários belgas organizada pela Federação Ornitológica do Brasil (FOB), em julho de 2015, na cidade de Fortaleza, Ceará, Brasil. Um total de 88 amostras de fezes foram coletadas e submetidas a pré-enriquecimento utilizando água peptonada, caldo de enriquecimento Brain Heart Infusion, Rappaport-Vassiliadis e Selenito-Cistina. Fez-se triagem em placas de ágar MacConkey, Verde Brilhante e ágar Salmonella Shigella. As colônias foram selecionadas e submetidas à identificação bioquímica e susceptibilidade antimicrobiana. Estirpes de Escherichia coli foram avaliadas quanto a presença de 8 genes de virulência de DEC e cinco de APEC por reação em cadeia da polimerase convencional (PCR). As enterobactérias encontradas com maior frequência foram Pantoea agglomerans (25%), Serratia liquefaciens (12,5%) e Enterobacter aerogenes (9,1%). Uma única estirpe de Salmonella enterica subsp. enterica (rugosa) esteve presente em um dos isolados (1,1%). Altos percentuais de resistência foram encontrados para dois antibióticos: amoxicilina (78,7%) e ampicilina (75,4%). Polimixina B (9,8%), gentamicina (6,8%) e enrofloxacina (6,5%) foram os antibióticos com melhor eficiência. O total de estirpes multirresistentes (a mais de três classes de antimicrobianos) foi de 23 (37,7%). Das quatro estirpes de E. coli isoladas, duas foram positivas para os genes de APEC, sendo uma estipe para o gene iss e outra para os genes iutA e hlyF. Portanto, canários belgas criados em cativeiro no Brasil que participam de exposições podem apresentar Salmonella spp., Escherichia coli e outras enterobactérias em sua microbiota intestinal com resistência antimicrobiana. Estes resultados indicam que as estirpes de E. coli isoladas de canário belga no presente estudo apresentam alguns, mas não todos, genes de virulência para serem caracterizadas como E. coli patogênica para aves (APEC).(AU)

Genes de virulencia en Aeromonas spp. (Aeromonadales: Aeromonadaceae) aisladas de Oreochromis spp. (Perciformes: Cichlidae) para consumo humano en México / Virulence genes in Aeromonas spp. (Aeromonadales: Aeromonadaceae) isolated from Oreochromis spp. (Perciformes: Cichlidae) destined for human consumption in Mexico

Resumen Las especies del género Aeromonas se encuentran ampliamente distribuidas en ecosistemas acuáticos, son bacilos Gram negativas, oxidasa positivas y fermentadoras de glucosa que han sido consideradas patógenas emergentes en humanos. Por otra parte, Aeromonas pertenece a la microbiota normal de los peces, no obstante, estos microorganismos poseen una diversidad de factores de virulencia responsables de una variedad de infecciones en humanos, principalmente de tipo gastrointestinal. La presencia de Aeromonas en productos destinados a consumo de alta demanda comercial como la tilapia genera preocupación sanitaria por el potencial patogénico que posee esta bacteria. En este contexto, identificar genes de virulencia presentes en cepas de Aeromonas aisladas en Oreochromis spp. para consumo humano en Reynosa, Tamaulipas, México; es de importancia ante la escasez de estudios moleculares al respecto en la zona. En el presente estudio se analizó el potencial patogénico de 15 cepas de Aeromonas previamente identificadas molecularmente mediante PCR y secuenciación, procedentes de Oreochromis spp. Mediante PCR se analizaron seis genes de virulencia (alt, ast, aerA, hlyA, gcat y stx1) y las cepas utilizadas como control fueron: Aeromonas hydrophila subsp. hydrophila ATCC 7966, Aeromonas caviae 429865 INP, Escherichia coli O157:H7 y Escherichia coli K12. El 100 % (n = 15) de las cepas presentaron al menos un gen de virulencia, el gen aerA se detectó en 86.66 % de las cepas analizadas, mientras que los genes ast y stx1 no fueron identificados. Se encontró que las cepas de Aeromonas presentaban genes asociados en una misma cepa: aerA/gcat, alt/aerA, alt/ aerA/gcat/hlyA y alt/aerA/gcat, de los cuales aerA/gcat se observó con mayor frecuencia y principalmente en A. veronii, mientras que, A. hydrophila presentó el mayor número de asociaciones de genes de virulencia. Estos hallazgos indican que las cepas de Aeromonas aisladas en Oreochromis spp. tienen el potencial de causar enfermedades en humanos. Por lo tanto, es necesario proporcionar información sobre esta bacteria emergente, para tratar y controlar eficazmente cualquier posible evento epidemiológico causado por la misma.(AU)

Abstract The genus Aeromonas are widely distributed in aquatic ecosystems are Gram-negative rods, oxidase-positive, and glucose-fermenting, considered emerging pathogens in humans. Aeromonas belongs to the fish microbiota, these microorganisms have a diversity of virulence factors responsible for a variety of infections in humans mainly gastrointestinal diseases. The presence of Aeromonas in products intended for consumption with high commercial demand such as tilapia generates sanitary concern due to the pathogenic potential of this bacteria. In this context, identification of virulence genes in strains of Aeromonas isolated in Oreochromis spp. intended for human consumption in Reynosa, Tamaulipas, Mexico is important due to the lack of molecular studies in this geographical area. In the present study the pathogenic potential of 15 strains of Aeromonas (A. veronii, A. hydrophila and A. schubertii) from Oreochromis spp. for human consumption were analyzed. Through PCR six virulence genes were analyzed (alt, ast, aerA, hlyA, gcat and stx1) and the strains used as control were: Aeromonas hydrophila subsp. hydrophila ATCC 7966, Aeromonas caviae 429865 INP, Escherichia coli O157: H7 and Escherichia coli K12. El 100 % (n = 15) of the strains harbored at least one virulence gene, aerA gene was detected in 86.66 % of the analyzed strains, while ast and stx1 genes were not identified. Moreover, Aeromonas strains had associated genes in the same strain: aerA / gcat, alt / aerA, alt / aerA / gcat / hlyA and alt / aerA / gcat, of which aerA / gcat were observed mostly in A. veronii, while A. hydrophila had the highest associations. These findings indicate that the strains of Aeromonas isolated in Oreochromis spp. have the potential to cause human diseases, and therefore, this species used as food, could be a vehicle for infections caused by Aeromonas. It also allows to provide information on this emerging microorganism to effectively treat and control any epidemiological event caused by Aeromonas spp. in the future.(AU)

Assessment of FTA card employment for Pasteurella multocida DNA transport and detection of virulence-associated genes in strains isolated from fowl cholera in the United States / Avaliação do emprego de cartões FTA para o transporte do DNA de Pasteurella multocida e pesquisa de genes associados à virulência em cepas isoladas de cólera aviária nos Estados Unidos

Fowl Cholera (FC) is a disease caused by Pasteurella multocida. The severity of this disease is partly caused by virulence factors. Genes encoding fimbriae, capsule, sialidases and proteins for iron metabolism may be related to P. multocida's ability to infect the host. Besides to examining DNA for the presence of virulence genes, DNA is essential for the diagnostic and FTA cards are an alternative for genetic material transport. The study aims to evaluate the viability of P. multocida DNA transport using the cards and to detect 14 virulence genes in 27 strains isolated from FC cases in the United States by multiplex-PCR. No growth was observed in any of the FTA cards, which was essential to assess the security. Furthermore, DNA detection was possible in 100% of the samples, independent of the storage period (7 to 35 days) and temperature (4°C and 37°C). ptfA, exbd-tonB, hgbA, nanB, oma87, hyaD-hyaC, sodC, hgbB, sodA, nanH and pfhA genes were detected in more than 80% of the samples. FTA cards have proven to be a viable and safe tool for DNA transport of P. multocida. A majority of genes showed a high frequency, which was similar to strains isolated from FC cases.(AU)

Cólera aviária (CA) é uma doença causada pela bactéria Pasteurella multocida e a severidade dos casos é em parte justificada por fatores de virulência. Genes codificando fímbrias, cápsulas, sialidases, dismutases e proteínas do metabolismo férrico podem ser relacionados à capacidade do agente em infectar o hospedeiro. Além da obtenção do DNA para pesquisa de genes de virulência, o material genético é fundamental para o diagnóstico, e os cartões FTA seriam uma alternativa no transporte de microrganismos. Os objetivos da presente pesquisa foram avaliar a viabilidade do transporte de DNA de P. multocida através dos cartões e detectar 14 genes de virulência em 27 cepas isoladas de CA nos Estados Unidos, por meio de multiplex-PCR. Nenhuma das amostras para análise microbiológica da segurança dos cartões apresentou crescimento. Foi possível a detecção do DNA em 100% das amostras, independentemente do tempo de estocagem (sete a 35 dias) e das temperaturas (4°C e 37°C) avaliadas. Genes ptfA, exbd-tonB, hgbA, nanB, oma87, hyaD-hyaC, sodC, hgbB, sodA, nanH e pfhA foram detectados em mais de 80% das amostras. Os cartões FTA demonstraram ser uma ferramenta viável e segura para o transporte do DNA de P. multocida. A maioria dos genes apresentou uma alta frequência, compatível com isolados de CA.(AU)

Occurrence and molecular characterization of different virulence-associated genes of Cronobacter sakazakii isolates from some foods and dust samples / Ocorrência e caracterização molecular de diferentes genes associados à virulência de Cronobacter sakazakii detectados em alguns alimentos e amostras de poeira

ABSTRACT: Among the Cronobacter genus, Cronobacter sakazakii is the most common species posing a severe health risk for newborns, infants and children. Some infant formulas, cereal-based foods, and food production environments may be the potential reservoirs of C. sakazakii. This pathogen possesses different virulence factors encoded by different virulence genes. Therefore, characterizing these genes is important for distinguishing pathogenic strains from nonpathogenic ones. The objective of this study was to characterize some virulence genes [OmpA, OmpX, zpx, and Cpa] by real-time polymerase chain reaction (PCR) in C. sakazakii isolates from a total of 120 samples (20 each of milk powder, starch, rice flour, semolina, infant formula and dust samples from food production environments). Overall, 13 isolates (7 from milk powder, 2 rice flour, 1 semolina, and 3 dust) were cultured, identified by bioMérieux API® 20E test kit, and then subjected to real-time PCR application for screening the target virulence-associated genes. Our results showed that all of 13 isolates were positive for the virulence genes OmpA, OmpX, zpx, and Cpa. In summary, our study revealed that some of the analyzed foods and environmental samples were contaminated with pathogenic C. sakazakii with its virulence-associated markers, far above the allowable limit; and therefore, this level of contamination may pose a severe health threat for newborns, infants, and children.

RESUMO: Dentre o gênero Cronobacter, Cronobacter sakazakii é a espécie mais comum que representa um grave risco para a saúde dos recém-nascidos, bebês e crianças. Algumas formulas infantis paracrianças, alimentos a base de cereais e locais de produção de alimentos, foram considerados como potenciais locais de contaminação de C. sakazakii. Este patógeno possui diferentes agentes de virulência codificados por diferentes genes de virulência. Portanto, a caracterização dos genes é importante para distinguir as cepas patogênicas das não patogênicas. O objetivo deste estudo foi caracterizar os diferentes genes de virulência [OmpA, OmpX, zpx, and Cpa] em C. sakazakii isolados em um total de 120 amostras (20 de cada uma delas - leite em pó, amido, farinha de arroz, sêmola, comida para bebês e amostras de poeira provenientes dos ambientes de produção de alimentos) por reação em cadeia da polimerase em tempo real (RT-PCR). No total, foram cultivadas 13 estirpes (7 de leite em pó, 2 de farinha de arroz, 1 de sêmola e 3 poeiras) e depois identificadas pelo kit de teste bioMérieux API® 20E. As estirpes identificadas foram submetidas ao PCR em tempo real para caracterizar os genes alvo associados à virulência. Os resultados mostraram que todos os genes C. sakazakii isolados eram patogenicos e positivos às OmpA, OmpX, zpx e Cpa com um padrão de coexistência. Em resumo, o nosso estudo revelou que os alimentos e os ambientes de produção de alimentos analisados ​​constituíam uma ameaça à saúde dos recém-nascidos, bebês e crianças devido à contaminação por C. sakazakii patogênico como marcadores associados à virulência.

Susceptibilidade de duas linhagens comerciais de frango de corte no desenvolvimento de dermatite necrótica e possível relação dos genes iss e iutA de Escherichia coli com a reprodução experimental da doença / Susceptibility of two commercial lineages of broilers in the development of necrotic dermatitis and relationship of iss and iutA genes from Escherichia coli with the experimental reproduction of the disease

Celulite aviária é uma enfermidade de grande importância para a avicultura mundial, sendo relacionada principalmente à Escherichia coli (E. coli). Neste estudo foi comparada a susceptibilidade de duas linhagens de aves no desenvolvimento da celulite diante do desafio com diferentes concentrações de E. coli. Além disso, foi avaliada a relação dos genes iss e iutA com a patogenicidade de amostras de E. coli de diferentes origens (fecal/casos clínicos) em pintinhos e com a reprodução experimental da doença em aves de 35 dias de idade. Através da inoculação de frangos de corte (Cobb/Ross) com diferentes níveis de desafio (105 a 108 UFC/mL) de E. coli, não foram observadas diferenças significativas entre as linhagens quanto à sensibilidade à dermatite necrótica para a mesma dosagem (p≤0,05). A detecção dos genes iss e iutA demonstrou que estes estiveram presentes somente nas amostras provenientes de casos clínicos. Da mesma forma, estes isolados foram considerados de alta patogenicidade para pintinhos (>80% letalidade), levando a formação de áreas de lesão mais extensas (≥3cm2) em aves de 35 dias, quando comparado às amostras de origem fecal (p≤0,05). Ainda, as diferenças com relação ao tamanho de lesão foram constatadas também entre os isolados de mesma origem (p≤0,05). Desta forma, a linhagem não pode ser considerada um fator primordial para o desenvolvimento de dermatite necrótica em frangos. Ainda, sugere-se que os genes iss e iutA, quando presentes em conjunto ou isoladamente, poderiam ser considerados marcadores de virulência em cepas de E. coli causadoras de celulite aviária.(AU)

Avian cellulitis is a disease of great importance for the global poultry industry, being mainly related to Escherichia coli. In this study the susceptibility of two lineages of broilers in the development of cellulite was compared to the challenge with different concentrations of E. coli. In addition, it evaluated the relationship of the iss and iutA genes with pathogenicity of E. coli samples from different origins (fecal/clinical cases) in chicks and with the experimental reproduction of disease in 35-day-old broilers. By inoculating broilers (Cobb/Ross) with different levels of challenge (105-108 CFU/mL) of E. coli, no significant differences had been observed between strains for sensitivity to necrotic dermatitis for the same dosage (p≤0.05). Detection of the iss and iutA genes showed that they were only present in samples from clinical cases. Likewise, these strains were considered high pathogenicity for chickens (>80% lethality), leading to the formation of more extensive lesion areas (≥3cm2) at 35 days of birds compared to the samples from fecal origin (p≤0.05). Still, the differences with respect to lesion size were also found among isolates of the same origin (p≤0,05). Thus, the lineage can not be considered a primary factor in the development of necrotic dermatitis in broilers. Furthermore, it is suggested that iss and iutA genes, when present together or separately, could be considered as virulence markers for E. coli strains that cause avian cellulite.(AU)

A comparative survey between non-systemic Salmonella spp. (paratyphoid group) and systemic Salmonella Pullorum and S. Gallinarum with a focus on virulence genes / Uma investigação comparativa entre Salmonella spp. não-sistêmicas (grupo paratifoide) e sistêmicas Salmonella Pullorum e S. Gallinarum com enfoque nos genes de virulência

A comparative survey between non-systemic (paratyphoid Salmonellae) and systemic (S. Pullorum and S. Gallinarum) Salmonella strains was performed to produce a virulence gene profile for differentiation among the groups. The following virulence genes were evaluated: invA, spvC, sefC, pefA, fimY, sopB, sopE1, stn and avrA. There are substantial differences among paratyphoid Salmonellae, S. Pullorum, and S. Gallinarum regarding the genes sefC, spvC, sopE1 and avrA. A higher frequency of sefC, spvC, sopE1 and avrA genes were detected in S. Gallinarum and S. Pullorum when compared with strains from the paratyphoid group of Salmonella. These results may be useful for differentiating among different groups and serotypes.(AU)

Uma investigação comparativa entre amostras de Salmonella não-sistêmicas (grupo paratifoide) e sistêmicas (S. Pullorum and S. Gallinarum) foi desenvolvida para produzir um perfil de genes de virulência para diferenciação entre os grupos. Os seguintes genes de virulência foram avaliados invA, spvC, sefC, pefA, fimY, sopB, sopE1, stn e avrA. Detectou-se uma diferença substancial entre Salmonella do grupo paratifoide, S. Pullorum e S. Gallinarum considerando os genes sefC, spvC, sopE1 e avrA. Os genes sefC, spvC, sopE1 e avrA foram detectados, em maior número, em S. Gallinarum e S. Pullorum quando comparados com as amostras de Salmonella do grupo paratifoide. Estes resultados podem ser úteis para a diferenciação entre os diferentes grupos e sorotipos de Salmonella.(AU)

Determining the pathogenicity of bacteria present in wetland waters and crow feces in Bothell / Determinando a patogenicidade de bactérias presentes naságuas dos pântanos e em fezes de corvos em Bothell

This study will determine the pathogenicity of bacteria isolated from the wetland waters and crows feces within the UWBothell campus. This emanated from the need to determine whether the American crow (Corvus brachyrhyncos) has arole in the epidemiology of diarrheal disease along with its significant con-tribution to the high level of fecal coliformsin the stream water that runs through the crow roosting area. Modified from previous studies, we developed protocolsto culture Escherichia coli and Campylobacter, both are known to be pathogenic and present in crow feces, to isolateDNA from cultures or samples, and to perform PCR (Polymerase Chain Reaction)/qPCR (Quantitative PolymeraseChain Reaction) to detect virulence genes. We found that the virulence genes eae and rfb that are necessary to causediarrhea were absent in a representative number of E. coli strains isolated from the water samples and the fecal samples.The virulence genes flaA and cad in the Campylobacter species were detected in fecal samples (77.8% and 73%,respectively) and in water samples (75% each). In conclusion, our hypothesis could not be verified, but our resultssuggest that the Campylobacter isolated from wetland water and crow feces are potentially pathogenic. However, theresults are not conclusive and more sample and virulence genes specific to ex-traintestinal pathogenic E. coli, need to bescreened in order to accurately assess the pathogenicity of these bacteria

Este estudo determinará a patogenicidade de bactérias isoladas das águas pantanais e fezes de corvos den-tro do campusUW (University of Washington) Bothell. Este estudo emanou da necessidade de determinar se o corvo americano (Corvusbrachyrhyncos) tem um papel na epidemiologia da doença diarréica, junta-mente com sua contribuição significativapara o alto nível de coliformes fecais na água do fluxo que per-corre a área onde as aves se alojam. Modificado a partirde estudos anteriores, desenvolvemos protocolos para cultura de Escherichia coli e Campylobacter, ambas conhecidaspor serem patogênicas e presentes em fezes de corvos, isolar DNA de culturas ou amostras e realizar PCR/qPCR paradetectar genes de virulên-cia. Descobriu-se que os genes de virulência eae e rfb que são necessários para causar diarreiaestavam au-sentes num número representativo de estirpes de E. coli isoladas das amostras de água e das amostras fecais.Os genes de virulência flaA e cad em espécies de Campylobacter foram detectados em amostras fecais (77,8% e73%, respectivamente) e em amostras de água (75% cada). Concluindo, nossa hipotese não pôde ser confirmada, masnossos resultados sugerem que a Campylobacter isolada das amostras de água e de fezes de corvo é potencialmentepatogênica. No entanto, os resultados não são conclusivos e mais amostras e genes de virulência específicos para E. coliextraintestinal patogênica necessitam ser identificados, a fim de avaliar com precisão a patogenicidade destas bactérias

Virulence genotyping and antimicrobial resistance profiles of Yersinia enterocolitica isolated from meat and meat products in Egypt

Abstract Pathogenic Yersinia enterocolitica (Y. enterocolitica) is one of the food-borne entero-pathogen responsible for yersiniosis in humans. The purpose of this research was to survey the prevalence, virulence-associated genes, and antimicrobial resistance of Y. enterocolitica isolated from meat and meat product samples in Egypt. Forty-one (5.9%) out of 700- samples of chicken meat, beef, ground beef, and sausage were positive Y. enterocolitica with a high prevalence in chicken meat (12%). Five virulence genes (ail, inv, ystA, ystB, and yadA) were characterized among 41 Y. enterocolitica isolates with variable frequencies. Among the strains tested, the ystB gene was detected with a high percentage (78.1%), followed by inv gene (70.7%), ail gene (14.6%), ystA gene (12.2%), and yadA gene (2.4%). A high resistance rate was estimated to amoxicillin-clavulanic acid (100%), followed by cefazolin (95%), ampicillin (65.9%), and doxycycline (51.2%), whilst a high sensitivity rate was observed to gentamicin and ciprofloxacin (97.6% each). Interestingly, the multidrug resistance was specified in the 70.7% of strains and showing 13 resistance patterns. Based on nucleotide sequence analysis of the 16s rRNA gene, the phylogenetic tree showed the genetic relatedness amongst Y. enterocolitica isolates. These findings highlighted the emergence of virulent and multidrug-resistant pathogenic Y. entrocolitica in retailed meat and meat products in Egypt.

Resumo A Yersinia enterocolitica patogênica (Y. enterocolitica) é um dos enteropatógenos de origem alimentar responsáveis pela yersiniose no ser humano. O objetivo desta pesquisa foi avaliar a prevalência, genes associados à virulência e resistência antimicrobiana de Y. enterocolitica isolada de amostras de carne e produtos à base de carne no Egito. Quarenta e um (5,9%) de 700 amostras de carne de frango, carne bovina, moída e linguiça foram Y. enterocolitica positivas, com alta prevalência em carne de frango (12%). Cinco genes de virulência (ail, inv, ystA, ystB e yadA) foram caracterizados entre 41 isolados de Y. enterocolitica com frequências variáveis. Entre as cepas testadas, o gene ystB foi detectado com uma alta porcentagem (78,1%), seguido pelo gene inv (70,7%), ail genes (14,6%), gene ystA (12,2%) e gene yadA (2,4%). Foi estimada uma alta taxa de resistência ao ácido amoxicilina-clavulânico (100%), seguida de cefazolina (95%), ampicilina (65,9%) e doxiciclina (51,2%), enquanto uma alta taxa de sensibilidade foi observada para gentamicina e ciprofloxacina (97,6% cada). Curiosamente, a resistência a múltiplas drogas foi especificada em 70,7% das cepas e mostrando 13 padrões de resistência. Com base na análise da sequência nucleotídica do gene rRNA 16s, a árvore filogenética mostrou a relação genética entre isolados de Y. enterocolitica. Esses achados destacaram o surgimento de Y. entrocolitica patogênica virulenta e multirresistente em carnes e produtos à base de carne no Egito.

Characterization of Enterococcus spp. isolated from a fish farming environment in southern Brazil

Abstract The aim of present study is to characterize the resistance and virulence profile of enterococci isolated from aquaculture excavated ponds and masonry tanks (6 samples) in southern Brazil. Samples were cultured in selective medium, 10 colonies were randomly selected from each sample, which were identified by MALDI-TOF and tested against 13 antimicrobials. The presence of resistance (tetL, tetM, tetS, ermB and msrC) and virulence (ace, esp, agg, cylA and gelE) genes were determined by PCR. A total of 79 enterococci were identified, and Entecococcus faecalis (44.3%) and E. casseliflavus (36.7%) were the most prevalent species isolated. Sixty-five strains (82.3%) were resistant to at least one of the antimicrobials tested, whereas 27 (34.2%) strains were multiresistant. The overall percentages of antimicrobial resistant isolates were: 58.2% to rifampicin, 40.5% to fluoroquinolones, 36.7% to erythromycin and 30.4% to tetracycline. The tetL and tetM genes were found in 57.7% of the tetracycline-resistant strains; and msrC in 31.01% of erythromycin-resistant strains. The most frequently detected virulence factors were ace and gelE genes. Although limited to a single farm, these data suggest that aquaculture may be a reservoir of resistant and virulent enterococci. This study is the first step towards enhancing our understandingof distribution, resistance and virulence profile in enterococci isolated from fish farming environments in the south Brazil.

Resumo O objetivo do estudo apresentado é caracterizar o perfil de resistência e virulência de enterococos isolados de viveiros escavados e tanques de alvenaria (6 amostras) de uma pisicultura no Sul do Brasil. As amostras foram cultivadas em meio seletivo, 10 colônias foram selecionadas aleatoriamente de cada amostra, que foram identificadas por MALDI-TOF e testadas contra 13 antimicrobianos. A presença de genes de resistência (tetL, tetM, tetS, ermB e msrC) e virulência (ace, esp, agg, cylA e gelE) foi determinada por PCR. Foram identificados 79 enterococos, sendo Entecococcus faecalis (44,3%) e E. casseliflavus (36,7%) as espécies mais frequentes isoladas. Sessenta e cinco cepas (82,3%) eram resistentes a pelo menos um dos antimicrobianos testados, enquanto 27 (34,2%) eram multirresistentes. As porcentagens gerais de isolados resistentes a antimicrobianos foram: 58,2% para rifampicina, 40,5% para fluoroquinolonas, 36,7% para eritromicina e 30,4% para tetraciclina. Os genes tetL e tetM foram encontrados em 57,7% das cepas resistentes à tetraciclina; e msrC em 31,01% das cepas resistentes à eritromicina. Os fatores de virulência mais comumente detectados foram ace e gelE. Embora limitados a uma única fazenda, esses dados indicam que a aquicultura pode ser uma fonte de enterococos resistentes e virulentos. Este estudo é o primeiro passo para melhorar nosso entendimento da distribuição, resistência e perfil de virulência em enterococos isolados de ambientes de piscicultura no sul do Brasil.

Characterization of Streptococcus suis through serotyping, SE-AFLP and virulence profile / Caracterização de Streptococcus suis por sorotipagem, SE-AFLP e perfil de virulência

Streptococcus suis is one of most important pathogens in the swine industry worldwide. Despite its importance, studies of S. suis characterization in South America are still rare. This study evaluates S. suis isolates from distinct Brazilian states, from 1999 to 2004, and its molecular and serological characterization. A total of 174 isolates were studied. S. suis identification was confirmed by PCR and isolates were further serotyped and genotyped by SE-AFLP and amplification of virulence markers. Serotype 1, 2, 3, 4, 7, 18, 22 and 32 were identified among the studied isolates, and only 4% were characterized as non-typeable. The mrp+/epf+/sly+ genotype was the most frequent. The SE-AFLP analysis resulted in 29 patterns distributed in three main clusters with over 65% of genetic similarity. Isolates presented a slight tendency to cluster according to serotype and origin; however, no further correlation with virulence genotypes was observed.(AU)

Streptococcus suis é um dos patógenos de maior importância para indústria suinícola mundial. Apesar de sua importância, a caracterização de isolados de S. suis na América do Sul ainda é pouco descrita. O presente estudo descreve a avaliação de isolados de S. suis provenientes de diferentes Estados brasileiros, e sua caracterização sorológica e molecular. Foram avaliados 174 isolados de S. suis e os mesmos foram submetidos a SE-AFLP e pesquisa de marcadores de virulência. Os sorotipos 1, 2, 3, 4, 7, 18, 22 e 32 foram identificados dentre os isolados estudados e apenas 4% foram caracterizados como não tipáveis. O perfil de virulência mrp+/epf+/sly+ foi o mais frequente. A análise do SE-AFLP resultou em 29 perfis distribuídos em três grupos principais com mais de 65% de similaridade genética. Os isolados apresentaram tendência de se agrupar segundo origem e sorotipo; no entanto, não foi observada correlação entre os grupamentos e os perfis de virulência.(AU)

Molecular screening of pathogenic Escherichia coli strains isolated from dairy neonatal calves in Cordoba province, Argentina / Detección molecular de cepas patógenas de Escherichia coli aisladas de terneros neonatos de tambo en la provincia de Córdoba, Argentina

The aim of this study was to perform a current molecular characterization of bovine pathogenic Escherichia coli strains isolated from random samplings in Argentinean dairy farms. Rectal swabs were obtained from 395 (63.7 %) healthy and 225 (36.3 %) diarrheic calves, belonging to 45 dairy farms in Cordoba Province, Argentina. E. coli isolates were examined for virulence genes (f5, f41, f17, sta, stb, lt, eae, vt) using PCR and the prevalence of E. coli virulence profiles was spatially described in terms of spatial distribution. A total of 30.1 % isolates were found to be positive for at least one of the virulence genes. Depending on the different gene combinations present, 11 virulence profiles were found. Most of the isolates analyzed had a single gene, and no combination of fimbrial and enterotoxin gene was predominant. There was no association between the frequency and distribution of E. coli virulence genes and calf health status. Most of the virulence profiles were compatible with ETEC strains and showed a homogeneous distribution over the sampled area. A clustering pattern for E. coli virulence profiles could not be recognized. This work provides updated information on the molecular characterization of pathogenic E. coli strains from dairy herds in Cordoba, Argentina. These findings would be important to formulate prevention programs and effective therapies for diarrhea in calves caused by E. coli.

El objetivo de este trabajo fue realizar una caracterización molecular actualizada de cepas patógenas bovinas de Escherichia coli aisladas de un muestreo aleatorio en tambos de una de las principales zonas lecheras de Argentina. Se obtuvieron hisopados rectales de 395 terneros neonatos sanos (63,7 %) y 225 diarreicos (36,3 %) pertenecientes a 45 tambos de la provincia de Córdoba, Argentina. Los genes de virulencia f5, f41, f17, sta, stb, lt, eae y vt se analizaron mediante PCR y se investigó la prevalencia de los perfiles de virulencia en función de la distribución geográfica. La prevalencia de aislamientos de E. coli patogénicos con al menos un gen de virulencia fue del 30,1 %. Once perfiles de virulencia fueron identificados, dependiendo de la combinación de genes presentes. La mayor parte de las muestras presentó un solo gen de virulencia, y no predominó ninguna combinación de genes de fimbrias y toxinas. No hubo asociación entre la frecuencia y la distribución de los genes de virulencia y el estado de salud de los terneros. La mayoría de los perfiles de virulencia fueron compatibles con cepas ECET y se distribuyeron cubriendo toda el área geográfica muestreada. No se reconoció ningún patrón de agrupamiento espacial para dichos perfiles. Este trabajo provee información actualizada sobre la caracterización molecular de E. coli patógena en rodeos lecheros de Córdoba, Argentina. Estos resultados serían importantes para formular programas preventivos y terapias eficaces contra la diarrea bovina causada por E. coli.