RESUMEN
<p><b>INTRODUCTION</b>Herpes simplex virus type 2 (HSV-2) is the most common cause of genital herpes. Glycoprotein G (gG) is a prototype antigen for type-specific serodiagnosis distinguishing between HSV type 1 (HSV-1) and HSV-2 infections. As immunological diagnosis kits for accurate differentiation between HSV-1 and HSV-2 antibodies can be expensive, there is a need to develop a convenient, sensitive, specific and cost-effective serodiagnostic kit.</p><p><b>METHODS</b>We successfully expressed a fragment of gG comprising residues 321-580 of HSV-2 with histidine tag (gG(321-580His)) in a Bac-to-Bac baculovirus expression system, which had an antigenicity similar to its native counterpart. An indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was developed using gG(321-580His) as the diagnostic antigen and evaluated by comparison with a commercial HerpeSelect 2 ELISA immunoglobulin G kit as reference.</p><p><b>RESULTS</b>In testing 318 field serum samples, the diagnostic relative sensitivity and specificity of the developed gG(321-580His)-ELISA test in qualitative comparison with the commercial kit were 93.81% and 96.74%, respectively, and the accuracy was 94.65%.</p><p><b>CONCLUSION</b>The study indicates that gG(321-580His) has a high diagnostic potential for HSV-2 virus serodiagnosis in humans.</p>
Asunto(s)
Adulto , Femenino , Humanos , Masculino , Anticuerpos Antivirales , Sangre , Ensayo de Inmunoadsorción Enzimática , Herpes Genital , Diagnóstico , Virología , Herpes Simple , Diagnóstico , Virología , Herpesvirus Humano 1 , Herpesvirus Humano 2 , Inmunoglobulina G , Química , Reacción en Cadena de la Polimerasa , Juego de Reactivos para Diagnóstico , Valores de Referencia , Reproducibilidad de los Resultados , Sensibilidad y Especificidad , Pruebas Serológicas , MétodosRESUMEN
En la Argentina, la rabia está circunscripta a algunas provincias del norte. La disponibilidad de nuevas vacunas que eliminen la manipulación del virus rábico y que permitan el control de la enfermedad es de importancia estratégica nacional y regional. Las vacunas basadas en poxvirus recombinantes se han utilizado con éxito como vacunas antirrábicas a nivel mundial. SI bien estos sistemas no están disponibles comercialmente, la plataforma de obtención de virus canarypox (CNPV) recombinantes ya ha sido implementada en nuestro laboratorio. El objetivo de este trabajo fue obtener y evaluar un candidato a vacuna antirrábica basado en CNPV recombinantes que expresan la glicoproteína G (RG) del virus rábico (RV). Se construyó un virus recombinante que expresa la secuencia codificante de RG (CNPV-RG). La inoculación de ratones con este virus indujo altos títulos de anticuerpos seroneutralizantes de RV (3,58 y 9,76 Ul/ml después de una o dos inmunizaciones, respectivamente) y protegió al 78 % de los animales desafiados intracerebralmente con RV. Además, se determinó que el CNPV-RG posee una potencia relativa de 3,5 Ul/ml. Los resultados obtenidos constituyen la primera etapa en la evaluación del CNPV-RG como candidato a vacuna antirrábica. Se requerirán nuevos ensayos para confirmar su utilidad en especies de interés veterinario.
In Argentina, rabies is limited to some northern provinces. Availability of new vaccines abolishing the handling of the rabies virus and allowing disease control has regional and national strategic importance. Vaccines based on recombinant poxviruses have been successfully used as antirabic vaccines worldwide. Although these systems are not commercially available, the platform to obtain recombinant canarypox viruses (CNPV) has been previously set up in our laboratory. The aim of this work was the development and evaluation of an antirabic vaccine candidate based on recombinant CNPV expressing the rabies virus (RV) glycoprotein G (RG). A recombinant virus (CNPV-RG) expressing the RG coding sequence was designed. Inoculation of mice with this virus induced high RV seroneutralizing antibodies (3.58 and 9.76 lU/ml after 1 or 2 immunizations, respectively) and protected 78% of intracerebrally RV-challenged animals. In addition, it was determined that CNPV-RG has a relative potency of 3.5 lU/ml. The obtained results constituted the first stage of CNPV-RG evaluation as antirabic vaccine candidate. Further assays will be necessary to confirm its utility in species of veterinary Interest.
Asunto(s)
Animales , Embrión de Pollo , Cricetinae , Ratones , Antígenos Virales/inmunología , Virus de la Viruela de los Canarios/inmunología , Glicoproteínas/inmunología , Vacunas Antirrábicas , Proteínas del Envoltorio Viral/inmunología , Anticuerpos Antivirales/biosíntesis , Anticuerpos Antivirales/inmunología , Antígenos Virales/genética , Chlorocebus aethiops , Virus de la Viruela de los Canarios/genética , Virus de la Viruela de los Canarios/crecimiento & desarrollo , Virus de la Viruela de los Canarios/aislamiento & purificación , Línea Celular/virología , Fibroblastos/virología , Glicoproteínas/genética , Riñón , Mesocricetus , Fragmentos de Péptidos/genética , Fragmentos de Péptidos/inmunología , Vacunas Antirrábicas/inmunología , Rabia/prevención & control , Organismos Libres de Patógenos Específicos , Cultivo de Virus , Vacunas Sintéticas/inmunología , Células Vero/virología , Proteínas del Envoltorio Viral/genéticaRESUMEN
El presente estudio calculó diferentes MI (Multiplicidad de Infección) para la producción de cultivos industriales de virus de Estomatitis Vesicular (EV) y evaluó el efecto de la cantidad de glicoproteína G en la inducción de respuesta de anticuerpos neutralizantes contra el virus de EV en cobayos inmunizados con una vacuna oleosa bivalente (Indiana (I) y New Jersey (NJ)). Al establecer el MI más eficiente se logró mejorar la cinética de infección de los cultivos industriales disminuyendo los tiempos de cultivo y mejorando los títulos infectantes. Adicionalmente se encontró que títulos de anticuerpos neutralizantes de cobayos inmunizados con vacuna de EV conteniendo aproximadamente 5 microgramos de glicoproteína G de cada serotipo fueron de 3.66 log10 para I y 4.06 log10 para NJ, los cuales se correlacionan con títulos de protección en bovinos. De este estudio se puede concluir que al seleccionar un mejor MI se puede hacer más eficiente el proceso de producción de cultivos virales industriales de EV y que la formulación de una vacuna contra estomatitis vesicular a partir de la cuantificación de la glicoproteína G puede ser una metodología de gran utilidad en la producción industrial de vacunas de buena calidad.
This experiment assess different MI for Vesicular Stomatitis VS virus industrial culture production and evaluated the effect of glycoprotein G concentration in relation to antibodies induction against VS on guinea pigs vaccinated with oil bivalent vaccine (Indiana I and New Jersey NJ). With efficient MI it was possible to get better kinetic of infection at industrial cultures, reducing time of culture and improving viral titers. In addition, it was found that neutralizing titers of guinea pigs immunized with an EV vaccine containing 5 micrograms of glycoprotein G, were 3.66 log10 for I and 4.06 log10 for NJ, which are correlated to protection titers in cattle. About this study can be concluded that selecting a superior MI, efficiency of industrial VE virus production can be improved; on the other hand, glycoprotein G quantification methodology can be useful for a good quality VS Vaccine industrial manufacture.
RESUMEN
A fragment containing amino acid residues 561～578 of HSV-2 glycoprotein G(gG2) was obtained by PCR assembling technique,and doubly cloned into vector pET-KDO.The recombinant plasmid was transformed to BL21(DE3)plysS.Fusion protein,of molecular weight about 39kDa was highly expressed by induction of IPTG.Western blot result showed the fusion protein had good antigenicity.After putification and digestion,the purity reached 95%.The digested purified protein was analysed by ELISA and showed good sensitivity and specificity.The recombinant protein should be useful for type-specific serodiagnosis of HSV-2.