Identificación directa de microorganismos a partir de hemocultivos positivos utilizando espectrometría de masas (MALDI-TOF MS) / Direct identification of microorganisms in positive blood culture bottles by mass spectrometry (MALDI-TOF MS)

Resumen La espectrometría de masas (MALDI-TOF MS) permite la identificación de microorganismos directamente de las colonias en pocos minutos. En este estudio se ha desarrollado y evaluado un protocolo reducido para identificar microorganismos directamente de las botellas de hemocultivos positivos en 30 minutos con una alta sensibilidad y especificidad, utilizando MALDITOF. Un total de 2535 hemocultivos positivos fueron estudiados por el método directo de MALDI-TOF MS, a partir de una alícuota de sangre de las botellas y el método de colonia, utilizando los cultivos desarrollados en medios sólidos. Del total de hemocultivos positivos incluidos en este estudio, 2381 (93,9%) fueron monomicrobianos y 146 (5,8%) polimicrobianos. Mil trescientos treinta (55,9%) de los aislamientos correspondieron a cocos gram positivos, 922 (38,7%) a bacilos gram negativos, 60 (2,5%) a anaerobios, 36 (1,5%) a bacilos gram positivos y 13 a levaduras. La concordancia global entre ambos métodos fue del 81,7% a nivel de especie (90,0% para bacilos gram negativos, 76,7% para cocos gram positivos y 33,3% para bacilos gram positivos). Se identificó al menos un germen en el 88% de las botellas positivas con desarrollo polimicrobiano. Los resultados del presente estudio demostraron que el protocolo basado en MALDI-TOF MS permite la identificación microbiana directamente de hemocultivos positivos en un tiempo corto, con una alta precisión, con excepción de los bacilos gram positivos.

Abstract Matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) enables the identification of microorganisms directly from colonies within minutes. In this study this technology was adapted and tested for use with blood culture bottles, thus allowing identification in 30 minutes once the blood culture is detected as positive by the automate. A total of 2535 blood culture bottles reported as positive were tested by MALDI-TOF MS directly from positive blood culture bottles and colonies. A total of 2381 (93.9%) and 146 (5.8%) of the positive blood cultures were monomicrobial and polymicrobial, respectively. And 1330 (55.9%), 922 (38.7%), 60 (2.5%), 36 (1.5%) and 13 of the isolates were gram-positive cocci (GPC), gram-negative bacilli (GNB), anaerobic bacteria, gram-positive bacilli (GPB) and yeast respectively. Concordance between both methods was 81.7% (76.7% of GPC, 90% of GNB, 74.2% of anaerobic bacteria and 33.3% of GPB) in monomicrobial cultures. Eighty eight per cent of the polymicrobial cultures were identified correctly in at least one of the two bacteria. The results of the present study show that this fast, MALDI-TOF MS based method allows microbial identification directly from positive blood culture in a short time, with a high accuracy, with the exception of gram-positive bacilli.

Resumo A espectrometria de massa (MALDI-TOF MS) permite a identificação de microorganismos diretamente das colônias em minutos. Nesse estudo, foi desenvolvido um protocolo reduzido para identificar microrganismos diretamente das garrafas de hemoculturas positivas em 30 minutos com alta sensibilidade e especificidade, utilizando MALDI-TOF. Um total de 2535 hemoculturas positivas foram relatadas -o método direto de MALDI-TOF MS, a partir de uma alíquota de sangue dos vidros e o método de colônia, a partir das culturas desenvolvidas em meios sólidos. Do total de hemoculturas positivas incluídas neste estudo, 2.381 (93,9%) eram monomicrobianas e 146 (5,8%) eram polimicrobianas. Mil trezentos e trinta (55,9%) dos isolados corresponderam a cocos gram-positivos, 922 (38,7%) bacilos gram-negativos, 60 (2,5%) anaeróbios, 36 (1,5%) bacilos gram-positivos e 13 leveduras. A concordância geral entre os dois métodos foi de 81,7% em nivel de especie (90,0% para bacilos gram-negativos, 76,7% para cocos gram-positivos e 33,3% para bacilos gram-positivos). Pelo menos um germe foi identificado em 88% dos vidros positivos com desenvolvimento polimicrobiano. Os resultados do presente estudo demonstraram que o protocolo baseado em MALDI-TOF MS permite a identificação microbiana diretamente de hemoculturas positivas em um curto espaço de tempo, com alta precisão, com exceção de bacilos gram-positivos.

Frequência de cepas produtoras de enzima beta lactamase de espectro expandido (ESBL) e perfil de susceptibilidade de Klebsiella pneumoniae em hemoculturas no berçário de um hospital de Fortaleza / Producing frequency strain of extended spectrum beta lactamase enzyme (ESBL) and profile of susceptibility of Klebsiella pneumoniae in bloods cultures in the nursery of a hospital of Fortaleza

As infecções no período neonatal são mais freqüentes e habitualmente mais severas do que em qualquer outra época da vida. Ainda hoje, os processos infecciosos são os principais responsáveis pela elevada morbidade e mortalidade nesse período. O objetivodeste estudo foi verificar a freqüência e o perfil de susceptibilidade aos antimicrobianos nas hemoculturas positivas para Klebsiella pneumoniae isoladas de recém nascidos do berçário do Hospital Geral de Fortaleza nos meses de julho a dezembro de 2003.Foi realizado um trabalho retrospectivo neste período, as hemoculturas foram realizadas no aparelho de automação Bactec, as hemoculturas positivas foram semeadas em ágar sangue e ágar MacConkey, as amostras positivas foram identificadas também no aparelhode automação Microscan Walkway. Neste período 7,11% das hemoculturas realizadas foram positivas para Klebsiella pneumoniae e destas 81,25% foram ESBL (Beta Lactamase de Amplo Espectro) positivos. As cepas produtoras destas betalactamases são responsáveispor infecções hospitalares e são, também, uma importante fonte de transferência de resistência aos antibióticos para outros microrganismos.Em relação ao perfil de susceptibilidade aos antimicrobianos pode-se observar que os mais susceptíveis foram cefoxitina, imipenem e ofloxacina e os mais resistentes foram a cefazolina, ceftriaxona, cefalotina, ampicilina, aztreonam, piperacilina e a tobramicina.Vários estudos mostraram que a implementação de uma restrição rigorosa ao uso de cefalosporinas de amplo espectro de ação, junto com as medidas gerais de controle das infecções hospitalares, podem diminuir a prevalência destas cepas.

The infections in the neonatal period they are more frequent and habitually more severe of the one than in any another time of the life. Still today, the infectious processes are main responsible for the raised morbidad and mortality in this period. The objectiveof this study was to verify the frequency and the profile of susceptibility to antimicrobials in the positive bloods cultures it stops Klebsiella pneumoniae isolated of just been born of the nursery of the General Hospital of Fortaleza in the months of July the December of 2003. A retrospective work in this period was carried through, the bloods cultures had been carried through in the device of Bactec automation, positive bloods cultures had been sown in agar blood and MacConkey agar, positive samples had been identified alsoin the automation device Microscan Walkway. In this period 7.11% of the carried through bloods cultures they had been positive stop Klebsiella pneumoniae e of these 81.25% had been ESBL (Extended Spectrum Beta Lactamase) positive. Strain producing of these ESBL is responsible for hospital infections and is, also, one important source of transference of resistance to antibiotics for others microorganisms.In relation to the profile of susceptibility to antimicrobials it can to observe that susceptive they had been cefoxitin, they imipenem and ofloxacin and more resistant they had been the cefazolin, ceftriaxone, cefalotin, ampicillin, aztreonam, piperacillin and the tobramycin. Some studies had shown that implementation of a rigorous restriction to the use of cefalosporin of ample specter of action, together with the general measures of control of the infections hospital, they can diminish the prevalence of these strain.

Importância da presença de granulações tóxicas para o diagnóstico hematológico de septicemia / The investigation of the presence of toxic granulation for septicemia hematologic diagnostic

Este trabalho visou investigar a associação da coexistência da presença de granulações tóxicas com resultados de hemocultura positivas, idade dos pacientes, condições de internamento e tipos de agentes bacterianos. Foi realizada análise retrospectiva e prospectiva, cega, para a presença de granulações tóxicas em amostras sangüíneas de trezentos pacientes, de ambos os sexos, internados em hospitais da Cidade de Belém - Pará, com solicitação de hemocultura, num período de dois anos. Com os hemogramas e as hemoculturas realizadas por métodos de automação, e todos os dados submetidos à metodologia de comparação estatística pelo Qui-quadrado (método de clump). Nossos resultados mostraram a existência de associação estatística entre: (1) a presença de granulações tóxicas e os resultados de hemoculturas positivas; (2) a menor idade dos pacientes (neonatos) associadas a hemocultura positiva; (3) a condição de internamento em UTI com hemocultura positiva; e (4) a presença de granulações tóxicas e a observação de leucocitose e desvio à esquerda, em pacientes internados em UTI, com hemoculturas positivas. E que os cinco principais agentes bacterianos identificados nas hemoculturas deste estudo foram Klebsiella oxytoca (22 por cento), Acinetobacter calcoaceticus (20 por cento), Escherichia coli (18 por cento), Enterobacter cloacae (14 por cento), e Pseudomonas aeruginosa (8 por cento).

This work aims at investigating the association of the presence of toxic granulation with positive blood cultures, age of patients, conditions of hospitalization and types of bacterial agents. Blind prospective and retrospective, analyses were carried out for the presence of toxic granulations-in blood samples of 300 patients of the both genders hospitalized in the City of Belém, Pará, Brazil. Request blood tests over a two year period were evaluated. The blood tests and cultures were performes using automated methods. All the data were statistically compared using the Qui-square test (clump method). The results show statistical associations between: (1) the presence of toxic granulations and positive blood cultures; (2) lower ages of patients (the newborn) and positive blood cultures; (3) hospitalization in the ICU and positive blood cultures and (4) toxic granulations-and the observation of leucocytosis and right-left shunts in patients hospitalized in the ICU with positive blood cultures. The commonest bacterial agents identified were klebsiella oxytoca (22 percent), Acinetobacter calcoaceticus (20 percent), Escherichia coli (18 percent), Enterobacter cloacae (14 percent), and Pseudomonas aeruginosa (8 percent).

Epidemiologia das infecções bacterianas e fúngicas diagnosticada através de hemocultivos, no Hospital Universitário de Santa Maria - HUSM, RS / Bacterial and fungi infections epidemiology diagnosed by blood culture in Hospital Universitário de Santa Maria - HUSM, RS, Brazil

O presente estudo descreve a etiologia dos episódios infecciosos da corrente sanguínea, diagnosticados através de hemoculturas, observados no âmbito do Hospital Universitário de Santa Maria entre 1999 e 2001. Dos 2027 hemocultivos positivos, 53,9% foram devidos a cocos gram positivos; 17% devido a bacilos gram negativos não fermentadores; 16,64% devido a bacilos gram negativos fermaentadores e 4,88% por leveduras do gênero candida. O estudo da suscetibilidade dos isolados detectou que 37,1% de Staphylococcus aureus eram oxacilina resistentes e, entre Staphylococcus epidermidis, esta resistência atingiu 65% dos isolados. Os autores comparam seus resultados com estudos semelhantes desenvolvidos em outros centros brasileiros e no exterior.