Endophytic bacteria promote growth and increase the aloin content of Aloe vera / Las bacterias endofíticas promueven el crecimiento y aumentan el contenido de aloína del Aloe vera

Aloe vera is among the world's economically most important medicinal plants, but as the growth of this plant and, consequently, the accumulation of metabolites is slow, we tested the hypothesis that root endophytic bacteria isolated from A. vera plants can promote growth and increase the accumulation of aloin in the gel and latex. For this, we inoculate seedlings with four endophytic bacteria and a combination of them. We confirmed the hypothesis and identified two strains with potential for the formulation of inoculants to improve the cultivation of A. vera. The bacterium 149H Paraburkholderiasp. increases the number of leaves and the accumulation of biomass, but on the other hand, 35V Enterobacter ludwigii inoculation increased the content of aloin in the gel and in the latex. Further research should focus on the association of these two strains in a single inoculant, to both promote growth and increase the synthesis of metabolites.

Aloe vera se encuentra entre las plantas medicinales económicamente más importantes del mundo, pero como el crecimiento de esta planta y, en consecuencia, la acumulación de metabolitos es lento, probamos la hipótesis de que las bacterias endofíticas de raíces aisladas de las plantas de A. vera pueden promover el crecimiento y aumentar la acumulación de aloína en el gel y látex. Para ello, inoculamos plántulas con cuatro bacterias endofíticas y una combinación de ellas. Confirmamos la hipótesis e identificamos dos cepas con potencial para la formulación de inoculantes para mejorar el cultivo de A. vera. La bacteria 149H Paraburkholderia sp. aumenta el número de hojas y la acumulación de biomasa, pero, por otro lado, la inoculación con Enterobacter ludwigii 35V aumentó el contenido de aloína en el gel y en el látex. La investigación adicional debe centrarse en la asociación de estas dos cepas en un solo inoculante, tanto para promover el crecimiento como para aumentar la síntesis de metabolitos

Performance of lactating cows fed sugarcane silage treated with microbial additives

Background: No studies have been conducted evaluating sugarcane silage associated with both Lactobacillus plantarum and Pediococcus pentosaceus for lactating dairy cows. Objective: To evaluate diets containing different roughages with and without microbial inoculants on intake, digestibility and milk yield of medium-producing cows. Methods: A total of 15 Holstein cows distributed into a randomized block design were used. Dietary treatments were: 1) a corn silage-based diet (CS), 2) a fresh sugarcane-based diet (SC), 3) a sugarcane silage ensiled without inoculant (SS), 4) sugarcane silage ensiled with Lactobacillus buchneri (SSLB), and 5) sugarcane silage ensiled with Lactobacillus plantarum and Pediococcus pentosaceus (SSLP). Results: Digestible organic matter intake (DOMI) was lower (p<0.05) in cows fed SSLB (9.77 kg day-1) when compared with cows fed CS (13.29 kg day-1) and SSLP (12.42 kg day-1). Ensiling of sugarcane increased intake of neutral detergent fiber (NDF) compared to SC (mean of 6.00 kg day-1 versus 4.97 kg day-1; p<0.05). Dry matter digestibility was greater (p<0.05) in CS (77.80%) compared with diets based on sugarcane silage, whereas NDF digestibility was lower for treatments with sugarcane (p<0.05). Milk yield was similar among CS (27.99 kg), SC (25.59 kg), and silages with additives (25.47 and 27.07 for SSLB and SSLP, respectively). Cows fed CS produced more fat-corrected milk (25.89 kg) than those fed sugarcane-based diets (p<0.05). Conclusions: Fresh sugarcane or sugarcane silage with additives can be used as a roughage source for dairy cows producing up to 23.43 kg d-1 fat-corrected milk, considering the total diet is properly balanced.

Antecedentes: No existen estudios que evalúen la adición de Lactobacillus plantarum y Pediococcus pentosaceus en el ensilaje de caña de azúcar para vacas lactantes. Objetivo: Evaluar dietas con diferentes forrajes y ensilajes con y sin inoculantes microbianos sobre el consumo, digestibilidad y producción lactea de vacas de mediana producción. Metodología: Quince vacas Holstein se distribuyeron en un diseño de bloques al azar. Los tratamientos fueron: 1) dieta con ensilaje de maíz (CS), 2) dieta con caña de azúcar fresca (SC), 3) dieta con ensilaje de caña sin inoculantes (SS), 4) dieta con ensilaje de caña de azúcar ensilada con Lactobacillus buchneri (SSLB), y 5) dieta con ensilaje de caña de azúcar ensilada con Lactobacillus plantarum y Pediococcus pentosaceus (SSLP). Resultados: El consumo de materia orgánica digestible fue menor (p<0,05) en la dieta SSLB (9,77 kg day-1) en comparación con CS (13,29 kg dia-1) y SSLP (12,42 kg dia-1). El ensilaje de caña de azúcar promovió un mayor consumo de fibra detergente neutra (NDF) en comparación con SC (promedio de 6,00 kg dia-1 versus 4,97 kg dia-1; p<0,05). La digestibilidad de la materia seca fue mayor (p<0,05) para la dieta CS (77,80%) en comparación con las dietas con ensilaje de caña de azúcar, mientras que la digestibilidad de la NDF fue menor para las dietas a base de caña de azúcar (p<0,05). La producción de leche fue similar entre CS (27,99 kg), SC (25,59 kg) y ensilajes con aditivos (25,47 y 27,07 para SSLB y SSLP, respectivamente). Las vacas alimentadas con ensilaje de maíz produjeron más leche corregida por grasa (25,89 kg) que las alimentadas con dietas a base de caña de azúcar (p<0,05). Conclusión: La caña de azúcar fresca o ensilada con aditivos se puede utilizar como fuente de forraje para vacas que producen hasta 23,43 kg d-1 leche corregida por grasa, siempre que la dieta total esté equilibrada adecuadamente.

Antecedentes: Há carência de estudos avaliando a adição de Lactobacillus plantarum e Pediococcus pentosaceus na silagem de cana-de-açúcar para vacas em lactação. Objetivo: Avaliar dietas contendo diferentes forragens e silagens com e sem inoculantes microbianos sobre o consumo, digestibilidade e produção de leite de vacas de média produção de leite. Métodos: Quinze vacas Holandesas foram distribuídas em um delineamento em blocos casualizados. Os tratamentos foram: 1) dieta com silagem de milho (CS), 2) dieta com cana-de-açúcar fresca (SC), 3) dieta com silagem de cana ensilada sem inoculantes (SS), 4) dieta com silagem de cana-de-açúcar ensilada com Lactobacillus buchneri (SSLB), ou 5) dieta com silagem de cana- de-açúcar ensilada com Lactobacillus plantarum, and Pediococcus pentosaceus (SSLP). Resultados: O consumo de matéria orgânica digestível foi menor (p<0,05) na dieta SSLB (9,77 kg day-1) comparada com CS (13,29 kg dia-1) e SSLP (12,42 kg dia-1). A ensilagem da cana-de-açúcar promoveu maior consumo de fibra em detergente neutro (FDN) em comparação com SC (média de 6,00 kg dia-1 versus 4.97 kg dia-1; p<0.05). A digestibilidade da matéria seca foi maior (p<0,05) para a dieta CS (77,80%) comparada com as dietas com silagem de cana-de-açúcar, enquanto que a digestibilidade da FDN foi menor para as dietas baseadas em cana-de-açúcar (p<0,05). A produção de leite foi similar entre CS (27,99 kg), SC (25,59 kg) e silagens com aditivos (25,47 e 27,07 para SSLB e SSLP, respectivamente). Vacas alimentadas com silagem de milho produziram mais leite corrigido para gordura (25,89 kg) que aquelas alimentadas com dietas baseadas em cana-de-açúcar (p<0,05). Conclusão: A cana-de-açúcar fresca ou ensilada com aditivos pode ser utilizada como fonte volumosa para vacas produzindo até 23,43 kg d-1 leite corrigido para gordura, desde que a dieta total esteja apropriadamente balanceada.

Contributions and difficulties of soil metagenomics and its impact on agricultura / Aportes y dificultades de la metagenómica de suelos y su impacto en la agricultura

RESUMEN Los microorganismos son de gran interés porque colonizan todo tipo de ambiente, sin embargo, uno de los problemas al que nos enfrentamos para conocer su diversidad biológica es que no todos los microorganismos son cultivables. El desarrollo de nuevas tecnologías como la generación de vectores de clonación aunado al desarrollo de técnicas de secuenciación de alto rendimiento ha favorecido el surgimiento de una nueva herramienta llamada metagenómica, la cual nos permite estudiar genomas de comunidades enteras de microorganismos. Debido a que ningún ambiente es idéntico a otro, es importante mencionar que dependiendo del tipo de muestra a analizar será el tipo de reto al cual nos enfrentaremos al trabajar con metagenómica, en el caso específico del suelo existen diversas variantes como la contaminación del suelo con metales pesados o diversos compuestos químicos que podrían limitar los estudios. Sin embargo, pese a las limitaciones que el mismo ambiente presenta, la metagenómica ha permitido tanto el descubrimiento de nuevos genes como la caracterización de las comunidades microbianas que influyen positivamente en el desarrollo de plantas, lo cual en un futuro podría generar un gran impacto en la agricultura. En este artículo se realizó una revisión de diversas investigaciones que han empleado metagenómica, reportadas en las bases de datos de PudMed y Google Schoolar, con el objetivo de examinar los beneficios y limitaciones de las diversas metodologías empleadas en el tratamiento del ADN metagenómico de suelo y el impacto de la metagenómica en la agricultura.

ABSTRACT Microorganisms are of great interest because they colonize all types of environment, however, one of the problems we face in knowing biological diversity is that not all microorganisms are cultivable. The development of new technologies such as the generation of cloning vectors coupled with the development of high performance sequencing techniques, have favored the emergence of a new tool in science called metagenomics, which allows us to study genomes of entire communities. Since all environments are different, the type of challenge that we will face when working with metagenomics is going to change depending of the type of sample, in the specific case of soils, there are several variables, such as soil contamination with heavy metals or chemical compounds that could limit metagenomic studies. However, despite the limitations that the environment presents, with the help of metagenomics, both gene discovery and the characterization of microbial communities that positively influence plant development have been achieved, which could generate a greater impact on agriculture in the future. In this article a review of several investigations that have used metagenomics, reported in the PudMed and Google Schoolar databases was carried out, with the aim of examining the benefits and limitations of the various methodologies used in the treatment of metagenomic DNA from soil and the impact of metagenomics in agriculture.

Desarrollo de marcadores moleculares del tipo SCAR para la identificación de Azospirillum brasilense Az39 / Development of sequence characterized amplified región markers for identification of Azospirillum brasilense Az39

Resumen Azospirillum brasilense Az39 es utilizada por empresas productoras de inoculantespara la formulación de bioinsumos en América del Sur desde hace más de 30 a˜nos. Esta cepapuede promover el crecimiento, desarrollo, así como la capacidad de tolerar diferentes tiposde estrés en las plantas inoculadas, lo que determina un aumento de la productividad de culti-vos de interés agronómico. En la actualidad, no existen protocolos en Argentina que permitanconfirmar la identidad de Az39 en productos comerciales a nivel de laboratorios de control decalidad de inoculantes. Por ello, el objetivo de este trabajo fue desarrollar una metodología enbase molecular que permita la identificación certera de A. brasilense Az39. Con la secuenciacompleta del genoma y mediante herramientas bioinformáticas, se pudieron reconocer frag-mentos de ADN presentes únicamente en el genoma de Az39. Se dise˜naron cebadores dirigidosa amplificar por PCR dichas secuencias. Como resultado se observaron los productos específicosúnicamente en la presencia de la cepa de interés. La reacción pudo detectar un título mínimode 105UFC/ml (4,5 ng/l ADN) o de 102UFC/ml (0,88 ng/l ADN) o una concentración mínimade 0,098 ng/l ADN, dependiendo del método de extracción utilizado. Los cebadores fueronevaluados en el análisis de productos comerciales obtenidos del mercado nacional, arrojandoresultados positivos, tanto en muestras directas como así también en pruebas confirmatoriasa partir de colonias aisladas de tales productos. La metodología desarrollada en este trabajo,permite la detección certera de A. brasilense Az39 en cultivos puros o mezclas complejas demicroorganismos.

Abstract Azospirillum brasilense Az39 has been used since more than 30 years by several companies in South America for biofertilizers production. This strain may promote plants growth and development, as well as the ability of inoculated plants to tolerate environmental stresses, which determines an increase in the productivity under field conditions. At present, there are no protocols in Argentina to confirm the identity of Az39 in commercial products; however, such biofertilizers are formulated almost exclusively with this strain. Therefore, the objective of this paper was to develop a molecular methodology that allows the accurate identification of A. brasilense Az39. Using the complete genome sequence and several bioinformatics tools, fragments of DNA present only in the Az39 genome were recognized. A set of PCR primers to amplify these sequences were designed, and the specific products were observed only in the strain of our interest. The sensitivity of the methodology was evaluated, where the strain could be detected up to a titer of 105 CFU/ml (4.5 ng/pl ADN) or 102 CFU/ml (0.88 ng/pl DNA) or in a minimal concentration of 0.098 ng/pl DNA, depending on the DNA extraction methodology used. Primers were tested against direct samples of commercial inoculants and cultures, in both cases there were specifics products, both in direct samples and in confirmatory tests from isolated colonies from those products. The procedure presented in this paper allows the accurate identification of A. brasilense Az39 in pure cultures, mixtures of microorganisms, and commercial biofertilizers.

Aislados de Bacillus provenientes de la rizósfera de cactus incrementan la germinación y la floración en Mammillaria spp. (Cactaceae) / Bacillus isolates from rhizosphere of cacti improve germination and bloom in Mammillaria spp. (Cactaceae)

Las cactáceas son la vegetación característica de las zonas áridas en México, donde las lluvias son escasas, la evapotranspiración es elevada y la fertilidad de los suelos es baja. Las plantas han desarrollado estrategias fisiológicas como la asociación con microorganismos en la zona de la rizósfera para incrementar la captación de nutrientes. En el presente trabajo se obtuvieron 4 aislados bacterianos de la rizósfera de Mammillaria magnimamma y Coryphantha radians, los que fueron nombrados como QAP3, QAP19, QAP22 y QAP24 e identificados genéticamente como pertenecientes al género Bacillus. Estos aislados exhibieron in vitro propiedades bioquímicas como solubilización de fosfatos, producción de ácido indolacético y actividad ACC deaminasa, que se relacionan con la promoción del crecimiento de las plantas. Dicha promoción fue ensayada inoculando semillas de M. magnimamma y evaluando luego algunos parámetros. Se encontró que todos los aislados incrementaron la germinación desde un 17% hasta un 34,3% (con respecto a las semillas testigo sin inocular); el aislado QAP24 fue el que presentó el mayor efecto en este sentido y permitió la germinación de todas las semillas viables (84,7%) 3 días antes que en el testigo. La inoculación de este aislado en plantas de Mammillaria zeilmanniana mostró un efecto positivo sobre la floración: en 2 meses dentro del período de un año se detectó un incremento en el número de plantas en floración con respecto a las plantas testigo, de hasta el 31,0% en uno de ellos. Se concluye que los aislados de Bacillus spp. caracterizados poseen potencial para ser empleados en programas de conservación de especies vegetales de zonas áridas.

Cacti are the most representative vegetation of arid zones in Mexico where rainfall is scarce, evapotranspiration is high and soil fertility is low. Plants have developed physiological strategies such as the association with microorganisms in the rhizosphere zone to increase nutrient uptake. In the present work, four bacterial isolates from the rhizosphere of Mammillaria magnimamma and Coryphantha radians were obtained and named as QAP3, QAP19, QAP22 and QAP24, and were genetically identified as belonging to the genus Bacillus, exhibiting in vitro biochemical properties such as phosphate solubilization, indoleacetic acid production and ACC deaminase activity related to plant growth promotion, which was tested by inoculating M. magnimamma seeds. It was found that all isolates increased germination from 17 to 34.3% with respect to the uninoculated control seeds, being QAP24 the one having the greatest effect, accomplishing the germination of viable seeds (84.7%) three days before the control seeds. Subsequently, the inoculation of Mammillari zeilmanniana plants with this isolate showed a positive effect on bloom, registering during two months from a one year period, an increase of up to 31.0% in the number of flowering plants compared to control plants. The characterized Bacillus spp. isolates have potential to be used in conservation programs of plant species from arid zones.

Scientometric analysis of Colombian research on bio-inoculants for agricultural production / Análisis cienciométrico de investigación colombiana en bio-inoculantes para producción agrícola / Análise cientométrica das pesquisas colombianas em bioinoculantes para a produção agrícola

The excessive use of synthetic chemical inputs in agricultural production has led to the disruption of biogeochemical cycles. One of the alternatives that arose within the systems of sustainable agriculture was the partial or total replacement of chemicals by biological substances. The analysis of relevant scientific literature has become a tool for assessing the quality of knowledge generation and its impact on the environment. A scientometric analysis was conducted of Colombian research on bio-inoculants from 2009 through 2014 in journals added to the Web of SciencesTM in order to identify the characteristics of the main target crops, the microorganisms used, and the beneficial effects on agriculture. In this work, 34 articles were identified: 24 (71 %) were research on bio-fertilizer development and 10 (29 %) on bio-pesticides. Articles mainly focused on the study of Gram-negative bacilli affecting the area (77 %), while others focused on issues and topics surrounding vegetables (30 %).The analysis of co-occurrence of keywords identified: i. several genera of microorganisms (e.g. A%otobacter sp., Bradyrhi%obium sp.) and sustainable agriculture as issues that have a leading role in this scientific field, ii. plant growth promoting rhizobacteria (PGPR) as an emerging issue, iii. biological nitrogen fixation (BNF) as a subject which has risen in a complementary manner and iv. endophytic bacteria and biodiversity as issues in growth. This study showed that research in Colombia could be targeted on issues such as endophytic bacteria, diversity and productivity.

El uso excesivo de insumos sintéticos en la producción agrícola ha llevado a la disrupción de los ciclos biogeoquímicos. Como alternativa a este problema, los sistemas de agricultura sostenible han reemplazado parcial o totalmente los químicos por sustancias biológicas. El análisis de literatura científica relevante se ha convertido en una herramienta para determinar la calidad de la generación de conocimiento en este campo y su impacto en el ambiente.Se llevó a cabo un análisis cienciométrico de la investigación en Colombia sobre bioinoculantes entre 2009 y 2014. Se tuvieron en cuenta revistas indizadas en la Red de Ciencias®. Se buscó identificar las características de los principales cultivos, los microorganismos utilizados y sus efectos benéficos en la agricultura. Se seleccionaron 34 artículos: 24 (71%) sobre desarrollo de biofertilizantes y 10 (29%) sobre biopesticidas. Los artículos se enfocaron principalmente en el estudio de bacilos Gram-negativos (77%), mientras que otros se enfocaron en los temas relativos a hortalizas (30%). El análisis de co-ocurrencia de palabras claves identificó: i. Algunos géneros de microorganismos (Azptobacter sp., Bradyrhizobium sp.) y la agricultura sostenible como temas relevantes en este campo, ii. Rizobacterias promotoras del crecimiento en plantas (PGPR) como un tópico emergente, iii. Fijación biológica de nitrógeno (FBN) como un tema emergente y complementario y iv. Bacterias endofíticas y biodiversidad como tópicos en crecimiento. Este estudio mostró también que la investigación en Colombia podría enfocarse en temas como bacterias endofíticas, diversidad y productividad.

O uso excessivo de produtos químicos sintéticos na produção agrícola levou a uma perturbação dos ciclos biogeoquímicos. Uma das alternativas que surgiram dentro dos sistemas de agricultura sustentável foi a substituição total ou parcial de compostos químicos por substancias biológicas. O estudo de literatura científica relevante se tornou uma ferramenta para avaliar a qualidade da geração de conhecimento e seu impacto no meio ambiente. A análise cientométrica foi realizada em investigacoes colombianas sobre bioinoculantes de 2009 a 2014, em revistas disponíveis em Web of ScienceTM, com o intuito de identificar as características das principais culturas alvos, os microorganismos utilizados, e o efeito benéfico na agricultura. Neste trabalho, 34 artigos foram identificados: 24 (71 %) eram pesquisas sobre o desenvolvimiento de biofertilizantes e 10 (29 %) sobre biopesticidas. Os artigos eram focados principalmente no estudo de bacilos Gram-negativos afetando a área (77 %), enquanto que outros eram voltados a questoes e temas de vegetais (30 %). A análise de coocorréncia de palavras-chave identificou: i. diversos géneros de microorganismos (Ex. Azptobacter sp., Bradyrhizpbium sp.) e agricultura sustentável como questóes fundamentais nesta área científica, ii. rizobactéricas promotoras de crescimento de plantas (PGPR) como um tema emergente, iii. fixação biológica de nitrogénio (BNF) como um assunto que tem surgido de maneira complementar e iv. bactérias endofíticas e biodiversidade como temas em crescimento. Este estudo mostrou que a pesquisa na Colombia poderia ser dirigida a questoes como bactérias endofíticas, diversidade e produtividade.

Efecto de la temperatura de almacenamiento sobre la viabilidad de bacterias simbióticas fijadoras de nitrógeno utilizadas en la elaboración de inoculantes biológicos para arveja (Pisum sativum) y soya (Glycine max) / Effect of storage temperature on the viability of symbiotic nitrogen fixing bacteria used in the preparation of biological inoculants for crop pea (Pisum sativum) and soybean (Glycine max)

El nitrógeno es un elemento requerido en grandes cantidades por los cultivos, sin embargo, en el suelo es uno de los elementos más limitantes ya que se encuentra en formas poco disponibles para las plantas y debe ser incorporado a través de la fertilización química o por medio de la fijación biológica llevada a cabo por microorganismos. Las bacterias simbióticas fijadoras de nitrógeno han sido ampliamente utilizadas para la elaboración de inoculantes, constituyéndose en una alternativa viable para mejorar el rendimiento de los cultivos a través de un mejor suministro de este elemento. Estos inoculantes para que puedan ser comercializados deben cumplir con ciertos requisitos de calidad que garanticen el buen funcionamiento del producto. En este estudio se evalúo la viabilidad de las cepas ICA L9 e ICA J96 en inoculantes almacenados a temperaturas de 4±2, 18±3 y 28±2 °C durante 180 días y la actividad biológica en plantas de arveja y soya. Las cepas utilizadas pertenecen al Banco de Germoplasma de Microorganismos de Corpoica; para los ensayos biológicos se emplearon semillas de arveja variedad "Santa Isabel" y soya variedad "Corpoica Superior 6". Al evaluar la viabilidad de los inoculantes almacenados a 4±2 °C, 18±3 °C y 28±2 °C, se evidenció que la temperatura no afectó la supervivencia y la concentración de rizobios después de 180 días de almacenamiento permitiendo observar un número de unidades formadoras de colonias por gramo superior a 108, valor que garantiza la calidad del inoculante. En cuanto a la actividad biológica, se observó que las cepas inoculadas fueron infectivas y efectivas para la fijación biológica del nitrógeno, compa­rado con los testigos absolutos.

Nitrogen is an element required in large amounts by most crops, however, in soil is one of the most limiting and located in ways not available to the plant and must be incorporated through chemical fertilization or by biological fixation conducted by microorganisms. Fixing symbiotic bacteria nitrogen has been widely used for the production of inoculants, becoming a viable alternative to improve crop yields through a better supply of this element. These inoculants to be marketed must meet certain requirements quality to ensure the smooth operation of the product. This study assessed the viability of the strains ICA L9 and ICA J96 inoculants stored at temperatures 4±2, 18±3 y 28±2°C for 180 days and the biological activity in pea and soybean plants. The strains used belong to the collection of work Germplasm Bank CORPOICA Microorganisms; for biological assays were used pea seeds variety "Santa Isabel" and soybean variety "Superior Corpoica 6". In assessing the viability of inoculants stored at 4±2°C, 18±3°C y 28±2°C, evidenced that the temperature did not affect the survival and the concentration of rhizobia after 180 days of storage allowing to observe a number of colony forming units per gram than 10s, value that guarantees the quality of the inoculant. Concerning the biological activity, it was observed that the strains were inoculated infective and effective biological nitrogen fixation, absolute compared to controls.

Caracterização da região espaçadora 16-23S rDNA para diferenciação de estirpes de rizóbios utilizadas na produção de inoculantes comerciais no Brasil / Characterization of the spacer region 16-23S rDNA for differentiation of strains of rhizobia used in the production of commercial inoculants in Brazil

A identificação de estirpes de rizóbio tem sido feita pela especificidade por hospedeiros e ensaios microbiológicos tradicionais. Por constituírem um grupo filogeneticamente heterogêneo, diferentes técnicas moleculares têm sido empregadas para auxiliar na caracterização genética e na identificação de estirpes eficientes e competitivas para a produção de inoculantes. Este trabalho teve por objetivos caracterizar a região espaçadora 16S-23S rDNA das estirpes de rizóbios utilizadas nos inoculantes comercializados no Brasil para espécies leguminosas, utilizando a técnica da PCR em combinação com a de RFLP, e avaliar a possibilidade do uso desse marcador molecular como método auxiliar para identificação das estipes. A amplificação da região espaçadora 16-23 S rDNA das estirpes de rizóbios gerou fragmentos com tamanhos que variaram entre 700pb e 1350pb. Os produtos resultantes da amplificação foram submetidos à digestão com as endonucleases. Mps I, Dde I e Hae III. Os resultados obtidos neste estudo indicam a possibilidade do uso da técnica de PCR-RFLP da região espaçadora 16S-23S rDNA como marcador molecular para a diferenciar as estirpes de rizóbios, em complemento às técnicas microbiológicas tradicionais. Contudo, este marcador não é suficientemente discriminatório para ser usado na identificação das estirpes recomendadas para a produção de inoculantes comerciais.

The identification of strains of rhizobia has been made by host specificity and regular microbiological tests. By forming a phylogenetically heterogeneous group, different molecular techniques have been employed to assist in the genetic characterization and identification of efficient and competitive strains for production of inoculants. This study aimed to characterize the spacer region 16S-23S rDNA of the strains of rhizobia used in commercial inoculants in Brazil for legume species, using PCR combined with RFLP, and assess the possibility of using this molecular marker as an auxiliary method for identification of strains. The amplification of the 16-23 S rDNA spacer region of rhizobium strains generated fragments with sizes ranging between 700 and 1350bp. Products from the amplification were subjected to digestion with Mps I, Dde I and Hae III endonucleases. The results indicated the possibility of using the technique of PCR-RFLP of 16S-23S spacer region rDNA as molecular marker to differentiate most strains tested and recommended for production of inoculants, in addition to the traditional microbiological techniques. However, this marker is not sufficiently discriminatory to be used in the identification of the strains recommended for the production of commercial inoculants.