Efeito da irrigação ultrassônica e da medicação intracanal com hidróxido de cálcio na quantidade e no metabolismo de bactérias que persistiram após o preparo dos canais radiculares de dentes com periodontite apical / Effect of ultrasonic irrigation and calcium hydroxide intracanal medication on the levels and metabolism of bacteria that persisted after root canal preparation of teeth with apical periodontitis

Estudos moleculares ressaltam as limitações do protocolo endodôntico tradicional em eliminar bactérias dos canais radiculares. Apesar do preparo químico-cirúrgico (PQC) promover uma drástica redução bacteriana, muitos canais continuam infectados após essa etapa do tratamento. Dessa forma, estudos apontam para a necessidade de complementação técnica para potencializar a desinfecção dos canais radiculares após o PQC. Assim, o objetivo deste estudo clínico foi avaliar, por métodos moleculares baseados em DNA e RNA, o efeito dos métodos complementares ao preparo na desinfecção dos canais radiculares. Coletas microbiológicas dos canais de 20 dentes unirradiculares com periodontite apical foram feitas em diferentes etapas do tratamento endodôntico: previamente ao preparo (S1); após o PQC realizado com sistema Reciproc associado à irrigação com NaOCl 2,5% (S2); após a irrigação ultrassônica passiva, denominada PUI (S3); e após a medicação intracanal à base de hidróxido de cálcio (S4). As amostras foram submetidas à extração de DNA e RNA. O RNA foi submetido à reação de transcrição reversa (RT-PCR) para confecção da fita dupla de DNA complementar (cDNA). DNA e cDNA foram submetidos a reações de qPCR, com iniciadores universais para a região 16S rRNA do domínio Bacteria. A atividade metabólica das bactérias foi verificada através da relação entre os níveis de rRNA e rDNA determinados pelos ensaios de qPCR. Os dados foram analisados pelo teste de Wilcoxon para amostras pareadas (p < 0,05). As amostras S1 dos 20 casos apresentaram altos níveis de rDNA (mediana: 1,25 x 105, intervalo 1,83 x 104 - 9,2 x 106) e rRNA bacteriano (mediana: 5,47 x 105, intervalo 7,8 x 104 - 5,95 x 107). Dezessete canais (85%) apresentaram reações qPCR positivas para rDNA nas amostras pós-preparo (S2). A redução de rDNA após o preparo foi estatisticamente significativa (p = 0,0003), com mediana de 2,5 x 104 (intervalo 2,26 x 103 - 9,52 x 104) cópias de rDNA em S2. Por sua vez, os níveis de rRNA (mediana: 7,84 x 104, intervalo 2,91 x 103 - 1,09 x 106) foram maiores que os níveis de rDNA (p = 0,01), sugerindo que essas bactérias estavam metabolicamente ativas em S2. Após a PUI, o número de amostras S3 com resultados positivos para rDNA caiu para 12, representando uma redução significativa em relação às amostras S2 (p = 0,008). Além disso, a PUI promoveu uma redução significativa dos níveis de rDNA (mediana 2,94 x 103, intervalo 2,70 x 103 - 1,09 x 105) em relação à amostras S2 (p = 0,01). Na análise baseada em rRNA, os níveis em S3 (mediana: 03 x 104, intervalo 1,82 x 103 - 1,39 x 105) não apresentaram diferença significativa em comparação aos níveis de rDNA (p = 0,07), sugerindo que houve uma redução do metabolismo bacteriano após a PUI. Em S4, o número de casos positivos para rDNA bacteriano (n = 13) e os níveis de rDNA (mediana: 3,73 x 104, intervalo 1,98 x 103 - 3,21 x 105) foram ligeiramente maiores quando comparados aos valores das amostras S3, porém sem diferenças significativas. Entretanto, os níveis de rRNA (mediana: 1,08 x 105, intervalo 3,41 x 103 - 1,60 x 106) foram maiores que os de rDNA (p = 0,02) nas amostras S4, sugerindo que as bactérias retomaram sua atividade metabólica apesar do uso da medicação intracanal. Portanto, foi possível concluir que a irrigação ultrassônica passiva contribuiu para a desinfecção dos canais radiculares, promovendo uma redução do número e do metabolismo de bactérias. Por outro lado, as bactérias persistiram ativas nos canais radiculares após o uso do hidróxido de cálcio como medicação intracanal em dentes com periodontite apical.

Avaliação de protocolos de irrigação ultrassônica passiva na remoção de detritos do canal radicular / Evaluation of passive ultrasonic irrigation protocols in the removal of root canal debris

Introdução: O objetivo deste estudo foi avaliar a eficácia de diferentes protocolos de Irrigação Ultrassônica Passiva (PUI) por meio de microscopia eletrônica de varredura (MEV). Métodos: Seis cavidades foram confeccionadas ao longo da seção vestibular de 20 canais radiculares de pré-molares inferiores humanos e preenchidas com detritos. 10 grupos foram criados de acordo com o protocolo final de irrigação: Grupo 1- controle positivo (sem detritos); Grupo 2- controle negativo (com detritos); Grupo 3 - irrigação convencional com hipoclorito de sódio a 2,5% (NaOCl); Grupo 4 - irrigação convencional com 17% de ácido etilenodiaminotetracético (EDTA) seguido de NaOCl; Grupo 5- PUI com 3 ciclos de 20 segundos (NaOCl-NaOCl-NaOCl); Grupo 6- PUI com 3 ciclos de 20 segundos (NaOCl-EDTA-NaOCl); Grupo 7- PUI com um ciclo de 60 segundos (NaOCl); Grupo 8 - PUI com ciclo de 180 segundos (NaOCl); Grupo 9 - PUI com 2 ciclos de 60 segundos (EDTA-NaOCl); Grupo 10 - PUI com 2 ciclos de 60 segundos (NaOCl-EDTA). Os espécimes foram observados em MEV para a análise da remoção dos detritos (scores 1 a 5) e exposição dos túbulos dentinários (score 1 ou 2) dentro das cavidades. O teste de Kruskal-Wallis foi realizado para a análise estatística, com significância de 5%. Resultados: Os grupos PUI apresentaram melhores resultados na limpeza de detritos do que os grupos de irrigação convencionais nas cavidades 1, 2 e 3. As cavidades 4, 5 e 6 foram limpas em todos os grupos experimentais. Em relação à exposição dos túbulos dentinários, os grupos PUI foram capazes de alcançar um resultado melhor do que os grupos de irrigação convencional. Conclusões: A PUI mostrou-se mais eficaz na remoção de detritos do que a irrigação convencional nas cavidades localizadas na região apical do canal radicular, e os grupos PUI promoveram maior exposição dos túbulos dentinários independentemente do uso de EDTA como agente quelante para tecidos inorgânicos(AU)

Introduction: The aim of this study was to evaluate the effectiveness of different Passive Ultrasonic Irrigation (PUI) protocols by means of scanning electron microscopy. Methods: Six hemispherical cavities were made along the buccal section of 20 root canals of human lower premolars and filled with debris. 10 groups was created according to the final irrigation protocol: Group 1- positive control (no debris); Group 2- negative control (with debris); Group 3- conventional irrigation with 2.5% sodium hypochlorite (NaOCl); Group 4- conventional irrigation with 17% ethylenediamine tetracetic acid (EDTA) followed by NaOCl; Group 5- PUI with 3 cycles of 20 seconds (NaOCl-NaOCl-NaOCl); Group 6- PUI with 3 cycles of 20 seconds (NaOCl-EDTANaOCl); Group 7- PUI with a 60 seconds cycle (NaOCl); Group 8- PUI with a 180 seconds cycle (NaOCl); Group 9- PUI with 2 cycles of 60 seconds (EDTA-NaOCl); Group 10- PUI with 2 cycles of 60 seconds (NaOCl-EDTA). Scores were given for the analysis of debris removal in SEM, as well as for the exposure of dentinal tubules within the cavities. Kruskal-Wallis test was performed for statistical analysis. Results: The PUI groups presented better results in cleaning of debris than the conventional irrigation groups in cavities 1, 2 and 3. Cavities 4, 5 and 6 were well cleansed in all experimental groups. Regarding the exposure of the dentinal tubules, the PUI groups were able to achieve a better result than the conventional irrigation groups. Conclusions: Passive ultrasonic irrigation proved to be more effective in the removal of debris than conventional irrigation in the cavities located in the apical region of the root canal, and the PUI groups promoted greater exposure of the dentinal tubules independently of the use of EDTA as a chelating agent for inorganic tissues(AU)

Comparison of different final irrigant agitation techniques for the removal of Enterococcus faecalis biofilms from root canals: an in vitro study / Comparação de diferentes técnicas finais de agitação de irrigantes para a remoção de biofilmes de Enterococcus faecalis de canais radiculares: estudo in vitro

Objective: The aim of this in vitro study was to compare the effectiveness of different final irrigant agitation techniques in the removal of Enterococcus faecalis biofilms from root canals. Material and Methods: In total, the root canals of 85 extracted single-rooted human maxillary incisors teeth were prepared using the Revo-S system to a 40/06 size. The apical foramen of each tooth was sealed by light-cured resin composite material to obstruct bacterial leakage. The specimens were sterilized in an autoclave at 121°C for 15 min and stored until further use. All teeth except five (negative control group) were inoculated with Enterococcus faecalis and incubated in a CO2 chamber at 37°C for 7 days; the trypticase soy broth was changed every 2 days. For the determination of possible biofilm formation, five of the 80 teeth were randomly selected as a positive control group; one tooth of positive control group was analysed for biofilm development by scanning electron microscope (SEM) and these teeth received no final irrigant agitation procedure. Then, the remaining 75 teeth were randomly divided into five test groups (n=15 each) and were sequentially irrigated with 5% sodium hypochlorite (NaOCl), 17% ethylenediaminetetraacetic acid and 5% NaOCl. Following each irrigant application, different final irrigant agitation techniques were introduced for 60 s (3×20-s sessions). Group 1 received manual­ dynamic agitation, group 2 received passive ultrasonic agitation (PUI), group 3 received EndoActivator agitation, group 4 received photoninitiated photoacoustic streaming (PIPS) with the Er:YAG laser and group 5 received conventional syringe irrigation. Colony-forming units (CFUs) were counted in samples from the positive control and test groups. Data were analysed using Kruskal­ Wallis and post-hoc Mann­Whitney U multiple comparison tests. Results: E. faecalis elimination was significantly better in the experimental groups than in the positive control groups (p < 0.001). Manual­dynamic agitation and conventional syringe irrigation, with no significant differences between the two groups. Conclusion: Essentially, CFU reduction was significantly greater in the PUI, EndoActivator and PIPS groups than in the manual­dynamic agitation and conventional syringe irrigation groups (p <0.001) , with no significant differences among the former three groups. (AU)

Objetivo: O objetivo deste estudo in vitro foi comparar a eficácia de diferentes técnicas finais de agitação de irrigantes na remoção de biofilmes de Enterococcus faecalis de canais radiculares. Material e Métodos: No total, os canais radiculares de 85 dentes incisivos superiores unirradiculares humanos extraídos foram preparados usando o sistema Revo-S para um tamanho 40/06. O forame apical de cada dente foi selado por material compósito de resina fotopolimerizável para obstruir o vazamento bacteriano. Os espécimes foram esterilizados em autoclave a 121 ° C por 15 min e armazenados até uso posterior. Todos os dentes, exceto cinco (grupo controle negativo), foram inoculados com Enterococcus faecalis e incubados em câmara de CO2 a 37 ° C por 7 dias; o caldo de soja tripticase foi trocado a cada 2 dias. Para a determinação da possível formação de biofilme, cinco dos 80 dentes foram selecionados aleatoriamente como grupo controle positivo; um dos dentes do grupo controle positivo foi analisado para o desenvolvimento do biofilme por microscopia eletrônica de varredura (MEV) e estes dentes não receberam nenhum procedimento final de agitação irrigante. Em seguida, os 75 dentes restantes foram aleatoriamente divididos em cinco gruposteste (n = 15 cada) e irrigados sequencialmente com hipoclorito de sódio a 5% (NaOCl), ácido etilenodiaminotetracético a 17% e NaOCl a 5%. Após cada aplicação de irrigantes, diferentes técnicas finais de agitação foram introduzidas por 60 s (3 x 20 s sessões). Grupo 1 recebeu agitação manual-dinâmica, grupo 2 recebeu agitação ultra-sônica passiva (PUI), grupo 3 recebeu agitação EndoActivator, grupo 4 recebeu fotoacústica iniciada por fóton (PIPS) com o laser Er: YAG e grupo 5 recebeu irrigação convencional com seringa. As unidades formadoras de colônia (CFUs) foram contadas em amostras dos grupos controle positivo e teste. Os dados foram analisados utilizando testes de comparação múltipla Kruskal-Wallis e post-hoc Mann-Whitney U. Resultados: A eliminação de E. faecalis foi significativamente melhor nos grupos experimentais do que nos grupos de controle positivo (p < 0,001). Agitação manual-dinâmica e irrigação com seringa convencional, sem diferenças significativas entre os dois grupos. Conclusão: Essencialmente, a redução de UFC foi significativamente maior nos grupos PUI, EndoActivator e PIPS do que nos grupos de agitação manual-dinâmica e de seringa convencional (p < 0,001), sem diferenças significativas entre os três grupos anteriores (AU)

Influência da agitação do hipoclorito de sódio como protocolo de irrigação final quanto à atividade antibacteriana no sistema de canais radiculares / Influence of sodium hypochlorite agitation as a final irrigation protocol on antibacterial activity in the root canal system

Diferentes manobras para promover agitação do hipoclorito de sódio têm sido propostas para incrementar a desinfecção do sistema de canais radiculares (SCR). O objetivo deste trabalho foi comparar, ex vivo, diferentes formas de agitação do NaOCl usado na irrigação final do SCR, avaliando a mais eficaz na redução de UFC/ml, a partir de biofilme de Enterococcus faecalis. Oitenta e cinco incisivos inferiores humanos extraídos, com canais ovais e obtidos do banco de dentes da UERJ foram acessados, contaminados com uma suspensão de E. faecalis (ATCC 29212) e incubados por 30 dias possibilitando crescimento bacteriano em biofilme. Os espécimes foram preparados com o instrumento Primary (25/08) do sistema Wave One TM. Foram formados cinco grupos contendo 15 dentes cada um, que foram irrigados com hipoclorito de sódio a 2,5% e, posteriormente, submetidos à agitação do irrigante como protocolo de irrigação final com o auxílio de diferentes instrumentos/ equipamentos, como a seguir: o EndoActivator ® (EA), o Easy Clean® (EC), a espiral de Lentulo (EL), a lima manual tipo K número 10 (LM) e o inserto ultrassônico Irrisonic - E1 (US). Foi formado o grupo controle positivo (n=5) o qual foi contaminado, sem a realização de nenhum procedimento. Foi formado também o grupo controle negativo (n=5) que não foi contaminado, mas seus espécimes foram irrigados com o NaOCl e submetidos a cada um dos protocolos de agitação da substância química auxiliar. As amostras microbiológicas foram coletadas usando cone de papel estéril antes da instrumentação (S1), após a instrumentação (S2) e após o protocolo final de irrigação (S3). Tais cones foram transferidos para tubos contendo meio BHI e incubados durante 48 horas. O crescimento bacteriano foi contado em unidades formadoras de colônia (UFC/ml). Os resultados foram submetidos aos testes Shapiro-Wilks, Wilcoxon e Kruskall-Wallis, para análise estatística ( P< 0.05) e demostraram que não houve diferença estatística significativa entre os grupos EA e EC, o grupo US quando comparado aos grupos EL e LM, foi significantemente mais eficiente na redução bacteriana. De acordo com os resultados do presente estudo, é possível afirmar que a agitação do NaOCl tem influência na atividade antibacteriana no SCR, e que o uso de ultrassom é mais eficiente quando comparado ao uso da espiral de lentulo e da lima manual.

Different maneuvers to promote agitation of sodium hypochlorite have been proposed to increase the disinfection of the root canal system. The objective of this study was to compare, ex vivo, different forms of agitation of chemical substance used in irrigation of the root canal system, evaluating the most effective in reducing or eliminating biofilms of Enterococcus faecalis. Eighty-five human mandibular incisors extracted with oval shape and obtained from UERJ teeth bank were accessed, contaminated with a suspension of E. faecalis (ATCC 29212) and incubated for 30 days allowing bacterial growth in biofilms. The specimens were prepared with the instrument Primary (25 / 0.08) Wave One TM system. Five groups were formed containing 15 teeth each, which were irrigated with sodium hypochlorite to 2.5% and then subjected to agitation of the irrigator as the final irrigation protocol with the help of different instruments / equipment, as follows: the EndoActivator ® (EA), Easy Clean® (EC), the Lentulo spiral (EL), the manual K file number 10 (LM) and the ultrasonic insert Irrisonic -E1 (US). The positive control group was formed (n=5), which was contaminated, without performing any procedure. It has also formed the negative control group containing (n=5), which was not infected but was irrigated with NaOCl and subjected to each of the agitation protocols of the irrigator. Microbiological samples were collected using sterile paper points before instrumentation (S1) after instrumentation (S2) and after the end of the irrigation protocol (S3). These points were transferred to Eppendorf containing BHI and incubated for 48 hours. Bacterial growth was counted in colony forming units (CFU / ml). The results were submitted to the Shapiro-Wilks test, Wilcoxon and Kruskal-Wallis test for statistical analysis and demonstrated a significant difference between the groups. US group compared to EL and LM groups was significantly more efficient in bacterial reduction. According to the results of this study it is clear that the agitation of NaOCl influences the antibacterial activity in the root canal system and that the use of ultrasonic is more efficient when compared to the use of lentullo and manual file.