Os morcegos e a raiva na região oeste do Estado de São Paulo / The bats and rabies in the Western region of the State of São Paulo, Brazil

INTRODUÇÃO: O laboratório do Pólo da Alta Sorocabana de Presidente Prudente, SP, em parceria com outras instituições de pesquisa, realizou estudos pertinentes aos morcegos da região oeste do Estado de São Paulo, Brasil. Para tal, foram pesquisadas algumas situações, tais como: a) isolamento do vírus rábico, no período 2006 a 2008; b) as respectivas variantes antigênicas; c) abrigos diurnos do morcego hematófago Desmodus rotundus. MÉTODOS: As amostras para exame foram provenientes de morcegos não hematófagos encaminhadas ao laboratório sendo submetidas aos testes de imunofluorescência direta e prova biológica. As amostras positivas foram caracterizadas antigenicamente por meio do teste de anticorpos monoclonais. Quanto aos morcegos, foram identificados e classificados, e também foi realizado mapeamento de abrigos dos mesmos. RESULTADOS: O laboratório recebeu 1.113 morcegos não hematófagos para diagnóstico laboratorial, sendo 11 (1 por cento) deles positivos, e dentre as amostras positivas, 5 (45,5 por cento) delas tiveram variante antigênica 3 associada ao morcego D. rotundus e 4 (36,5 por cento) foram compatíveis com amostras de morcegos insetívoros. Foram pesquisados 16 abrigos de morcegos hematófagos e observou-se a presença de outras 3 espécies de morcegos não hematófagos convivendo com eles. CONCLUSÕES: Os experimentos mostraram que o vírus rábico continua circulando na região com pelo menos 3 variantes antigênicas, e que, a coabitação de morcegos hematófagos com não hematófagos pode ter alguma relação com a disseminação do vírus rábico.

INTRODUCTION: The Polo da Alta Sorocabana Laboratory in Presidente Prudente, SP, in partnership with other research institutions, conducted studies related to bats from the western region of the State of Sao Paulo, Brazil. Thus, certain situations were investigated, including: a) isolation of the rabies virus from 2006 to 2008; b) identification of respective antigenic variants; and c) characterization of daytime shelters of Desmodus rotundus vampire bats. METHODS: Samples for examination originated from nonhematophagous bats forwarded to the laboratory and subjected to direct fluorescent antibody test and mouse inoculation test. Positive samples were characterized by the monoclonal antibody test. Regarding the bats, they were identified and classified and mapping of their shelters was also performed. RESULTS: The laboratory received 1,113 nonhematophagous bats for rabies diagnosis, 11 (1 percent) of which were positives, and among the positive samples, 5 (45.5 percent) presented antigenic variant 3 (from the bat Desmodus rotundus) and 4 (36.5 percent) were compatible with samples derived from Brazilian insectivorous bats. Sixteen vampire bat shelters were investigated and observation confirmed the presence of another 3 species of nonhematophagous bats coexisting with them. CONCLUSIONS: The experiments showed that at least 3 antigenic variants of rabies virus are circulating in the region and that the cohabitation of vampire bats with nonhematophagous bats could be related to the dissemination of the rabies virus.

Imunocitoquímica e imunohistoquímica para o diagnóstico laboratorial da leishmaniose tegumentar / Immunocytochemistry and immunohistochemistry for laboratorial diagnosis of cutaneous leishmaniasis

0 aumento significativo do número de casos notificados da Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) e a expansão geográfica da endemia tem motivado o desenvolvimento de novas tecnologias para auxiliar no diagnóstico das leishmanioses, visando minimizar as restrições apresentadas pelos testes diagnósticos disponíveis nos serviços de saúde. 0 presente trabalho empregou imunocitoquimica e imunohistoquímica (ICQ/IHQ) como métodos diagnósticos laboratoriais para LTA. Amostras de culturas de Leishmania in vitro e cortes histológicos de lesões em animais infectados experimentalmente foram submetidos a ICQ/IHQ, utilizando anticorpos policlonais desenvolvidos para este estudo e o complexo avidina-biotina modificado (Ultra Streptavidin®). Em comparação com outras técnicas empregadas para o diagnóstico da LTA, nos casos avaliados, a IHQ apresentou resultados semelhantes aos da histopatologia com coloração HE, com sensibilidade de 33,3% para formas amastigotas. Quando considerada a presenva de antígenos de Leishmania no padrão celular, a IHQ apresentou uma sensibilidade de 83,3%, significativamente maior que na histopatologia e compatível com metodos padrão ouro de cultura e PCR. As metodologias de ICQ/IHQ desenvolvidas neste trabalho foram capazes de demonstrar em biópsias de lesões, a presença de formas amastigotas e antígenos de Leishmania, oferecendo contribuição adicional ao diagnóstico da LTA, sendo de facil aplicação e podendo ser utilizada no sistema público de saúde.

The significant increase in cutaneous leishmaniasis (CL) notified cases and the geographic expansion of this endemy has motivated the development of new techniques to help in leishmaniasis diagnosis, seeking the minimization of the restrictions imposed by the diagnostic tests available at the health services. The current study applied immunocytochemistry and immunohystochemistry methods (ICC/IHC) for laboratory diagnosis of CL. Imprints and histological sections from tissue infected with Leishmania were submitted to ICC/IHC methods using polyclonal antibodies developed for this study and a modified avidin-biotin complex (Ultra Streptavidin®). The samples also were submitted for routinely stained hematoxylin and eosin (H&E) specimens and gold standard methods (culture and PCR). Compared with other useful techniques for the CL diagnosis, ICC/IHC showed the same sensitivity results (33%) as H&E stain for amastigotes recognition. When the presence of Leishmania antigens was evaluated, ICC/IHC presented 83,3% sensitivity, i.e., higher than that detected by histopathology and equivalent with gold standard methods (culture and PCR). The ICC/IHC techniques developed in the current study were able to recognize amastigote forms and also Leishmania antigens in lesion biopsies, offering an additional help to CL diagnosis and it can be easily applied in the public health system.

Botulism in Brazil, 2000-2008: epidemiology, clinical findings and laboratorial diagnosis / Botulismo no Brasil, 2000-2008: epidemiologia, achados clínicos e diagnóstico laboratorial

Botulism is a rare and potentially lethal illness caused by Clostridium botulinum neurotoxin. We describe the findings of a laboratorial investigation of 117 suspected cases of botulism reported to the surveillance system in Brazil from January 2000 to October 2008. Data on the number and type of samples analyzed, type of toxins identified, reporting of the number of botulism cases and transmission sources are discussed. A total of 193 clinical samples and 81 food samples were analyzed for detection and identification of the botulism neurotoxin. Among the clinical samples, 22 (11.4 percent) presented the toxin (nine type A, five type AB and eight with an unidentified type); in food samples, eight (9.9 percent) were positive for the toxin (five type A, one type AB and two with an unidentified type). Of the 38 cases of suspected botulism in Brazil, 27 were confirmed by a mouse bioassay. Laboratorial botulism diagnosis is an important procedure to elucidate cases, especially food-borne botulism, to confirm clinical diagnosis and to identify toxins in food, helping sanitary control measures.

Botulismo é uma doença rara e potencialmente letal, resultante da ação de uma neurotoxina produzida pelo Clostridium botulinum. No presente estudo, estão descritos os resultados da investigação laboratorial de 117 casos suspeitos de botulismo notificados ao sistema de vigilância, ocorridos no Brasil no período de janeiro de 2000 a outubro de 2008. Os dados obtidos sobre as fontes de transmissão, os tipos de toxina identificados e de amostras analisadas serão discutidos. Foram analisadas 193 amostras clínicas e 81 amostras de alimentos para detecção e identificação de neurotoxina botulínica. Entre as amostras clínicas, 22 (11,4 por cento) amostras apresentaram resultado positivo para toxina (nove do tipo A, cinco do tipo AB e em oito o tipo não foi identificado) e entre as amostras de alimentos, oito (9,9 por cento) foram positivas (cinco do tipo A, uma do tipo AB e em duas o tipo não foi identificado). Dos 38 casos considerados positivos para botulismo, 27 foram confirmados pelo bioensaio em camundongo. O diagnóstico laboratorial de botulismo é importante para elucidação dos casos, principalmente de botulismo alimentar, para confirmação dos diagnósticos clínicos e identificação das toxinas nos alimentos, provendo subsídios para as medidas de controle sanitário.

Rastreamento de hemoglobinas variantes e talassemias com associação de métodos de diagnóstico / Tracking of variant hemoglobins and thalassemias by association of diagnosis methodologies

O diagnóstico neonatal de hemoglobinopatias permite a melhoria na qualidade de vida do doente com a implementação de medidas profiláticas, acompanhamento clínico e aconselhamento genético. Objetivou-se no presente estudo o diagnóstico das hemoglobinas variantes e talassemias em amostras de sangue de cordão umbilical de neonatos da região noroeste do estado de São Paulo por Cromatografia Líquida de Alta Performance (HPLC), associada a procedimentos eletroforéticos, bioquímicos e citológicos, visando adaptar a melhor metodologia de análise à freqüência dos defeitos de hemoglobina na população brasileira. Foram analisadas 3.048 amostras de janeiro de 2001 a dezembro de 2002, e 13,12 por cento apresentaram alterações de hemoglobinas, sendo 1,84 por cento com presença de Hb S; 0,6 por cento com Hb C; 0,65 por cento com resultados sugestivos de beta talassemia e 9,48 por cento sugestivos de alfa talassemia. Dentre as hemoglobinas anormais encontradas, 0,33 por cento das amostras apresentaram resultados discordantes nas metodologias aplicadas. A HPLC mostrou-se eficiente para a identificação de variantes de hemoglobinas e permitiu a análise de grande número de amostras em curto espaço de tempo e agilidade nas triagens. Entretanto, foi necessário associar outros métodos de análise para a caracterização das formas talassêmicas.

The neonatal diagnosis hemoglobinopathies improves the quality of life by prophylactic measures and genetic counseling. The diagnosis of variant hemoglobins and thalassemias was considered in the present study. Cord blood samples of newborn babies from the northwestern region of São Paulo state were analyzed by High Performance Liquid Chromatography (HPLC) associated with electrophoretic, biochemical and cytologic procedures aiming to adapt the best methodology to analyze the frequency of hemoglobin defects in the Brazilian population. Three thousand and forty-eight samples were analyzed from January 2001 to December 2002 with 13.12 percent presenting hemoglobin alterations; 1.84 percent had Hb S; 0.6 percent had Hb C; 0.65 percent were suggestive of thalassemia beta and 9.48 percent were suggestive of thalassemia alpha. Among the abnormal hemoglobins, 0.33 percent of the samples presented different results in the methodologies used. HPLC was efficient to identify variant hemoglobins and enable the analysis of several samples in a short period of time with agility in screenin. However, an association of other methods was necessary for the characterization of the thalassemic forms.

Influence of temperature, incubation time, antigen density and age of the culture in agglutinability of leptospires

In leptospirosis, the Microscopic Agglutination Test (MAT) is the basis of serological diagnosis and the most widely used. In our study, the MAT was applied to evaluate the influence of temperature, incubation time, antigen density and age of the culture in the agglutinability of Leptospires and the interference of these factors in diagnosis. Three serum samples with titers of 100, 800 and 25.600 to the serovar tande (local isolate) of canicola serogroup were used with different combinations among the four factors. There was a significant relation among all factors, specially between the antigen density and age of the culture.

Na leptospirose, o teste de soroaglutinação microscópica (MAT) é a base do diagnóstico sorológico, sendo amplamente usado. Em nosso estudo, o MAT foi aplicado para avaliar a influência da temperatura, tempo de incubação, densidade do antígeno, a idade da cultura na aglutinabilidade das leptospiras e a interferência desses fatores na interpretação do diagnóstico. Três amostras de soro com títulos de 100, 800 e 25600 para o sorovar tande (isolado local), do sorogrupo canicola foram utilizadas com combinações diferentes entre os quatro fatores. Houve uma significante relação entre todos os fatores principalmente a densidade do antígeno e a idade da cultura.

Influence of temperature, incubation time, antigen density and age of the culture in agglutinability of leptospires

In leptospirosis, the Microscopic Agglutination Test (MAT) is the basis of serological diagnosis and the most widely used. In our study, the MAT was applied to evaluate the influence of temperature, incubation time, antigen density and age of the culture in the agglutinability of Leptospires and the interference of these factors in diagnosis. Three serum samples with titers of 100, 800 and 25.600 to the serovar tande (local isolate) of canicola serogroup were used with different combinations among the four factors. There was a significant relation among all factors, specially between the antigen density and age of the culture.

Na leptospirose, o teste de soroaglutinação microscópica (MAT) é a base do diagnóstico sorológico, sendo amplamente usado. Em nosso estudo, o MAT foi aplicado para avaliar a influência da temperatura, tempo de incubação, densidade do antígeno, a idade da cultura na aglutinabilidade das leptospiras e a interferência desses fatores na interpretação do diagnóstico. Três amostras de soro com títulos de 100, 800 e 25600 para o sorovar tande (isolado local), do sorogrupo canicola foram utilizadas com combinações diferentes entre os quatro fatores. Houve uma significante relação entre todos os fatores principalmente a densidade do antígeno e a idade da cultura.

Contribuiçäo de amostras de sangue no diagnóstico laboratorial da doença meningocócica / Contribution of blood samples in laboratorial diagnosis of meningococcal disease

Foram estudados retrospectivamente 73 casos de doença meningocócica (DM), dos quais, analisou-se amostras de líquido céfalorraquidiano (LCR) e de sangue, empregando-se as técnicas de cultura e pesquisa de antígenos polissacarídicos, através da contraimunoeletroforese (CIE) e pela reaçäo de aglutinaçäo de partículas de látex sensibilizadas por antissoros específicos (LA). Os resultados laboratoriais revelaram que 45,2 por cento das amostras foram positivas através da análise do LCR; 41,0 por cento foram positivas pela análise do LCR, hemocultura e/ou soro e 13,6 por cento foram positivas através da análise de hemocultura e/ou soro. Quanto ao tipo de exame realizado com o sangue, notou-se que 35,2 por cento dos casos foram positivos pela hemocultura, e quando se pesquisou o antígeno no soro dos pacientes, obteve-se 24,6 por cento de positividade pela CIE e 46,7 por cento pelo LA. Constatou-se que 13,6 por cento dos casos, só tiveram a confirmaçäo laboratorial, através dos exames realizados em amostras de sangue, destacando-se assim, a importante contribuiçäo desse tipo de material na identificação do agente etiológico e no aumento da positividade do diagnóstico laboratorial da DM. (AU)

73 cases of meningococcal disease (MD) have been studied retrospectively in whichsamples of cerebrospinal fluid (CSF) and blood were analysed using culture and meningococcal antigendetection through counterimmunoelectrophoresis (CIE) and reaction of latex agglutination (LA). Thelaboratory results showed that 45,2% of the samples were found positive in the CSF alone; 41,0% in theCSF, blood culture and/or serum, and only 13,6% in the blood culture and/or serum. As for the type of testcarried out in the blood, it was observed that 35,2% of the cases were positive in the blood culture, whilethe tests of antigen detection in the serum, showed that 24,6% were positive by CIE and 46,7% by LA. Itwas noticed that 13,6% of the cases only had the laboratorial confirmation through blood samples, thusshowing the important contribution of the blood in the identification of the ethiological agent and theincrease of the positivity of MD laboratorial diagnosis. (AU)

Análises dos resultados de exames de escarros, provenientes de unidades de saúde, hospitais e presídios do município de Säo Paulo, para o diagnóstico da tuberculose / Analysis of sputum examinations results provided by health units. hospitais and jails of São Paulo city for the diagnosis of tuberculosis

Para o controle da tuberculose, é essencial o conhecimento da prevalência dos dados de positividade da baciloscopia e cultura de escarros. No Laboratório de Micobactérias da Faculdade de Saúde Pública -USP, de julho de 1996 a dezembro de 1999, foram examinados 3.713 escarros, sendo 3.087 para diagnóstico e 626 para o controle de tratamento. Os escarros foram provenientes de 12 Unidades de Saúde da cidade de São Paulo, de quatro Hospitais Públicos e de dois Presídios. Nas amostras das Unidades de Saúde foram realizadas baciloscopia e cultura em 2.394 para diagnóstico e em 626 para o controle de tratamento. A positividade dos diagnósticos foi de 12,6 % para a baciloscopia e 16,0 % para as culturas e dos controles de tratamento, 24,0 % para as baciloscopias e 16,0 % para as culturas. A positividade da baciloscopia e cultura para o diagnóstico das 167 amostras dos Hospitais foi de 41,3% e 42,0% e das 526 amostras dos Presídios de 15,6% e 15,8%, respectivamente. Observou-se uma maior positividade em pacientes do sexo masculino na faixa etária de 21 a 30 anos. Recomenda-se que os laboratórios tenham uma maior atuação e participação na Vigilância da Tuberculose para adoção de uma estratégia mais ativa.

For tuberculosis control lhe knowledge of the prevalence of positive smear examinations and culture testing is essential. From July 1996 to December 1999, 3,713 samples of sputum (3,087 for diagnosis of tuberculosis and 626 for treatment control) were examined in lhe Laboratory of Mycobacteria of the School of Public Health of the University of São Paulo. The samples were provided by 12 health units, 4 hospitais and 2 jails of lhe City of São Paulo. Health units provided 2,394 samples for diagnosis and 626 for treatment controlo Of lhe samples provided for diagnosis, 12.6% were smear positive and 16.0% had positive cultures. Twenty-four percent (24.0%) and 16.0% of lhe treatment control samples were smear and culture positive, respectively. Of a total of 167 samples sent by hospitais for diagnosis, 41.3% were smear positive and 42.0% had positive cultures. Smear and culture positive samples were obtained in 15.6% and 15.8%, respectively, of a total of 526 samples sent by the jails. A greater number of positive smears in male patients, with ages between 21 and 30 years were observed. Laboratories should have. a greater performance and participation in tuberculosis surveillance in order to enhance control strategies.