Análise comparativa entre isolamento microbiológico convencional e PCR para detecção de Salmonella spp. em produtos cárneos / Comparative analysis between conventional microbiological isolation and PCR for detection of Salmonella spp. in meat products

Salmonella spp. está entre os principais agentes causadores de doenças de origem alimentar no mundo, representando um sério problema para saúde pública, portanto, a fiscalização de alimentos deve contar com métodos sensíveis e eficientes para detecção deste micro-organismo. O objetivo do presente estudo foi realizar uma análise comparativa entre o isolamento microbiológico convencional e Reação em Cadeia Polimerase (PCR) para detecção de Salmonella spp. em produtos cárneos. Foram analisadas 22 amostras recebidas pela Agência Estadual de Defesa Sanitária Animal e Vegetal de Mato Grosso do Sul, sendo duas amostras de carne in natura resfriada, duas de charque, duas de mortadela, duas de salsichão e 14 de linguiça frescal. O cultivo microbiológico foi realizado conforme as normas vigentes no Brasil e para a PCR foram utilizados 1,5mL de solução salina peptonada tamponada a 1% e 1,5mL dos caldos Rappaport Vassiliadis (RSV) e Selenito Cistina (SC) de cada amostra. No método convencional não foram detectadas amostras positivas, enquanto na PCR, das 22 amostras, 13 foram positivas (59,1%). O caldo SC e solução salina permitiram melhor detecção do DNA de Salmonella spp., principalmente para as amostras de linguiça frescal, que apresentaram maior número de positivos. As duas amostras de salsichão e mortadela provenientes do caldo Rappaport Vassiliadis e uma de salsichão do caldo SC tiveram o DNA degradado, não sendo possível determinar se realmente estavam contaminadas pela bactéria. Não foi observada correlação entre a data de fabricação dos produtos e a data do início dos testes para detecção de Salmonella spp. De acordo com os resultados obtidos a PCR foi superior ao método microbiológico convencional para detecção de Salmonella spp. em produtos cárneos, apesar do protocolo de extração de DNA escolhido não ter sido eficiente para algumas amostras de salsichão e mortadela.

Salmonella spp. is one of the main agents causing foodborne diseases in the world and represents a serious problem for public health. Therefore, food control must have sensitive and efficient methods to detect this microorganism. The objective of the present study was to perform a comparative analysis between conventional microbiological isolation and PCR for the detection of Salmonella spp. in meat products. Twenty-two samples received from the State Agency for Animal and Plant Health Protection of Mato Grosso do Sul were analyzed, two samples of fresh meat, two of beef jerky, two of mortadella, two of sausage and 14 of fresh sausage. Microbiological culture was carried out according to the Brazilian norms, and 1.5mL of buffered peptone saline solution at 1% and 1.5mL of the Rappaport Vassiliadis (RVS) and Selenito Cistina (SC) broths of each sample were used for PCR. In the conventional method, no positive samples were detected, while for PCR, of the 22 samples, 13 were positive (59.1%). The SC broth and saline solution allowed a better detection of Salmonella spp. DNA, especially for the fresh sausage samples, which presented a higher number of positives. The two samples of sausage and mortadella from the RVS and one from SC had the DNA degraded and it was not possible to determine if these meat products were actually contaminated by the bacteria. No correlation was observed between the date of manufacture of the products and the start date of the tests for Salmonella spp. According to the results, PCR was superior to the conventional microbiological method for the detection of Salmonella spp. in meat products, although the chosen DNA extraction protocol was not efficient for some samples of sausage and mortadella.

Behavior of Staphylococcus aureus and autochthone microbiota in fresh sausages added of sodium nitrite and stored under refrigeration / Comportamento de Staphylococcus aureus e microbiota autóctone frente à ação de nitrito de sódio em linguiças frescais estocadas sob refrigeração

Fresh sausages are cured meat products that may be contaminated with Staphylococcus aureus during the manufacturing procedure, which is frequently related with inadequate handling practices. The use of nitrite in meat products has proven efficacy against Clostridium botulinum, and studies indicate that bactericidal action against S. aureus depends on factors that are intrinsic and extrinsic to the product. The objective of the present study was to evaluate the effect of nitrite concentration, and pH on S. aureus and psychrotrophic autochthone microbiota in fresh sausages stored at different times and temperatures. Fresh sausage were produced at nitrite concentrations 50, 150 and 200ppm and contaminated with S. aureus. The sausages were storage at refrigeration (7 and 12°C) and the quantification of S. aureus and psychrotrophic microorganisms was carried out on days 0, 2, 4, 7, and 10. Results showed that nitrite concentrations and the temperatures used had minimal effect on the multiplication of S. aureus and psychrotrophic autochthone microbiota. Final counts depended only on the length of storage: at the end of 10 days, counts were statistically similar in the different groups, showing that temperature and nitrite concentrations used did not control microbial growth effectively. It is suggested that the product should be stored below 7°C or at freezing temperatures for greater microbiological stability.

A linguiça frescal é um embutido curado que, devido à manipulação durante as etapas de produção, pode se tornar contaminado com S. aureus, patógeno frequentemente relacionado com práticas inadequadas de higiene durante a produção de alimentos. A utilização de nitrito em embutidos tem sua eficácia comprovada contra C. botulinum e, para o S. aureus, estudos indicam que a ação bactericida depende de fatores extrínsecos e intrínsecos. O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da concentração de nitrito e do pH frente à contaminação por S. aureus e microbiota autóctone em linguiças frescais estocadas em diferente tempos e temperaturas. Linguiças foram produzidas com concentrações de 50, 150 e 200ppm de nitrito e contaminadas com S. aureus. As linguiças foram armazenadas sob refrigeração (7 e 12°C) e a quantificação de S. aureus e psicrotróficos foi realizada nos dias 0, 2, 4, 7 e 10. Os resultados demonstraram que a influência das concentrações de nitrito e temperaturas utilizadas sobre a multiplicação de S. aureus e da microbiota autóctone foi mínima, sendo dependente apenas do período de estocagem. Entretanto, ao final de dez dias, as contagens foram estatisticamente iguais nos grupos analisados, mostrando que as condições de temperatura e concentrações de nitrito utilizadas não exerceram controle efetivo no desenvolvimento destes micro-organismos. Sugere-se que este produto seja armazenado sob temperaturas inferiores a 7°C ou sob congelamento para maior estabilidade microbiológica.

Molecular characterization of Listeria monocytogenes isolated from animal products in a city of Northern Brazil / Caracterização molecular de Listeria monocytogenes isolada de produtos de origem animal em uma cidade da região Norte do Brasil

Listeria monocytogenes, a foodborne pathogen causes listeriosis, a fatal disease in about 30% of cases that affects mainly immunocompromised persons. The aim of this research was to characterize L. monocytogenes pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) types isolated from meat products collected at public markets in Araguaina city, TO. Sixty samples of raw ground beef and frescal sausage were analyzed during the second half of 2008. Five out of 30 samples (16.7%) of raw ground beef tested positive for L. monocytogenes, three of which were classified as serotype 1/2b and two as serotype 4b. Among the 30 samples of sausage collected, two strains of L. monocytogenes were isolated (6.7%), one of them belonging to serotype 1/2a and the other belonging to serotype 1/2b. The restriction enzymes used were ApaI and SmaI. Similarities among the strains were determined by Dice coefficient. The macro restriction profile obtained by using SmaI enzyme allowed the distribution of seven strains in two clusters, two pulsotypes and two subtypes. The result indicates that L. monocytogenes isolates, belonging to serotype 4b, 1/2a and 1/2b, are strongly correlated within the same serotype group, and in some cases among different serotypes, suggesting that they have a common source.

Listeria monocytogenes é um patógeno de origem alimentar que causa a listeriose, doença fatal em aproximadamente 30% dos casos, e que afeta principalmente pessoas imunocomprometidas. O presente trabalho teve como objetivo analisar os perfis PFGE de cepas de L. monocytogenes isoladas de produtos de origem animal, obtidos em mercados públicos da cidade de Araguaína, TO. Foram analisadas 60 amostras de carne moída crua e de linguiça frescal, no segundo semestre de 2008. Cinco (16,7%) das 30 amostras de carne moída crua foram positivas ao patógeno, sendo que três pertenciam ao sorotipo 1/2b e duas ao sorotipo 4b. Das 30 amostras de linguiça mista frescal, duas (6,7%) foram positivas para L. monocytogenes, sendo uma do sorotipo 1/2a e outra do 1/2b. Foram utilizadas as enzimas de restrição ApaI e SmaI. A similaridade entre eles foi determinada pelo coeficiente de Dice. A análise do perfil de macrorestrição com a enzima SmaI permitiu a distribuição dos sete isolados em dois clusters, dois pulsotipos e dois subtipos. Os resultados permitiram concluir que os isolados de L. monocytogenes sorotipos 4b, 1/2a e 1/2b foram fortemente correlacionados dentro dos mesmos sorotipos e em alguns casos entre diferentes sorotipos, sugerindo uma fonte comum.

Perfil microbiológico de lingüiças mistas / Microbiological profile of sausages

A ocorrência de Doenças Transmitidas por Alimentos (DTA) tem aumentando de modo significativo e traz prejuízos tanto à saúde quanto à economia. O controle higiênico e sanitário dos alimentos constitui fator preponderante para a prevenção das doenças de origem alimentar e relevante fator de desenvolvimento social. Lingüiças mistas do tipo frescal são produtos de origem animal que apresentam alta atividade de água e, por serem intensamente manipulados e não serem submetidos a tratamento térmico, podem conter micro-organismos patogênicos. (...)O presente trabalho teve como objetivo verificar a contaminação por coliformes fecais, Staphylococcus coagulase positiva, Clostridium sulfito redutor, Salmonella sp e Listeria monoytogenes em lingüiças tipo frescal. Foram analisadas vinte amostras de lingüiças, sendo todas de supermercados locais da cidade. Dentre as amostras analisadas, 5 (25%) apresentaram contaminação acima do limite máximo permitido pela legislação brasileira para coliformes fecais, 20 (100%) mostraram que estão de acordo com os limites legais para Staphylococcus coagulase positiva, Clostridium sulfito redutor, Salmonella sp e Listeria monoytogenes.Os resultados permitem concluir que as amostras analisadas colocam em risco a saúde do consumidor, pois estão em condições higiênico-sanitárias inadequadas em função da presença de coliformes fecais.

Histórico e aspectos tecnológicos do processamento da linguiça cuiabana / Historical and technological aspects of the cuiabana sausage manufacturing procedure

O presente trabalho apresenta o aspecto histórico da linguiça cuiabana e os resultados da análise de suas características tecnológicas/sensoriais. Quatro formulações da linguiça tipo cuiabana foram processadas, variando-se a matéria-prima básica (carne bovina, frango, suína) utilizada. As matérias-primas (bovina,frango e suína) cortadas em cubos, assim como os demais ingredientes (alho, queijo, leite, pimenta e cebolinha) foram pesados e homogeneizados. A massa resultante foi refrigerada durante 24 horas para intensificar o sabor e, a seguir, embutida em tripas naturais. Nas amostras obtidas, foi realizada a caracterização do perfil físico-químico, avaliação ao longo de sete dias de armazenamento sob refrigeração por meio de análises microbiológicas de coliformes totais e termotolerantes (fecais), clostridrios sulfito redutores, Salmonella spp., Staphylococcus coagulase positiva, e de pH. Já o estudo de vida de prateleira sob refrigeração, ao longo de sete dias de armazenamento, foi efetuado por meio de análises microbiológicas para pesquisa de coliformes totais e termotolerantes (fecais), clostrídrios sulfito redutores, Salmonella spp, Staphylococcus coagulase positiva, e de pH. As amostras foram submetidas às análises sensorial e estatística das diferentes linguiças tipo cuiabana processadas em laboratório. As variações feitas, ao longo do tempo, na formulação das linguiças cuiabanas são fatores positivos, evidenciando que as alterações na formulação, como adição de queijo e mudanças nos tipos de carnes, são bem mais aceitas do que o produto original.

This paper reports the data on the cuiabana sausage historical aspect, and from the study performed on its technical/sensory characteristics. Four formulations of cuiabana-type sausage were prepared, varying the basic raw material (bovine, chicken and swine meats). For processing these sausages, the raw meats (beef, chicken and pork) were cut into cubes and together with the other ingredients (garlic, cheese, pepper and chives) they were weighed and homogenized. The resulting mixture was refrigerated for 24 hours for intensifying the flavor. Thereafter, it was stuffed into natural casings. These prepared samples were characterized on the physical-chemical profile and on the shelf life under refrigeration for over a seven day-storage in order to assess the microbiological contamination (total coliforms and fecal thermotolerant bacteria), sulphite-reducing clostridium, Salmonella spp., coagulase-positive Staphylococcus), and pH. The sensory evaluation and statistics analysis were carried out on the different types of laboratory- processed cuiabana sausage. Introducing over time changes in the cuiabana sausages formulation are positive factors; therefore, variations in the formulations it is feasible to get a better final product than that original one, and it might be resulted from the market demand.