Evaluation of the effects of sugarcane molasses as a carbon source for Ankistrodesmus gracilis and Haematococcus pluvialis (Chlorophyceae) / Avaliação do efeito do melaço de cana-de-açúcar como fonte de carbono para Ankistrodesmus gracilis e Haematococcus pluvialis (Chlorophyceae)

Abstract Two species of Chlorophyceae, Ankistrodesmus gracilis and Haemotococcus pluvialis, were used to compare and evaluate the effect of sugarcane molasses as a carbon source. Highest cell density in the two microalgae culture media was obtained in commercial culture media (CHU12 and WC). During exponential growth (day 1 to day 10), high cell density in H. pluvialis was detected for E. crassipes culture medium ranging between 0.4 x 105 cells mL-1 and 1.7 x 105 cells mL-1. Culture media were fundamental for growth under mixotrophic cultivation. Sugarcane molasses showed different results for the two microalgae with regard to growth performance, lipid and protein levels. Rates were high for H. pluvialis except lipid at the end of the experiment. In fact, A. gracilis presented almost double the lipid levels. Sugarcane molasses may be an alternative carbon source in laboratory conditions.

Resumo Duas espécies de Chlorophyceae, Ankistrodesmus gracilis e Haemotococcus pluvialis foram utilizadas para comparar o efeito do melaço de cana-de-açúcar como fonte de carbono. Nos dois meios de cultura de microalgas, a maior densidade celular foi obtida em meio de cultura comercial (CHU12 e WC). Durante o crescimento exponencial (1º ao 10º dia), detectou-se alta densidade celular em H. pluvialis para o meio de cultura E. crassipes variando entre 0,4 x 105 células mL-1 e 1,7 x 105 células mL-1. Os meios de cultura foram fundamentais para o crescimento em cultivo mixotrófico. O melaço de cana-de-açúcar apresentou resultados diferentes para as duas microalgas em relação ao crescimento, aos teores de proteína e lipídio foram mais elevados para o cultivo de H. pluvialis, exceto lipídio no final do experimento onde A. gracilis apresentou quase o dobro dos níveis de lipídio. O melaço de cana de açúcar pode ser uma fonte alternativa de carbono em condições de laboratório.

Impacto de la concentración de suero fetal bovino sobre las células epiteliales dentales / Impacto da concentração de soro bovino fetal nas células epiteliais dentárias / Impact of bovine fetal serum concentration on dental epithelial cells

Resumen El esmalte dental, tejido más duro del cuerpo humano, es formado por medio de la diferenciación de células epiteliales conocidas como ameloblastos. Recientemente, las células epiteliales dentales de incisivo de rata han sido utilizadas como modelo celular de eventos fisiopatológicos durante la formación del esmalte dental. Sin embargo, en función de los eventos estudiados es meritorio comprender su comportamiento, particularmente cuando la concentración del Suero Fetal Bovino (SFB) varia. El propósito de este trabajo es evaluar el impacto de la concentración del SFB sobre el crecimiento, proliferación y supervivencia de las células epiteliales dentales. Células epiteliales dentales fueron cultivadas en DMEM/F12, en presencia y ausencia de SFB. Observaciones morfológicas e inmunohistoquímicos de la actina, vimentina y fibronectina fueron realizados. Los resultados permitieron constatar que la ausencia de SFB afectó negativamente la proliferación de las células epiteliales dentales, pero mantuvo una expresión óptima de la actina y vimentina. Se identificó una alteración en la expresión de la fibronectina en las células tratadas en ausencia de SFB. En conclusión, la carencia de SFB disminuyo drásticamente la supervivencia, proliferación y expresión de la fibronectina en las células epiteliales dentales de rata.

Abstract Dental enamel, the hardest tissue in the human body is formed by the differentiation of epithelial cells known as ameloblasts. Recently rat incisor dental epithelial cells have been used as a cellular model of pathophysiological events during tooth enamel formation. However depending on the events studied, it is necessary to understand the behavior of these cells, particularly when the concentration of Bovine Fetal Serum (FBS) varies. The purpose of this work is to evaluate the impact of FBS concentration on the growth, proliferation, and survival of dental epithelial cells. Dental epithelial cells were cultured in DMEM/F12 culture medium in the absence and presence of 10% FBS. Morphological and immunohistochemical observations of actin, vimentin, and fibronectin were performed. The results confirm that the absence of FBS negatively affected the proliferation of dental epithelial cells but maintained an optimal expression of actin and vimentin. An alteration in the expression of fibronectin in the cells treated in the absence of FBS was identified. In conclusion, the lack of FBS dramatically decreased the survival, proliferation, and expression of fibronectin in rat dental epithelial cells.

RESUMO O esmalte dentário, o tecido mais duro do corpo humano, é formado pela diferenciação de células epiteliais conhecidas como ameloblastos. Recentemente, células epiteliais dentárias de incisivo de rato têm sido utilizadas como modelo celular de eventos fisiopatológicos durante a formação do esmalte dentário. No entanto, dependendo dos eventos estudados, é meritório entender seu comportamento, particularmente quando a concentração de soro fetal bovino (FBS) varia. O objetivo deste trabalho é avaliar o impacto da concentração de SFB no crescimento, proliferação e sobrevivência de células epiteliais dentárias. Células epiteliais dentárias foram cultivadas em DMEM / F12, na presença e ausência de SFB. Observações morfológicas e imunohistoquímicas de actina, vimentina e fibronectina foram realizadas. Os resultados permitiram confirmar que a ausência de SFB afetou negativamente a proliferação de células epiteliais dentárias, mas manteve uma ótima expressão de actina e vimentina. Uma alteração na expressão de fibronectina nas células tratadas na ausência de SFB foi identificada. Em conclusão, a falta de SFB diminuiu drasticamente a sobrevivência, proliferação e expressão de fibronectina em células epiteliais dentárias de ratos

Evaluation of the effects of sugarcane molasses as a carbon source for Ankistrodesmus gracilis and Haematococcus pluvialis (Chlorophyceae)

Abstract Two species of Chlorophyceae, Ankistrodesmus gracilis and Haemotococcus pluvialis, were used to compare and evaluate the effect of sugarcane molasses as a carbon source. Highest cell density in the two microalgae culture media was obtained in commercial culture media (CHU12 and WC). During exponential growth (day 1 to day 10), high cell density in H. pluvialis was detected for E. crassipes culture medium ranging between 0.4 x 105 cells mL-1 and 1.7 x 105 cells mL-1. Culture media were fundamental for growth under mixotrophic cultivation. Sugarcane molasses showed different results for the two microalgae with regard to growth performance, lipid and protein levels. Rates were high for H. pluvialis except lipid at the end of the experiment. In fact, A. gracilis presented almost double the lipid levels. Sugarcane molasses may be an alternative carbon source in laboratory conditions.

Resumo Duas espécies de Chlorophyceae, Ankistrodesmus gracilis e Haemotococcus pluvialis foram utilizadas para comparar o efeito do melaço de cana-de-açúcar como fonte de carbono. Nos dois meios de cultura de microalgas, a maior densidade celular foi obtida em meio de cultura comercial (CHU12 e WC). Durante o crescimento exponencial (1º ao 10º dia), detectou-se alta densidade celular em H. pluvialis para o meio de cultura E. crassipes variando entre 0,4 x 105 células mL-1 e 1,7 x 105 células mL-1. Os meios de cultura foram fundamentais para o crescimento em cultivo mixotrófico. O melaço de cana-de-açúcar apresentou resultados diferentes para as duas microalgas em relação ao crescimento, aos teores de proteína e lipídio foram mais elevados para o cultivo de H. pluvialis, exceto lipídio no final do experimento onde A. gracilis apresentou quase o dobro dos níveis de lipídio. O melaço de cana de açúcar pode ser uma fonte alternativa de carbono em condições de laboratório.

Characterization of cryopreserved primary human corneal endothelial cells cultured in human serum-supplemented media / Caracterização de células endoteliais corneanas humanas primárias criopreservadas cultivadas em meio suplementado com soro humano

ABSTRACT Purpose: To compare cryopreserved human corneal endothelial cells (HCECs) grown in human serum-supplemented media (HS-SM) with cryopreserved HCECs grown in fetal bovine serum-supplemented media (FBS-SM). Methods: Three pairs of human corneas from donors aged 8, 28, and 31 years were obtained from the eye bank. From each pair, one cornea was used to start a HCEC culture using HS-SM; the other cornea was grown in FBS-SM. On reaching confluence, the six cell populations were frozen using 10% dimethyl sulfoxidecontaining medium. Thawed cells grown in HS-SM were compared with those grown in FBS-SM with respect to morphology, growth curves, immunohistochemistry, real time-reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) for endothelial cell markers, and detachment time. Results: No difference in morphology was observed for cells grown in the two media before or after cryopreservation. By growth curves, cell counts after thawing were similar in both media, with a slight trend toward higher cell counts in FBS-SM. Cells grown in both the media demonstrated a similar expression of endothelial cell markers when assessed by immunohistochemistry, although HCEC marker gene expression was higher in cells grown in HS-SM than in those grown in FBS-SM as assessed by RT-PCR. With FBS-SM, there was a tendency of longer detachment time and lower cell passages. Conclusions: HS-SM was similar to FBS-SM for cryopreservation of cultured HCECs as assessed by analysis of cell morphology, proliferation, and protein expression, although marker gene expression was higher in cells grown in HS-SM than in those grown in FBS-SM. Detachment time was longer with FBS-SM and in lower passages.

RESUMO Objetivo: Comparar células endoteliais de córnea humana (HCECs) criopreservadas e cultivadas em meio suplementado com soro humano (HS-SM) com HCEC criopreservadas e cultivadas em meio suplementado com soro bovino fetal (FBS-SM). Métodos: Três pares de córneas humanas de doadores com 8, 28 e 31 anos de idade foram obtidos do banco de olhos e, de cada par, uma córnea foi utilizado para iniciar uma cultura com HS-SM e outra com FBS-SM. Ao atingir a confluência, as populações de células foram congeladas utilizando-se dimetil-sulfóxido 10% no respectivo meio de cultura. Após descongeladas, as células cultivadas em HS-SM foram comparados com as cultivadas em FBS-SM por meio de morfologia, curva de crescimento, imuno-histoquímica, reação em cadeia de Reação em cadeia da polimerase da transcrição reversa em tempo real (RT-PCR) para marcadores de células endoteliais e tempo de descolamento. Resultado: Não foram observadas diferenças morfológicas antes ou após a criopreservação. Curva de crescimento mostrou contagens celulares semelhantes em ambos os meios, com discreta tendência para um maior número em FBS-SM. As células cultivadas em ambos os meios mostraram expressão semelhante de marcadores celulares endoteliais quando avaliadas por imuno-histoquímica, embora a expressão genética de marcadores para HCEC tenha sido maior em HS-SM quando avaliado por RT-PCR. Houve uma tendência de maior tempo de descolamento com FBS-SM e passagens iniciais. Conclusões: HS-SM foi semelhante ao FBS-SM na criopreservação de HCEC cultivadas in vitro quando avaliadas por morfologia celular, proliferação celular e expressão proteica, embora a expressão genética de marcadores endoteliais tenha sido maior em células cultivadas em HS-SM quando comparadas a células cultivadas em FBS-SM. O tempo de descolamento foi maior quando utilizado FBS-SM e em passagens iniciais.

Evaluation of different culture media and enrichment in orange juice upon the growth of Alicyclobacillus spp / Avaliação de diferentes meios de cultura e enriquecimento em suco de laranja sobre o crescimento de Alicyclobacillus spp

Bacteria of the genus Alicyiclobacillus spp. form spores and develop in acid media, leading to the spoilage of citrus juices. Brazil is the largest exporter of orange juice concentrate, and yet, it has been extensively studied due to changes in taste and smell. Several investigations have reported different culture media used to detect and enumerate Alicyiclobacillus spp. The objective of the present study was to evaluate the recovery of Alicyiclobacillus spp. spores grown in ALI, BAT, K agar and YSG media using the methodology suggested by ABECitrus. Five inocula were used, two from reference strains and three from pasteurized concentrated orange juice. Cell recovery after the enrichment in reconstituted orange juice was also analyzed. An initial population of 6 log CFU/mL was inoculated. ALI, BAT and YSG media were able to recover the initial population of all different inocula, with no significant differences between the results. When compared to BAT, however, the preparation of ALI and YSG media was simpler and had more advantages. The recovery with K agar medium was lower than the other media for all the tested inocula, with significant differences found for Alicyclobacillus acidocaldarius0298T (3.66 log CFU/mL) and Alicyclobacillus pomorum-like CBMAI 0278 (4.11 log CFU/mL).(AU)

As bactérias do gênero Alicyiclobacillus spp. formam esporos e se desenvolvem em meios ácidos, podendo causar deterioração em sucos cítricos. O Brasil é o maior exportador de suco de laranja concentrado do mundo e, assim, este gênero vem sendo estudado por causar alterações de odor e sabor. Vários estudos relatam diferentes meios de culturas empregados para a detecção e enumeração de Alicyclobacillus spp. Este estudo teve como objetivo avaliar a recuperação de esporos de Alicyclobacillus spp. nos meios ALI, BAT, K ágar e YSG, utilizando a metodologia indicada pela ABECitrus. Cinco inóculos diferentes foram utilizados, sendo dois de linhagens-referência e os outros três isolados de suco concentrado de laranja pasteurizado. Também foi verificada a recuperação das células após o enriquecimento em suco de laranja reconstituído. Foi inoculada uma população inicial de 6 log UFC/mL. Os meios ALI, BAT e YSG conseguiram recuperar esta população nos diferentes inóculos, não existindo diferenças significativas entre os resultados. Contudo, devido à facilidade do preparo, os meios ALI e YSG mostraram-se mais vantajosos quando comparados ao meio BAT. O meio K ágar apresentou recuperação inferior aos outros meios para todos os inóculos, porém, houve diferença significativa apenas para Alicyclobacillus acidocaldarius 0298 T (3,66 log UFC/mL) e Alicyclobacillus pomorum-like CBMAI 0278 (4,11 log UFC/mL).(AU)

Actualización en bacteriemia por Staphylococcus Aureus / Update on Staphylococcus aureus bacteremia / Atualização em bacteriémia por Staphylococcus aureus

El Staphylococcus aureus es un patógeno bacteriano de distribución mundial y es el principal responsable de las bacteriemias en numerosas áreas geográficas. Las tasas de resistencia a antibióticos han aumentado exponencialmente y diversos estudios han demostrado que las cepas resistentes ya no se limitan al ámbito hospitalario, con un aumento significativo de las infecciones adquiridas en la comunidad por bacterias meticilino-resistentes. La epidemiología de la infección es cambiante, lo que ha dificultado el enfoque inicial de los pacientes con bacteriemia por S. aureus, sumado a la cantidad de antibióticos relativamente limitada para su tratamiento. A pesar de los avances médicos y científicos, la mortalidad atribuible a esta infección ha permanecido estable durante los últimos años, por lo que se ha convertido en un problema para los sistemas de salud con un aumento considerable en los costos de atención. Es necesario realizar una actualización en este tópico para facilitar un tratamiento clínico adecuado de las bacteriemias por S. aureus.

Staphylococcus aureus is a bacterial pathogen that is distributed worldwide and is the main cause of bacteremia in numerous geographical regions. The rates of resistance to antibiotics have increased exponentially and various studies have demonstrated that the resistant strains are no longer limited to the hospital environment, as there has been a significant increase in community-acquired methicillin-resistant bacteria. The epidemiology of this infection is changing, which has made the initial management of patients with S. aureus bacteremia more complicated, as well as the relatively limited amount of antibiotics for treatment. Despite medical and scientific progress, mortality attributed to this infection has remained the same over the past years. Thus, it is becoming a problem for health systems that implies increased healthcare costs. It is necessary to update this topic in order to offer adequate clinical treatment for S. aureus bacteremia.

O Staphylococcus aureus é um patógeno bacteriano de distribuição mundial e é o principal responsável das bacteriémias em numerosas áreas geográficas. As taxas de resistência a antibióticos aumentaram exponencialmente e diversos estudos demostraram que as cepas resistentes já não se limitam ao âmbito hospitalário, com um aumento significativo das infecções adquiridas na comunidade por bactérias meticilino-resistentes. A epidemiologia da infecção é cambiante, o que há dificultado o enfoque inicial dos pacientes com bacteriémia por S. aureus, somado à quantidade de antibióticos relativamente limitada para seu tratamento. A pesar dos avanços médicos e científicos, a mortalidade atribuível a esta infecção há permanecido estável durante os últimos anos, pelo que se há convertido num problema para os sistemas de saúde com um aumento considerável nos custos de atenção. É necessário realizar uma atualização neste tópico para facilitar um tratamento clínico adequado das bacteriémias por S. aureus.

Germinação in vitro de Hyptis leucocephala Mart. ex Benth. e Hyptis platanifolia Mart. ex Benth. / In vitro germination of Hyptis leucocephala Mart. ex Benth. and Hyptis platanifolia Mart. ex Benth

Hyptis leucocephala e Hyptis platanifolia (Lamiaceae) são espécies aromáticas endêmicas do semiárido nordestino e possuem grande importância econômica devido ao seu potencial medicinal. O presente trabalho teve por objetivo obter o protocolo para o estabelecimento inicial in vitro das espécies H. leucocephala e H. platanifolia. O meio de cultura WPM promoveu a maior porcentagem de germinação (96,81%) para H. leucocephala, porém não diferiu estatisticamente dos resultados obtidos no MS½ na última semana de cultivo. Para a germinação de sementes de H. platanifolia, o MS½ foi o meio que proporcionou a maior porcentagem (40,83%). O tipo de esterilização não interferiu na germinação in vitro para as duas espécies. Para a espécie H. platanifolia, quando se utilizou o fechamento dos tubos de ensaio com tampão de algodão, a hiperidricidade foi eliminada; porém, a porcentagem de germinação das sementes foi menor. Avaliando-se o tipo de meio de cultura no crescimento in vitro de H. leucocephala observou-se que este fator não influenciou no número de brotações, nem o comprimento de parte aérea e da matéria seca de raiz. O meio MS proporcionou incremento para o número de folhas, matéria seca da parte aérea, e comprimento da maior raiz, enquanto o meio MS½ foi o que promoveu maior número de raízes. O meio de cultura ideal para a germinação de H. leucocephala e H. platanifolia foi o MS½, podendo ser esterilizado com hipoclorito de sódio, enquanto que o MS foi o melhor meio de cultura para o crescimento in vitro de H. leucocephala.

The Hyptis leucocephala and Hyptis platanifolia (Lamiaceae) are aromatic species, endemic to the Brazilian Semiarid northeast, and they have great economic importance becaude of their pharmacological potential. This study aimed to obtain the protocol for the in vitro establishment of H. leucocephala and H. platanifolia plants. The WPM promoted higher germination percentage (96.81%) for H. leucocephala, but there was no difference between the results obtained in ½MS, in the last week of cultivation. For the germination of H. platanifolia, ½MS was the one that provided the highest percentage (40.83%). The type of sterilization did not affect the in vitro germination of both species. For the H. platanifolia species, when we closed the tubes with a cotton plug, hyperhydricity was eliminated, but the percentage of seed germination was the lowest one. Evaluating the type of culture medium on the in vitro growth of H. leucocephala, it did not influence the number of shoots, length of shoot or root dry matter. The MS medium promoted an increase of the number of leaves, dry shoot and longest root length, and the ½MS medium was more suitable for root induction. The optimal culture medium for the germination of H. leucocephala and H. platanifolia is ½MS, as it can be sterilized with sodium hypochlorite, while the MS was the best culture medium for the in vitro growth of H. leucocephala.

Culture of equine bone marrow mononuclear fraction and adipose tissue-derived stromal vascular fraction cells in different media / Cultivo de células da fração mononuclear da medulla óssea e da fração vascular stromal do tecido adipose de equinos em diferentes meios

The objective of this study was to evaluate the culture of equine bone marrow mononuclear fraction and adipose tissue - derived stromal vascular fraction cells in two different cell culture media. Five adult horses were submitted to bone marrow aspiration from the sternum, and then from the adipose tissue of the gluteal region near the base of the tail. Mononuclear fraction and stromal vascular fraction were isolated from the samples and cultivated in DMEM medium supplemented with 10% fetal bovine serum or in AIM-V medium. The cultures were observed once a week with an inverted microscope, to perform a qualitative analysis of the morphology of the cells as well as the general appearance of the cell culture. Colony-forming units (CFU) were counted on days 5, 15 and 25 of cell culture. During the first week of culture, differences were observed between the samples from the same source maintained in different culture media. The number of colonies was significantly higher in samples of bone marrow in relation to samples of adipose tissue.

O objetivo deste estudo foi avaliar o cultivo de células da fração mononuclear da medula óssea e da fração vascular estromal do tecido adiposo de equinos em dois diferentes meios. Cinco cavalos foram submetidos à aspiração da medula óssea do esterno e à coleta de tecido adiposo da região glútea, próxima à inserção da cauda. A fração mononuclear e a fração vascular estromal foram obtidas das amostras e cultivadas em meio DMEM suplementado com soro fetal bovino a 10% ou em meio AIM-V. As culturas foram observadas uma vez por semana com um microscópio de luz invertida, com o intuito de se realizar uma análise qualitativa das características morfológicas das células, bem como do aspecto geral do cultivo celular. As unidades formadoras de colônia (CFU) foram contadas nos dias 5, 15 e 25 do cultivo celular. Durante a primeira semana, foram observadas diferenças entre amostras obtidas de mesma origem mantidas em diferentes meios. O número de colônias foi significativamente maior nas amostras de medula óssea em relação às amostras de tecido adiposo.

Fitorreguladores e posição de explantes foliares na indução à calogênese em cerejeira-do-mato / Phytoregulators and leaf explants position on callus induction in cerejeira-do-mato

O presente trabalho objetivou avaliar o efeito de diferentes formas de inoculação, no meio nutritivo, de explantes foliares de Eugenia involucrata DC., uma espécie florestal nativa com diversas potencialidades econômicas. Foram avaliadas as posições abaxial, adaxial, com e sem cortes no limbo foliar. Foi utilizado o meio de cultura MS acrescido de 10 µM de ANA isolado ou das combinações, em µM, de 2,4-D e BAP: 5-5 e 5-10. A posição dos explantes afeta a calogênese e a organogênese em segmentos foliares de E. involucrata, sendo mais adequada a abaxial sem cortes na região do limbo. A associação dos reguladores de crescimento 2,4-D + BAP na concentração de 5-10 µM foi mais promissora para a obtenção de calos, especialmente os nodulares, putativos à embriogênese somática.

The aim of this research was to evaluate the effect of different forms of leaf explants inoculation in nutritive medium of Eugenia involucrata DC., an native forest species with diverse economic potentials. Inoculations were evaluated at abaxial and adaxial positions, with and without cuts on the leaf surface in the MS nutritive medium supplemented with 10 µM NAA or combination, in µM, of 2.4-D and BAP: 5-5 and 5-10. The explants position inoculation affects the callus induction and organogenesis in E. involucrata leaf segments, being the abaxial the most suitable position, without cuts in the leaf surface. The combination of growth regulators 2.4-D and BAP, at concentrations of 5-10( µM) was most promising of callus obtaining, especially nodular callus, putative at somatic embryogenesis.

A influência de diferentes meios de cultura na geração de células dendríticas para o tratamento imunoterápico de pacientes com leucemia mieloide aguda / The influence of different culture media in generation of dendritic cells for immunotherapeutic treatment of acute myeloid leukemia patients

Células dendríticas (DCs) são as principais células apresentadoras de antígeno do sistema imune, capazes de estimular o linfócito T a iniciar resposta imune especifica. Vacinas de DCs vêm sendo utilizadas como forma de tratamento imunoterápico adjuvante para várias neoplasias. Protocolos para geração dessas células têm sido desenvolvidos e o método ideal de produção para uso clínico ainda necessita ser definido. É fundamental a definição de protocolos e reagentes que ofereçam, a partir de células mononucleares do sangue periférico, células dendríticas seguras e funcionais para uso clínico. A suplementação de meios de cultura com soro de origem animal e humano leva á riscos de xenosensibilização e transmissão de doenças. O uso do soro autólogo parece oferecer menos riscos ao paciente, porém a presença de fatores imunossupressores nesse soro poderia interferir na qualidade das DCs produzidas. Vários tipos de meios livres de soro, baseados nas boas práticas de produção - "good manufacture practice" (GMP), têm sido utilizados recentemente e parecem ser uma opção viável. O objetivo desse estudo foi avaliar os resultados da diferenciação, maturação e funcionalidade de DCs de pacientes com LMA, produzidas em meios livres de soro e em meio suplementado com soro autólogo. Concluímos que os meios de cultura livres de soro foram eficientes na produção de DCs para fins imunoterápicos em pacientes com LMA. Em contrapartida, o uso de soro autólogo parece interferir na capacidade funcional das DCs geradas.

Dendritic cells (DCs) are the main antigen-presenting cells of the immune system, capable of stimulating T lymphocytes to initiate specific immune responses. Vaccines based on DCs have been used as a treatment adjuvant immunotherapy for various malignancies. Protocols for generating these cells have been developed and the optimal method of production for clinical use remains to be defined. There is a great interest in the definition of protocols and reagents providing from peripheral blood mononuclear cells, functional and safe dendritic cells for clinical use. Supplementation of culture media with serum from animal and human leads to reactions due the animal proteins and transmission of disease. The use of autologous serum seems to offer less risk to the patient, but the presence of immunosuppressive factors may affect the quality of the DCs produced. Several types of serum-free media, based on "good manufacture practice" (GMP), have been used recently and seem to be a viable option. The aim of this study was to evaluate the results of the differentiation, maturation and function of DCs from AML patients, generated in serum-free media and media supplemented with autologous serum. We concluded that the serum-free media were efficient in the production of DCs for immunotherapy in AML patients. However, the use of autologous serum appears to interfere with the functional capacity of generated DCs.

Different culture media containing methyldopa for melanin production by Cryptococcus species / Avaliação de diferentes meios de cultura contendo metildopa para a produção de melanina por espécies de Cryptococcus

INTRODUCTION: Melanin production by species of Cryptococcus is widely used to characterize C. neoformans complex in mycology laboratories. This study aims to test the efficacy of methyldopa from pharmaceutical tablet as a substrate for melanin production, to compare the production of melanin using different agar base added with methyldopa, and to compare the melanin produced in those media with that produced in Niger seed agar and sunflower seed agar by C. neoformans, C. laurentii, and C. albidus. Two isolates of each species, C. neoformans, C. laurentii, and C. albidus, and one of Candida albicans were used to experimentally detect conditions for melanin production. METHODS: The following media were tested: Mueller-Hinton agar (MHA), brain and heart infusion agar (BHIA), blood agar base (BAB), and minimal medium agar (MMA), all added with methyldopa, and the media Niger seed agar (NSA) and sunflower seed agar (SSA). RESULTS: All isolates grew in most of the culture media after 24h. Strains planted on media BAB and BHIA showed growth only after 48h. All isolates produced melanin in MMA, MHA, SSA, and NSA media. CONCLUSIONS: Methyldopa in the form pharmaceutical tablet can be used as a substrate for melanin production by Cryptococcus species; minimal medium plus methyldopa was more efficient than the BAB, MHA, and BHIA in the melanin production; and NSA and SSA, followed by MMA added with methyldopa, were more efficient than other media studied for melanin production by all strains studied.

INTRODUÇÃO: A produção de melanina por espécies de Cryptococcus é uma característica amplamente utilizada em laboratórios de micologia para caracterização do complexoC. neoformans. O objetivo deste estudo foi verificar a eficácia da metildopa na forma farmacêutica de comprimido, como substrato para a produção de melanina por Cryptococcus, comparar diferentes bases de meios de cultura acrescidas de metildopa para produção de melanina e comparar o pigmento produzido nestes meios com o produzido em ágar Níger e ágar girassol por C. neoformans, C. laurentii e C. albidus. MÉTODOS: Foram testados dois isolados de cada uma das espécies, C. neoformans, C.laurentii e C.albidus, e um de C. albicans para avaliar a produção de melanina nos meios de cultura ágar Müeller-Hinton (MH), ágar brain heart infusion (BHI), ágar base sangue (BS), meio mínimo (MM), todos acrescidos de metildopa, e ainda ágar girassol e ágar Níger. RESULTADOS: Todos os isolados cresceram na maioria dos meios após 24h. O crescimento nos meios BS e BHI somente ocorreu após 48h. Todos os isolados produziram melanina nos meios MM, MH, girassol e Niger. CONCLUSÕES: A metildopa de origem farmacêutica pode ser utilizada como substrato para a produção de melanina por espécies de Cryptococcus; o MM acrescido de metildopa mostrou-se mais eficiente na produção de melanina do que os meios BS, MH e BHI; ágar girassol e ágar Níger seguidos de MM acrescido de metildopa foram os mais eficientes na produção de melanina pelos isolados estudados.

Calli induction in leaf explants of coffee elite genotypes / Indução de calos em explantes foliares de clones elite de café

Three experiments were carried out with the objective of achieving high effectiveness in calli induction from high heterozygosis leaf explants of Coffea arabica through indirect somatic embryogenesis. A randomized-block design in a 2x5 factorial arrangement made up of two media [BOXTEL & BERTHOULY (1996) and TEIXEIRA et al. (2004)] and five C. arabica genotypes were used in the first experiment. In the second experiment the embryogenic calli production potential was evaluated in ten genotypes. Each of them was considered as a treatment. In the third experiment the variations in both 2.4-D (2.5 e 20µM) and 2-iP (2.5 e 20µM) concentrations in TEIXEIRA et al. (2004) medium and secondary media were evaluated. Crops were kept in a growth room under darkness, at 25±2oC. The medium described by TEIXEIRA et al (2004) was found to be superior when compared to that described by BOXTEL & BERTHOULY (1996) in the 2.2 and 7.2 genotypes. An opposite behavior was noticed in 4.2 genotype, that is, BOXTEL & BERTHOULY (1996) had medium superiority. Both 3.0 and 5.0 genotypes had the same behavior in both media studied, which shows that the somatic embryo production depends on the genotype. Calli induction depends on the 2-iP and 2.4 D ratio. The 20.0µM of 2.4-D and 20.0µM of 2-iP combination caused the highest embryogenic calli induction rate.

Visando a alcançar alta eficiência na indução de calos a partir de explantes foliares de plantas matrizes de C. arabica com alta heterozigose, por meio da embriogênese somática indireta, foram instalados três experimentos. O primeiro experimento foi conduzido em esquema fatorial 2x5, constituído de dois meios de cultura (BOXTEL & BERTHOULY, 1996 e TEIXEIRA et al., 2004) e cinco genótipos de C. arabica. No segundo experimento, foi avaliado o potencial de produção de calos embriogênicos em 10 genótipos, sendo cada genótipo considerado como um tratamento e, no terceiro experimento, foram avaliadas as variações nas concentrações de 2.4-D (2,5 e 20µM) e 2-iP (2,5 e 20µM) nos meios primário e secundário de TEIXEIRA et al. (2004). As culturas foram mantidas a 25oC, sob obscuridade. Para os genótipos 2.2 e 7.2, verificou-se a superioridade do meio de cultura Teixeira et al. (2004) em relação ao meio BOXTEL & BERTHOULY (1996). No genótipo 4.2, observou-se o comportamento inverso, ou seja, a superioridade do meio BOXTEL & BERTHOULY (1996). Os genótipos 3.0 e 5.0 apresentaram o mesmo comportamento em ambos os meios de cultura estudados, evidenciando que a produção de embriões somáticos é fortemente dependente do genótipo. A indução de calos depende da relação de 2-iP e 2.4-D. A combinação de 20.0µM of 2.4-D e 20.0µM of 2-iP promoveu a maior porcentagem de indução de calos embriogênicos.

Estudo comparativo da citotoxicidade de cimentos obturadores sobre culturas de células endoteliais da linhagem ECV 304 / Comparative study of cytotoxicity of sealers on cultured endothelial cells line ECV 304

Este estudo teve como objetivo avaliar, in vitro, a citotoxicidade dos cimentos endodônticos Densell Endo®, Pulp-Fill®, Endofill®, Sealer 26®, Pulp Canal Sealer® e GuttaFlow® após 12, 24 e 72 horas de tempo de contato, utilizando-se uma linhagem de células endoteliais ECV-304. Para a avaliação da viabilidade celular, utilizou-se o teste de citotoxicidade MTT. Para cada cimento foram preparados 12 corpos de prova que foram distribuídos em seis grupos experimentais de acordo com as marcas comerciais, sendo quatro para cada tempo. Foi criado um grupo controle que não foi submetido à ação de cimento. Para avaliação do efeito dos cimentos sobre as células endoteliais, os corpos de prova foram inseridos nos poços da placa cultura, incubados a 37ºC em presença de 5% de CO2 e 100% de umidade. Os testes MTT foram realizados, em quadruplicata, após 12, 24 e 72 horas de contato das amostras com o tapete celular. Foi utilizada a prova Two-Way Anova com o teste Post Hoc de Bonferroni com nível de significância de 5%. Na análise de 12 horas, foi possível observar que o cimento GuttaFlow® apresentou média de absorbância de 0,055, seguido do Sealer 26® (média = 0,038). Os cimentos Pulp Canal Sealer® e Densell Endo® apresentaram a mesma média de absorbância (0,031). O Pulp Fill® e o Endofill® foram os cimentos que apresentaram maior citotoxicidade (média de absorbância = 0,024 e 0,021, respectivamente). O grupo controle apresentou média de absorbância de 0,158. Em 24 horas observou-se que os cimentos GuttaFlow® e Sealer 26® apresentaram as maiores médias de absorbância (0,041 e 0,037, respectivamente), seguidos pelo cimento Pulp Canal Sealer® que apresentou média de absorbância de 0,035. Já os cimentos Densell Endo® e Pulp Fill® apresentaram médias de absorbância de 0,033 e 0,032, respectivamente. O cimento Endofill® apresentou uma média de 0,026 e o grupo controle de 0,086. Quando analisados em 72 horas, o cimento Pulp Canal Sealer® obteve média de absorbância ...

This study aimed to evaluate, in vitro, cytotoxicity of root canal sealers Densell Endo®, Pulp-Fill®, Endofill®, Sealer 26®, Pulp Canal Sealer® and GuttaFlow® after 12, 24 and 72 hours of contact time, using a endothelial cell line ECV-304. For the assessment of cell viability, used the MTT cytotoxicity test. For any cement were prepared 12 specimens that were divided into six groups according to the trademarks, four for each time. Created a control group that was not subjected to action of cement. To assess the effects of cements on endothelial cells, the specimens were placed in culture plate wells, incubated at 37°C with 5% CO2 and 100% humidity. MTT tests were performed, in quadruplicate, after 12, 24 and 72 contact hours of the samples with monolayers. Was used to test Two-Way Anova with Bonferroni Post Hoc test with significance level of 5%. In the analysis of 12 hours, was observed that the cement GuttaFlow® had a mean absorbance of 0,055, followed by Sealer 26® (average = 0,038). Cements Pulp Canal Sealer® and Densell Endo® had the same mean absorbance (0,031). The Pulp Fill® and Enfofill® were the cements with higher cytotoxicity (mean absorbance = 0,024 and 0,021, respectively). The control group had a mean absorbance of 0,158. In 24 hours it was observed that the cements Sealer 26® and GuttaFlow® had the highest average absorbance (0,041 and 0,037, respectively), followed by cement Pulp Canal Sealer® that had a mean absorbance of 0.035. Already cements Densell Endo® and Pulp Fill® showed means absorbance of 0,033 and 0,032, respectively. Cement Endofill showed an average of 0,026 and the control group, 0,086. When analyzed at 72 hours, the cement Pulp Canal Sealer® had an average absorbance of 0,049, followed by cement GuttaFlow® and Pulp Fill®, both with 0,048. Cements Densell Endo®, Sealer 26® and Endofill® showed respectively, averaging 0,044, 0,040 and 0,036. The control group differed significantly ...(AU)

Rastreabilidade das causas de não conformidades em meios de cultura / Traceability of the causes of non-compliance in culture media

O processo de produção de meios de cultura deve garantir a liberação do produto dentro das especificações requeridas em normas e legislações. Quando o produto apresentar resultado não conforme com as especificações, deve-se buscar a causa raiz do problema e implantar ações corretivas. A rastreabilidade das causas de não conformidades deve ser uma etapa de decisão rápida. Objetivando elaborar ferramentas da qualidade voltadas a esta rastreabilidade e verificar a sua aplicabilidade em estudos de casos,foram analisados manuais e registros de produção e controle dos produtos. Foi aplicada a metodologia de rainstorming, a produção e o controle foram mapeados e com o Diagrama de Causa e Efeito foi possível estabelecer os pontos críticos. As ferramentas da qualidade propostas foram Fluxogramas e Folhas de Verificação de Processos, cuja aplicabilidade foi avaliada em lotes de meios de cultura não conformes. Os resultados mostraram que as ferramentas foram capazes de indicar, localizar e confirmar as nãoconformidades e as suas origens. Porém, para a investigação aprofundada da causa torna-se necessário, além destas ferramentas, o conhecimento técnico em microbiologia, a pesquisa em literaturas e Brainstorming permanente, possibilitando tomada de decisãoconfiável em desvios da qualidade dos meios de cultura.

The process of production of culture media should ensure the release of the product within the specifications required by rules and laws. When the product does not produce results consistent with the specifications, you should seek the root cause of the problem and implement corrective actions. The traceability of the causes of non-conformities should be a stage of rapid decision. Aiming at producing quality tools focussed on traceability and verifying its applicability in case studies, manuals and records were analyzed for the production and control of products. The methodology of Brainstorming was used, the productionand control have been mapped and, with the Diagram of Cause and Effect, it was possible to establish the critical points. The quality tools proposed were flow charts and Verification Process sheets, whose applicability was evaluated in batches of noncompliant culture media. The results showed that the tools were able to indicate, locate and confirm the non-conformities and their origins. However, for a detailed case nvestigation, besides these tools, technical knowledge in microbiology, research in different literature and permanent Brainstorming, are necessary thus enabling reliable decision making related to gaps in the quality of culture media.

Estudo comparativo da citotoxicidade de cimentos obturadores sobre culturas de células endoteliais da linhagem ECV 304 / Comparative study of cytotoxicity of sealers on cultured endothelial cells line ECV 304

Este estudo teve como objetivo avaliar, in vitro, a citotoxicidade dos cimentos endodônticos Densell Endo®, Pulp-Fill®, Endofill®, Sealer 26®, Pulp Canal Sealer® e GuttaFlow® após 12, 24 e 72 horas de tempo de contato, utilizando-se uma linhagem de células endoteliais ECV-304. Para a avaliação da viabilidade celular, utilizou-se o teste de citotoxicidade MTT. Para cada cimento foram preparados 12 corpos de prova que foram distribuídos em seis grupos experimentais de acordo com as marcas comerciais, sendo quatro para cada tempo. Foi criado um grupo controle que não foi submetido à ação de cimento. Para avaliação do efeito dos cimentos sobre as células endoteliais, os corpos de prova foram inseridos nos poços da placa cultura, incubados a 37ºC em presença de 5% de CO2 e 100% de umidade. Os testes MTT foram realizados, em quadruplicata, após 12, 24 e 72 horas de contato das amostras com o tapete celular. Foi utilizada a prova Two-Way Anova com o teste Post Hoc de Bonferroni com nível de significância de 5%. Na análise de 12 horas, foi possível observar que o cimento GuttaFlow® apresentou média de absorbância de 0,055, seguido do Sealer 26® (média = 0,038). Os cimentos Pulp Canal Sealer® e Densell Endo® apresentaram a mesma média de absorbância (0,031). O Pulp Fill® e o Endofill® foram os cimentos que apresentaram maior citotoxicidade (média de absorbância = 0,024 e 0,021, respectivamente). O grupo controle apresentou média de absorbância de 0,158. Em 24 horas observou-se que os cimentos GuttaFlow® e Sealer 26® apresentaram as maiores médias de absorbância (0,041 e 0,037, respectivamente), seguidos pelo cimento Pulp Canal Sealer® que apresentou média de absorbância de 0,035. Já os cimentos Densell Endo® e Pulp Fill® apresentaram médias de absorbância de 0,033 e 0,032, respectivamente. O cimento Endofill® apresentou uma média de 0,026 e o grupo controle de 0,086. Quando analisados em 72 horas, o cimento Pulp Canal Sealer® obteve média de absorbância...

This study aimed to evaluate, in vitro, cytotoxicity of root canal sealers Densell Endo®, Pulp-Fill®, Endofill®, Sealer 26®, Pulp Canal Sealer® and GuttaFlow® after 12, 24 and 72 hours of contact time, using a endothelial cell line ECV-304. For the assessment of cell viability, used the MTT cytotoxicity test. For any cement were prepared 12 specimens that were divided into six groups according to the trademarks, four for each time. Created a control group that was not subjected to action of cement. To assess the effects of cements on endothelial cells, the specimens were placed in culture plate wells, incubated at 37°C with 5% CO2 and 100% humidity. MTT tests were performed, in quadruplicate, after 12, 24 and 72 contact hours of the samples with monolayers. Was used to test Two-Way Anova with Bonferroni Post Hoc test with significance level of 5%. In the analysis of 12 hours, was observed that the cement GuttaFlow® had a mean absorbance of 0,055, followed by Sealer 26® (average = 0,038). Cements Pulp Canal Sealer® and Densell Endo® had the same mean absorbance (0,031). The Pulp Fill® and Enfofill® were the cements with higher cytotoxicity (mean absorbance = 0,024 and 0,021, respectively). The control group had a mean absorbance of 0,158. In 24 hours it was observed that the cements Sealer 26® and GuttaFlow® had the highest average absorbance (0,041 and 0,037, respectively), followed by cement Pulp Canal Sealer® that had a mean absorbance of 0.035. Already cements Densell Endo® and Pulp Fill® showed means absorbance of 0,033 and 0,032, respectively. Cement Endofill showed an average of 0,026 and the control group, 0,086. When analyzed at 72 hours, the cement Pulp Canal Sealer® had an average absorbance of 0,049, followed by cement GuttaFlow® and Pulp Fill®, both with 0,048. Cements Densell Endo®, Sealer 26® and Endofill® showed respectively, averaging 0,044, 0,040 and 0,036. The control group differed significantly...

Produção semissólida de Metarhizium anisopliae e Beauveria bassiana em diferentes substratos e efeito da radiação ultravioleta e da temperatura sobre propágulos desses entomopatógenos / Semi-solid production of Metarhizium anisopliae (Metsch) Sorok and Beauveria bassiana (Bals) Vuill on different media and the effects of ultraviolet radiation and temperature on the infective propagules of these fungi

O trabalho teve os seguintes objetivos: 1) avaliar diferentes substratos para a produção semissólida dos fungos Metarhizium anisopliae e Beauveria bassiana; 2) verificar a tolerância dos conídios produzidos ao efeito da radiação ultravioleta e da temperatura; e 3) avaliar a patogenicidade dos conídios a Diatraea saccharalis. Para ambos os fungos, foram utilizadas 6 repetições para cada tratamento: amido de milho, arroz integral, arroz parboilizado tipo1, arroz tipo 1 e 2, aveia em flocos, canjiquinha, farelo de trigo, farinhas de mandioca crua, de milho amarela e de trigo especial, fubá, milho em grãos, polvilho azedo, soja em grãos, trigo moído e turfa. Os conídios foram quantificados em câmara de Neubauer e a determinação da viabilidade foi realizada através da observação em microscópio, dos conídios germinados e não germinados, após espalhamento da suspensão fúngica em placas de Petri contendo BDA. No ensaio com radiação os fungos foram expostos à radiação por 25 e 50 segundos e foi considerado um tratamento sem exposição; para temperatura os fungos foram expostos a 20, 25, 30 e 35o C. Utilizando a torre de Potter, 2 mL de cada suspensão fúngica dos tratamentos foram pulverizados em lagartas de D. saccharalis. As maiores concentrações de conídios de M. anisopliae e B. bassiana foram encontradas nos tratamentos com arroz parboilizado tipo 1, arroz tipo 1 e 2, farinha de milho amarela, fubá e trigo moído e a viabilidade dos conídios produzidos superou os 94%. Quanto maior o tempo de exposição à radiação menor foi o número de conídios viáveis; também ocorreu perda significativa da viabilidade dos conídios quando expostos à temperatura de 35o C. Os fungos foram patogênicos para D. saccharalis.

The present study was aimed to evaluate different (semi-solid) media for the production of Metarhizium anisopliae and Beauveria bassiana propagules, and to evaluate the tolerance of these propagules to ultraviolet radiation and temperature. The experiments were performed at the Biological Control Laboratory of the Instituto Biológico at Campinas, São Paulo, Brazil. For both fungi, 6 repetitions were performed for each of the 17 treatments: corn starch, full rice, parboiled rice, type-1 rice, type-2 rice, oat flakes, canjiquinha [grits], wheat flour, raw cassava flour, yellow corn flour, special wheat flour, corn flour, corn in grains, cassava starch, soy in grains, crushed wheat, and turf. The viability analysis was done in plastic plates containing BDA. For the bioassays involving exposure to ultraviolet light and temperature, BDA was also used for viability analysis, and each treatment was exposed to the UV radiation for 0, 25 and 50 seconds, the temperature exposure being at 20, 25, 30 and 35º C. Using a Potter tower, 2 mL of fungus suspension from each treatment was inoculated to the Diatraea saccharalis caterpillars. Regarding the sporulation, the largest concentrations of M. anisopliae and B. bassiana were found for the treatments with parboiled rice, type-1 rice, type-2 rice, yellow corn flour, corn flour and crushed wheat. The viability of all treatments was superior to 94.00%. Also, the longer the duration of the exposition to the UV, the 2Universidade Estadual Paulista, Faculdade de Ciências Agronômicas, Botucatu, SP, Brasil.

Patógenos periodontais: comparação entre cultura bacteriana e PCR em tempo real para teste diagnóstico / Periodontal pathogens: comparison between culture and real time PCR for diagnostic assay

A correta distinção dos microrganismos envolvidos na patogênese da doença periodontal, torna-se importante para o entendimento da sua progressão e adequado plano de tratamento. Métodos de identificação e quantificação foram desenvolvidos e são considerados extremamente sensíveis e precisos na caracterização das espécies bacterianas. Com isso a presente revisão mostra trabalhos existentes na literatura, os quais analisaram comparativamente os métodos de Reação em Cadeia da Polimerase em tempo real (qPCR) e cultura bacteriana com objetivo na identificação de periodontopatógenos. Através do método de cultura bacteriana é possível a identificação de novos microrganismos e realização de testes de sensibilidade a antibióticos. O qPCR é um teste microbiológico que identifica e quantifica espécies bacterianas, através da amplificação gênica de fragmentos de DNA pré-determinados, com alta sensibilidade, especificidade e dispendem menor tempo do operador quando comparados a cultura bacteriana. Assim para a escolha de um determinado teste diagnóstico deve-se levar em consideração não somente a sua precisão na identificação dos micro-organismos, mas também a relação custo-beneficio.

The correct distinguishment of microorganisms involved in the periodontal disease pathogen, it is important in the understanding of its progression and adequate treatment planning. Considering this fact, some molecular methods of identification and quantification were developed and are extremely sensitive and precise in the characterization of different bacteria species. The present study aimed to realize a literature review, including studies that realized a comparative analysis between bacterialculture and real time PCR methods in the identification of pathogens. The bacterial culture method can possibly identify new microorganisms and realize antibiotics sensitivity tests. The real time PCR is a microbiologic test that identifies and quantifies bacterial species, through gene amplification of predetermined DNA fragments, with high sensitivity and specificity, and need a shorter operation time of the operator when compared to thebacterial culture method. In this way, to determine a specific diagnostic test, should be considered not only its precision in the identification of microorganisms, but the cost-benefit relationship as well.

Desenvolvimento, padronização e avaliação da técnica de microcultura para o crescimento primário e proliferação de Leishmania spp, no diagnóstico etiológico das leishmanioses / Development, standardization and evaluation of microculture technical for primary growth and proliferation of Leishmania spp, in etiological diagnosis of leishmaniasis

Os métodos imunológicos são amplamente empregados no diagnóstico da leishmaniose visceral americana (LVA), porém apresentam problemas relacionados a reações cruzadas com outros agentes e persistência de anticorpos mesmo após o tratamento. A demonstração da presença do agente causal a partir da utilização de métodos diretos, especialmente o cultivo, embora possa ser considerado como procedimento de referência, apresenta baixa sensibilidade e demanda dias e até semanas para a sua finalização. No presente estudo objetivou-se: Avaliar a viabilidade da técnica de microcultura (TMC) para o crescimento primário de Leishmania spp; avaliar a sensibilidade da TMC em comparação à técnica tradicional de cultura (TTC) e às técnicas sorológicas utilizadas no diagnóstico da leishmaniose visceral canina (LVC), utilizando o exame direto como referência. Foram realizados: a) Cultivo de cepas de referência para observar a viabilidade da TMC e quantificação do inóculo mínimo para proliferação; b) utilização de amostras provenientes de cães do Centro de Controle de Zoonozes do município de Bauru, onde foram utilizados: sangue total para a realização do teste imunocromatográfico, soro para realização de reação de imunofluorescência indireta (RIFI) e ensaio imunoenzimático (ELISA), aspirado de baço, de linfonodo e pele, para semeadura na TMC e na TTC e para a realização de exame direto. Foram constituídos três grupos: Grupo A - Padronização das condições de cultivo com amostras de 65 animais; Grupo B - avaliação da TMC frente as demais técnicas diagnósticas utilizando amostras de 135 animais; Grupo C - cultivo de diferentes tecidos utilizando amostras de 70 animais incluídos no grupo B. No cultivo de cepas de referências, foi observada proliferação a partir do inóculo de um parasita. A TMC apresentou maior positividade que a TTC, que a RIFI e que o exame direto, este último utilizado como referência. A TMC apresentou maior concordância frente aos...

Detection of Streptococcus agalactiae colonization in pregnant women by using combined swab cultures: cross-sectional prevalence study / Detecção de colonização por Streptococcus agalactiae em gestantes por meio da cultura de swabs combinados: estudo transversal de prevalência

CONTEXT AND OBJECTIVE: Maternal Streptococcus agalactiae colonization and early-onset neonatal sepsis have aroused interest in the worldwide literature. Streptococcal neonatal disease is associated with significant morbidity and mortality in the perinatal period, especially among premature neonates. The aim of this study was to assess the prevalence of maternal streptococcal colonization by using combined swab cultures, compared with swab collection from a single site. DESIGN AND SETTING: Cross-sectional study at Faculdade de Medicina de Botucatu, Universidade Estadual Paulista. METHODS: Samples were obtained from 405 patients at gestational ages of 35 to 37 weeks. Swabs from the perianal (rectal) region, vaginal introitus and upper lateral vaginal vault were cultured in Todd-Hewitt selective broth. Colonies suggestive of Streptococcus agalactiae were subjected to the catalase and CAMP (Christie, Atkins, Munch-Petersen) tests. To evaluate the positivity of combined swab cultures, Tukey's test was used for comparison of proportions. RESULTS: The prevalence of streptococcal colonization was 25.4 percent. Among the patients with positive cultures, 28.1 percent had this at only one collection site, 24.2 percent simultaneously at two sites and 47.5 percent at all three sites. Associating the swabs from two collection sites significantly increased streptococcal isolation, compared with a single swab (P < 0.05), except for perianal (rectal) collection. Use of combined swabs from three collection sites showed statistically higher isolation rates. CONCLUSION: In combined swab cultures collected from three collection sites, the prevalence of maternal Streptococcus agalactiae colonization was higher than in swabs collected from a single site.

CONTEXTO E OBJETIVO: Colonização materna por Streptococcus agalactiae e sepse neonatal de início precoce têm despertado interesse na literatura mundial. A doença estreptocócica neonatal está associada com significantes índices de morbidade e mortalidade perinatal, principalmente nos recém-nascidos prematuros. O objetivo deste estudo foi avaliar a prevalência de colonização estreptocócica materna por meio da coleta de swabs combinados, comparada com coleta de swab num único local. TIPO DE ESTUDO E LOCAL: Estudo transversal na Faculdade de Medicina de Botucatu, Universidade Estadual Paulista. MÉTODOS: Foram obtidas amostras de 405 pacientes com idade gestacional entre 35 e 37 semanas. Swabs da região perianal retal, introito vaginal e terço distal da parede vaginal foram cultivados em caldo seletivo de Todd-Hewitt. Colônias sugestivas de Streptococcus agalactiae foram submetidas aos testes de catalase e CAMP (Christie, Atkins, Munch-Petersen). Para avaliação da positividade de cultura de swabs combinados foi empregado o teste de Tukey para comparação de proporções. RESULTADOS: A prevalência de colonização estreptocócica foi de 25,4 por cento. Dentre as pacientes com cultura positiva, 28,1 por cento tiveram positividade em apenas um local de coleta, 24,2 por cento em dois locais simultaneamente e 47,5 por cento nos três locais avaliados. Associação de swabs de dois locais de coleta aumentou significativamente o isolamento estreptocócico, comparado a único swab (P < 0,05), exceto para coleta perianal. (retal) Utilização de swabs combinados de três locais de coleta mostrou taxas de isolamento estatisticamente superiores. CONCLUSÃO: Na cultura de swabs combinados de três locais de coleta houve maior prevalência de colonização materna por Streptococcus agalactiae, comparada com coleta de swabs em um único local.