RESUMEN
A leptospirose é uma zoonose que causa sérios danos à saúde dos animais. Por se tratar de uma das doenças de maior impacto econômico, o correto diagnóstico e vigilância epidemiológica são fundamentais para o controle da infecção. Objetivou-se padronizar e validar o teste de ELISA indireto empregando proteínas de membrana externa (PME) do sorovar Hardjo como antígeno (ELISA-PME/Hardjo), tendo o teste de Soroaglutinação Microscópica (SAM) como referência. O ELISA-PME/Hardjo foi padronizado utilizando-se amostras de soro de 15 bovinos positivos e 15 negativos no exame de SAM. A PME/Hardjo foi avaliada nas concentrações de 0,35 µg/µL, 0,17 µg/µL, 0,08 µg/µL e 0,04 µg/µL. As amostras de soro foram testadas nas diluições 1:50, 1:100, 1:500 e 1:1000, e o conjugado anti IgG 1:5000 e 1:10000. A validação do teste foi feita utilizando-se 218 amostras de soro bovino. A padronização do ELISA-PME/Hardjo indicou que a melhor concentração protéica para sensibilização da placa foi de 0,08 µg/µL, diluição do anticorpo primário 1:50 e do conjugado anti-IgG 1:5000. Das 218 amostras submetidas ao teste de SAM, 86 (39%) foram positivas, e 132 (61%) negativas. Já o ELISA-PME/Hardjo identificou 121 (55%) amostras positivas e 97 (45%) negativas. A sensibilidade foi de 100% e especificidade 73%. A comparação dos testes de SAM e ELISA demonstrou concordância de 0,83% e índice Kappa de 0,68 (p<0,0001). O ELISA-PME/Hardjo mostrou ser um teste sensível, indicando seu uso potencial como exame de triagem no diagnóstico da leptospirose bovina.
Leptospirosis is a zoonotic disease that causes serious health risks to animals. It is a disease of high economic impact, therefore the correct diagnosis and surveillance are essential to control infection. The aim of this study was to standardize and validate an indirect ELISA using outer membrane proteins (OMPs) of serovar Hardjo as the antigen of the test (ELISA-OMP/Hardjo), using the microscopic agglutination test (MAT) as a reference. The ELISAOMP/Hardjo was standardized using 15 serum samples from positive animals and 15 negative in the MAT. The OMP / Hardjo was evaluated at concentrations of 0.35 µg / µL, 0.17 µg / µL, 0.08 µg / µL and 0.04 µg / µL. Serum samples were tested at dilutions 1:50, 1:100, 1:500, 1:1000, and anti IgG conjugate in 1:5000 and 1:10000. The validation of the test was performed using 218 serum samples. The standardization of ELISA-OMP/Hardjo indicated that the best protein concentration for sensitization of the plate was 0.08 µg / µL, 1:50 dilution of primary antibody and conjugated anti-IgG 1:5000. Of the 218 samples tested in MAT, 86 (39%) were positive and 132 (61%) negative. ELISA-OMP/Hardjo already identified 121 (55%) positive samples and 97 (45%) negative. The sensitivity was 100% and specificity 73%. Comparison of MAT and ELISA tests showed concordance of 0.83% and Kappa of 0.68 (p <0.0001). The ELISA-OMP/Hardjo proved to be a sensitive test, indicating its potential as a screening tool in the diagnosis of bovine leptospirosis.