Gene de virulência oipA de Helicobacter pylori como marcador molecular de gastropatias severas / Helicobacter pylori oipa virulence gene as a molecular marker of severe gastropathies

ABSTRACT Background: Helicobacter pylori is an etiologic agent of gastroduodenal diseases. The microorganism, considered a type I carcinogen, affects about 50% of the global population. H. pylori virulence factors are determinant for the clinical outcome of the infection. The outer inflammatory protein A (oipA) gene encodes an outer membrane adhesin and is related to severe gastropathies, such as gastric cancer. Objective: The aim of this study was to evaluate the association of the oipA gene with the severity of gastroduodenal diseases in dyspeptic patients in region Central Brazil. Methods: The polymerase chain reaction (PCR) was used to determine the presence of H. pylori. Samples positives were used for molecular screening of the oipA gene. Gastropathies were categorized as non-severe and severe diseases. Results: Approximately 68% of patients had H. pylori and 36% were infected with H. pylori oipA+ strains. Infection was significantly associated in patients aged over 44 years (P=0.004). However, there was no association between oipA and patients' age (P=0.89). Approximately 46% of patients infected with oipA+ strains had some severe illness. Gastric adenocarcinoma was the most frequent severe gastropathy. The H. pylori oipA genotype was inversely associated with the severity of gastroduodenal diseases (OR=0.247, 95%CI: 0.0804-0.7149 and P=0.007). Conclusion: The characterization of possible molecular markers will contribute to personalized medicine, impacting the prognosis of patients.

RESUMO Contexto: Helicobacter pylori é um agente etiológico de doenças gastroduodenais. O microrganismo, considerado cancerígeno tipo I, afeta cerca de 50% da população mundial. Os fatores de virulência do H. pylori são determinantes para o desfecho clínico da infecção. O gene da proteína inflamatória externa A (oipA) codifica uma adesina da membrana externa e está relacionado a gastropatias severas, como o câncer gástrico. Objetivo: O objetivo deste estudo foi avaliar a associação do gene oipA com a gravidade das doenças gastroduodenais em pacientes dispépticos na região Brasil Central. Métodos: A reação em cadeia da polimerase (PCR) foi utilizada para determinar a presença de H. pylori. Amostras positivas foram utilizadas para triagem molecular do gene oipA. As gastropatias foram categorizadas como doenças não severas e severas. Resultados: Aproximadamente 68% dos pacientes apresentaram H. pylori e 36% estavam infectados com cepas H. pylori oipA+. A infecção foi significativamente associada em pacientes com idade superior a 44 anos (P=0,004). No entanto, não houve associação entre oipA e a idade dos pacientes (P=0,89). Aproximadamente 46% dos pacientes infectados com cepas oipA+ tiveram alguma doença severa. O adenocarcinoma gástrico foi a gastropatia severa mais frequente. O genótipo oipA de H. pylori foi inversamente associado à gravidade das doenças gastroduodenais (OR=0,247, IC95%: 0,0804-0,7149 P=0,007). Conclusão: A caracterização de possíveis marcadores moleculares contribuirá para a medicina personalizada, impactando no prognóstico dos pacientes.

Una vacuna de vesículas de membrana externa de Vibrio cholerae es aún una promesa: Caracterización proteómica / Outer membrane vesicle vaccine from Vibrio cholerae is still a promise: Proteomic characterization

Las epidemias de cólera afectan a un gran número de países africanos, asiáticos y del Caribe. Los cambios climatológicos y las constantes migraciones hacen que esta enfermedad se extienda, por lo que resulta necesario disponer de vacunas protectoras. En el presente trabajo se caracterizó una nueva vacuna de vesículas de membrana externa (VMEs) obtenidas de Vibrio cholerae O1 biotipo El Tor serotipo Ogawa cepa C7258, en el Instituto Finlay de vacunas (Cuba), a través de métodos proteómicos. Se identificaron 53 proteínas presentes en las VME (4 proteínas por banda electroforética) separadas por electroforesis unidimensional (1D) y digeridas con tripsina. Los fragmentos obtenidos fueron separados por cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) acoplada a espectrometría de masa, secuenciados e identificados mediante bases de datos de proteínas Swiss-Prot y TrEMBL. El patrón proteico obtenido presentó algunas de las proteínas (12 proteínas citoplasmáticas y 5 proteínas de membrana externa) sugeridas dentro del proteoma de buena calidad para candidatos vacunales. Se estudiaron las mejores condiciones para la separación de las proteínas a través de electroforesis bidimensional. Las VME evaluadas cuentan con una composición fundamentada en proteínas necesarias para garantizar una respuesta inmune que proteja contra Vibrio cholerae O1 biotipo El Tor serotipo Ogawa.

Cholera epidemics affect a large number of African, Asian and Caribbean countries. The climate changes and the constant migrations cause this disease to spread, making it is necessary to obtain protective vaccines. In the present work, a new vaccine of outer membrane vesicles (OMV) from V. cholerae O1 El Tor biotype Ogawa serotype strain C7258 at Finlay Institute of vaccines (Cuba) was characterized by proteomic methods. A total of 53 proteins present in the OMV (approximate ratio of 4 proteins by electrophoresis band) were identified, separated by one dimension electrophoresis and digested by tripsin method. The fragments were separated by high performance liquid chromatography (HPLC) coupled to mass spectrometry, sequenced and identified, using Swiss-Prot and TrEMBL protein databases. The pattern showed some proteins (12 cytoplasmic proteins and 5 outer membrane proteins) suggested within the highest quality proteome for vaccine candidate. The best conditions for proteins separation by two dimension electrophoresis were studied. The OMV composition was based on proteins described to the immunity response and protection against V. cholerae O1 El Tor biotype Ogawa serotype.

As epidemias de cólera afetam um grande número de países africanos, asiáticos e caribenhos. As mudanças climáticas e as constantes migrações fazem com que esta doença se espalhe, portanto é necessário ter vacinas protectoras. No presente trabalho, uma nova vacina de vesículas de membrana externa (VMEs) obtidas de Vibrio cholerae 01 biotipo El Tor sorotipo Ogawa cepa C7258, no Instituto de Vacinas Finlay (Cuba), através de métodos proteômicos. Foram identificadas 53 proteínas presentes nas VME (4 proteínas por banda eletroforética) separadas por eletroforese unidimensional (1D) e digeridas com tripsina. Os fragmentos obtidos foram separados por cromatografia de alta resolução (HPLC) acoplada a espectrometria de massa, sequenciados e identificados usando bancos de dados de proteínas Swiss-Prot e TrEMBL. O padrão proteico obtido apresentou algumas das proteínas (12 proteínas citoplasmáticas e 5 proteínas de membrana externa) sugeridas dentro do proteoma de boa qualidade para candidatos vacinais. As melhores condições para a separação de proteínas através de eletroforese bidimensional foram estudadas. As VME avaliados possuem uma composição baseada em proteínas necessárias para garantir uma resposta imune que proteja contra Vibrio cholerae O1 biotipo El Tor sorotipo Ogawa.

Efficacy of bacterin-, outer membrane protein- and fimbriae extract-based vaccines for the control of Salmonella Enteritidis experimental infection in chickens / Eficácia de bactéria inativada (bacterina), proteína da membrana externa e extrato de fimbrias no controle de infecção experimental por Salmonella Enteritidis (SE) em galinhas

The efficacy of three vaccines was evaluated in chickens for the control of experimental infection with Salmonella Enteritidis (SE) phage type 4. The vaccines were produced with bacterin, outer membrane proteins (OMP) and fimbriae crude extract (FE). The chickens were vaccinated intramuscularly with two doses of each vaccine at 12 and 15 weeks of age. The chickens were then orally challenged with 10(9) CFU/chicken Salmonella Enteritidis phage type 4 at 18 weeks of age. Fecal swabs were performed for the recovery of shedding SE, and SE was recovered from the liver and spleen. Additionally, antibody titers were measured in the serum by micro-agglutination test. The results indicated that the vaccine produced with bacterin yielded better results and resulted in reduction of fecal shedding and organ invasion by SE after oral challenge, although no vaccine was 100% effective for the control of SE experimental infection.

A eficácia de três vacinas de Salmonella Enteritidis fagotipo 4, produzidas na forma de bacterina, proteínas de membrana externa (OMP) e extrato bruto de fímbrias (FE) foi avaliada para proteção de aves infectadas experimentalmente. As aves foram vacinadas por via intramuscular com duas doses de cada vacina as 12 e 15 semanas de idade e desafiadas com 10(9) UFCs de Salmonella Enteritidis fagotipo 4 às 18 semanas de idade, por via oral. A eficácia foi determinada através do reisolamento da bactéria nas fezes e no fígado e baço, e os anticorpos foram mensurados no soro. Os resultados demonstraram que a vacina produzida com a bacterina foi mais eficaz em comparação às outras vacinas examinadas, para reduzir a excreção fecal e a invasão de órgãos após o desafio por SE.