Genes related to maintenance of autophagy and successful aging / Genes relacionados à manutenção da autofagia e envelhecimento bem-sucedido

ABSTRACT Considering aging as a phenomenon in which there is a decline in essential processes for cell survival, we investigated the autophagic and proteasome pathways in three different groups: young, older and oldest old male adults. The expression profile of autophagic pathway-related genes was carried out in peripheral blood, and the proteasome quantification was performed in plasma. No significant changes were found in plasma proteasome concentrations or in correlations between proteasome concentrations and ages. However, some autophagy- and/or apoptosis-related genes were differentially expressed. In addition, the network and enrichment analysis showed an interaction between four of the five differentially expressed genes and an association of these genes with the transcriptional process. Considering that the oldest old individuals maintained both the expression of genes linked to the autophagic machinery, and the proteasome levels, when compared with the older group, we concluded that these factors could be considered crucial for successful aging.

RESUMO Considerando o envelhecimento como um fenômeno em que há um declínio nos processos essenciais a sobrevivência celular, investigamos as vias autofágica e proteassômica em três grupos: jovens, idosos e longevos. O perfil de expressão dos genes relacionados à via autofágica foi analisado em sangue periférico, e a quantificação do proteassoma realizada em plasma. Não foram encontradas alterações significativas nas concentrações plasmáticas de proteassoma ou na correlação entre as concentrações de proteassoma e as idades. No entanto, alguns genes relacionados a autofagia e / ou apoptose foram expressos diferencialmente. Além disso, as análises de rede e de enriquecimento mostraram uma interação entre quatro dos cinco genes diferencialmente expressos e a associação desses ao processo transcricional. Considerando que os indivíduos longevos mantiveram tanto a expressão de genes ligados à maquinaria autofágica, quanto os níveis de proteassoma quando comparados aos idosos, concluímos que esses fatores poderiam ser considerados cruciais para o envelhecimento bem-sucedido.

Análise da expressão imunoistoquímica de regy e de proteínas envolvidas na regulação da apoptose em carcinomas epidermoides de língua oral / Analysis of the immunohistochemical expression of regy and of proteins involved in the regulation of apoptosis in oral tongue squamous cell carcinomas

O câncer na cavidade oral é uma das lesões malignas mais frequentes na população mundial. Como o processo de desenvolvimento das neoplasias malignas remete a danos que promovem um desequilíbrio na regulação da divisão e morte celular, nos últimos anos, diversos estudos foram realizados com o intuito de verificar a influência desses danos no comportamento global das células e na evolução da doença. Nesse contexto, pesquisas recentes mostraram que alterações na expressão de REG podem desempenhar um importante papel na progressão tumoral de várias neoplasias malignas, por interferir na regulação da apoptose. Diante disso, o objetivo desse trabalho foi investigar a expressão imunoistoquímica dos marcadores REG, p53, MDM-2, Bcl-2 e Bax em carcinomas epidermoides de língua (CELs) oral, com a finalidade de promover uma análise comparativa da imunoexpressão destas proteínas com os parâmetros clínico-patológicos de agressividade da lesão, no intuito de identificar se o REG contribui para a progressão do tumor e se interfere na expressão das proteínas relacionadas a apoptose. Para tanto, foram coletadas informações clínicas de 58 pacientes acometidos por CELs. Em seguida, foi realizada análise histopatológica e imunoistoquímica dos marcadores supracitados, em amostras de material biológico parafinado da lesão. Os resultados mostraram que os tumores com metástase nodal e de alto grau histopatológico de malignidade apresentavam percentuais significativamente menores de REG (p<0,05). Em adição, a análise da expressão de p53, MDM-2 e Bax nos diferentes parâmetros clínico-patológicos avaliados nesse trabalho, não revelou diferenças significativas nos percentuais de imunopositividade desses marcadores. Com relação ao Bcl-2, foi visto que tumores de alto grau de malignidade e com óbitos relacionados a doença apresentavam percentual significativamente menor de positividade dessa proteína (p<0,05). Por fim, o teste de correlação de Spearman demonstrou existir fraca correlação positiva, estatisticamente significativa, entre os percentuais de REG e das proteínas MDM-2 e Bcl-2. Baseado nesses achados, pode-se concluir que a redução da expressão de REG parece contribuir para a progressão do CEL oral e pode influenciar na expressão das proteínas relacionadas a regulação da apoptose (AU).

Cancer of the oral cavity is one of the most common malignancies in the world. Since the development of malignant neoplasms is related to damage that causes an imbalance in the regulation of cell division and cell death, many studies have been conducted in recent years to verify the influence of this damage on overall cell behavior and on the progression of the disease. Within this context, recent studies suggest that changes in the expression of REG play an important role in the progression of different malignant tumors by interfering with the regulation of apoptosis. Therefore, the objective of the present study was to investigate the immunohistochemical expression of REG, p53, MDM-2, Bcl-2 and Bax in oral tongue squamous cell carcinoma (OTSCC), correlating the immunoexpression of these proteins with clinicalpathological parameters of tumor aggressiveness, in order to determine whether REG contributes to tumor progression and interferes with the expression of apoptosisrelated proteins. For this purpose, the clinical data of 58 patients with OTSCC were collected and paraffin-embedded tumor specimens were submitted to histopathological analysis and immunohistochemistry using the markers cited above. The results showed significantly higher expression of REG (p<0.05) in low-grade tumors and without lymph node metastases. In addition, comparison of the expression patterns of p53, MDM-2 and Bax according to the clinical-pathological parameters studied revealed no significant differences in the percentage of immunostaining for these markers. Regarding Bcl-2, a significantly lower percentage of immunostaining for this protein was observed in tumors with a high grade of malignancy and tumors associated with deaths related to the disease (p<0.05). Finally, Spearman's correlation test demonstrated a significant weak positive correlation between the percentages of REG and of MDM-2 and Bcl-2. These findings suggest that the reduced expression of REG contributes to the progression of OTSCC and may influence the expression of proteins related to the regulation of apoptosis (AU).

Avaliação do fator CIITA como potencial adjuvante molecular para vacinas e imunoterapias / Evaluation of CIITA factor as a potential molecular adjuvant for vaccines and immunotherapies

O fator CIITA é a proteína responsável por controlar a transcrição de genes do complexo principal de histocompatibilidade de classe II (MHC II) envolvidos na apresentação antigênica a linfócitos T CD4+. A expressão desta proteína é complexa e célula-específica, dependendo de mecanismos de regulação transcricionais e póstranscricionais. Com o intuito de investigar o potencial do fator CIITA como adjuvante molecular, no presente estudo desenvolvemos e validamos sistemas de transferência gênica capazes de promover a eficiente expressão de CIITA em vários tipos celulares. Além disso, investigamos a regulação pós-traducional deste fator em células não hematopoéticas. Desta forma, foram produzidos um vetor plasmidial e um vetor lentiviral, ambos carreando a sequência do fator CIITA humano desenhada in silico visando a eliminação de elementos cis-reguladores, e otimizada para eficiente expressão em células humanas. A transfecção/transdução de três linhagens de células humanas não hematopoéticas resultou na eficiente expressão de CIITA com localização nuclear apropriada. Células expressando CIITA apresentaram síntese de novo do MHC II, confirmando a funcionalidade da proteína e validando ambos os vetores para a análise futura da atividade adjuvante do CIITA em imunizações gênicas. Ensaios preliminares de inoculação de explantes de pele humana com o vetor lentiviral evidenciaram a eficiente transdução e expressão do CIITA exógeno em células primárias. Em seguida, células dendríticas (DCs) derivadas de monócitos de indivíduos saudáveis ou infectados com HIV-1 foram transduzidas com o vetor lentiviral para confirmar a expressão do CIITA em células primárias e avaliar a aplicação desse sistema adjuvante no aprimoramento da vacina de DCs anti-HIV. DCs de indivíduos saudáveis ou infectados foram transduzidas com sucesso pelo lentivírus, o qual induziu uma produção prolongada do mRNA codificando CIITA. Entretanto, os vetores lentivirais induziram um...

The CIITA factor is a protein responsible for controlling the transcription of major histocompatibility complex class II (MHC II) genes involved on antigen presentation to CD4+ T helper cells. The expression of this transcription factor is complex and differs in various cell types depending on transcriptional and post-transcriptional regulatory mechanisms. In order to investigate the CIITA factor potential as molecular adjuvant, here we developed and validated two gene delivery systems capable of promoting efficient CIITA expression in various human cell types. Additionally, we applied the delivery systems to investigate the post-translational regulation of this factor in nonimmune cells. A DNA plasmid and a lentiviral vector were produced, both carrying the human CIITA DNA sequence in silico designed to avoid cis-regulatory elements, and genetic optimized for expression efficacy in human cells. Transfection or transduction of three different non-immune human cell lines resulted in efficient CIITA expression with proper nuclear localization. The CIITA-expressing cells presented de novo MHC II molecules expression confirming the functionality of the exogenous protein, and validating both delivery systems for the future analysis of the CIITA adjuvant activity in genetic immunizations. Preliminary assays involving the inoculation of the lentiviral vector into human skin explants showed efficient transduction and expression of exogenous CIITA in primary cells. Next, monocyte-derived dendritic cells (DCs) from healthy individuals and HIV-1-infected patients were transduced with the lentiviral vector to confirm the exogenous CIITA expression in primary human cells and also evaluate the applicability of this adjuvant system to improve the DC-based vaccines against HIV. DCs from healthy and infected individuals were successfully transduced by the lentivirus, which induced a sustained CIITA mRNA production. However, the vector particles by themselves induced an...

Carfilzomib en el tratamiento de mieloma múltiple: revisión sistemática de la literatura y experiencia colombiana basada en RIPS / Carfilzomib for the Treatment of Multiple Myeloma: Systematic Review of the Literature and Colombian Experience Based on RIPS / Carfilzomib no tratamento do mieloma múltiplo: revisão da literatura e da experiência colombiana baseada em RIPS

Introducción: El mieloma múltiple es un tumor maligno y progresivo de las células B asociado a lesiones osteolíticas, inmunodeficiencia y disfunción renal que ha sido tratado desde 2008 con bortezomib con el cual se logró un aumento del tiempo de sobrevida de los pacientes, sin embargo su uso se vio limitado por efectos adversos dependientes de la dosis, en especial la neuropatía periférica dolorosa. Recientemente ha entrado en uso carfilzomib (agente inhibidor de proteosoma de segunda generación) aprobado por la FDA en 2012 como agente único para tratamiento de enfermedad refractaria y recaídas de mieloma múltiple. Objetivo: Realizar una revisión de la literatura y determinar la experiencia colombiana con el medicamento carfilzomib teniendo en cuenta las estadísticas nacionales consignadas en los registros individuales de prestación de servicios de salud. Además se describe la situación de un caso clínico. Metodología: La revisión se hizo con base en literatura indexada en PubMed; como criterio de inclusión se tuvo en cuenta que los artículos a revisar fueran estudios clínicos de fase 2 y 3 de carfilzomib en manejo de mieloma múltiple Respecto a la experiencia colombiana se identificaron 37 pacientes colombianos con mieloma múltiple diagnosticado entre 2003 y 2012 y a quienes se hubiera prescrito carfilzomib, teniendo en cuenta información proporcionada por Biotoscana. Resultados: En total se localizaron 8 estudios clínicos con asignación al azar que evidencian efectos adversos no hematológicos como fatiga (367 de los 678 pacientes, 54%), y náusea (323 pacientes, 48%). En el caso de los RIPS, de los 37 pacientes, 22 pacientes recibieron de 1 a 8 ciclos de carfilzomib (promedio 3.0, mediana 3). Se evaluó la respuesta clínica en 9 de ellos, encontrándose 4 pacientes (22%) en respuesta parcial muy buena, 4 pacientes (22%) en respuesta parcial, 1 paciente (6%) con enfermedad estable. Conclusiones: Se encontró diferencia entre los efectos adversos que se reportan en Colombia y los que se han reportado globalmente, predominando en nuestros pacientes la fatiga; asimismo se concluye que la experiencia con nuevos medicamentos no ha sido suficientemente documentada. [Castañeda C, Pantoja MC, Montaño L, Rosselli D. Carfilzomib en el tratamiento de mieloma múltiple: revisión sistemática de la literatura y experiencia colombiana basada en RIPS. MedUNAB 2015; 17(2):99-106].

Introduction: Multiple myeloma is a B-cell malignant and progressive tumor, associated with osteolytic lesions, immunodeficiency and renal dysfunction, that has been treated since 2008 with Bortezomib, which achieved an increase in patients survival, however its use was limited due to dose dependent adverse effects, especially painful peripheral neuropathy, it has recently come into use Carfilzomib (a second generation proteasome inhibitor agent) approved by the FDA in 2012 as the only agent for treatment of refractory disease and relapsing of multiple myeloma. Objective: To conduct a literature review and determine the Colombian experience with the drug Carfilzomib, considering national statistics contained in the individual records of health service delivery, plus the status of a case is described. Methodology: for the review was considered literature indexed in PubMed, as an inclusion criterion was considered clinical studies Phase 2 and 3 that reviewed Carfilzomib in handling multiple myeloma. Regarding the Colombian experience, taking information provided by Biotoscana, 37 multiple myeloma Colombian patients diagnosed between 2003 and 2012 and who had been prescribed Carfilzomib were identified. Results: A total of eight randomized trials shown on hematologic adverse effects such as fatigue (367 of 678 patients, 54%), and nausea (323 patients, 48%). For the RIPS of 37 patients, 22 patients received 1 to 8 cycles Carfilzomib (3.0 average, median 3). Clinical response in 9 of them, 4 patients (22%) very good partial response, 4 patients (22%) partial response, 1 patient (6%) with stable disease was assessed. Conclusions: We found difference between the side effects reported in Colombia from the ones who have been reported globally, fatigue prevails in our patients, also experience with new drugs has not been sufficiently documented. [Castañeda C, Pantoja MC, Montaño L, Rosselli D. Carfilzomib for the Treatment of Multiple Myeloma: Systematic Review of the Literature and Colombian Experience Based on RIPS. MedUNAB 2015; 17(2):99-106].

Introdução: O mieloma múltiplo é um tumor maligno e progressivo das células B associado com lesões osteolíticas, imunodeficiência e disfunção renal que tem sido tratados desde 2008 com bortezomib com o qual se conseguiu um aumento no tempo de sobrevida dos pacientes, entretanto a seu uso foi limitado pelos efeitos colaterais dose dependente, especialmente a neuropatia periférica dolorosa. Recentemente se introduziu o uso Carfilzomib (agente inibidor do proteosoma de segunda geração), aprovado pelo FDA em 2012 como única droga para o tratamento da doença refratária e recidiva do mieloma múltiplo. Objetivo: Realizar revisão da literatura e determinar a experiência colombiana com a droga Carfilzomib considerando as estatísticas nacionais contidas nos prontuários individuais de prestação de serviços de saúde, além de descrever um caso clínico. Metodologia: Para a revisão foi levantada a literatura indexada no PubMed, sendo o critério de inclusão os estudos clínicos de fase 2 e 3 de Carfilzomib no tratamento do mieloma múltiplo. Em relação a experiência colombiana, foram identificados 37 pacientes colombianos com mieloma múltiplo diagnosticado entre 2003 e 2012 e que foram submetidos a prescrição de Carfilzomib, levando em conta as informações fornecidas pela BIOTOSCANA. Resultados: Foram localizados 8 estudos clínicos randomizados que evidenciaram efeitos colaterais não hematológicos tais como fadiga (367 de 678 pacientes, 54%) e náuseas (323 pacientes, 48%). Para os RIPS, 22 dos 37 pacientes receberam de 1 a 8 ciclos de Carfilzomib (média=3,0,mediana=3). Foi avaliada a resposta clínica em 9 pacientes, sendo 4(22%) com resposta parcial muito boa, 4(22%) resposta parcial e 1 (6%) com doença estável. Conclusões: Encontramos diferença entre os efeitos colaterais relatados na Colômbia em relação aos relatados mundialmente, com predominância da fadiga em nossos pacientes e se conclue que a experiência com novas drogas não foi suficientemente documentada. [Castañeda C, Pantoja MC, Montaño L, Rosselli D. Carfilzomib no tratamento do mieloma múltiplo: revisão da literatura e da experiência colombiana baseada em RIPS. MedUNAB 2015; 17(2):99-106].

Aspectos clínicos, fatores de risco e manejo da neuropatia periférica relacionada ao uso do bortezomibe nos pacientes com mieloma múltiplo / Clinical features, risk factors and management of peripheral neuropathy related to bortezomib use in patients with multiple myeloma

A neuropatia periférica é uma das principais alterações presentes nos pacientes com mieloma múltiplo. Pode ocorrer devido à própria doença e também como evento adverso dos agentes potencialmente neurotóxicos utilizados para o seu tratamento. O bortezomibe é um inibidor de proteassoma que pode levar ao desenvolvimento de neuropatia periférica. Neste caso, a neuropatia sensorial é mais comumente observada que a motora. Esses sintomas podem ser limitantes para o seguimento do tratamento e influenciar negativamente na qualidade e duração da resposta. As evidências clínicas indicam boas taxas de reversibilidade da neuropatia, após medidas como a diminuição de dose ou a interrupção do tratamento. Entretanto, o melhor momento para realizar tais condutas, além de fatores preditores indicativos de evolução à neuropatia, são ainda imprecisos. Outra abordagem que se tem mostrado promissora para a diminuição e o controle da neuropatia periférica causada pelo bortezomibe é a modificação do uso deste agente, de doses bissemanais para aplicação semanal. Esta atitude provou manter a qualidade e a durabilidade da resposta, com uma redução significativa dos eventos adversos. Este artigo traz um resumo atualizado sobre o tema. Os autores propõem, para melhor controle da neuropatia periférica, um trabalho de equipe multidisciplinar que inclui uma parceria médico-enfermagem, com identificação do evento adverso, intervenção precoce e consequente modificação da história da neuropatia.