Influence of time and storage temperature on raw milk deteriorating microbiota / Influência do tempo e temperatura de estocagem sobre a microbiota deteriorante do leite cru

The quality of raw milk depends on initial microbial contamination and conditions of storage until industry processing. Considering the influence of time and storage temperature on raw milk microbiota, the objective of this work was to quantify and monitor the multiplication of these groups under different conditions. For this purpose, 41 samples of raw milk were collected immediately after milking, stored in the following storage conditions: 25 °C/2 h; 35 °C/2 h; 7 °C/24 h; 7 °C/48 h and 7 °C/60 h and analyses of aerobic mesophilic, psychrotrophic and proteolytic psychrotrophic microorganisms. The milk samples analyzed in the study had an initial mean count of mesophilic aerobes of 5.38 Log CFU/mL at Time Zero. The milk stored at 25 °C/2 h and 35 °C/2 h kept the mesophilic aerobic counts within the limits established by the legislation (5.48 Log CFU/mL), with an increase in counts of psychrotrophic and proteolytic microorganisms. When stored at 7 °C/24 h and 7 °C/48 h, the count of mesophiles exceeded the established parameters. A significant increase in the count of proteolytic psychrotrophs and psychrotrophs was also observed during storage at 7 °C from 24 h. The results of this study indicate that the temperature of 7 °C is not suitable for the milk conservation, since it was not able to control the microbial multiplication. Thus, the results contribute to the change in milk storage temperature proposed by the new Brazilian legislation.(AU)

A qualidade do leite cru depende da contaminação microbiana inicial e das condições de armazenamento até o processamento na indústria. Considerando a influência do tempo e da temperatura de armazenamento na microbiota do leite cru, o objetivo deste trabalho foi quantificar e monitorar a multiplicação desses grupos de microrganismos sob diferentes condições. Para tanto, foram coletadas 41 amostras de leite cru imediatamente após a ordenha, armazenadas nas seguintes condições de armazenamento: 25 °C/2 h; 35 °C/2 h; 7 °C/24 h; 7 °C/48 h e 7 °C/60 h para análise de microrganismos psicrotróficos, aeróbios mesófilos, psicrotróficos e proteolíticos. As amostras de leite analisadas no estudo apresentaram uma contagem média inicial de aeróbios mesófilos de 5.38 Log UFC/mL no Tempo Zero. O leite armazenado a 25 °C/2 h e 35 °C/2 h manteve as contagens aeróbias mesófilas dentro dos limites estabelecidos pela legislação (5,48 Log UFC/mL), com aumento nas contagens de microrganismos psicrotróficos e proteolíticos. Quando armazenado a 7 °C/24 h e 7 °C/48 h a contagem de mesófilos excedeu os parâmetros estabelecidos. Um aumento significativo na contagem de psicrotróficos e psicrotróficos proteolíticos também foi observado durante o armazenamento a 7 °C a partir das 24 h. Os resultados deste estudo indicam que a temperatura de 7 °C não é adequada para a conservação do leite, uma vez que não foi capaz de controlar a multiplicação microbiana. Assim, os resultados contribuem para a mudança na temperatura de armazenamento de leite proposta pela nova legislação brasileira.(AU)

Pseudomonas spp. and other psychrotrophic microorganisms in inspected and non-inspected Brazilian Minas Frescal cheese: proteolytic, lipolytic and AprX production potential / Pseudomonas spp. e outros micro-organismos psicrotróficos em queijos Minas Frescal inspecionados e não inspecionados: potencial proteolítico, lipolítico e produção de AprX

The most consumed cheese in Brazil, Minas Frescal cheese (MFC) is highly susceptible to microbial contamination and clandestine production and commercialization can pose a risk to consumer health. The storage of this fresh product under refrigeration, although more appropriate, may favor the growth of spoilage psychrotrophic bacteria. The objective of this study was to quantify and compare Pseudomonas spp. and other psychrotrophic bacteria in inspected and non-inspected MFC samples, evaluate their lipolytic and proteolytic activities and their metalloprotease production potentials. Twenty MFC samples were evaluated: 10 inspected and 10 non-inspected. Counts of psychrotrophic bacteria and Pseudomonas spp., evaluation of the proteolytic and lipolytic potential of the isolates, and identification of potential producers of alkaline metalloprotease (AprX) were assessed. The mean total psychrotrophic counts were 1.07 (±2.18) × 109CFU/g in the inspected samples and 4.5 (±5.86) × 108CFU/g in the non-inspected, with no significant difference (p=0.37). The average score of Pseudomonas spp. was 6.86 (±18.6) × 105 and 2.08 (±3.65) × 106 CFU/g for the inspected and non-inspected MFC samples, respectively, with no significant difference (p=0.1). Pseudomonas spp. represented 0.06% and 0.004% of psychrotrophic bacteria found in inspected and non-inspected MFC samples, respectively. Collectively, 694 psychrotrophic strains and 47Pseudomonas spp. were isolated, of which 59.9% and 68.1% were simultaneously proteolytic and lipolytic, respectively. Of the 470 psychrotrophs isolated from inspected and 224 from non-inspected cheese samples, 5.74% and 2.23% contained aprX, respectively, while 100 and 86.96% of the Pseudomonas spp. isolates in inspected and non-inspected cheese samples contained the gene. The production potential of AprX did not, however, determine the proteolytic activity on plates of these isolates under the conditions evaluated in this study. Of total, 65.63% of the psychrotrophs that contained aprX gene were confirmed as Pseudomonas spp., using genus-specific PCR. Phylogenetic analysis of the 16S rRNA gene of the other psychrotrophs that were potential producers of AprX identified them as Serratia spp. (n=7), Raoultella ornithinolytica (n=1), and Acinetobacter schindleri (n=1) in the inspected samples and Psychrobacter sanguinis (n=1) and Leuconostoc mesenteroides (n=1) in the non-inspected samples. The production conditions of Brazilian MFC of these samples, while meeting the legal determinations, are not sufficient to control Pseudomonas and other spoilage-related psychrotrophs. Thus, stricter hygienic measures are required during the formal production of this type of cheese.(AU)

O mais consumido no Brasil, o queijo Minas Frescal (QMF) é altamente suscetível à contaminação microbiana e a produção e comercialização clandestina podem representar um risco para a saúde do consumidor. O armazenamento deste produto fresco sob refrigeração, embora mais apropriado, pode favorecer a multiplicação de bactérias psicrotróficas deteriorantes. O objetivo deste estudo foi quantificar e comparar Pseudomonas spp. e outras bactérias psicrotróficas em amostras de QMF inspecionadas e não inspecionadas, avaliar o potencial lipolítico, proteolítico e de produção de metaloprotease alcalina. Vinte amostras de QMF foram avaliadas: 10 inspecionadas e 10 não inspecionadas. Foram avaliadas as contagens de bactérias psicrotróficas e Pseudomonas spp., o potencial proteolítico e lipolítico dos isolados e a identificação de potenciais produtores de metaloprotease alcalina (AprX). A média total das contagens de bactérias psicrotróficas foi de 1,07 (±2,18) × 109UFC/g nas amostras inspecionadas e 4,5 (±5,86) × 108UFC/g nas não inspecionadas, sem diferença significativa (p=0,37). A média de Pseudomonasspp. foi de 6,86 (±18,6) × 105 e 2,08 (±3,65) × 106UFC/g para as amostras QMF inspecionadas e não-inspecionadas, respectivamente, sem diferença significativa (p=0,1). Pseudomonas spp. representaram 0,06% e 0,004% de bactérias psicrotróficas encontradas em amostras QMF inspecionadas e não-inspecionadas, respectivamente. Das amostras inspecionadas e não inspecionadas, foram isoladas 694 colônias psicrotróficas e 47 Pseudomonasspp., dos quais 59,9% e 68,1% foram simultaneamente proteolíticos e lipolíticos, respectivamente. Dos 470 isolados de psicrotróficos das amostras de queijo inspecionados e dos 224 isolados das não inspecionadas, 5,74% e 2,23% continham o gene aprX, respectivamente, enquanto 100 e 86,96% das Pseudomonasspp. isoladas em amostras de queijo inspecionadas e não inspecionadas continham o potencial de expressão de AprX. Esse potencial, no entanto, não determinou a atividade proteolítica em placas desses isolados nas condições avaliadas neste estudo. Do total, 65,63% dos psicrotróficos que continham o gene aprX foram confirmados como Pseudomonasspp., utilizando PCR gênero-específico. A análise filogenética do gene 16S rRNA dos outros psicrotróficos que foram produtores potenciais de AprX os identificou como Serratia spp. (n=7), Raoultella ornithinolytica (n=1) e Acinetobacter schindleri (n=1) nas amostras inspecionadas e Psychrobacter sanguinis (n=1) e Leuconostoc mesenteroides (n=1) nas amostras não inspecionadas. As condições de produção do QMF dessas amostras, atendendo às determinações legais, não são suficientes para controlar a Pseudomonas e outros psicrotróficos relacionados à deterioração. Assim, medidas higiênicas mais rígidas são necessárias durante a produção formal deste tipo de queijo.(AU)

Biodiversity of psychrotrophic microbes and their biotechnological applications

The extreme cold environments harbor novel psychrotrophic microbes. The psychrotrophic microbes have been reportedas plant growth promoters and biocontrol agents for sustainable agriculture, in industry as cold-adapted hydrolyticenzymes and in medicine as secondary metabolites and pharmaceutical important bioactive compounds. Inoculationwith psychrotrophic/psychrotolerant strains significantly enhanced root/shoot biomass and nutrients uptake as comparedto non-bacterized control. The psychrotrophic microbes play important role in alleviation of cold stress in plant growingat high hill and low temperature and conditions. The psychrotrophic microbes have been reported from worldwidefrom cold habitats and belong to all three domain archaea, bacteria, and eukarya including different phylum such asActinobacteria, Ascomycota, Bacteroidetes, Basidiomycota, Chloroflexi, Chlamydiae, Planctomycetes, Cyanobacteria,Euryarchaeota, Firmicutes, Gemmatimonadetes, Verrucomicrobia, Mucoromycota, Proteobacteria, Spirochaetes,Thaumarchaeota and Nitrospirae. The most dominant genera belong to Arthrobacter, Bacillus, Exiguobacterium,Paenibacillus, Providencia, Pseudomonas, and Serratia have been reported from the cold habitats. The Psychrotrophicmicrobes have biotechnological applications in agriculture, medicine, industry, food, and allied sectors

Effect of Alpinia zerumbet essential oil on the shelf life of tambaqui fillets during short-term refrigerator storage

We investigated the effect of Alpinia zerumbet essential oil on the quality and shelf life of tambaqui (Colossoma macropomum) fillets stored under refrigeration (10.0 ± 0.5 °C) for 14 days. The treatments were A. zerumbet essential oil at 0.75% v v-1 (AEO 0.75%), A. zerumbet essential oil at 1.5% v v-1 (AEO 1.5%) and a control (no essential oil). The sample quality and shelf life were determined by the total psychrotrophic count (TPC) and chemical parameters (pH, total volatile basic nitrogen, centesimal composition and thiobarbituric acid reactive substances - TBARS) at zero, seven and 14 days of storage time. The TPC decreased significantly (p < 0.05) with an A. zerumbetessential oil level of 1.5% until seven days of storage. The concentration of A. zerumbet essential oil at 0.75% resulted in lower pH, TBARS, and TVBN values in comparison with the other treatment and the control. Thus, A. zerumbet essential oil was efficient in extending the shelf life of refrigerated tambaqui fillets up to approximately seven days. (AU)

Proteolytic and lipolytic potential of Pseudomonas spp. from goat and bovine raw milk / Potencial proteolítico e lipolítico de espécies de Pseudomonas do leite cru caprino e bovino

Pseudomonas, the main genus of gram-negative microorganisms isolated from milk, is psychrotrophic, biofilm-forming, and thermo-resistant deteriorating enzyme producers. The aim of this study was to quantify Pseudomonas spp. in goat's and cow's milk produced in the Paraná state, Brazil, to evaluate the deteriorating activity of the isolates at mesophilic and psychrotrophic conditions and to identify, at the species level, the isolates with alkaline metalloprotease (aprX gene) production potential. Microbiological, biochemical and molecular methods were used for isolating, confirming and identifying of isolates. The mean counts were 1.6 (±6.3)x104 and 0.89(±3)x102 CFU/mL for goat and bovine milk samples, respectively, immediately after milking. Of the Pseudomonas colonies isolated from goat milk (n=60), 91.7% showed proteolytic potential when incubated at 35°C/48 h and 80% at 7°C/10 days, and lipolytic potential was observed in 95% of the isolates incubated in mesophilic and 78.3% at refrigeration conditions. From the isolates of bovine milk (n=20), 35% showed proteolytic activity only when incubated at 35°C/48 h, and lipolytic potential was observed in 25% of the isolates incubated at 7°C/10d and 35°C/48h. It was observed that 83.3% and 25% of the isolates genetically confirmed as Pseudomonas spp. of goat and bovine milk showed the potential for alkaline metalloprotease production, with the species P. azotoformans, P. koreensis, P. gessardii, P. monteilii and P. lurida being the most frequent in goat milk and P. aeruginosa the only species identified in cow milk.(AU)

Pseudomonas é o principal gênero de micro-organismos Gram negativos isolados do leite, são psicrotróficos, formadores de biofilmes e produtores de enzimas deteriorantes termodúricas. O objetivo do presente trabalho foi quantificar Pseudomonas spp. no leite de cabras e vacas produzido no estado do Paraná, Brasil, avaliar a atividade deteriorante em temperatura mesofílica e psicrotrófica e identificar, em nível de espécie, os isolados com potencial de produção de metaloprotease alcalina (geneaprX). Foram utilizados métodos microbiológicos, bioquímicos e moleculares para isolamento, confirmação e identificação dos isolados. As contagens médias foram de 1,6 (±6,3) x 104 e 0,9 (±3) x 102 UFC/mL para as amostras de leite caprino e bovino, respectivamente. Dos isolados de Pseudomonas do leite de cabra (n=60), 91,7% demonstraram potencial proteolítico quando incubadas a 35°C/48h e 80% a 7°C/10dias e lipolíticos em 95% dos isolados incubados em mesofilia e em 78,3% dos incubados em temperatura de refrigeração. Dos isolados do leite bovino (n=20), foi verificada atividade proteolítica de 35% apenas quando incubadas a 35°C/48h e lipolítica em 25% dos isolados incubados a 7°C/10d e 35°C/48h. Foi observado que 83,3% e 25% dos isolados confirmados geneticamente como Pseudomonas spp. do leite caprino e bovino, respectivamente, apresentaram o potencial de produção de metaloprotease alcalina, sendo as espécies P. azotoformans, P. koreensis, P. gessardii, P. monteilii e P. lurida as mais frequentes no leite de cabras e P. aeruginosa a única identificada do leite de vacas.(AU)

Spoilage potential of psychrotrophic bacteria isolated from raw milk and the thermo-stability of their enzymes / 浙江大学学报（英文版）（B辑：生物医学和生物技术）

The storage and transportation of raw milk at low temperatures promote the growth of psychrotrophic bacteria and the production of thermo-stable enzymes, which pose great threats to the quality and shelf-life of dairy products. Though many studies have been carried out on the spoilage potential of psychrotrophic bacteria and the thermo-stabilities of the enzymes they produce, further detailed studies are needed to devise an effective strategy to avoid dairy spoilage. The purpose of this study was to explore the spoilage potential of psychrotrophic bacteria from Chinese raw milk samples at both room temperature (28 °C) and refrigerated temperature (7 °C). Species of Yersinia, Pseudomonas, Serratia, and Chryseobacterium showed high proteolytic activity. The highest proteolytic activity was shown by Yersinia intermedia followed by Pseudomonas fluorescens (d). Lipolytic activity was high in isolates of Acinetobacter, and the highest in Acinetobacter guillouiae. Certain isolates showed positive β-galactosidase and phospholipase activity. Strains belonging to the same species sometimes showed markedly different phenotypic characteristics. Proteases and lipases produced by psychrotrophic bacteria retained activity after heat treatment at 70, 80, or 90 °C, and proteases appeared to be more heat-stable than lipases. For these reasons, thermo-stable spoilage enzymes produced by a high number of psychrotrophic bacterial isolates from raw milk are of major concern to the dairy industry. The results of this study provide valuable data about the spoilage potential of bacterial strains in raw milk and the thermal resistance of the enzymes they produce.

Variação da qualidade microbiológica, durante o período de validade, de leite pasteurizado em laticínio da cidade de Januária-MG / Variation of the microbiological quality, during the period of validity, of pasteurized milk in dairy of the city of Januaria-MG

Por sua composição, o leite é considerado um dos alimentos mais completos em termos nutricionais e por essa mesma razão constitui um excelente meio para proliferação de micro-organismos patogênicos. A pasteurização, quando feita de forma correta, visa acabar com esses micro-organismos, mas quando o leite é produzido em condições higiênicas inadequadas ou é mal conservado nos pontos de venda pode se transformar em um veículo para transmissão de doenças. Este trabalho teve como objetivo avaliar a segurança microbiológica, durante o período de validade, do leite pasteurizado produzido em um laticínio da cidade de Januária-MG. Foram analisadas amostras de leite pasteurizado no primeiro e no último dia de validade. Foram realizadas contagens de micro-organismos mesófilos aerofílicos, bactérias coliformes totais e a 45°C, bactérias psicrotróficas e enterobactérias. Nenhuma amostra apresentou contaminação por bactérias psicrotróficas. Foram encontradas contagens de micro-organismos coliformes totais e coliformes a 45°C acima dos valores máximos permitidos pela legislação brasileira, representando um risco para a saúde dos consumidores.

Lipolytic capacity of Pseudomonas spp. isolated from refrigerated raw milk / Capacidade lipolítica de Pseudomonas spp. isoladas de leite cru refrigerado

The psychrotrophic bacteria growth in refrigerated milk is responsible for the production of heat resistant enzymes, including those which have lipolytic capacity. Lipases can cause rancidity and off-flavor in pasteurized and UHT milk, milk powder and cheese. Pseudomonas spp. is the major genera responsible by lipases synthesis, mainly Pseudomonas fluorescens. The lipolytic capacity of Pseudomonas spp. (1182 strains) and P. fluorescens (158 strains) isolated from cooling tank and bulk milk transportation were tested. Pseudomonas spp. strains were isolated by Pseudomonas Agar Base, adding the supplement cephalotin, fusidic acid, cetrimide- CFC (30º C/48 h) and Pseudomonas Cetrimide Agar with 10% of glicerol (21º C/ 48 h) to determine P. fluorescens. The strains lipolytic capacity were tested with Tributyrin Agar (21 oC/72 h). Lipolytic indexes of Pseudomonas spp. were 51.4% and 67.2% in cooling tank and bulk milk transportation (p< 0.05), respectively. P. fluorescens lipolytic capacity indexes were 26.4% from strains isolated from cooling tank and 41% (p < 0.05) from strains isolated from bulk milk transportation. High lipolytic indexes had been found in the strains isolated from refrigerated raw milk sent to manufacturing. Refrigeration temperature and storage time may contribute to the difference observed between two points of collection evaluated in this study.

A multiplicação de bactérias psicrotróficas em leite refrigerado pode promover a síntese de enzimas resistentes ao calor, entre elas aquelas que tem capacidade lipolítica. As lipases podem promover rancidez, e defeitos de sabor em leite pasteurizado, UHT, leite em pós e queijos. Pseudomonas spp. é o principal gênero responsável pela síntese desta enzimas, principalmente a espécie Pseudomonas fluorescens. Avaliou-se a capacidade lipolítica de 1182 cepas de Pseudomonas spp. e 158 cepas de P. fluorescens isoladas de amostras de leite de tanques de resfriamento (TR) e caminhão tanque (CT) enviado ao beneficiamento. Foi utilizado o Agar base Pseudomonas com suplemento cephalotin, fusidic acid, cetrimide - CFC (30º C/48 h ) para isolamento das pseudomonas e Pseudomonas Cetrimide Agar com 10% de glicerol (21º C/ 48 h) para a espécie P. fluorescens. Para avaliação da capacidade lipolítica as cepas fora semeadas em Ágar Tributirina (21 ºC/72 h). O índice de lipólise das cepas de Pseudomonas spp. provenientes do leite do tanque de resfriamento e do caminhão tanque (p<0,05) foram de 51,4% e 62,7%, respectivamente. Foram também observados índices de capacidade lipolítica de P. fluorescens de 26,4% e 41% (p<0,05) para TR e CT, respectivamente. Altos índices de cepas lipolíticas foram encontrados nas cepas isoladas do leite cru refrigerado enviado ao beneficiamento. Temperatura de refrigeração e tempo de estocagem podem ter contribuído para a diferença observada na população lipolítica dos dois pontos de coleta avaliados.

Microbiological quality of refrigerated raw milk in the dairy farm and after transport to the processing dairy plant / Qualidade microbiológica do leite cru refrigerado na propriedade produtora de leite e após o transporte para a indústria beneficiadora

Transport of cooled raw milk in bulk has greatly improved the quality of the raw material collected by dairy plants as it reduces the proliferation of mesophilic microorganisms that cause milk acidity and hinder its processing. However, refrigeration has favored the growth of psychrotrophic microorganisms which are able to grow at low temperatures (below 10ºC) and that produce heat resistant enzymes which degrade some milk components, reducing milk shelf life and causing organoleptic changes. The aim of this paper was to evaluate the microbiological quality of raw milk in dairy farms and after its transport to the processing dairy plant, through plate counting of mesophilic and psychrotrophic microorganisms. Fourteen milk samples were collected from tanks of the dairy-farming properties, and one sample was collected from their milk transport tanker at the entrance of the processing plant. Our results showed that the mean number of mesophilic microorganisms was higher in samples collected straight from the dairy farm tanks than in the samples collected from the transportation tankers at the entrance of the plant. Of the 14 sampled tanks, 64.3% were non-compliant with legislation. The sample collected from the milk transportation tanker containing milk from all properties showed a higher mean number of psychrotrophic microorganisms than the dairy farm samples. We conclude that the milk from dairy properties showed a higher amount of mesophilic microorganisms, and after transportation, at the entrance of the processing plant, there is a higher amount of psychrotrophic microorganisms.(AU)

O transporte do leite cru refrigerado a granel melhorou muito a qualidade da matéria-prima recebida pelas indústrias de laticínios, reduzindo a proliferação de micro-organismos mesófilos que causam a acidez do leite e que impossibilitam seu beneficiamento. Porém, a refrigeração favoreceu o crescimento de micro-organismos psicrotróficos que são capazes de crescer em baixas temperaturas (abaixo de 10ºC) e que produzem enzimas termorresistentes que degradam alguns componentes do leite, diminuindo o seu tempo de prateleira e causando alterações organolépticas. Este trabalho teve como objetivo avaliar a qualidade microbiológica do leite cru presente na propriedade leiteira e após o transporte para a indústria beneficiadora, por meio da contagem em placas de micro-organismos mesófilos e psicrotróficos. Foram coletadas 14 amostras de leite nos tanques das propriedades produtoras e uma amostra do caminhão de transporte dessas propriedades, na chegada à indústria beneficiadora. Os resultados mostraram que, nas amostras coletadas diretamente nos tanques das propriedades, a média de micro-organismos mesófilos foi mais alta do que a amostra coletada diretamente do caminhão de transporte ao chegar à indústria. Dos 14 tanques amostrados, 64,3% estão em desacordo com a legislação. A amostra coletada do caminhão de transporte do leite, contendo o leite de todas as propriedades, apresentou média maior de micro-organismos psicrotróficos em relação à média das propriedades. Conclui-se que o leite das propriedades apresentou maior quantidade de mesófilos e que, após o transporte, na chegada à indústria beneficiadora, há maior quantidade de psicrotróficos.(AU)

Pseudomonas spp. and P. fluorescens: population in refrigerated raw milk / Pseudomonas spp. e P. fluorescens: população em leite cru refrigerado

ABSTRACT: Raw milk samples were collected from cooling tanks (after they cooled for 48 h) in five dairy farms and the corresponding bulk tank (bulk milk transportation, BMT) when they arrived to the industry. Routine physical chemical analyzes and quantification of psychrotrophic ( Pseudomonas spp. and P. fluorescens ) and aerobic mesophilic (AM) populations were performed. Only relative density and titratable acidity values for samples of milk from three farms were in agreement to the quality parameters required by law. In the BMT, only the protein content has not reached the minimum value established by law, and counting was performed for AM (>105 colony forming units (CFU) mL-1) and psychrotrophic bacteria (2.8x106CFU mL-1). Pseudomonas spp. counting corresponded to 17.9% of the psychrotrophic population, and P. fluorescens was 3.4% of Pseudomonas spp . count. In milk samples from dairy farms, counts were variable for AM (3.4x105 to 3.7 x107CFU mL-1), psychrotrophic (4.0x104 to 3.1x106CFU mL-1), Pseudomonas spp. (2.3x104 to 1.8x105CFU mL-1), and P. fluorescens (62 to 8.4x103CFU mL-1). For the populations studied, no statistical difference (P>0.05) was observed between counts reported in milk samples collected in dairy farms (cooling tanks) and BMT. Therefore, the genera Pseudomonas spp. and P. fluorescens were not the most frequent psychrotrophic bacteria in this studied milk transportation line.

RESUMO: Amostras de leite foram coletadas de tanques de refrigeração (após 48h de refrigeração) em cinco fazendas de produção e do respectivo caminhão tanque (leite de conjunto, LC) ao chegar à indústria beneficiadora. Análises físico químicas de rotina e quantificação das populações de bactérias psicrotróficas ( Pseudomonas spp. e P. fluorescens ) e aeróbios mesófilos (AM) foram realizadas. Apenas os valores de densidade relativa e acidez titulável de amostras de leite de três fazendas estavam de acordo com a legislação. No LC, apenas o teor de proteína não atingiu o valor mínimo estabelecido por lei, e a contagem foi realizada para AM (>105 unidades formadoras de colônias (UFC) mL-1) e psicrotróficos (2,8x106UFC mL-1). A contagem de Pseudomonas spp. correspondeu a 17,9% da população de psicrotróficos, e 3,4% da contagem de Pseudomonas spp. eram da espécie P. fluorescens . Nas amostras de leite das fazendas de produtoras, as contagens foram variáveis para AM (3,4x105a 3,7x107UFC mL-1), psicrotróficos (4,0x104 a 3,1x106UFC mL-1), Pseudomonas spp. (2,3x104 a 1,8x105UFC mL-1) e P. fluorescens (62 a 8,4x103UFC mL-1). Para as populações estudadas, nenhuma diferença estatística (P>0,05) foi observada entre as contagens encontradas nas amostras de leite coletadas nas fazendas (tanques de resfriamento) e do LC. Portanto, o gênero Pseudomonas spp. e a espécie P. fluorescens não foram os psicrotróficos mais frequentes nesta linha de transporte de leite estudada.

Avaliação microbiológica de leite pasteurizado produzido em laticínio do município de Januária-MG / Microbiological evaluation of pasteurized milk produced in dairy municipality of Januaria-MG

Com o objetivo de avaliar a qualidade microbiológica de leite pasteurizado produzido em laticínio do município de Januária - MG, foram analisadas amostras de leite no período de março a agosto de 2014. Foram realizadas as contagens de aeróbios mesofílicos, enterobactérias, coliformes totais, coliformes a 45ºC e psicrotróficos. Das amostras analisadas, todas apresentaram contaminação por enterobactérias e coliformes totais, 80% estavam contaminadas por coliformes a 45°C e 60% por Escherichia coli. Todas as amostras analisadas estavam de acordo com os padrões estabelecidos pela legislação brasileira para mesófilos aeróbios e bactérias psicrotróficas. Os resultados demonstraram que o produto pode representar risco à saúde pública, enfatizando a necessidade de adoção de boas práticas de fabricação para prevenir a contaminação e o crescimento bacteriano.

Multiplicação microbiana no leite cru armazenado em tanques de expansão direta / Microbial multiplication in raw milk stored in direct expansion bulk tanks

O presente estudo objetivou avaliar o efeito do tempo de armazenagem do leite em tanques de expansão direta, modelo de duas e quatro ordenhas, sobre a contagem bacteriana total (CBT) e a contagem de bactérias psicrotróficas (CBP). As avaliações foram conduzidas em 19 propriedades leiteiras, localizadas nas regiões Serrana e Oeste de Santa Catarina, as quais utilizavam equipamentos de refrigeração do leite por expansão direta, modelo de duas ou quatro ordenhas, com taxa de ocupação variando de 60 a 100% de sua capacidade. Antes e após cada ordenha, foram coletadas amostras de leite para análise de CBT, CBP e contagem de células somáticas (CCS), totalizando aproximadamente 36 horas de armazenagem (quatro ordenhas). O tempo de armazenagem do leite cru resfriado não afetou a CBT e CBP (P>0,05) em ambos os modelos. O modelo de tanque de expansão afetou somente a CBP (P<0,05), com média inferior para amostras de leite de tanques de duas ordenhas em relação ao de quatro ordenhas (3,61±0,104 e 4,00±0,120UFC mL-1 (log10), respectivamente). Conclui-se que tanques de resfriamento por expansão direta, utilizados dentro de suas especificações quanto ao volume de leite a ser resfriado, permitem a manutenção da CBT e da CBP em sistemas de transporte do leite ao laticínio a cada 48 horas.

The purpose of this study was to evaluate the effect of the cold storage period of raw milk in bulk tanks, using two and four milking models, on total bacterial count (TBC) and psychrotrophic bacterial count (PBC). A total of 19 dairy farms, located in West and Uplands of the Santa Catarina State - Brazil, was been evaluated. Each dairy farm had direct expansion bulk milk tank and an occupancy rate varying from 60% to 100%. Samples were collected before and after each milking procedure to determine PBC and TBC, totalizing four milking and a storage period of 36 hours. The storage time did not affect TBC and PBC (P>0.05). The bulk tank model only affected the PBC (P < 0.05), with two-milking model presenting a lower mean than four-milking model (3.61±0.104 and 4.00±0.120CFU mL-1 (log10)). It was possible to conclude that bulk tanks, when used properly concerning raw milk volume to be chilled, allow the TBC and PBC to remain stable in the transportation systems of raw milk to the industry each 48 hours.

Behavior of Staphylococcus aureus and autochthone microbiota in fresh sausages added of sodium nitrite and stored under refrigeration / Comportamento de Staphylococcus aureus e microbiota autóctone frente à ação de nitrito de sódio em linguiças frescais estocadas sob refrigeração

Fresh sausages are cured meat products that may be contaminated with Staphylococcus aureus during the manufacturing procedure, which is frequently related with inadequate handling practices. The use of nitrite in meat products has proven efficacy against Clostridium botulinum, and studies indicate that bactericidal action against S. aureus depends on factors that are intrinsic and extrinsic to the product. The objective of the present study was to evaluate the effect of nitrite concentration, and pH on S. aureus and psychrotrophic autochthone microbiota in fresh sausages stored at different times and temperatures. Fresh sausage were produced at nitrite concentrations 50, 150 and 200ppm and contaminated with S. aureus. The sausages were storage at refrigeration (7 and 12°C) and the quantification of S. aureus and psychrotrophic microorganisms was carried out on days 0, 2, 4, 7, and 10. Results showed that nitrite concentrations and the temperatures used had minimal effect on the multiplication of S. aureus and psychrotrophic autochthone microbiota. Final counts depended only on the length of storage: at the end of 10 days, counts were statistically similar in the different groups, showing that temperature and nitrite concentrations used did not control microbial growth effectively. It is suggested that the product should be stored below 7°C or at freezing temperatures for greater microbiological stability.

A linguiça frescal é um embutido curado que, devido à manipulação durante as etapas de produção, pode se tornar contaminado com S. aureus, patógeno frequentemente relacionado com práticas inadequadas de higiene durante a produção de alimentos. A utilização de nitrito em embutidos tem sua eficácia comprovada contra C. botulinum e, para o S. aureus, estudos indicam que a ação bactericida depende de fatores extrínsecos e intrínsecos. O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da concentração de nitrito e do pH frente à contaminação por S. aureus e microbiota autóctone em linguiças frescais estocadas em diferente tempos e temperaturas. Linguiças foram produzidas com concentrações de 50, 150 e 200ppm de nitrito e contaminadas com S. aureus. As linguiças foram armazenadas sob refrigeração (7 e 12°C) e a quantificação de S. aureus e psicrotróficos foi realizada nos dias 0, 2, 4, 7 e 10. Os resultados demonstraram que a influência das concentrações de nitrito e temperaturas utilizadas sobre a multiplicação de S. aureus e da microbiota autóctone foi mínima, sendo dependente apenas do período de estocagem. Entretanto, ao final de dez dias, as contagens foram estatisticamente iguais nos grupos analisados, mostrando que as condições de temperatura e concentrações de nitrito utilizadas não exerceram controle efetivo no desenvolvimento destes micro-organismos. Sugere-se que este produto seja armazenado sob temperaturas inferiores a 7°C ou sob congelamento para maior estabilidade microbiológica.

Production of cold-adapted cellulase by Verticillium sp. isolated from Antarctic soils

Background: Cellulose can be converted to ethanol by simultaneous saccharification and fermentation (SSF). The difference between the optimal temperature of cellulase and microbial fermentation, however, has been identified as the critical problem with SSF. In this study, one fungal strain (AnsX1) with high cellulase activity at low temperature was isolated from Antarctic soils and identified as Verticillium sp. by morphological and molecular analyses. Results: The biochemical properties of crude AnsX1 cellulase samples were studied by filter paper cellulase assay. The maximum cellulase activity was achieved at low temperature in an acidic environment with addition of metal ions. Furthermore, AnsX1 cellulase demonstrated 54-63% enzymatic activity at ethanol concentrations of 5-10%. AnsX1 cellulase production was influenced by inoculum size, carbon and nitrogen sources, and elicitors. The optimal culture conditions for AnsX1 cellulase production were 5% inoculum, wheat bran as carbon source, (NH4)2SO4 as nitrogen source, and sorbitol added in the medium. Conclusions: Our present work has potential to enable the development of an economic and efficient cold-adapted cellulase system for bioconversion of lignocellulosic biomass into biofuels in future.

Detection of airborne psychrotrophic bacteria and fungi in food storage refrigerators

The purpose of this study was to determine the microbiological air quality (psychrotrophic bacteria and airborne fungi) and distribution of fungi in different types of ready-to-eat (RTE) food-storage refrigerators (n=48) at selected retail stores in the city of Edirne, Turkey. Refrigerators were categorized according to the type of RTE food-storage: meat products, vegetables, desserts, or a mix of food types. Microbiological quality of air samples was evaluated by using a Mas-100 Eco Air Sampler. Four refrigerators (all containing meat products, 8.3%) produced air samples with undetectable microorganisms. The highest detected mean value of airborne psychrotrophic bacteria and fungi was 82.3 CFU/m³ and 54.6 CFU/m³, respectively and were found in mixed-food refrigerators. The dominant airborne fungal genera found were Penicillium (29.0%), Aspergillus (12.0%), Mucor (9%), Cladosporium (8%), Botyrtis (7%), and Acremonium (6%). By definition, RTE food does not undergo a final treatment to ensure its safety prior to consumption. Therefore, ensuring a clean storage environment for these foods is important to prevent food-borne disease and other health risks.

Association between milking practices and psychrotrophic bacterial counts in bulk tank milk / Asociación entre prácticas de ordeño y recuento de organismos psicrótrofos en leche de tanque de frío

The objective of this work was to determine on-farm risk factors for psychrotrophic bacterial counts in bulk tank milk from dairy farms in Argentina. Raw milk samples from bulk tanks of 27 dairy farms were examined for total psychrotrophic counts (TPC), proteolytic psychrotrophic counts (PPC) and lipolytic psychrotrophic counts (LPC) (dependent or outcome variables). A survey recording infrastructure conditions, milking equipment and milking management (independent variables) was performed. Bivariate association proofs and logistic regression analyses were used to determine association between independent variables and psychrotrophic bacterial counts. Milk cooled in plate heat exchangers or barrel tanks were 16.39 and 10.52 times more likely to yield TPC and PPC above the standard established for high quality milk compared with milk cooled in bulk tanks, respectively. Periodic cleaning of cooling tanks (3 times a week or daily) was associated with lower TPC (approximately 1.5 log CFU/ml) than weekly cleaning frequency and farms where milkers did not wash their hands during milking time were 7.81 times more likely to have higher PPC. No association was found between LPC and any of the independent variables. The only variable associated with TPC and PPC in a logistic regression model was the refrigeration system used on the farm. Dairy farms that possessed bulk milk cooling tanks yielded the lowest bacterial counts. Results of this study highlight the importance of both the type of cooling system used on the farm and its adequate hygienic maintenance for obtaining low pshychrotrophic counts at dairy farm.

El objetivo del trabajo fue determinar los factores de riesgo para altos recuentos de organismos psicrótrofos en leche de tanques de tambos de la Argentina. Se examinaron muestras de leche cruda de tanques de frío de 27 tambos, y se realizó el recuento de organismos psicrótrofos totales (PT), de psicrótrofos proteolíticos (PP) y de psicrótrofos lipolíticos (PL) (variables dependientes). Se realizó una encuesta para registrar las condiciones de infraestructura, el equipo de ordeño y las prácticas de ordeño (variables independientes). Se utilizaron pruebas bivariadas de asociación y regresión logística para determinar la asociación entre las variables independientes y los recuentos de organismos psicrótrofos. La leche enfriada en sistemas de placas de intercambio o tanques tipo cuba tuvo una probabilidad mayor de dar recuentos elevados de PT y PP (16,39 y 10,52) comparada con la enfriada en tanques tipo "panza fría". La limpieza periódica del equipo de frío (3 veces por semana o diariamente) se asoció con bajos recuentos de PT (aproximadamente 1,5 log de UFC/ml). Los tambos cuyos ordeñadores no se higienizaban las manos durante el ordeño tuvieron una probabilidad 7,81 veces mayor de tener recuentos elevados de PP. No se encontró asociación entre el recuento de PL y las variables independientes. La única variable asociada con los recuentos de PT y PP en el modelo de regresión logística fue el sistema de enfriamiento utilizado en el tambo. El tipo de sistema de refrigeración usado y su adecuado mantenimiento higiénico son importantes para la obtención de leche con baja carga de organismos psicrótrofos en el tambo.

Ocorrência de Aeromonas sp. e microrganismos psicrotróficos e estimativa do prazo de validade comercial de filé de pintado (Pseudoplatystoma coruscans) mantidos sob refrigeração / Occurrence of Aeromonas sp. and psychrotrophic microorganisms and estimate the shelf life of "pintado" (Pseudoplatystoma coruscans) fillets kept under refrigeration

Verificou-se a ocorrência de bactérias do gênero Aeromonas e estimou-se o prazo de validade comercial de filés de pintado (Pseudoplatystoma coruscans) com pele, durante estocagem em refrigeração por meio da quantificação de microrganismos heterotróficos aeróbios psicrotróficos e análises físico-químicas para determinação do pH e detecção de amônia e gás sulfídrico. Foram utilizadas 45 amostras de filé de pintado, com aproximadamente 100 gramas cada, embaladas individualmente em polietileno de alta densidade e armazenadas em câmara frigorífica entre 0ºC e 3ºC. A cada dois a três dias de estocagem, três unidades de filés foram submetidas a análises microbiológicas e físico-químicas, totalizando 15 análises durante o período de estocagem. As contagens de Aeromonas sp. e microrganismos heterotróficos aeróbios psicrotróficos variaram de 1,89 a 9,47logUFC/g e 0 a 6,54logUFC/g, respectivamente. A variação do pH foi de 6,20 a 6,97, e as análises de amônia e gás sulfídrico foram negativas durante todo o período. O pH dos filés de pintado atingiu o limite máximo de 6,4 aos 23 dias de estocagem, e estimou-se o seu prazo de validade comercial.

This word studied the occurrence of bacteria from genus Aeromonas and estimate the shelf life of "pintado" fish fillets (Pseudoplatystoma coruscans), during cold storage, through the quantification of psychrotrophic aerobic microorganisms, physical and chemical analyses for presence of ammonia and gas sulphide (H2S) and pH as used in 45 samples of "pintado" fillets with approximately 100 grams each, individually packed in high density polyethylene and stored in cold storage (0ºC to 3ºC). Every 2-3 days of storage, 3 units of fillets were subjected to microbiological and physicochemical analysis for a total of 15 days during the storage period. The Aeromonas sp. and psychrotrophic microorganisms count varied from 1.89 to 9.47logCFU/g and 0 to 6.54logCFU/g, respectively. The pH variation was from 6.20 to 6.97 and ammonia and H2S analyses were negative during the whole period. According under Brazilian legislation (Brazil, 1981) estimated the commercial shelf life of "pintado" fillets being 23 days when the pH reached a value of 6.4. The pH of the "pintado" fillets reached the maximum limit of 6.4 at 23 days of storage, being its estimated commercial shelf life.

Características microbiológicas de amostras de leite de tanque comunitário / Microbiological characteristics of milk samples from community bulk tanks

Microbiological quality of 72 samples of raw milk taken from nine cattle-rearing farms and from 12 samples of milk from a community bulk tank shared by the same farms in Gameleira region, municipality of Sacramento, MG, were evaluated. Mesophilic and psychrotrophic microorganisms were counted. Mesophilic and psychrotrophic microorganisms counts of the 72 raw milk samples from nine farms ranged from 6.2 x 102 to 2.2 x 107CFU/mL and from 3.2 x 102 to 9.6 x 105CFU/mL, respectively. Geometric means of all counts of mesophilic and psychrotrophic microorganisms from the 12 raw milk samples from the community bulk tank of nine farms were 1.8 x 105CFU/mL and 7.4 x 104CFU/mL, respectively. Results showed that community bulk tank may be a great asset for obtaining satisfactory microbiological quality milk.

Contagem, isolamento e caracterização de bactérias psicrotróficas contaminantes de leite cru refrigerado / Counting, isolation and characterization of psychrotrophic bacteria from refrigerated raw milk

Com os objetivos de quantificar, isolar e caracterizar bactérias psicrotróficas contaminantes de leite cru refrigerado, produzido na região da Zona da Mata de Minas Gerais e Sudeste do Rio de Janeiro, foram analisadas amostras de leite coletadas de 20 tanques coletivos e 23 tanques individuais. As contagens de bactérias psicrotróficas nas amostras de leite para os dois tipos de tanques de refrigeração variaram entre 10² e 10(7) Unidades Formadoras de Colônias (UFC) ml-1, porém, um maior número de tanques coletivos apresentou contagens acima de 1 x 10(5) UFC ml-1. Foi verificada a predominância de bactérias psicrotróficas gram-negativas (81,2 por cento), que foram identificadas pelos sistemas API 20E e API 20NE nos gêneros: Aeromonas, Alcaligenes, Acinetobacter, Burkholderia,Chryseomonas, Enterobacter, Ewingella, Klebsiella, Hafnia, Methylobacterium, Moraxella, Pantoea, Pseudomonas, Serratia, Sphingomonas e Yersinia. As bactérias gram-positivas (18,8 por cento) foram identificadas com API 50 CH, API Coryne e API Staph, nos gêneros: Bacillus, Brevibacterium, Cellum/Microbacterium, Kurthia e Staphylococcus. Os sistemas API utilizados não identificaram todos os isolados bacterianos. Pseudomonas foi o gênero mais isolado e P. fluorescens foi a espécie predominante. A maioria dos isolados bacterianos apresentou atividade proteolítica e/ou lipolítica a temperaturas de refrigeração de 4ºC, 7ºC e 10ºC, evidenciando seu alto potencial de deterioração do leite e dos produtos lácteos. Os resultados ressaltam que maior atenção deve ser dada aos procedimentos que impeçam a contaminação do leite por esses microrganismos.

This study aimed to quantify, isolate and characterize psychrotrophic bacteria from refrigerated raw milk produced at the 'Mata' Region of Minas Gerais State and Southeast of Rio de Janeiro State, Brazil. Raw milk samples, were collected at the farms, from 20 collective refrigerated tanks and 23 individual refrigerated tanks. The psychrotrophic bacteria counting ranged from 10² to 10(7) Colony Forming Units (CFU) ml-1 for both types of refrigerated tanks, but most of the collective tanks showed counts higher than 1 x 10(5) CFU ml-1. Predominance of psychrotrophic gram-negative bacteria (81.2 percent), that were identified by API 20E and API 20NE as belonging to genera: Aeromonas, Alcaligenes, Acinetobacter, Burkholderia, Chryseomonas, Enterobacter, Ewingella, Klebsiella, Hafnia, Methylobacterium, Moraxella, Pantoea, Pseudomonas, Serratia, Sphingomonas e Yersinia were oserved. The gram-positive bacteria (18.8 percent), were identified by API 50 CH, API Coryne and API Staph, to genera: Bacillus, Brevibacterium, Cellum/Microbacterium, Kurthia e Staphylococcus. The API systems utilized could not identify all the bacterial isolates. Pseudomonas was the genus most isolated with P. fluorescens as the predominant species. Most of the isolates presented proteolytic and/or lipolytic activity at 4ºC, 7ºC and 10ºC showing high potential for milk and milk products spoilage. The results indicated that more attention must be taken to the procedures necessaries to reduce milk contamination with psychrotrophic bacteria.

Pesquisa de Salmonella spp. e microrganismos indicadores em carcaças de frango e água de tanques de pré-resfriamento em abatedouro de aves / Research of Salmonella spp. and indicators microorganisms in poultrycarcasses and chilling tanks water in poultry slaughterhouse

O objetivo desse trabalho foi pesquisar Salmonella spp. e microrganismos indicadores (coliformestotais-CT, coliformes termotolerantes-CTT, aeróbios mesófilos-AM e microrganismos psicrotróficos-MP) em carcaças de frango e água dos tanques de pré-resfriamento em um frigorífico do norte do Paraná.Foram analisadas 120 carcaças de frango (60 antes do pré-chiller e 60 após a saída do chiller) e 120amostras de água (60 pré-chiller e 60 do chiller), totalizando 20 coletas. Para as análises utilizaram-se ametodologia recomendada pela legislação brasileira e sistema PetrfilmTMAC. Salmonella spp. foi isoladaem uma carcaça antes do pré-chiller e outra após a saída do chiller, ambas identificadas como SalmonellaO8, 20: z4, z23. Nas amostras de água foram isolados e identificados seis sorovares no pré-chiller, cincoSalmonella O8,20;z4,z23 e um S. Tennessee. As médias de CT nas carcaças antes do pré-chiller e após asaída do chiller e na água destes tanques foram 3,74 NMP/g, 3,10 NMP/g e 4,00 NMP/100mL / 2,81 NMP/100mL respectivamente; CTT 3,65 NMP/g / 3,00 NMP/g e 3,81 NMP/100mL / 2,73 NMP/100mL; AM 6,40UFC/g / 5,60 UFC/g e 4,40 UFC/mL / 4,13 UFC/mL; MP 4,21 UFC/g e de 3,66 UFC/g. Nas carcaças defrango antes do pré-chiller e após o chiller e na água do pré-chiller e chiller não foi observadadiferença significativa (p>0,05) nos índices de contaminação com relação aos microrganismos indicadoresestudados. Pelos resultados obtidos pode-se concluir que no frigorífico estudado não houve reduçãoda contaminação bacteriana das carcaças durante a passagem pelos tanques.

The purpose of this work was to research the Salmonella spp. and indicators microorganisms (total coliforms-CT, thermotolerant coliforms-CTT, mesophlic aerobes-AM and psychotrophic microorganisms) in poultry carcasses and chilling tanks water in a poultry slaughterhouse in north of Paraná state. Had been analyzed 120 poultry carcasses (60 before the entrance in the chilling tank and 60 after the exit of the chilling tank) and 120 water samples (60 from pre-chiller tank and 60 from chiller tank), totalizing 20 collections. For the analyses was used the brazilian legislation and PetrifilmTMAC. Salmonella spp. was isolated in one poultry carcass before the entrance in the chilling tank and other after the exit of the chilling tank, both identified as Salmonella O8,20;z4,z23. In the water samples was recognized six serovars in pre-chiller tank, five as Salmonella O8,20;z4,z23 and one S. Tennessee. The means of TC on carcasses before the entrance and after the exit of the tanks and in the water samples from pre-chiller tank and in chiller were 3,74 MPN/g / 3,10 MPN/g and 4,00 MPN/100mL / 2,81 MPN/100mL respectively; the mean of TCC was 3,65 MPN/g / 3,00 MPN/g and 3,81 MPN/100mL / 2,73 MPN/100mL; the mean of MA was 6,40 CFU/g / 5,60 CFU/g and 4,40 CFU/mL e 4,13 CFU/mL; the mean of MP was 4,21 CFU/g /3,66 CFU/g and . It was not observed any significant difference (p>0,05) in contamination index neither in poultry carcasses nor in tank water samples. It is possible to conclude that chilling tanks were not able to remove the microorganisms from the carcasses and could contribute to cross-contamination due to elevate water contamination.