RESUMEN
La congelación y almacenamiento en nitrógeno líquido (N2L) es la técnica más utilizada para preservar el semen de canino y de otras especies domésticas durante largos períodos de tiempo. Este estudio fue diseñado para validar el uso del ultracongelador de -80C para congelar y almacenar semen canino en pajuelas. Tres protocolos fueron ensayados (n=10): Control: semen congelado y almacenado en N2L; Exp. 1: semen congelado y almacenado -80C, y Exp.2: semen congelado a -80C y almacenado en N2L. Postdescongelación se evaluó por citometría de flujo la viabilidad e integridad de membrana plasmática (SYBR-14/PI), potencial de membrana mitocondrial (DYm; JC-1), integridad de la membrana del acrosoma (PSA/FITCPI), translocación de fosfatidilserina (Annexin-V-FITC/PI) y fragmentación del ADN (TUNEL). No se observaron diferencias significativas (P<0,05) entre los grupos Control, Exp.1 y Exp.2 respecto a: integridad de membrana plasmática intacta (42,2 ± 5,3; 35,57 ± 10,3 y 40,76 ± 12,1; respectivamente), DYm normal (54,7 ± 20,6; 44,4 ± 15,8 y 43,4 ± 15,3 respectivamente), membrana acrosomal intacta (42,9 ± 11,1; 53,2 ± 15,8 y 48,7 ± 20,1 respectivamente) y ADN fragmentado (0,87 ± 0,41; 0,75 ± 0,16; 0,79 ± 0,27 respectivamente). Sin embargo, el promedio de la motilidad progresiva postdescongelación de los grupos E1 y E2 (37,0 ± 4,4%; 36,8 ± 4,1% respectivamente) demostraron diferencias (P<0,05) respecto al grupo Control (55,9 ± 8,7%). Los resultados obtenidos en el presente estudio demostraron que la utilización del ultracongelador de -80C para congelar y almacenar espermatozoides caninos tiene un uso potencial en medicina veterinaria como alternativa a la utilización del N2L.
The freezing and storage in liquid nitrogen (LN2) is the technique used most for the preservation of canine and other domestic species semen, for long periods of time. This study was designed to validate the use of deep freezer at -80C to freeze and store canine semen in straws. Three protocols were tested (n = 10): Control: sperm frozen in N2L and stored; Exp 1: sperm frozen and stored -80°C, and Exp.2: semen frozen at -80 ° C and stored in N2L. Post-thawing was assessed by flow cytometry and the viability of plasma membrane integrity (SYBR-14/PI), mitochondrial membrane potential (YDm, JC-1), acrosome membrane integrity (PSA / FITC-PI), translocation of phosphatidylserine (Annexin -V-FITC/PI) and DNA fragmentation (TUNEL). No significant differences (P <0.05) between the Control, Exp.2 and Exp.1groups regarding: intact plasma membrane integrity (42.2 ± 5.3, 35.57 ± 10.3 and 40.76 ± 12.1, respectively), YDm normal (54.7 ± 20.6, 44.4 ± 15.8 and 43.4 ± 15.3, respectively), intact acrosomal membrane integrity (42.9 ± 11 , 1, 53.2 ± 15.8 and 48.7 ± 20.1, respectively) and fragmented DNA (0.87 ± 0.41, 0.75 ± 0.16, 0.79 ± 0.27, respectively). However, the average motility of the post-thawing of Exp.1 and Exp.2 groups (37.0 ± 4.4% 36.8 ± 4.1% respectively) showed significant differences (P <0.05) than the Control group (55.9 ± 8.7%). The results obtained in this study showed that the use of deep freezer at -80°C for freezing and storing canine sperm has potential use in veterinary medicine as an alternative to the use of N2L.