Estudo da morfologia e status oxidativo em rim de ratos com nefropatia isquêmica após tratamento com células-tronco mesenquimais de tecido adiposo / Study of morphology and oxidative status in kidney of rats with ischemic nephropathy after treatment with adipose tissue mesenchymal stem cells

A nefropatia isquêmica é uma doença renal crônica provocada pela redução do fluxo sanguíneo renal que pode progredir para a doença renal terminal, cujo tratamentos disponíveis se baseiam em terapias substitutivas da função renal, como diálise ou transplante renal. No entanto, devido ao alto custo dos tratamentos e a carência de órgãos, se faz necessária a busca por novas terapias, como as células-tronco (CT). Apesar do potencial terapêutico das CT em doenças crônicas, não está claro se essas células mantêm seus efeitos benéficos em órgãos lesionados por tempo prolongado. O objetivo desse estudo foi avaliar os efeitos precoces e tardios do tratamento com células-tronco adiposas (CTA) sobre a morfologia e o status oxidativo em rins de ratos com nefropatia isquêmica. A isquemia renal foi induzida pelo modelo 2rins-1clip (2R1C) e, depois de um mês da clipagem da artéria renal, foram injetadas 106 células-tronco na região subscapsular do rim afetado. Após 15 e 30 dias da injeção das CTA, a morfologia renal foi verificada por meio da análise macroscópica, microscópica e ultraestrutural. Além disso, o status oxidativo foi avaliado no tecido renal através da mensuração da atividade das enzimas antioxidantes catalase e glutationa peroxidase; e de marcadores biológicos de dano oxidativo, como proteínas carboniladas, 3-Nitrotirosina e 4-Hidroxinonenal. Por imunoperoxidase foi possível localizar as células-tronco adiposas GFP+ foram rastreadas e encontradas tanto 15 dias, quanto 30 dias após a injeção na região subcapsular. A restauração da arquitetura renal foi evidenciada 15d após o uso das células, onde detectamos redução na deposição de fibras colágenas no parênquima renal, o que não foi observado 30d após o uso das células. Os resultados também foram confirmados através da análise da ultraestrutura renal que mostraram restauração da arquitetura renal no grupo de 15d, não evidenciada no grupo de 30d. Quanto a análise do status oxidativo, somente os animais com nefropatia isquêmica mais prolongada apresentaram estresse oxidativo com redução da atividade da enzima antioxidante catalase no tecido renal. Além disso, foi observado dano proteico e lipídico, sem melhora dessa condição nos animais 30d após o tratamento com as células-tronco. No modelo de nefropatia isquêmica avaliado, o tratamento com CTA mostrou benefícios na morfologia renal a curto prazo, mas não tardiamente, apesar da permanência dessas células no tecido. Acreditamos que o estresse oxidativo, evidenciado somente no tecido renal com isquemia mais prolongada, possa ter dificultado a ação das células-tronco, contribuindo para tais achados. Esses resultados abrem perspectivas para o aprofundamento do estudo quanto à caracterização dos mecanimos de ação das CTA nas respostas anti-fibrogênicas, assim como o estabelecimento do número, frequência, vias de administração e melhor momento para uso dessas células no tratamento de doenças renais crônicas.

Ischemic nephropathy is a chronic kidney disease caused by reduced kidney blood flow that can progress to end stage kidney disease, whose available treatments are based on kidney function replacement therapies, such as dialysis or kidney transplantation. However, due to the high cost of treatments and the lack of organs, it is necessary to search for new therapies, such as stem cells (SC). Despite the therapeutic potential of SC in chronic diseases, it is unclear whether these cells maintain their beneficial effects on injured organs for a long time. The aim of this study was to evaluate the early and late effects of adipose-derived stem cells (ADSC) treatment on the morphology and oxidative status in kidneys of rats with ischemic nephropathy. Renal ischemia was induced by the 2kidneys-1clip (2K1C) model and, after a month of clipping the renal artery, 106 stem cells were injected into the subscapsular region of the affected kidney. After 15 and 30 days of ADSC injection, renal morphology was verified by macroscopic, microscopic, and ultrastructural analysis. In addition, oxidative status was assessed in renal tissue by measuring the activity of the antioxidant enzymes catalase and glutathione peroxidase; and biological markers of oxidative damage, such as carbonylated proteins, 3-nitrotyrosine and 4-hydroxynonenal. By immunoperoxidase, it was possible to locate GFP + adipose-derived stem cells that were tracked and found both 15 days and 30 days after injection in the subcapsular region. The restoration of the renal architecture was evidenced 15d after the use of the cells, where we detected a reduction in the deposition of collagen fibers in the renal parenchyma, which was not observed 30d after the use of the cells. The results were also confirmed by analyzing the renal ultrastructure, which showed restoration of the renal architecture in the 15d group, not evidenced in the 30d group. Regarding the analysis of oxidative status, only animals with more prolonged ischemic nephropathy presented oxidative stress with reduced activity of the antioxidant enzyme catalase in renal tissue. In addition, protein and lipid damage was observed, with no improvement in this condition in the animals 30d after treatment with stem cells. In the evaluated ischemic nephropathy model, treatment with ADSC showed benefits in renal morphology in the short term, but not late, despite the permanence of these cells in the tissue. We believe that oxidative stress, evidenced only in renal tissue with more prolonged ischemia, may have hindered the action of stem cells, contributing to such findings. These results open perspectives for further study on the characterization of ADSC mechanisms of action in anti-fibrogenic responses, as well as the establishment of the number, frequency, routes of administration and the best time to use these cells in the treatment of chronic kidney diseases.

Estructura y la ultraestructura del ovario de Cichlasoma urophthalmus (Perciformes: Cichlidae)

Structure and ultrastructure of the ovary of Cichlasoma urophthalmus (Osteichthyes: Cichlidae). The study of the normal development, differentiation, structure and function of various components of developing follicles in the ovaries of numerous fish species have been a consistent focus of comparative reproduction. The structural and ultrastructural features of gonads from Cichlasoma urophthalmus have received scarce attention. In this work, we realized a descriptive study of female gonads of Cichlasoma urophthalmus. A total of 40 samples were collected in the Veracruz Alvarado Lagoon, Mexico in 2007-2008 period including the windy, dry and rainy seasons. Female gonads were extracted and a portion was fixed in 4% formaldehyde for treatment for routine histology hematoxylin and eosin (HE) and another part was processed for transmission electron microscopy (TEM). The gonads were fixed in 3% glutaraldehyde and 2% osmium tetroxide, followed by dehydrated in ethanol 50%, 70%, 80%, 95% and 100% for inclusion in Epon, thin sections were then prepared and were contrasted with lead citrate and uranyl acetate. The process of oocyte development can be divided into five distinct stages (formation of oocytes from oogonia, primary growth, lipid stage, vitellogenesis and maturation). In this work, we found that the primary growth stage is characterized by intense RNA synthesis and the differentiation of the vitelline envelope. Secondary growth starts with the accumulation of lipid droplets in the oocyte cytoplasm (lipid stage), which is then followed by massive uptake and processing of proteins into yolk platelets (vitellogenic stage). During the maturation stage, the lipid inclusions coalesce into a single oil droplet, and hydrolysis of the yolk platelets leads to the formation of a homogeneous mass of fluid yolk in mature eggs. In conclusion, further studies should elucidate structure and ultrastructural changes in the ovarian follicular components, in C. urophthalmus during different stages of oocyte growth. Rev. Biol. Trop. 59 (2): 743-750. Epub 2011 June 01.

Se realizó un estudio descriptivo de las gónadas femeninas de Cichlasoma urophthalmus. Las muestras fueron recolectadas en la Laguna de Alvarado Veracruz, México en el período 2007-2008 que incluyó las temporadas de Nortes, Secas y Lluvias. Se extrajeron las gónadas femeninas y una parte se fijó en formol al 4% para su tratamiento por técnica histológica de rutina hematoxilina y Eosina (H-E) y otra parte se procesó para microscopia electrónica de transmisión. Las gónadas se fijaron en glutaraldehído al 3% y OsO4 al 2%, se deshidrataron en etanol de 50 al 100% para ser incluidas en Epón. Se realizaron cortes finos y semifinos contrastados con citrato de plomo y acetato de uranilo. Los ovarios de C. urophthalmus son pareados presentan un desarrollo asincrónico con ovocitos previtelogénicos en estadio perinuclear tardío, asociados a las lamelas ovígeras y ovocitos vitelogénicos del VII estadio, éstos últimos presentan una zona radiada bien definida, con gránulos de vítelo lipídico y vesículas de vítelo proteico que se distribuyen en capas concéntricas, que rodean al núcleo. El presente estudio, permitió conocer más a fondo los cambios de la estructura y ultraestructura de los componentes de los folículos ováricos, en C. urophthalmus durante las diferentes etapas de crecimiento de los oocitos.

Avaliação ultraestrutural comparativa de biomaterial particulado de origem ovina / Comparative ultrastructure evaluation of particle biomaterial of ovine origin

Introdução: Os biomateriais de enxerto ósseo xenogênicos têm sido alvo de grande interesse científico. A fácil aplicação clínica e o baixo custo atraem profissionais e pacientes. Como alternativa ao biomaterial bovino é possível desenvolver o ovino. Objetivo: Comparar por microscopia eletrônica de varredura a ultraestrutura de biomaterial particulado de origem ovina com ossos equino e bovino disponíveis comercialmente, além de osso humano proveniente de um banco de tecidos musculoesqueléticos. Material e métodos: Osso mandibular de ovelha, oriundo de criadouro local, submetido à moagem e a protocolo quúmico e físico para esterilização foi comparado com variadas partículas de biomateriais. Avaliaram-se as imagens obtidas quanto à quantidade e área de porosidades (x²), rugosidade visual da superfície e relação Ca/P. Resultados: Não houve diferenças significativas entre as imagens das amostras, mesmo assim porosidades e rugosidades mais expressivas foram observadas nas partículas de osso bovino. Conclusão: Em relação à porosidade, o osso ovino experimental apresentou características mais semelhantes ás do osso humano do que os ossos equino e bovino. Quanto à rugosidade visual, o osso equino foi o que mais se aproximou do humano, seguido pelo osso ovino e pelo bovino. No que diz respeito á relação Ca/P, o osso ovino evidenciou o menor valor e mais distante do osso humano; depois vieram o equino e o bovino.

Introduction: Xenogenic bone grafting biomaterials have been vastly studied. Easy clinical use and low cost have attracted professionals and patients. Alternatively to bovine biomaterial, ovine biomaterial can be developed. Objective: To compare by scanning electron microscopy the ultrastructure of a particle ovine biomaterial to equine and bovine commercially available biomaterials, besides to human bone from a tissue bank. Material and methods: Ovine mandibular bone, from a local sheep farm, was ground and submitted to a chemical and physical sterilization protocol to be compared to different biomaterial particles. Images were obtained and evaluated according to the quantity and area values of porosities (?2), visual surface roughness, and Ca/P ratio. Results: There was no statistical difference among the sample images; however, the bovine particles presented marked porosities and roughness. Conclusion: In relation to porosity, experimental ovine bone presented closer characteristics to human bone than equine and bovine. Regarding to surface roughness, equine bone was the most similar to human bone, followed by ovine and bovine. Concerning to Ca/P ratio, ovine bone presented the lowest and most distant value from human bone, followed by equine and bovine.

Anatomía de la agalla en Ficus benjamina (Moraceae) asociada a "thrips" (Tubulifera: Phlaeothripidae) / Gall anatomy in Ficus benjamina (Moraceae) associated with "thrips" (Tubulifera: Phlaeothripidae)

Anatomy of the gall in Ficus benjamina (Moraceae) associated with thrips (Tubulifera: Phlaeothripidae). The galls are generally recognized as abnormal growths of tissues affected by insects when lay the eggs or feed on plant tissues. In, Ficus benjamina the insect Gynaikothrips garitacambroneroi, when feeding on leaf tissues, causes a gall which consists on the bending of the leaves. In this paper we analyzed the ultrastructure of sections of healthy leaves, and leaves with galls of F. benjamina using scanning electron microscopy (SEM). We analyzed the number of stomata per area and found no significant changes, although there is less cuticular wax on the surface of the affected area by the barb. In the leaf area affected by G. garitacambroneroi, bacilli and fungi were observed and eggs of other organisms as possible invaders. Moreover, the inner tissues of leaves with galls had some problems in the differentiation of palisade and spongy mesophylls, and only parenchymatous tissue was observed. Rev. Biol. Trop. 57 (Suppl. 1): 179-186. Epub 2009 November 30.

Las agallas son reconocidas generalmente como crecimientos anormales de los tejidos afectados por insectos cuando estos realizan la deposición de los huevecillos o se alimentan de los tejidos de la planta. En Ficus benjamina la acción del thrips Gynaikothrips garitacambroneroi al alimentarse de los tejidos de la hoja, provoca una agalla que consiste en el doblamiento de la hoja. En este trabajo se analizó la ultraestructura de secciones de hojas sanas y hojas con agallas de F. benjamina mediante el uso de la microscopia electrónica de barrido. Se analizó la cantidad de estomas por área y no se determinó alteración significativa, aunque se observa menor cantidad de cera cuticular en la superficie del área afectada por la agalla. En la zona de la hoja afectada por G. garitacambroneroi se observó bacilos y hongos y huevecillos de otros organismos, aparentemente invasores. Además, en los tejidos internos de las hojas con agallas se pudo determinar problemas de diferenciación de los mesófilos de empalizada y esponjoso, observándose sólo tejido parenquimático.