Cultivo in vitro de raíces pilosas del arbusto Phyllanthus acuminatus (Phyllanthaceae) / In vitro culture of hairy roots of the shrub, Phyllanthus acuminatus (Phyllanthaceae)

Introducción: En condiciones naturales, las raíces del arbusto, Phyllanthus acuminatus, producen bajas concentraciones de metabolitos secundarios de interés medicinal. Esto abre una oportunidad para el cultivo in vitro, para aumentar la concentración de metabolitos. Objetivo: Determinar las condiciones óptimas de cultivo líquido para raíces pilosas de P. acuminatus. Métodos: Se utilizó la evaluación del crecimiento de la biomasa según porcentaje de inóculo inicial (0.50 y 0.10 %), porcentaje de nutrientes de los medios (100, 50 y 25 %) y tasa de agitación (90, 100 y 110 min-1) (N= 15 repeticiones). Resultados: Las mejores condiciones de cultivo líquido fueron: 0.10 % de inóculo inicial, nutrientes al 25 % y 90 min-1 para la tasa de agitación. Hay diferencias entre las raíces pilosas y las raíces no transformadas. Conclusiones: es factible producir raíces pilosas de P. acuminatus a gran escala, aplicando e implementando las condiciones evaluadas de porcentaje de inóculo, nutrientes en el medio y tasas de agitación utilizadas en este estudio.

Introduction: Under natural conditions, the roots of the shrub, Phyllanthus acuminatus, produce low concentrations of secondary metabolites of medicinal interest. This opens an opportunity for in vitro culture, to increase metabolite concentration. Objective: To determine the optimal liquid culture conditions for hairy roots of P. acuminatus. Methods: We used biomass growth evaluation according to initial inoculum percentage (0.50 and 0.10 %), percentage of medium nutrients (100, 50 and 25 %) and agitation rate (90, 100 and 110 min-1) (N=15 replications). Results: The best liquid culture conditions were: 0.10 % of initial inoculum, nutrients at 25 % and 90 min-1 for the agitation rate. There are differences among hairy roots and non-transformed roots. Conclusions: It is feasible to produce P. acuminatus hairy roots at a large scale, applying and implementing the evaluated conditions of inoculum percentage, nutrients in the medium and agitation rates.

Pre-incubation of ruminal inocula to assess in vitro gas production and digestibility / Pré-incubação de inóculo ruminal para avaliação da produção de gases e digestibilidade in vitro

ABSTRACT: In vitro gas production techniques represent a valuable tool to describe the kinetics of ruminal degradation of food. However, the ruminal liquor used as a microbial inoculum has been a great source of variation and error. A standardization of this factor should contribute to assure the independence of food fermentation parameters from those of the inocula. In this research it was hypothesized that a controlled pre-incubation treatment of ruminal liquor could contribute to stabilize and homogenize the undigested residues of blanks and as a consequence, of the production of residual cumulative gas production (CGP). A pre-incubation (i.e. previous real incubation) of rumen inocula was developed with a simple substrate similar to the diet offered to donors at 1% w/v for 0, 1, 2 and 4 h (Control, Prei-1, Prei-2 and Prei-4 treatments respectively). Once the pre-incubation hours were completed, they were incubated with contrasting substrates and without substrate (i.e. blanks) in order to evaluate the CGP, in vitro digestibility of the DM and fermentation products. Although, the fermentative activity of the pre-incubated inoculums worked satisfactorily in the in vitro system, contrary to what was speculated, residues of the pre-incubation increased the variability and heterogeneity of variances among blanks. Consequently, it was concluded that the pre-incubations did not work to generate more homogeneous and less variable ruminal liquor for the in vitro gas production system.

RESUMO: Técnicas de produção de gás in vitro representam uma ferramenta valiosa para descrever a cinética de degradação ruminal dos alimentos. No entanto, o líquido ruminal utilizado como inóculo microbiano tem sido uma grande fonte de variação e erro. A padronização deste fator deve contribuir para garantir a independência dos parâmetros de fermentação dos alimentos a partir dos inóculos. Neste trabalho, hipotetizou-se que um tratamento controlado de pré-incubação do líquido ruminal poderia contribuir para estabilizar e homogeneizar os resíduos não digeridos dos brancos e, como conseqüência, da produção de produção cumulativa de gás residual (CGP). Uma pré-incubação (ou seja, incubação real prévia) dos inóculos do rúmen foi desenvolvida com um substrato simples semelhante à dieta oferecida aos doadores a 1% p/v por 0, 1, 2 e 4 h (Controle, Prei-1, Pré- 2 e Prei-4 tratamentos respectivamente). Uma vez completadas as horas de pré-incubação, elas foram incubadas com substratos contrastantes e sem substrato (ou seja, brancos) para avaliar o CGP, a digestibilidade in vitro da MS e os produtos de fermentação. Embora a atividade fermentativa dos inóculos pré-incubados tenha funcionado satisfatoriamente no sistema in vitro, ao contrário do que foi especulado, os resíduos da pré-incubação aumentaram a variabilidade e heterogeneidade das variâncias entre os brancos. Consequentemente, concluiu-se que as pré-incubações não funcionaram para gerar um líquido ruminal mais homogêneo e menos variável para o sistema de produção de gás in vitro.

Isolation of phytoplasmas associated to frogskin disease in cassava / Aislamiento de fitoplasmas asociados a cuero de sapo en yuca

ABSTRACT Frogskin is the most limiting disease of cassava crops in Colombia, causing losses in production up to 90%. Since this disease was associatated with 16SrIII phytoplasma presence, a study was carried out to isolate this phytoplasma using liquid and solid culture media. Root, petiol, stem, leaf and cutting tissues of cassava affected by frogsking were employed as source materials. Molecular and microscopy techniques were applied to verify the phytoplasma growth and to discard other microorganism´s presence. The results showed that the media consistently allow phytoplasma growth, and colonies in solid medium were obtained. PCR, qPCR and sequencing tests confirmed the presence of 16SrIII group phytoplasmas in both liquid and solid culture media. Additionally, the isolation of a pigeon pea witches' broom phytoplasma strain (group 16SrIX) was obtained from stems, petioles and flowers of symptomatic Catharanthus roseus confirming the effectiveness of the medium in the phytoplasma isolation and culture. This is the first isolation of field-collected phytoplasma strains in groups 16SrIII and 16SrIX in America that confirm and corroborate the previous results in phytoplasma cultivation achieved on micropropagated and field-collected phytoplasma infected samples.

RESUMEN En Colombia, el ''cuero de sapo'' es la enfermedad más limitante del cultivo de yuca, que ocasiona pérdidas en producción de raíces hasta del 90%. La presente investigación tuvo como objetivo, el aislamiento in vitro del fitoplasma asociado a cuero de sapo. Para ello, se emplearon medios de cultivo líquido y sólido, usando tejidos de raíces, peciolos, tallos, hojas y semillas de yuca, afectada por la enfermedad. Pruebas de PCR, qPCR, secuenciación, microscopia de luz y microscopia electrónica de transmisión fueron aplicadas, para verificar el crecimiento de fitoplasmas y descartar la presencia de otros microrganismos. Los resultados muestran que los medios permiten, consistentemente, el crecimiento de fitoplasmas, obteniendo colonias en medio sólido a partir de medio líquido. Las pruebas de PCR, qPCR y secuenciación confirmaron presencia de Cassava frogskin phytoplasma del grupo 16SrIII, en los dos medios de cultivo. Además, a partir de las colonias, se lograron fotografías de células con morfología y tamaño similares a las fitoplasmáticas. Es la primera vez, en el mundo, que se consolida información suficiente del aislamiento de fitoplasmas en medio artificial. Adicionalmente, se logró el aislamiento de Pigeon pea witches´ broom phytoplasma del grupo IX, a partir de tallos, peciolos y flores de vinca (Catharanthus roseus), con síntomas asociados a fitoplasmas. Este proceso permitió corroborar la efectividad del medio y la morfología de las células fitoplasmáticas, bajo microscopia electrónica.

Inactivation of Alicyclobacillus acidoterrestris ATCC 49025 spores in apple juice by pulsed light: Influence of initial contamination and required reduction levels / Inactivación de esporas de Alicyclobacillus acidoterrestris ATCC 49025 por luz pulsada en jugo de manzana: Influencia de la contaminación inicial y de las reducciones requeridas

The purpose of this study was to analyze the response of different initial contamination levels of Alicydobadllus acidoterrestris ATCC 49025 spores in apple juice as affected by pulsed light treatment (PL, batch mode, xenon lamp, 3pulses/s, 0-71.6 J/cm²). Biphasic and Weibull frequency distribution models were used to characterize the relationship between inoculum size and treatment time with the reductions achieved after PL exposure. Additionally, a second order polynomial model was computed to relate required PL processing time to inoculum size and requested log reductions. PL treatment caused up to 3.0-3.5 log reductions, depending on the initial inoculum size. Inactivation curves corresponding to PL-treated samples were adequately characterized by both Weibull and biphasic models (R²d j 94-96%), and revealed that lower initial inoculum sizes were associated with higher inactivation rates. According to the polynomial model, the predicted time for PL treatment increased exponentially with inoculum size.

El objetivo del presente trabajo fue evaluar la influencia de la concentración de esporas de Alicyclobacillus acidoterrestris ATCC 49025 en la respuesta de inactivación por acción de la luz pulsada (modo estanco, lámpara de xenón, 3 pulsos/s, 0-71,6 J/cm²) en jugo de manzana comercial. Para caracterizar la relación existente entre la concentración de esporas y el tiempo de tratamiento con las reducciones logarítmicas alcanzadas luego de la exposición a la luz pulsada (LP), se aplicaron 2 modelos: el de Weibull y el bifásico. Adicionalmente, se estimó la relación entre el tiempo de tratamiento con LP y la concentración inicial de inoculo en el jugo con las reducciones logarítmicas logradas mediante regresión múltiple y la metodología de superficie de respuesta (MSR). La inactivación por LP provocó entre 3 y 3,5 reducciones logarítmicas, según la concentración inicial de esporas. Las curvas de inactivación fueron adecuadamente caracterizadas por los modelos matemáticos propuestos (Restado = 94-96%). El análisis por MSR permitió predecir un aumento exponencial del tiempo de tratamiento requerido conforme se incrementa el nivel de contaminación inicial.

Influence of manure concentration as inoculum in anaerobic digestion of vinasse / Influência da concentração de esterco como inóculo na digestão anaeróbia da vinhaça

Vinasse, main residue of the sugarcane industry, has high pollutant content, being subjected to the use in biogas production due to the high content of organic matter non-toxic to microbial action. For a consolidated process, it is necessary to study parameters that influence the process, in which the amount of inoculum is one of the major factors in the biological process of biogas production. This study investigated the influence of the amount of manure as inoculum (0.5 to 5.5%) during the biodigestion process, evaluating variables such as chemical oxygen demand (COD), pH, biogas production, methane concentration, total solids and total phosphorus and nitrogen contents, as well as microbiological analysis in the sludge remaining in the digester. Biodigestion occurred normally, with hydraulic retention time (HRT) of 20 days, with an acidogenic phase, subsequent stabilization of pH and biogas production. The vinasse had COD and total solids reduced during biodigestion by around 67 and 40%, respectively. Biogas production was increased after the fifth day. Among the three studied conditions, there was no significant increase in efficiency of inoculum use and it can be used the lowest amount, 0.5 % (m v-1).

A vinhaça, principal resíduo da indústria sucroalcooleira, possui alto teor poluente, sendo passível seu uso na produção de biogás devido ao grande teor de matéria orgânica não tóxica à ação microbiana. Para que haja um processo consolidado, é necessário estudar parâmetros que influem em seu processo, sendo a quantidade de inóculo um dos principais fatores no processo biológico de produção de biogás. Este estudo verificou a influência da quantidade de esterco bovino como inóculo (de 0,5 a 5,5%) durante o processo de biodigestão, avaliando variáveis como demanda química de oxigênio (DQO), pH, produção de biogás, concentração de metano, sólidos totais e teores de fósforo total e de nitrogênio total, além de análises microbiológicas no lodo restante no biodigestor. A biodigestão aconteceu normalmente, com um tempo de retenção hidráulica (TRH) de 20 dias, verificando-se a fase acidogênica, posterior estabilização do pH e produção de biogás. A vinhaça teve seus parâmetros de DQO e de sólidos totais diminuídos durante a biodigestão, em torno de 67 e 40%, respectivamente. Houve crescente produção de biogás após o quinto dia. Percebeu-se que, dentre as três condições estudadas, não houve significativa elevação da eficiência de uso de inóculo, podendo ser usada a menor quantidade, 0,5% (m v-1).

Inoculação de Sclerotinia sclerotiorum em sementes de oleaginosas: transmissão e seus efeitos sobre a emergência de plantas / Inoculation of Sclerotinia sclerotiorum in seed of oleaginous plants: transmission and effects on emergence

O trabalho propôs-se a verificar a transmissibilidade de Sclerotinia sclerotiorum de sementes de canola, cártamo, crambe, girassol, nabo forrageiro e níger inoculadas artificialmente e suas implicações na emergência de plântulas. O isolado fúngico foi repicado em placas de Petri, contendo meio BDA, incubado a 20ºC e fotoperíodo de 12 horas. Após o crescimento do patógeno, foram colocadas 50 sementes de cada cultura por placa, onde permaneceram por 20 horas. Como testemunha, utilizaram-se sementes incubadas nas mesmas condições, porém apenas em meio BDA. Observou-se que S. sclerotiorum pode ser transmitido para as plântulas das culturas quando associado às suas sementes, sendo estas uma importante fonte de inóculo. O fungo provocou tombamento de pré e pós-emergência em todas as espécies estudadas.

The study aimed to verify the transmission of Sclerotinia sclerotiorum of rapeseed, safflower, crambe, sunflower, radish and niger seed (artificially inoculated) and its implications on seedling emergence. The fungal isolate was peaked in Petri dishes containing PDA medium and incubated at 20°C and 12 hours photoperiod. After the growth of the pathogen, 50 seeds were placed on each plate cultures where they remained for 20 hours. As a control we used seeds incubated under the same conditions, but only on PDA. It was observed that S. sclerotiorum can be transmitted to seedlings of crops when associated with its seeds, being an important source of inoculum. The fungus caused damping-off in all of the studied species.

Efecto de la carga orgánica de la gallinaza de jaula en el potencial de biometanización / Effect of chicken manure organic load on biomethane potential

El propósito de este estudio fue evaluar el efecto de la carga orgánica expresada en función de la relación inóculo/sustrato (RIS) sobre el potencial de biometanización de la gallinaza de jaula usando como inóculo lodo estiércol bovino. Se llevaron a cabo ensayos de biodegradación anaerobia a temperatura mesofílica de 39 °C. Para cada una de las cargas orgánicas evaluadas (16.6, 11.0, 8.3, 6.6 y 5.5 g SV/L) se cuantificaron las variables: ácidos grasos volátiles totales, alcalinidad, concentración amonio y volumen acumulado de metano. El mayor potencial de biometanización (0.58 m³ CH4/kg SV) se alcanzó cuando la biodegradación anaerobia se llevó a cabo con una RIS de 1.0. Los resultados obtenidos demuestran que la gallinaza es un sustrato potencial para ser degradado por digestión anaerobia y el rendimiento del proceso es directamente proporcional a la concentración de sustrato. Este estudio también confirma que la RIS permite diluir la concentración de compuestos inhibitorios como el amonio en el caso de la gallinaza de jaula.

The aim of this study was to evaluate the effect of inoculum to substrate radio (ISR) on biomethane potential of chicken manure using cattle slurry as inoculum. Biomethane potential assays were carried out at 39 °C mesophilic temperature. Total fatty acids, total alkalinity, ammonium concentration and accumulative methane volume were measured to evaluate organic load (16.6, 11.0, 8.3, 6.6 y 5.5 g VS/L). The highest biomethane potential (0.58 m³ CH4/kg SV) was reached when anaerobic biodegradation was carried out to ISR of 1.0. The results demonstrated that chicken manure is a potential substrate to be degraded by anaerobic digestion and process performance is directly proportional to substrate concentration. This study also confirms that ISR allow dilution of inhibitory components as ammonium by the case of chicken manure.

DETERMINACIÓN IN VITRO DE LA ACCIÓN PROBIÓTICA DE Lactobacillus plantarum SOBRE Yersinia pseudotuberculosis AISLADA DE Cavia porcellus / IN VITRO DETERMINATION OF THE PROBIOTIC Lactobacillus plantarum ACTION ON Yersinia pseudotuberculosis ISOLATED FROM Cavia porcellus

Se evaluó el efecto in vitro de Lactobacillus plantarum sobre Yersinia pseudotuberculosis aislada de cuyes (Cavia porcellus) e identificada bioquímica y molecularmente. Se determinó la viabilidad de L. plantarum a diferentes pH (3.25, 4.5, 7.6 y 8.2), sales biliares bovinas (3, 4 y 5%), bilis bovina (0.5, 1 y 2%) y temperatura (38 y 45°C). Se realizó antibiograma a ambas bacterias con Cefalotina, Cefepima, Ciprofloxacina, Dicloxacilina, Enrofloxacina, Gentamicina, Penicilina y Trimetropim-Sulfametoxasol. Se determinaron los péptidos de L. plantarum mediante HPLC y la cinética de crecimiento en dos sustratos (MRS y Pro), midiéndose: biomasa, pH, consumo de azúcar total y ácido láctico. Se observó un mejor crecimiento bajo pH 3.25, sales biliares 5%, bilis bovina 2% y temperatura de 45°C con valores de 3.0·10(12), 2.3·10(12), 8.6·10(11) y 3.0·10(12) UFC/ml, respectivamente. L. plantarum y el sobrenadante inhibieron a Y. pseudotuberculosis, con halos de 3 y 5 mm. Se observó resistencia de L. plantarum y Y. pseudotuberculosis a Penicilina y Dicloxacilina, respectivamente, con sensibilidad de ambas cepas a los demás antibióticos. Se evidenciaron los péptidos VAL-TIR-VAL y TIR-GLI-GLI-FA-MET en el sobrenadante de L. plantarum. Durante la fase logarítmica para los medios MRS y Pro se alcanzaron valores de 6.75·10(12) y 1.20·10(12) UFC/ml (biomasa), 6.96 y 5.49 (pH), y 0.65 y 0.76%, (ácido láctico), respectivamente. La comparación de los medios mediante un diseño de bloques al azar (P > 0.05), mostró similar comportamiento. L. plantarum demostró su potencial probiótico en condiciones in vitro.

The in vitro effect of Lactobacillus plantarum on Yersinia pseudotuberculosis isolated from guinea pig identified and evaluated biochemical and molecular. L. plantarum viability was determined at different pH (3.25, 4.5, 7.6 y 8.2), bovine bile salts (3, 4 y 5%), bovine bile (0.5, 1 y 2%) and temperature (38 y 45°C). Both bacteria susceptibility was performed with Cephalothin, Cefepime, Ciprofloxacin, Dicloxacillin, Enrofloxacin, Gentamicin, Trimethoprim-Sulfamethoxazole and Penicillin. L. plantarum peptides were determined by HPLC and growth kinetics on two substrates (MRS and Pro), measuring biomass, pH, total sugar consumption and lactic acid. Better growth was observed at 3.25 pH, 5% bile salts, 2% bovine bile and temperature 45 °C. with values 3,0·10(12), 2.3·10(12), 8.6·10(11) y 3.0·10(12) UFC/ml, respectively. L. plantarum and the supernatant inhibited Y. pseudotuberculosis, with halos of 3 to 5 mm. L. plantarum and resistance to penicillin and Y. pseudotuberculosis Dicloxacillin was observed, respectively, with sensitivity of both strains to other antibiotics. Peptides were evidenced VAL-TIR-VAL y TIR-GLI-GLI-FA-MET in the supernatant of L. plantarum. During the logarithmic phase for MRS and Pro 1012 values were reached 6.75·10(12) y 1.20·10(12) CFU / ml (biomass), 6.96 and 5.49 (pH) and 0.65 and 0.76 % (lactic acid) respectively. The comparison of means using a randomized block design (P > 0.05) showed similar behavior. L. plantarum demonstrated their probiotic potential in vitro conditions.

Producción a nivel de laboratorio de Clostridium septicum IRP15 para la formulación de una vacuna veterinaria / Laboratory production of Clostridium septicum IRP15 for the formulation of a veterinary vaccine

Objetivo: establecer las condiciones de producción a nivel de laboratorio de la alfa toxina de Clostridium septicum IRP15 para la formulación de una vacuna veterinaria y la optimización del proceso de producción. Métodos: se caracterizó y estandarizó la edad apropiada del inóculo para los cultivos en un fermentador New Brunswick Scientific 7 L. Las condiciones de cultivo fueron: cepa C. septicum IRP15, medio de cultivo VBH, 5 L/vaso de 7 L, inóculo de 250 mL (5 por ciento), 37 ºC, 24 h, bajo agitaciones prueba de 0, 25 y 50 r.p.m. Se estableció el perfil cinético morfológico, de biomasa, consumo de sustrato y producción de toxina. Resultados: para las fermentaciones de 0 y 25 r.p.m. no se presentó fase de adaptación; el microorganismo creció de manera exponencial hasta las 4 y 6 h de fermentación, consumiendo simultáneamente la mayor cantidad de glucosa presente en el medio. A partir de estas horas y hasta las 24, se realizó la prueba de DL50 en ratones y se destaca que a 25 r.p.m. se obtuvo el mayor título de toxina (1/23). En las fermentaciones a 50 r.p.m. se observó que el microorganismo experimenta una fase de adaptación de 4 h aproximadamente; con un retardo en producción de biomasa, consumo de glucosa y producción de toxina, condición que no resulta óptima para la producción del antígeno. Conclusiones: la producción de toxina se presenta en la fase logarítmica y durante la fase estacionaria, asociándose así al crecimiento y al fenómeno de esporulación(AU)

Objective: to set the laboratory production conditions of Clostridium septicum IRP15 alpha toxin for the formulation of a veterinary vaccine and the optimization of the productive process. Methods: the appropriate inoculum age for the cultures was characterized and standardized in a 7L New Brunswick Scientific biorreactor. The conditions of culturing were C. septicum IRP15 strain, VBH medium at 5 L/7 L glass, 250 mL (5 percent) inoculum, 37 ºC, and 24 h under shaking conditions of 0, 25 y 50 r.p.m. The following kinetic parameters were monitored: morphological changes, biomass production, glucose consumption and toxin production. Results: for the shaking conditions at 0 and 25 r.p.m., C. septicum did not show an adaptation phase growth. The bacteria kept growing at the log phase up to 4-6 hours of fermentation respectively, thus consuming the highest amount of glucose from the medium. As from the growth phase hours till the 24 h of cultivation, the 50 percent lethal dose (LD50) in mice assay was conducted and at 25 r.p.m. condition, the best titre of toxin was reached (1/23). The cultures at 50 r.p.m. condition showed that the bacteria experienced adaptation phase for almost four hours, resulting in delayed biomass production, glucose consumption and toxin production. These results suggested that 50 r.p.m. is not useful for the antigen production. Conclusions : the toxin production occurred at the log phase and during the stationary phase, thus it is associated to growth and to sporulation(AU)

Validación del inóculo por densitometría para las pruebas de susceptibilidad a los antifúngicos en especies del género Fusarium / Validation of the inoculum by densitometry for antifungal susceptibility testing in Fusarium species

El objetivo de este trabajo fue validar la preparación del inóculo por densitometría para las pruebas de susceptibilidad a los antifúngicos en especies del género Fusarium. Se emplearon 15 aislamientos clínicos de Fusarium spp. para preparar los inóculos por espectrofotometría y contaje de unidades formadoras de colonias en cámara de Neubauer, siguiendo los protocolos establecidos por los documentos de referencia M38-A2 del Instituto de Estándares Clínicos y de Laboratorio (CLSI) y E.DEF 9.1 del Comité Europeo para Pruebas de Susceptibilidad a los Antimicrobianos (EUCAST), respectivamente. En paralelo se determinaron las lecturas por densitometría para ambos procedimientos. Se estableció un rango de 0,5-0,7 unidades McFarland para la preparación del inóculo por densitometría según el CLSI, y un rango de 0,2-0,8 unidades McFarland para la metodología descrita por el EUCAST. Con este estudio, se logró validar la preparación del inóculo para las pruebas de susceptibilidad en Fusarium spp., utilizando la densitometría como método alternativo de los procedimientos descritos internacionalmente, con considerables ventajas para ser implementado en los laboratorios de microbiología clínica. La variabilidad en cuanto a la capacidad de esporulación y tamaño de las conidias, sobre todo en especies poco frecuentes de Fusarium, sugiere la necesidad de validar el inóculo por especie.

The purpose of this work was to validate the preparation of the inoculum by densitometry for antifungal susceptibility testing in Fusarium species. Fifteen clinical isolates of Fusarium spp. were used to prepare the inocula by spectrophotometry and counting of colony forming units in a Neubauer chamber, according to the protocols established by the reference documents M38-A2 of the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI), and E.DEF 9.1 of the European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing (EUCAST), respectively. Densitometry readings were determined in parallel for both procedures. A range of 0.5-0.7 McFarland units was established for inocula preparation by densitometry according to the CLSI, and a range of 0.2-0.8 McFarland units was established for the methodology described by EUCAST. This study allowed validating the preparation of the inocula for antifungal susceptibility testing in Fusarium spp., using densitometry as an alternative method for other procedures described internationally, with considerable advantages that can be implemented at clinical microbiology laboratories. The variability regarding sporulation capacity and conidia size, especially in less frequent Fusarium species, suggests the need of validating inocula per species.

Combinação entre turfa vermelha e areia na obtenção de substrato-inóculo do fungo micorrízico arbuscular Glomus clarum / Combination of red peat and sand for obtaining substrate-inoculum of arbuscular mycorrhizal fungi Glomus clarum

O objetivo com o presente estudo foi verificar a influência de diferentes proporções de turfa vermelha e areia na composição do substrato sobre a colonização radicular por fungos micorríozicos arbusculares (FMA) e no desenvolvimento vegetativo de aveia branca. O experimento foi conduzido em casa de vegetação e os tratamentos foram constituídos a partir de combinações de turfa vermelha (T) e areia (A): 100%A; 25%T+75%A; 50%T+50%A; 75%T+25%A; 100%T. Dez sementes de aveia foram semeadas por vaso plástico preto (350ml de volume), contendo 5 gramas de inóculo de Glomus clarum. Quarenta e três dias após a semeadura da aveia, foram realizadas avaliações de desenvolvimento vegetativo e colonização micorrízica do sistema radicular das plantas, através da presença de estruturas, como hifas, arbúsculos e vesículas. Substratos com maior quantidade de turfa induziram maior desenvolvimento da parte aérea e maior qualidade de raízes (QR), em termos de volume de raízes. Entretanto, a presença da turfa acima de 50% no substrato diminuiu a percentagem de colonização micorrízica da aveia. A similaridade verificada entre as curvas de regressões de percentagem de colonização e Água Facilmente Disponível, com mesmo ponto de máximo, sugerem que a quantidade de mesoporos resultante da combinação turfa/areia influencia na resposta dos FMA, a melhor resposta é obtida em mistura com 32,5% de turfa vermelha.

The purpose of this study was to investigate the influence of different proportions of red peat and sand in the substrate on root colonization by arbuscular mycorrhizal fungi (AMF) and the consequent growth of white oats. The experiment was conducted in a greenhouse and the treatments consisted of combinations of read peat (T) and sand (A): 100%A; 25%T+75%A; 50%T+50%A; 75%T+25%A; 100%T. Ten oat seeds were sown per container (350ml volume) containing 5 grams of Glomus clarum inoculum. Forty-three days after sowing, vegetative development and mycorrhizae colonization of the plants' root system were evaluated by recording the presence of structures such as hyphae, arbuscules and vesicles. Substrates with higher amount of red peat led to increased shoot growth and quality of roots. However, the presence of peat above 50% in the substrate decreased the percentage of colonization of oats by AMF. The similarity of the regression curves of percentage of colonization and readily available water, with the same maximum point, suggest that the amount of mesopores influences the AMF response. It is concluded that the best quality of the substrate for the production of inoculum of Glomus clarum in mixtures of red peat and sand is obtained with about 32,5% red peat content in the mixture.

Densidade de esporos de fungos microrrizicos arbusculares do banco de germoplasma de Glomales da Unipar / Densidad de esporas de hongos micorrizas arbusculares del banco de germoplasma de Glomales en unipar / Spore density of arbuscular mycorrhizal fungi in glomales germplasm bank of unipar

Os fungos micorrízicos arbusculares (FMAs) formam associação simbiótica mutualística com as raízes da maioria das espécies de plantas que geralmente contribui para o crescimento e sustentabilidade da produção das plantas. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a densidade de esporos de FMAs depositados no banco de germo plasma de glomales utilizando Brachiaria brizantha como planta hospedeira. Foram avaliados13 isolados (acessos) de FMAs fornecidos pela Universidade Estadual de Londrina ? UEL e Instituto Agronômico do Paraná - IAPAR. Os inóculos de FMAs avaliados foram: Glomus clarum, Scutellospora calospora, S. heterogama, Gigaspora margarita, Paraglomus brasiliensis, Glomus etunicatum, Gigaspora rosea e Acaulospora spp. A B. brizantha foi crescida em vasos com 3 Kg de solo estéril coletado do Campus II da Universidade Paranaense ? UNIPAR. O período de avaliação foi entre 2011/2012. Após o período de um ano, foram encontrados esporos de FMAs em todos os acessos avaliados, indicando sucesso na implementação e manutenção do banco de germoplasma de glomales da UNIPAR. As espécies Paraglomus brasiliensis e Glomus etunicatum apresentaram 0,38 e 2,36 esporos g-1 de solo seco respectivamente, representando as espécies de menor e maior frequência de esporos.

Arbuscular mycorrhizal fungi (AMF) form a mutualistic symbiotic association with the roots of most plant species contributing to plant growth and environmental sustainability. The present study aims to evaluate the density of AMF spores deposited in glomales germplasm bank using Brachiaria brizantha as host plant. 13 isolates (access) of AMF provided by Universidade Estadual de Londrina - UEL and the Agronomic Institute of Paraná ? IAPAR were assessed. Evaluated AMF inocula were Glomus clarum, Scutellospora calospora, S. heterogama, Gigaspora margarita, Paraglomus brasiliensis, Glomus etunicatum, Gigaspora rosea and Acaulospora spp. B. brizantha was grown in the Laboratory of Botany-II at the Universidade Paranaense ? UNIPAR in pots with 3 kg of sterile soil.The evaluation period was from 2011 to 2012. After a one-year period, AMF spores were found in all access, indicating success of implementation and maintenance of glomales germplasm bank of UNIPAR. Paraglomus brasiliensis and Glomus etunicatum presented 0.38 and 2.36 spores g-1 dry soil, respectively, representing the species of with the lowest and highest frequency of spores.

Los hongos micorrizas arbusculares (HMA) forman asociación mutualista simbiótica con las raíces de la mayoría de las especies de plantas, que generalmente contribuye al crecimiento y sostenibilidad de producción de las plantas. Este estudio tuvo como objetivo evaluar la densidad de esporas de HMAs depositados en el banco de germoplasma de glomales utilizando Brachiaria brizantha como planta hospedera. Se ha evaluado 13 aislados (accesos) de HMAs proporcionados por la Universidade Estadual de Londrina - UEL e Instituto Agronômico do Paraná - IAPAR. Los inóculos HMAs evaluados fueron: Glomus clarum, Scutellospora calospora, S. heterogama, Gigaspora margarita, Paraglomus brasiliensis, Glomus etunicatum, Gigaspora rosea y Acaulosporas pp. B. brizantha, cultivados en macetas con 3 kg de suelo estéril colectado del Campus II de la Universidad Paranaense - UNIPAR. El período de evaluación fue entre 2011/2012. Tras el periodo de un año, se ha encontrado esporas de HMAs en todos los accesos evaluados, lo que indica éxito en la implementación y mantenimiento del banco de germoplasma de glomales de la UNIPAR. Las especies Paraglomus brasiliensis y Glomus etunicatum presentaron 0,38 y 2,36 esporas g-1 del suelo seco respectivamente, representando las especies de menor y mayor frecuencia de esporas.

Obtención de suspensiones celulares y embriones somáticos de cafeto (Coffea canephora P) con el empleo de metabolitos bacterianos / Obtaining of cell suspensions and somatic embryos of coffee (Coffea canephora P) using of bacterial metabolites

La embriogénesis somática es importante como sistema modelo para estudiar el desarrollo de eventos fisiológicos, citológicos y moleculares que sustentan la embriogénesis en plantas, por ser un sistema adecuado para la propagación masiva de especies vegetales y servir de herramienta para el mejoramiento genético, la conservación de germoplasma y la validación de nuevos productos biológicos, y facilitar la producción a gran escala a través del cultivo en medio líquido y su aplicación en biorreactores, proporcionando alta frecuencia de multiplicación, rápido crecimiento del embrión, facilidad de absorción de nutrientes y reducción de la labor de subcultivo. En este trabajo se empleó la embriogénesis somática como vía de multiplicación para evaluar el efecto de metabolitos bacterianos en la inducción de suspensiones celulares y embriones somáticos en tres genotipos de cafeto pertenecientes a Coffea canephora P. variedad Robusta. Para ello se estudiaron densidades de inóculo entre 0,2, 0,5, 1,0 y 3,0 gMF/L-1, y se evaluó el efecto de diferentes medios de cultivo en el desarrollo del proceso. Los resultados mostraron un comportamiento diferenciado en el genotipo M-28, en medios de cultivo suplementados con reguladores de crecimiento convencionales y en los alternativos. Se evidenció una fuerte relación entre la viabilidad celular y el número de células, ante las diferentes condiciones de cultivo y según la densidad de inóculo, se observó un amplio rango de tamaño y forma en las poblaciones de embriones somáticos. Los porcentajes de conversión de ES con el medio MDE-2 evidenciaron mejoras de este indicador para el cultivo del cafeto.

The somatic embryogenesis is important as model system to study the development of physiologic and molecular events that sustain the embryogenesis in plants, is an appropriate system for the massive propagation of vegetable species and as tool for the genetic improvement, the germplasm conservation and the validation of new biological products and to facilitate the multiplication to great scale through the culture in liquid medium, as well as application in bioreactores, providing high multiplication frequency, quick growth of the embryo, easiness of absorption of nutritious and reduction of the subculturing. In this paper the somatic embryogenesis was used to evaluate the effect of bacterial compounds in the induction of cellular suspensions and somatic embryos in three coffee genotypes of Coffea canephora P. var. Robusta. Were studied inoculo densities among 0.2, 0.5, 1.0 and 3.0 gMF/L-1 and the effect of different culture medium in the development of the process. The results showed a behavior differed in the genotype M-28, in medium culture with conventional regulators of growth and the alternatives. Strong relationship was evidenced between the cellular viability and the number of cells, in the different cultivation conditions and according to the inoculo density, a wide range of size and forms as observed in the populations of somatic embryos. The conversion percentages with the medium MDE-2, evidenced improvements of this indicator for the coffee.

Avaliação dos modelos logístico bicompartimental e de Gompertz na estimativa da dinâmica de fermentação ruminal in vitro do farelo e da torta de babaçu (Orbignya martiana) / Avaliation of bicompartimental logistic and Gompertz mathematical models to estimate gas production from babassu (Orbignya martiana) meal and pie using the semi-automated in vitro technique

Utilizaram-se dois modelos matemáticos para avaliar a produção de gases do farelo e da torta de babaçu, pela técnica in vitro semiautomática de produção de gases. Foram utilizados o modelo logístico e o de Gompertz. Os parâmetros de validação usados foram o quadrado médio do erro (QME), o coeficiente de determinação (R²), o desvio médio absoluto dos resíduos (DMA) e a análise gráfica dos resíduos. O modelo logístico bicompartimental apresentou menores valores (P<0,05) para o QME e o DMA em relação ao de Gompertz, e não houve diferença (P>0,05) quanto ao R². Os gráficos de dispersão mostraram semelhanças nos ajustes dos dois modelos. Na análise gráfica dos resíduos, os dois modelos descreveram bem cinética de produção de gases da matéria seca. No entanto, o modelo logístico apresentou melhor valor de QME. Para avaliação da cinética de fermentação ruminal do farelo e da torta de babaçu pela técnica in vitro semiautomática de produção de gases, recomenda-se adotar o modelo logístico.

Two mathematical models were used to evaluate gas production from the meal and pie of babassu using the semi-automated gas production technique. The logistic and Gompertz models were used and the validation parameters for both models were the residual mean square (RMS), the coefficient of determination (R 2 ), the absolute average residual (AAR), and the graphical analysis of residues. The logistic model showed lower RMS (P<0.05) and AAR in comparison to Gompertz model. Both Gompertz and logistic models showed similar R 2 . The dispersion graphics showed similarity for both models and graphics analyses demonstrated that both models describe well the kinetic of gas production of dry matter. However, the bicompartimental logistic model showed the best RMS value. Logistic models are recommended to describe the kinetic of gas production from babassu foods using the semi-automated in vitro technique.

Producción de inóculo de cepas nativas del hongo comestible Asam (Schizophyllum commune Fr) en diferentes sustratos y temperaturas / Inoculum production of edible mushroom native strains (Schizophyllum commune Fr) Asam on different substrates and temperatures

En este estudio se evaluó la producción de inóculo de cinco cepas nativas de S. commune, utilizando granos de sorgo, trigo, cebada y arroz, los cuales fueron inoculados con el micelio de cada una de las cepas, incubándose tanto a 26 oC como a 18 oC. Se determinó que el sustrato donde se obtuvieron los menores tiempos de producción de inóculo fue el trigo, seguido de sorgo, cebada y arroz, tanto a 18 oC como 26 oC, observándose diferentes diferencia significativa (p <0.001 solamente entre el primero respecto a los demás. Las cepas con menores tiempos de producción fueron la...

Enriquecimento de bactérias anaeróbias oxidadoras de amônia - anammox / Enrichment of anaerobic ammonium oxidizing bacteria - anammox

Bactérias anaeróbias oxidadoras de amônia (bactérias Anammox, do inglês anaerobic ammonium oxidizing bacteria) foram enriquecidas em reator em batelada sequencial (RBS), a partir de lodo proveniente de um sistema convencional de lodos ativados tratando esgoto doméstico de Belo Horizonte (MG). Após três meses de cultivo, atividade Anammox foi detectada no sistema pelo consumo de quantidades estequiométricas de NO2- e NH4+. Análises de hibridação in situ fluorescente (FISH, do inglês fluorescent in situ hybridization) confirmaram a presença de bactérias Anammox, provavelmente Candidatus Brocadia anammoxidans, e revelaram que estas representavam 53 por cento do total de células (após 6 meses de cultivo). O desempenho do reator ao longo dos sete meses de operação demonstrou remoção quase que total de nitrito, baseada em concentração afluente de 61 a 95 mg N-NO2-/L. A eficiência máxima de remoção de amônia alcançada foi de 95 por cento, a partir de concentração afluente de 55 a 82 mg N-NH4+/L.

Anaerobic ammonium-oxidizing (Anammox) bacteria were enriched from sludge collected at a conventional activated sludge system treating domestic wastewater of Belo Horizonte(MG), Brazil, employing a sequencing batch reactor (SBR). After three months of cultivation, Anammox activity was detected in the system by the consumption of stoichiometric amounts of NO2- and NH4+. Fluorescent in situ hybridization (FISH) results revealed the presence of Anammox bacteria (probably Candidatus Brocadia anammoxidans) and showed that they accounted for 53 percent of the total bacterial population (after 6 months of cultivation). The reactor performance during the seven months of operation showed a near perfect removal of nitrite, based on the influent NO2--N concentration of 61-95 mg/L. The maximum ammonia removal efficiency was 95 percent from the influent N-NH4+ concentration of 55-82 mg/L.

Estandarización del inóculo por desintometría para las pruebas de susceptibilidad antifungica en especies de fusarium / Inoculum standadization by densitometry for the antifungal susceptibility testing of fusarium species

Las especies del género Fusarium han emergido como patógenos oportunistas en las últimas décadas. La aparición de cepas resistentes y la introducción de nuevos antifúngicos, hace necesaria la realización de las pruebas de susceptibilidad en los laboratorios de microbiología clínica. El objetivo de este estudio fue estandarizar la preparación del inóculo por densitometría para las pruebas de susceptibilidad a los antifúngicos en especies de Fusarium. Se utilizaron 15 aislamientos clínicos de Fusarium spp. y se prepararon los inóculos por espectrofotometría y por contaje de unidades formadoras de conidias en cámara de Neubauer, siguiendo los protocolos establecidos por el CLSI y EUCAST respectivamente, determinando en paralelo sus lecturas por densitometría para ambos procedimientos. Las lecturas densitométricas a través del uso del Densimat®, permitieron establecer un intervalo de 0,5 ­ 0,7 unidades Mc Farland para la preparación del inóculo por la metodología descrita por el CLSI y un rango de 0,2 ­ 0,8 unidades Mc Farland para la metodología según el EUCAST. Con este estudio, pionero en Venezuela, se logró estandarizar la preparación del inóculo óptimo en las pruebas de susceptibilidad para Fusarium spp. utilizando la densitometría como método alternativo, comparable y sustitutivo de los procedimientos descritos internacionalmente, con considerables ventajas (útil, disponible y reproducible) para ser implementado en los laboratorios de microbiología clínica. La variabilidad en cuanto a la capacidad de esporulación y tamaño de las conidias, sobre todo en las especies poco frecuentes de Fusarium, sugiere la necesidad de estandarizar el inóculo por especie.

Fusarium species have emerged like opportunistic pathogens in the last decades. The appearance of new resistant strains and the introduction of new antifungal agents, make necessary susceptibility tests in clinical microbiology laboratories. The objective of this study was to standardize inoculum preparation by densitometry for antifungal susceptibility testing in Fusarium species. Fifteen clinical isolates of Fusarium spp. were used, and the inocula were prepared by spectrophotometry and by conidia forming count in Neubauer chamber, following the establishment protocols of CLSI and EUCAST, respectively, determining in parallel their densitometry readings for both procedures. Densitometry readings by Densimat® allowed to establish an interval of 0.5 - 0.7 Mc Farland units for the inoculum preparation by the CLSI methodology, and a rank of 0.2 - 0.8 Mc Farland units for the methodology according to the EUCAST. With this study, pioneer in Venezuela, it was achieved the standardization of the optimal inoculums preparation for the susceptibility tests in Fusarium spp., using densitometry like an alternative, comparable and substitute method of the described internationally standard procedures, with considerable advantages (useful, available and reproducible) to be applied in clinical microbiology laboratories. The variability as far as both sporulation capability and conidia's size, mainly in less frequent species of Fusarium, suggests the needs to standardize the inoculums by species.

Estandarización del inóculo por desintometría para las pruebas de susceptibilidad antifungica en aspergillus spp / Standardization of inoculum by densitometry for antifungal susceptibility testing in aspergillus spp

En los últimos años, la enfermedad invasora causada por Aspergillus spp. ha constituido un problema creciente en pacientes inmunosuprimidos, debido a su elevada incidencia y mortalidad. La aparición de nuevas alternativas terapéuticas como el voriconazol y la caspofungina, aunada a la resistencia documentada de especies de Aspergillus a la anfotericina B e itraconazol, conllevan a la realización de pruebas de susceptibilidad antifúngica de aislados clínicos de Aspergillus spp. Actualmente existen dos documentos de referencia aprobados par a las pruebas de susceptibilidad de Aspergillus spp., el M38-A2 y el E.DEF 9.1. Una de las variables que influye significativamente en éstas pruebas, es la preparación del inoculo; en tal sentido, los documentos mencionados presentan diferentes metodologías, el M38-A2 refiere que la preparación del inóculo se realice mediante el uso de, mientras que E.DEF 9. 1 indica que dicha preparación se realice mediante el contaje de conidias en una cámara de Neubauer. Por otra parte, algunos investigadores han obtenido resultados controversiales al evaluar y/o comparar la reproducibilidad de las metodologías de preparación del inóculo de ambos métodos de referencia En ésta investigación se estandarizó una metodología alternativa para la preparación del inóculo, la densitometría, que resultó ser un método adecuado, sencillo y rápido. Para la preparación de los inóculos y se estableció los siguientes rangos de unidades: MacFarland: de 0.4 a 0.6 para A.flavus, y A. nidulans. De 0.3 a 0.4 para A.fumigatus, y A.terreus y de 0.2 a 0.8 para A.niger.

In recent years, invasive disease caused by Aspergillus spp. has become an increasing problem in immunosuppressed patients because of its high incidence and mortality. The emergence of new therapies such as voriconazole and caspofungin, coupled with documented resistance of Aspergillus species to amphotericin B and itraconazole, leading to the realization of antifungal susceptibility testing of clinical isolates of Aspergillus spp .Currently there are two reference documents approved for susceptibility testing of Aspergillus spp., the M38-A2 and E. DEF 9.1. One of the variables that significantly influence these tests, is the preparation of inoculum; in this way, the documents before mentioned show differ entmethodologies, the M38-A2 refers to the preparation of the inoculum was performed by using spectrophotometry, while E. DEF 9.1 indicates that this preparation is executing by counting conidia in a Neubauer chamber. On the other hand, some researchers have obtained controversial results when evaluating and or compare the reproducibility of the methods of preparing the inoculum of the two methods of reference. For this study, it was standardized an alternative methodology for the preparation of inoculum, "densitometry", and this resulting an appropriate method, simple and fast. For preparation of inocula by densitometry was established the following range s of units MacFarland: 0.4 to 0.6 for A.flavus, and A. nidulans. from 0.3 to 0.4 for A.fumigatus, and A. terreus and from 0.2 to 0.8 for A.niger.

Salinomicina e semduramicina associadas em diferentes concentrações no controle da eimeriose em frangos de corte / Salinomycin and semduramicin in different concentrations on the broilers eimeriosis control

O presente estudo teve por objetivo investigar a associação de salinomicina e semduramicina, em diferentes doses, frente à infecção mista controlada de Eimeria acervulina, E. maxima e E. tenella em frangos de corte. Oitocentas aves foram divididas em 5 grupos (T1: ração não medicada; T2: 30 ppm de salinomicina e 12,5 ppm de semduramicina; T3: 30 ppm de salinomicina e 15 ppm de semduramicina; T4: 40 ppm de salinomicina e 12,5 ppm de semduramicina e T5: 40 ppm de salinomicina e 15 ppm de semduramicina) e inoculadas aos 15 dias de idade com oocistos esporulados de E. acervulina, E. maxima e E. tenella, em inóculo misto, via ração. Parâmetros produtivos e escore de lesões foram registrados. Todos os grupos tratados apresentaram estatisticamente melhores ganhos de peso cumulativo aos 21 dias de vida. Aos 35 dias de vida, somente o grupo T3 apresentou diferença significativa. A conversão alimentar cumulativa apresentou diferença estatística nos grupos T4 e T5. O tratamento T5 foi mais eficaz no controle de E. tenella. T3 e T5 obtiveram diferenças estatísticas no escore médio de lesão das três espécies. O uso de salinomicina, associada a semduramicina, em baixas doses demonstrou uma opção viável no controle da coccidiose neste experimento.

This study aimed to investigate the association of salinomycin and semduramicin, in different doses, against controlled mixed infection of Eimeria acervulina, E. maxima and E. tenella in broiler chickens. Eight hundred birds were divided into 5 groups (T1: not medicated feed; T2: 30 ppm of salinomycin and 12.5 ppm of semduramicin; T3: 30 ppm of salinomycin and 15 ppm of semduramicin; T4: 40 ppm of salinomycin and 12,5 ppm of semduramicin and T5: 40 ppm of salinomycin and 15 ppm of semduramicin) and inoculated at 15 days of age with sporulated oocysts of E. acervulina, E. maxima and E. tenella in a mixed suspension, through the feed. Performance data and lesion scores were recorded. All treated groups showed statistically better cumulative weight gain at 21 days old. At 35 days old only the T3 group showed significant difference. Cumulative feed conversion showed statistical difference in the groups T4 and T5. The treatment T5 was more effective in the coccidiosis control of E. tenella. T3 and T5 achieved statistical differences in the average lesion scores of the three analyzed species. The association of salinomycin and semduramicin used in lower doses than the usual, showed to be an option in the coccidiosis control in this experiment.

DINÁMICA MICROBIANA EN VERMICOMPOSTAS COMERCIALES CON Y SIN INOCULACIÓN DEL HONGO Trichoderma spp / Microbial dynmiccs in commercial vermicomposts with and withot trichoderma sspp. fungus inoculation

En el presente trabajo se presentan los resultados de un ensayo en el cual se evaluó la efectividad de la inoculación del hongo Trichoderma spp, en una vermicomposta comercial, comparándose ésta con la población del hongo presente en un vermicompost sin inocular. El experimento se realizó en el laboratorio de postcosecha de la Universidad de Costa Rica. Se desarrolló en tres fases (cultivo, aislamiento e inoculación de cepas del hongo) y se utilizaron tres vermicompostas comerciales elaboradas a partir de un sustrato de broza de café, procedentes de diferentes composteras. Los resultados muestran que no hubo aumento ni disminución de la población de Trichoderma como producto de la inoculación de cepas del mismo.

In tThis paper, presents the results are presented onof the growthefectiveness of the Trichoderma fungus in a inoculation in a commercial vermicompost, in comparison with the fungus from a vermicompostand without inoculation. In a three-phase laboratory process (cultivation, isolation and inoculation of fungal strains), three different commercial vermicompost, prepared from coffee pulp, have beenwere used, coming from three different commercial vermicomposts. The results of experiments carried out in the Post-Harvest Laboratory of the Universidad de Costa Rica, don’t show any increase or decrease of the Trichoderma population after inoculation. The experiment was carried out in the Post -harvest Laboratory of University of Costa Rica. It was developed following three phases, using three commercial vermicompost prepared with broza of coffee. Results showed no differences in Trichoderma population as product of inoculation of it into the compost.