Efeito da adição de plasma seminal oriundo de animais de alta e baixa fertilidade na criopreservação de espermatozoides da cauda do epidídimo e do ejaculado de garanhões subférteis / Effect of seminal plasma addition from high and low fertility animals on the cryopreservation of epididymal tail and ejaculated sperm from subfertile stallions

O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da adição de plasma seminal de garanhões de alta e baixa fertilidade sobre a congelabilidade e a viabilidade de espermatozoides do ejaculado (EJ) e do epidídimo (EP) de garanhões subférteis. Foram utilizados seis garanhões com histórico de subfertilidade. Após coleta, espermatozoides do ejaculado foram divididos em três alíquotas: BotuSêmen® (EJ-CT); plasma seminal de alta qualidade espermática (EJ-PS1); e plasma seminal de baixa qualidade espermática (EJ-PS2). O mesmo protocolo foi realizado com espermatozoides da cauda do epidídimo após orquiectomia (EP-CT; EP-PS1; EP-PS2). Foram realizadas avaliações da cinética espermática pelo CASA e análises de integridade de membrana, acrossoma, fragmentação de DNA, capacitação espermática e peroxidação espermática por citometria de fluxo. Não foram observadas diferenças na cinética espermática entre EJ e EP, logo após a descongelação. Porém, foi observada maior (P<0,05) porcentagem de células com membranas plasmática e acrossomal íntegras nos grupos EP (EP-CT:31,7±7,5b; EP-PS1:35,2±7,0b; EP-PS2:33,9±7,2b) em comparação aos grupos EJ (EJ-CT:15,1±4,9a; EJ-PS1:11,7±4,5a; EJ-PS2:13,1±5,2a). Adicionalmente, foram observadas diferenças no índice de fragmentação de DNA (EJ-CT:2,6±0,6a; EJ-PS1:2,4±0,8a; EJ-PS2:3,0±0,8a; EP-CT:1,4±0,4b; EP-PS1:1,2±0,3b; EP-PS2:1,3±0,2b). Concluiu-se que a adição de 20% de plasma seminal, oriundo de animais férteis ou subférteis, previamente à congelação de espermatozoides epidídimários de animais subférteis não interfere na qualidade espermática.(AU)

The aim of this study was to compare the effect of the addition of seminal plasma from high and low fertility stallions on sperm viability of frozen-thawed sperm cells from ejaculate and from epididymal tail of subfertile stallions. Six stallions with a history of subfertility were used. After collection, ejaculate spermatozoa were divided into three aliquots: Botu-Semen® (EJ-CT); High-quality seminal plasma (EJ-PS1); Low-quality seminal plasma (EJ-PS2). The same was done with sperm cells from epididymis tail after orchiectomy (EP-CT; EP-PS1; EP-PS2). Evaluations of sperm kinetics were assessed by CASA and membrane and acrosome integrity, DNA fragmentation, sperm capacitation and sperm peroxidation were assessed by flow cytometry. After thawing, no differences were observed between ejaculated sperm (EJ) and epididymal sperm (EP) in any CASA evaluations. However, higher (P< 0.05) percentage of cells with intact plasma and acrossomal membranes was observed in EP groups (EP-CT:31.7±7.5b; EP-PS1:35.2±7.0b; EP-PS2:33.9±7.2b) compared to EJ groups (EJ-CT:15.1±4.9a, EJ-PS1:11.7±4.5a, EJ-PS2:13.1±5,2a). In addition, differences in DNA fragmentation index were observed (EJ-CT:2.6±0.6a; EJ-PS1:2.4±0.8a; EJ-PS2:3.0±0.8a; CT:1.4±0.4b; EP-PS1:1.2±0.3b; EP-PS2:1.3±0.2b). It was concluded that the addition of 20% seminal plasma from fertile or subfertile animals prior to the freezing of epididymal spermatozoa from subfertile animals does not interfere in sperm quality.(AU)

Use of different pressures for transvaginal follicular aspiration in mares / Uso de diferentes pressões para aspiração folicular transvaginal em éguas

The success of transvaginal follicular aspiration in mares can be influenced by several factors, such as vacuum pump pressure levels. The present study aimed to investigate the effect of different negative pressures (150, 280 and 400mmHg) of the vacuum pump on the oocyte recovery in the mares. The mares (n=10) were undergoing follicular aspiration using three different negative pressures for three consecutive estrous cycles as follows: G150 = 150mmHg (n = 10); G280 = 280mmHg (n = 10); G400 = 400mmHg (n = 10). Every estrous cycle, the group that the mare would participate was drawn, and each animal participated once in each group. Only preovulatory follicle was used, about 30 to 36 hours after application of hCG. To compare the results, the chi-square test was used (5% significance) and Fisher exact test, when recommended. Thirty preovulatory follicles (diameter 36.1±1.80mm) were aspirated and ten oocytes were recovered (33.3%). There was no statistical difference between the experimental groups (p=0.59). Thus, accord to the results observed in this study, we could conclude that the negative pressure of the vacuum pump used was not efficient to increase oocyte recovery.(AU)

O sucesso da técnica de aspiração folicular transvaginal em éguas pode ser influenciado de maneira determinante por diversos fatores, tais como níveis de pressão da bomba de vácuo. Diante disso, o presente experimento visou investigar o efeito de diferentes pressões negativas (150, 280 e 400mmHg) da bomba de vácuo sobre a taxa de recuperação de oócitos em éguas. As éguas (n=10) foram submetidas à aspiração folicular utilizando-se três diferentes pressões negativas por três ciclos estrais consecutivos, da seguinte maneira: G150= 150mmHg (n=10); G280= 280mmHg (n=10); G400= 400mmHg (n=10). A cada ciclo estral, sorteava-se o grupo do qual a égua participaria, sendo que cada animal integrou um grupo somente uma vez. Foi puncionado somente folículo pré-ovulatório, em torno de 30 a 36 horas após a aplicação do hCG. Os resultados foram comparados utilizando-se o teste qui-quadrado (a 5% de significância) e o Fisher Exato, quando recomendados. Foram aspirados 30 folículos pré-ovulatórios (diâmetro 36,1±1,80mm) e recuperados 10 oócitos (33,3%). Não houve diferença estatística entre os grupos experimentais (P=0,59). Dessa forma, mediante os resultados obtidos no presente estudo, foi possível concluir que a pressão negativa da bomba de vácuo utilizada não se mostrou determinante para elevar a recuperação oocitária.(AU)

Estudo comparativo de éguas repetidoras ou não de cio através da avaliação histológica do endométrio e das concentrações plasmáticas de progesterona / Comparative study of repeat breeds and healthy mares through endometrial histology and plasmatic progesterone concentrations

O trabalho teve como objetivo geral fazer um estudo comparativo da histologia endometrial e das concentrações plasmáticas de progesterona (P4) em éguas, repetidoras ou não de cio. A hipótese do presente estudo é que existe correlação entre o histórico de infertilidade, os achados histopatológicos e a concentração de P4 destes animais. Para tanto, foram utilizadas 36 éguas, em idade reprodutiva (3-23 anos), das raças Mangalarga Marchador e Campolina. Utilizaram-se éguas não repetidoras (n=11) como grupo controle, sendo 4 éguas doadoras e 7 receptoras; e repetidoras de cio (n=25), 15 doadoras e 10 receptoras. Tal classificação foi realizada de acordo com o histórico reprodutivo destes animais. Amostras de endométrio foram coletadas para a realização de avaliação histopatológica e amostras de sangue para a mensuração das concentrações plasmáticas de progesterona. Os fragmentos de tecido endometrial obtidos pela biópsia foram fixados no Fixador de Bouin. Posteriormente os fragmentos foram processados e incluídos em parafina. Os cortes foram corados por Hematoxilina-Eosina (HE) para exame histopatológico. As concentrações plasmáticas de P4 foram mensuradas pelo método de enzima-imunoensaio (ELISA). Não foi observada correlação entre as concentrações de P4 e a subfertilidade, sendo estas variáveis tratadas como independentes. Houve uma correlação positiva entre a idade e a subfertilidade (p<0.05), assim, quanto mais velha a égua, maior a subfertilidade. Foi observada uma correlação entre a categoria da biópsia e a subfertilidade (p<0.05), ou seja, quanto mais alterações histológicas, maiores as chances da égua ser subfértil. Contudo, nem todas as éguas classificadas na Categoria I e II levaram a gestação a termo e nem todas da Categoria III tiveram falhas na reprodução, pois, deve-se considerar que outros fatores podem influenciar na manutenção da gestação. A biópsia endometrial demonstrou ser uma técnica fácil, segura, barata e com um desconforto...

The study aimed to compare endometrial histology and plasmatic progesterone (P4) concentration of repeat breeds and healthy mares. The hypothesis was that there is a correlation between infertility and endometrial histology and P4 concentration in both groups. A total of 36 Campolina and Mangalarga Marchador mares in reproductive age (3-23 years) were used, 11 of them were healthy mares (Control group, 7 embryo recipient and 4 embryo donors), and 25 repeat breeders (10 embryo recipient and 15 embryo donors), classified as based on their reproductive history. Endometrial and blood samples were collected for respectively histological and plasma progesterone concentration evaluation. The endometrial samples obtained after biopsy were fixed in Bouin's fluid, processed, included in paraffin, and stained with Hematoxylin-Eosin (HE) for histopathological examination. Plasmatic progesterone concentrations were evaluated by enzyme immunoessay (ELISA). There was no correlation between progesterone concentration and fertility. But there was a positive correlation between age and fertility, as older mares had major tendency of subfertility than younger ones. There was also a correlation between biopsy categories and fertility, as more histological alterations were found, higher were the chances for the mares to be subfertile. However not all mares classified as Category I and II maintained pregnancy until parturition. Other factors could influence pregnancy maintenance. In the same way, not all mares in Category III were infertile. The endometrial biopsy was shown to be an easy and cheap diagnostic technique with minimal discomfort to the animals and, together with other data, to be a very important component in the investigation of mare fertility.