Caracterización biológica del marcador CD66c y su importancia clínica en la leucemia linfoide aguda / Biological characterization of the CD66c marker and its clinical importance in acute lymphoid leukemia

Las leucemias son un grupo heterogéneo de hemopatías con diversa etiología, patogenia, historia natural y pronóstico en las que se desencadena una proliferación clonal. La leucemia linfoblástica aguda (LLA) es el tipo de cáncer más común en los niños, se caracteriza por la infiltración de células neoplásicas del sistema hematopoyético a la médula ósea, sangre y otros tejidos. Fue considerada fatal hasta hace 30 años, hoy, la tasa de sobrevida a los 5 años supera el 70 por ciento, lo que implica que la mayoría de los pacientes puede curarse; sin embargo, la situación es diferente para la población infantil de los países en desarrollo. Se estima que la supervivencia al cáncer es entre 10 y 20 por ciento menor que para los infantes en países desarrollados. Uno de los marcadores de inmunofenotipo que ha cobrado mayor relevancia en los últimos años en el diagnóstico de LLA-B y seguimiento de la enfermedad mínima residual es el CD66c, este es una glicoproteína miembro de la familia del antígeno carcinoembrionario con función de adhesión celular y ampliamente utilizado como marcador tumoral que fue descubierto por SvenBerg a finales de los años 1970. Este antígeno se expresa en la superficie de los granulocitos y está implicado en varias funcionesbiológicas, que incluyen la adhesión celular, la migración, la transducción de señales y la regulación de la expresión génica. Este antígeno se presenta frecuentemente en varios tipos de cáncer y su sobrexpresión se asocia a menudo con pobre respuesta al tratamiento y disminución de la supervivencia de los pacientes. Diversos estudios evidencian que este marcador se relaciona con la presencia de diversas alteraciones cromosómicas como BCR-ABL, CRLF2, hiperdiploidía, que permiten orientar al pronóstico de la enfermedad(AU)

Leukemias are a heterogeneous group of blood diseases with a diverse etiology, pathogenesis, natural history and prognosis in which a clonal proliferation may be triggered. Acute lymphoid leukemia (ALL) is one of the most common types of cancer in children, it is characterized by the infiltration of neoplastic cells from the haematopoietic system to the bone marrow, blood and other tissues. Until 30 years ago, it was considered fatal; nowadays, the five-year survival rate exceeds 70 percent, which implies that most patients may heal. Nevertheless, in developing countries the situation might be different for pediatric population; it is estimated that cancer survival rate ranges between 10 and 20 percent less than those children living in developed countries. One of the immunophenotype markers that has been relevant in the last few years in the diagnosis of B-ALL and the follow-up of the minimal residual disease is CD66c. This is a member of the glycoprotein family from the carcinoembryonic antigen with a cellular adhesion function that has been widely used as a tumor marker as discovered by Sven Berg in the late 1970's. This antigen has been identified as a superficial protein expressed on the granulocytes and it is also involved in several biological functions, including cellular adhesion, migration, signal transduction and regulation of gene expression. This antigen is frequently presented in several types of cancer and its overexpression is often associated with a poor response to treatment and a decrease of survival rates for patients. Several studies have evidenced that this marker is relatedwith the presence of several chromosomal abnormalities, such as: BCR-ABL, CRLF2, and hyperdiploidy, which may help in the disease prognosis(AU)

Novos antígenos de Schistosoma mansoni para o diagnóstico sorológicoda infecção ativa e controle de cura

A esquistossomose continua sendo uma das infecções parasitárias mais prevalentes no mundo, e para o controle e monitoramento efetivo dessa doença é essencial que se disponha de métodos diagnósticos cada vez mais acurados. Utilizando ferramentas de bioinformática e o proteoma do parasito S. mansoni, nosso grupo selecionou in silico, antígenos candidatos do S. mansonipara serem utilizados no diagnóstico sorológico da esquistossomose e no controle de cura da doença pós-tratamento. A estratégia baseou-se em critérios para seleção de potenciais antígenos que levaram em consideração a predição de presença de peptídeo sinal, baixa similaridade com proteínas humanas e de camundongos, presença de epítopos lineares de células B e T preditos, localização predita favorável (secretada ou de membrana) e predição de expressão em estágios de vida do parasito presentes no hospedeiro definitivo. Estas condicionais foram aplicadas em um banco de dados relacional construído para integrar os resultados das diferentes predições. Sete proteínas foram selecionadas e diante da inviabilidade de expressar todas elas, nosso grupo identificou epítopos lineares de célula B nas proteínas selecionadas, que foram produzidos como peptídeos sintéticos e utilizados na validação da estratégia de seleção in silico utilizada. Esses epítopos foram identificados por predição in silico dos programas AAP12, BCPred12, BepiPred e predição de regiões intrinsecamente desordenadas (IDRs). Adicionalmente, duas proteínas também foram expressas como proteínas recombinantes em sistema procarioto e avaliadas em ensaios de ELISA

Para os ensaios de ELISA com os peptídeos sintéticos e com as proteínas recombinantes, foram utilizados soro de camundongos infectados com S. mansoni e soros de indivíduos provenientes de uma área endêmica de baixa intensidade de infecção para S. mansoni e de doadores saudáveis não residentes em áreas endêmicas para esquistossomose. Dentre os sete peptídeos sintéticos utilizados nos ensaios de ELISA, cinco foram capazes de diferenciar indivíduos infectados de áreas endêmicas (INF), de indivíduos negativos de área endêmica (NEG) e doadores saudáveis não residentes de área endêmica (HD). Além disso, um dos peptídeos também foi capaz de diferenciar soro de indivíduos infectados de área endêmica, de soro de indivíduos infectados 30 e 180 dias após tratamento, o que poderia ser utilizado para controle de cura. O uso de soros de indivíduos que vivem em áreas endêmicas para esquistossomose demonstraram queas proteínas rSm200(1069-1520)-ELISA e a rSmVal7-ELISA foram capazes de discriminar os doadores saudáveis (HD) e ndivíduos infectados (INF) que vivem em áreas endêmicas para esquistossomose, porém não foram eficientes para o controle de cura após tratamento. Nossos resultados demosntram que a estratégia de seleção in silico de antígenos potencias para o diagnóstico da esquistossomose apresentou um racional promissor e com resultados promissores

IgG subclass responses to proinflammatory fraction of Brugia malayi in human filariasis.

Background & objectives: Earlier we demonstrated that immunization with F6, a proinflammatory molecular fraction isolated from the human filarial parasite Brugia malayi, protected the host and eliminated the infection in Mastomys coucha by a Th1/Th2 response including IgG2a antibody response. Whether F6 molecules become accessible to human host during natural course of infection and elicit similar response is not known. The present study was undertaken to determine the profile of IgG subclasses specifically reactive to F6 in different categories of bancroftian filariasis cases to infer any relationship between the levels of a particular F6-specific IgG subclass and the infection or disease status. Methods: Serum samples of normal individuals from filariasis non-endemic regions of India like Jammu & Kashmir, Uttarakhand, and Chandigarh [(NEN-W; n=10), healthy subjects from USA (NEN-U; n=10) and three categories of bancroftian filariasis cases from endemic areas: endemic normals (EN; n=10) with no symptoms and no microfilariae, asymptomatic microfilaremics (ASM; n=10) and chronic symptomatic amicrofilaremics (CL; n=10) were assayed for F6-specific IgG1, IgG2, IgG3 and IgG4 by ELISA using SDS-PAGE-isolated F6 fraction of B. malayi adult worms. Results: Significantly high levels of F6-specific IgG1, IgG2 and IgG3 were found in CL (P<0.001) and EN (P<0.01-0.001) bancroftian filariasis cases compared to NEN-U. Significant levels of F6-specific IgG1 (P<0.01) and IgG2 (P<0.01) but not IgG3 were found in ASM cases compared to NEN-U. The most abundant was IgG2 which when compared to NEN-U, was significantly high in CL (P<0.001) and EN cases (P<0.001), followed by ASM (P<0.01). F6-specific IgG4 response in EN, ASM and CL subjects was not significantly different from the levels of NEN-U. Among the non-endemic normals, the NEN-W subjects showed significant reactivity with IgG2 (P<0.001) but not with IgG1, IgG3 and IgG4 as compared to NEN-U subjects. IgG subclass levels were different in different categories. Interpretation & conclusions: The high levels of F6 reactive IgG1, IgG2 and IgG3 in endemic normals and chronic symptomatic bancroftian patients, and IgG1 and IgG2 in asymptomatic microfilaraemics, suggest that F6 molecules of parasite are accessible in these subjects for IgG subclass-specific immune response and IgG2 may be related to pathogenesis. Studies using individual F6 molecules will be done to identify the molecule(s) involved in infection and protective immunity.

An inexpensive antigen for serodiagnosis of Chagas’ Disease

In this prospective study we evaluated the performance characteristics of a specific and sensitive antigen preparation (AgA) used in an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the detection of anti-Trypanosoma cruzi antibodies in serum samples, for Chagas’ disease diagnosis. The antigen production was achieved by combination of nutritional stress and autoclaving the parasites. Specificity and sensitivity were evaluated in two separate tests, using 152 sera from healthy individuals and 175 sera from Chagas’ patients (70 by xenodiagnosis). Cross-reactivity was tested using 289 sera from patients who had a parasitological diagnosis of a disease known to induce antigenic responses towards T. cruzi. All of these sera were tested with our AgA-ELISA and with 3 commercial diagnosis kits. To evaluate the agreement of results between our AgA-ELISA and a “gold standard” test for Chagas, we tested 566 sera from an endemic area. Results: sensitivity and specificity were 100 percent; cross-reactivity was the lowest compared with commercial kits. Overall agreement with the gold standard test was excellent (kappa=0.92). AgA-ELISA exhibits levels of sensitivity, specificity and cross-reactivity comparable or superior to those shown, obtained with the commercial kits used in our country, while being at least 10 times less expensive. This balance between diagnostic accuracy and cost makes AgA-ELISA useful for blood bank screening in poor regions of the world suffering from Chagas’ disease. Further validations of this antigenic formulation in other countries are necessary.

Este estudio fue realizado para evaluar las características de sensibilidad y especificidad de una formulación antigénica (AgA), producida a bajo costo, para detectar anticuerpos dirigidos a Trypanosoma cruzi, en muestras de suero de pacientes con enfermedad de Chagas. El AgA fue producido por el efecto combinado de estrés nutricional y autoclave de los parásitos. La especificidad y sensibilidad fueron evaluadas en dos estudios separados, con 152 sueros de individuos sanos y 175 de pacientes Chagásicos. La reactividad cruzada con 289 sueros de pacientes con diagnóstico parasitológico de enfermedades con anticuerpos que reaccionan con antígenos de T. cruzi. Estos sueros fueron evaluados con AgA-ELISA y con tres estuches comerciales. 566 muestras de suero provenientes de un área endémica, fueron empleadas para estudiar la concordancia entre nuestro diagnostico y una prueba designada por nosotros como patrón oro estándar. Resultados: la sensibilidad y especificidad fue de 100 por ciento. El AgA presento el más bajo porcentaje de reactividad cruzada, respecto a los estuches comerciales evaluados. La concordancia con la prueba patrón oro, en Venezuela, fue excelente (kappa=0,92). En conclusión, Aga-ELISA, presentó niveles de sensibilidad, especificidad y de reactividad cruzada, comparables o superiores a los obtenidos por los tres estuches comerciales mas empleados en el país, pero con costos de producción al menos 10 veces menor. Este balance conveniente, favorece su potencial uso para el despiste en los bancos de sangre de los países pobres y endémicos para la enfermedad de Chagas. Futuras validaciones de esta formulación en otros países es necesaria.

Ensaios de padronização do teste ELISA para diagnósticoda cisticercose bovina utilizando antígenos de larvade Taenia crassiceps / ELISA test standardization for the diagnosis of bovine cysticercosis employing Taenia crassiceps metacestode antigens

Os antígenos total e vesicular de Taenia crassiceps e soros-controle de bovinos positivos e negativos para a cisticercose foramcomparados por meio de alguns parâmetros de padronização do teste ELISA, visando avaliar o seu desempenho no diagnósticoda referida doença. Os parâmetros avaliados foram: diferentes concentrações dos antígenos, diluições de soros e conjugados,marcas de placa e substâncias bloqueadoras das placas. As diluições 1:25 de soro e 1:2.500 de conjugado para o antígenode líquido vesicular e 1:5.000 para o antígeno total, o leite desnatado e as maiores concentrações dos antígenos testadas (1,2 e 4 µg/orifício) foram os critérios de padronização que proporcionaram maior diferenciação entre soros positivos e negativos,conseqüentemente, melhor desempenho do teste ELISA.

Using the cyst fluid and the total antigens of Taenia crassiceps and positive and negative bovine control sera, some standardizationparameters of one ELISA were compared, in order to evaluate its performance in the diagnosis of the bovine cysticercosis. Thereferred parameters were different antigen concentrations, dilutions of sera and conjugated, plate marks and blocking substances.The 1:25 dilution sera and 1:2.500 dilution conjugated for the cyst fluid antigen and 1:5.000 for the total antigen, the skimmedmilk and the largest antigens concentrations (1, 2 and 4 µg/well) improved the differentiation among positive and negative sera,consequently, they were the best criteria for the bovine cysticercosis determination employing the ELISA.

Inquérito sorológico da brucelose canina através da utilização de antígeno externo e interno de Brucella canis e Brucella ovis / Serodiagnosis of canine brucellosis using external and internal antigens of Brucella canis and Brucella ovis

O objetivo desse estudo foi investigar a ocorrência da brucelose canina na cidade do Rio de Janeiro utilizando-se a técnica deimunodifusão em gel de agarose.Antígenos externo e interno de Brucella canis e Brucella ovis foram previamente preparadose um antígeno comercial usado para diagnóstico da brucelose canina foi também utilizado.Amostras de soro de 316 cãescoletadas aleatoriamente foram examinadas.Oito amostras (2,53 por cento) foram positivas no teste utilizando-se antígeno externo deB. canis e B. ovis e sete amostras (2,2 por cento) foram confirmadas com o antígeno comercial.Três amostras (0,95 por cento) foram positivaspara todos os antígenos testados. Antígenos externo e interno devem ser usados nos testes sorológicos para diagnóstico dabrucelose canina para detecção precoce e obtenção de resultados mais precisos, respectivamente.

The present study was designed to carry out a serologic investigation of canine brucellosis by using agar gel immunodiffusiontest in the Rio de Janeiro city. External and internal antigens of B. canis and B. ovis were previously prepared and a commercialkit used for canine brucellosis diagnosis, was also employed. Random samples of 316 dogs were examined. Eight samples (2,53 percent) were positive by using external antigen of B. canis and B. ovis. Seven samples (2,2 percent) were positive using the commercialantigen also, and three samples (0,95 percent) were positive for all the antigens employed. External and internal antigens must beused for early detection and accurate results, respectively.

Caracterización antigénica de cepas de virus rábico aisladas de diferentes regiones en Venezuela: período 2001-2004 / Antigenic characterization of rabies virus strains isolated from different regions in Venezuela: 2001-2004 period

Con el objeto de conocer la situación epidemiológica de las variantes antigénicas del virus rábico en Venezuela, se analizaron 45 cepas, aisladas durante el período 2001-2004. Estas fueron amplificadas en cerebro de ratones lactantes y la caracterización antigénica se realizó por inmunofluorescencia indirecta de improntas de los cerebros de esos animales, utilizando un panel de 8 anticuerpos monoclonales dirigidos contra la nucleocápside viral. De las muestras analizadas, 37 fueron aisladas de bovinos, 1 de canino, 1 de gato, 4 de equinos y 2 de ovinos, con una distribución en diversas regiones del país. Las cepas fueron ubicadas como variante antigénica 3 (Desmodus rotundus), sugiriendo que estos quiropteros hematófagos se ubicaron como la principal especie transmisora del virus rábico, para los animales domésticos, durante el periodo estudiado. Esta variante también fue aislada en un perro y un gato de zonas urbanas libres de rabia canina, lo que sugiere que el quiróptero invadió en ese momento, un nicho que no correspondía a su hábitat natural, transmitiendo el virus a las mascotas. Esta investigación es la segunda efectuada en Venezuela en 10 años. La variante circulante es mantenida en un ciclo cuyo principal reservorio es D. rotundus. Sin embargo, no se descarta la posibilidad de la presencia de otras variantes, en cuyo ciclo estén involucradas diferentes especies de mamíferos salvajes como vectores transmisores.

Construçäo de bibliotecas de cDNA com PCR de baixa estringência e primers híbridos e clonagem de uma apirase de Schistosoma mansoni / Construction of cDNA libraries with low stringency RT-PCR and hybrid primers and cloning of an apyrase of Schistosoma mansoni

Este trabalho mostrou a purificação de uma apirase em extratos de tegumentos de vermes adultos de S. mansoni com razão de hidrólise de ADP/ATP aproximadamente 2. Análise da amostra por MALDI-TOF evidenciou a presença de helicase e carboxilesterase, sendo que a atividade de hidrólise de ADP ainda não foi descrita para estas proteínas. Através de ®Western blot¼ mostrou-se que a proteína purificada não tem epítopos reconhecíveis por anticorpo anti-apirase de batata, e que a imunoreatividade cruzada com apirase da família CD39 está presente na fração insolúvel que não foi utilizada no processo de purificação. Esta tese caracteriza também a utilização de ®primers¼ consenso degenerados na construção de bibliotecas de cDNA com PCR de baixa estringência...

Vitiligo, la faceta inmunológica / Vitiligo: the inmunological facet

El vitiligo es un cuadro dermatológico de acromía, que en la actualidad no ha podido ser definido claramente ya que existen muchas hipótesis no comprobadas sobre su posible causa. El proceso de la destruccióndel melanocito conlleva una serie de cambios en la actividad del sistema inmune de los afectados, que han hecho pensar en un proceso autoinmune al menos como parte de los mecvanismos etiológicos, en el participan tanto la inmunidad humoral como la celular. Se han identificado antígenos específicos en las membranas de los melanocitos e inmunoglobulinas G reactivas hacia ellos, modificaciones en la actividad celular con disminución de células de Langerhans y alteración de las proporciones de diferentes subpoblaciones de células T. Asímismo existen un aumento marcado en la expresión de ICAM-1 y anormal expresión de los MHC clase II por parte de los melanocitos en las fases activas de la enfermedad. Estos factores, y el incremento de la producción de linfocinas proinflamatorias (IL-6 e IL-8) indican la presencia de una citoxidad inmunológicamente mediada, pero la autoinmunidad podría ser solo un epifenómeno, o consecuencia de la exposición de antígenos nuevos mmmodificados por noxas desconocidas, quizás virales, a la luz de hallazgos que implican al virus de inclusión citomegálica en la patogénesis. En esta revisión, se trata de dar un panorama de los conocimientos acumulados en el campo inmunológico sobre el vitiligo en los últimos 40 años

Tolerancia oral no tratamento da artrite reumatoide e outras doencas auto-imunes / Oral tolerance in the treatment of rheumatoid arthritis and other autoimmune diseases

A tolerancia oral e uma forma de se dessensibilizar o organismo a um antigeno por meio de sua administracao por via oral. Este metodo tem sido usado no controle de diversos modelos experimentais de doencas auto-imunes onde o antigeno que desencadeia a doenca e conhecido. Estudos recentes indicam a possibilidade deste metodo ser aplicado no tratamento de doencas humanas. Neste artigo revisamos os mecanismos que levam a tolerancia oral e as perspectivas desta abordagem terapeutica

Seguimiento longitudinal de 64 niños crónicamente infectados por virus B, tratados y no tratados con interferon / Longitudinal follow up of 64 children chronically infected with hepatitis B virus; treated and not treated with interferon

Con la finalidad de contribuir a conocer el espectro de la enfermedad se presentan las características evolutivas de un grupo de niños crónicamente infectados con virus de hepatitis B (VHB), 38 de ellos recibieron tratamiento con interferon y 26 no lo recbieron. El tiempo mínimo de infección fue de 8 meses, la edad promedio fue de 4,7 años con ligero predominio del sexo masculino (39/25) y el tiempo promedio de observación fue de 5 años 3 meses (rango 6 meses-14 años). La muestra se dividió en dos grandes grupos: a) 40 pacientes AgeHB positivos, de los cuales 26 recibieron tratamiento y 14 no. b) 24 pacientes AgeHB negativos, 12 tratados y 12 sin tratamiento. La dosis fue de 5.000.000 unidades por metro cuadrado de superficie corporal 3 veces por semana durante 16 semanas. Los resultados no mostraron diferencias estadísticamente significativas que sugieran efectos favorables del INF en el logro de la seroconversión del Age ni del Ags, mientras que la edad si incluye significativamente en la seroconversión del Ags, por lo que se plantea si la seroconversión obtenida puede deberse más a la tendencia natural de la enfermedad a eliminar el virus que al efecto del inteferon. En el lapso de estudio solo un caso evolucionó a cirrosis (1,7 por ciento) y en ninguno se ha detectado hepatocarcinoma

Influência dos antígenos do sistema ABO(H) na saliva sobre a presença do gênero cândida na cavidade bucal / The influence of ABO(H) system antigens on the presence of the candida genus in the oral cavity

A secreçäo dos antígenos dos grupos sanguíneos ABO na saliva está associada ao estado de portador de Cândida na cavidade bucal e às candidoses. O objetivo deste estudo foi correlacionar a secreçäo ou näo dos antígenos do sistema ABO(H) na saliva com a presença do gênero Cândida na cavidade bucal. Apesar do pequeno número de pacientes näo secretores (5,44 por cento) encontrados na populaçäo estudada, o percentual de isolamento de leveduras foi maior nesses pacientes (72,22 por cento). A espécie mais encontrada nos dois grupos foi C. Albicans, seguida por C. Tropicalis e C. Glabrata. Nossos resultados sugerem, portanto, que os antígenos ABH secretados na saliva interferem na presença de leveduras do gênero Cândida na cavidade bucal, podendo atuar como fator de predisposiçäo às candidoses

Efecto de la revacunación con una mezcla polivalente de antígenos (HPS) en el tratamiento de bronquitis crónica / Effect of revaccination with a polivalent antigen mixture (PSH) in the treatment of chronic bronchitis

Treinta pacientes menores de 40 años de edad, portadores de bronquitis crónica o repetición, y que de manera previa habían sido vacunados con una serie de 10 inyecciones intradérmicas de 0.2 ml de una mezcla polivalente de antígenos (MPA) una vez por semana, fueron sometidos a revacunación después de transcurridos entre cinco y seis meses de haber finalizado la primera serie, esta vez con cinco nuevas inyecciones de MPA a igual dosificación e intervalos. Se hicieron valoraciones clínicas, espirométricas y determinanciones de IgA sérica antes de inicial, y a los dos, cuatro y seis meses de haber comenzado esta segunda serie. Dos enfermos desertaron del estudio y en los restantes el resultado clínico fue excelente o bueno en 20 de ellos (71%). El valor promedio de IgA sérica mostró aumento significativo en cada una de las deteminaciones realizadas, comparadas con el valor inicial. Los índices espirométricos no variaron de manera significativa. Se concluye que la revacunación con MPA produce mejoría clínica y elevación de IgA sérica, muy significativas, en enfermos portadores debronquitis crónica o de repetición, tal vez relacionada con una mejoría en la capacidad del sistema inmunitario