Reversal of the anticoagulant and anti-hemostatic effect of low molecular weight heparin by direct prothrombin activation

Lopap, found in the bristles of Lonomia obliqua caterpillar, is the first exogenous prothrombin activator that shows serine protease-like activity, independent of prothrombinase components and unique lipocalin reported to interfere with hemostasis mechanisms. To assess the action of an exogenous prothrombin activator reversing the anticoagulant and antihemostatic effect induced by low molecular weight heparin (LMWH), male New Zealand rabbits (N = 20, weighing 3.8-4.0 kg) allocated to 4 groups were anticoagulated with 1800 IU/kg LMWH (iv) over 2 min, followed by iv administration of saline (SG) or recombinant Lopap (rLopap) at 1 µg/kg (LG1) or 10 µg/kg (LG10), 10 min after the injection of LMWH, in a blind manner. Control animals (CG) were treated only with saline. The action of rLopap was assessed in terms of activated partial thromboplastin time (aPTT), prothrombin fragment F1+2, fibrinogen, and ear puncture bleeding time (BT) at 5, 10, 15, 17, 20, 30, 40, 60, and 90 min after initiation of LMWH infusion. LG10 animals showed a decrease of aPTT in more than 50% and BT near to normal baseline. The level of prothrombin fragment F1+2 measured by ELISA had a 6-fold increase with rLopap treatment (10 µg/kg) and was inversely proportional to BT in LMWH-treated animals. Thus, Lopap, obtained in recombinant form using E. coli expression system, was useful in antagonizing the effect of LMWH through direct prothrombin activation, which can be a possible strategy for the reversal of bleeding and anticoagulant events.

Diminuiçäo do sangramento pós-operatório produzido pela heparina, após aplicaçäo tópica de adenosina trifosfato (ATP) em cirurgia cardíaca com circulaçäo extracorpórea / Reduction of postoperative bleeding produced by heparin, before topical application of adenosine triphosphate in cardiac surgery with extracorporeal circulation

A concentraçäo de heparina foi determinada no sangue de pacientes submetidos a cirurgia cardíaca com circulaçäo extracorpórea, antes e depois da sua neutralizaçäo com protamina. Determinou-se também a quantidade de heparina no sangue coletado dos drenos da cavidade torácica 12 horas após a operaçäo. Cerca de 15 por cento da heparina, a despeito de um tempo de coagulaçäo normal, permanece na circulaçäo após a administraçäo de protamina, e também é encontrada no sangue coletado dos drenos da cavidade torácica. O peso molecular médio dessa heparina circulante, bem como da encontrada nos drenos torácicos, foi ao redor de 7 KiloDaltons (KDa), comparando ao de 15 KDa da heparina dosada no sangue antes da sua neutralizaçäo pela protamina. Graças a achados anteriores de que as heparinas de baixo peso molecular, responsáveis pelo sangramento da ferida operatória, podem ser neutralizadas por trifosfato de adenosina (ATP), a cavidade torácica de pacientes consecutivos e näo selecionados, divididos em 3 grupos de 15, foi lavada com diferentes concentraçöes, ou de ATP (10 elevado a -5, 5 x 10 elevado a -4 M) ou com protamina, ou, ainda, apenas com soluçäo fisiológica (grupo controle). Observou-se uma curva dose-resposta linear entre a diminuiçäo do sangramento com o aumento da dose da ATP utilizada. ATP, numa concentraçäo de 10 elevado a -4 M, diminuiu significativamente o volume de sangue drenado da cavidade torácica dos pacientes (média de 288 + ou - 188 ml), quando comparado ao grupo que recebeu protamina (média de 496 + ou - 210 ml), e ao grupo controle (média 564 + ou - 288 ml) (p<0,05). ATP numa concentraçäo de 5 x 10 elevado a -5 M reduziu as perdas sanguíneas a 370 + ou - 155 ml dos pacientes (p<0,08). A média de sangramento, no total dos pacientes que receberam ATP, foi de 314 + ou - 170 ml(p<0,08).