Production and evaluation of egg derived hot start antibodies

BACKGROUND: Hot start can greatly improve specificity, sensitivity and yield of PCR. Non-specific amplification can occur in PCR when reaction mixture is prepared at room temperature, because Taq DNA polymerase is active and the primers can hybridize non-specifically. Hot start Taq DNA polymerases remain inactive at room temperature and are activated after heating at 95°C preventing non-specific amplification. Monoclonal antibodies against Taq DNA polymerase is the first line of reagents used for turn on regular Taq DNA polymerase into Hot start one. The goal of this research was to produce and evaluate Hot Start antibodies derived from chicken eggs. RESULTS: We performed affinity purification of yolk immunoglobulin (IgY) and obtained polyclonal Hot Start antibodies. The yield of specific antibodies was 0.36 mg per egg or 0.2% of total yolk antibodies. The protocol for real time measurement and Hot start IgY activity assessment was developed. We found that Hot start IgY can reversibly block Taq DNA polymerase activity at 50°C and have no negative impact neither on the Taq DNA polymerase activity after denaturation nor on the reverse transcriptase. We estimated that 1.0 µg of Hot start IgY effectively blocks 5 U activity of Taq DNA polymerase. CONCLUSIONS: Egg derived Hot Start polyclonal antibodies are the cheapest source of Hot start antibodies, from one immune egg we can isolate 0.36 mg IgY, this quantity is enough for producing 1800 U activity of Hot start Taq DNA Polymerase.

Uso de partículas magnéticas en la purificación de anticuerpos IgM contra Taenia solium / Use of magnetic particles in the purification of IgM antibodies against Taenia solium

RESUMEN Se evaluó el uso de partículas magnéticas acopladas a proteína L para la concentración y purificación de anticuerpos monoclonales inmunoglobulina M (mIgM) contra Taenia solium. Se evaluaron tres métodos de concentración y diferentes tiempos de elución y se optimizó la proporción de partículas a la proporción de mIgM. Demostramos que: 1) con el uso partículas magnéticas no se requiere de una concentración previa de mIgM, lo que disminuye la manipulación de los anticuerpos y mejora la recuperación, 2) se puede omitir el uso de un tampón de unión, ya que el pH de la mayoría de los sobrenadantes de cultivo celular son neutros, y 3) se necesitan tiempos de elución más largos (~45 minutos) para aumentar la recuperación a un nivel mayor a 80%. El estudio demuestra que el uso de partículas magnéticas acopladas a proteína L es una herramienta simple y eficiente para la concentración y purificación de mIgM.

ABSTRACT The use of L protein coupled magnetic particles for the concentration and purification of immunoglobulin M (mIgM) monoclonal antibodies against Taenia solium was evaluated. Three concentration methods and different elution times were evaluated and the ratio of particles to the ratio of mIgM was optimized. It is demonstrated that: 1) with the use of magnetic particles, a previous concentration of mIgM is not required, which reduces the manipulation of the antibodies and improves the recovery, 2) the use of a binding buffer can be omitted, since the pH of most cell culture supernatants are neutral, and 3) longer elution times (~ 45 minutes) are needed to increase recovery to a level greater than 80%. The study demonstrates that the use of L protein-coupled magnetic particles is a simple and efficient tool for mIgM concentration and purification.

The value of antibody-coated bacteria in tracheal aspirates for the diagnosis of ventilator-associated pneumonia: a case-control study / Utilidade da avaliação de bactérias revestidas por anticorpos em aspirados traqueais para o diagnóstico de pneumonia associada à ventilação mecânica: um estudo caso-controle

ABSTRACT Objective: Ventilator-associated pneumonia (VAP) is the leading type of hospital-acquired infection in ICU patients. The diagnosis of VAP is challenging, mostly due to limitations of the diagnostic methods available. The aim of this study was to determine whether antibody-coated bacteria (ACB) evaluation can improve the specificity of endotracheal aspirate (EA) culture in VAP diagnosis. Methods: We conducted a diagnostic case-control study, enrolling 45 patients undergoing mechanical ventilation. Samples of EA were obtained from patients with and without VAP (cases and controls, respectively), and we assessed the number of bacteria coated with FITC-conjugated monoclonal antibodies (IgA, IgM, or IgG) or an FITC-conjugated polyvalent antibody. Using immunofluorescence microscopy, we determined the proportion of ACB among a fixed number of 80 bacteria. Results: The median proportions of ACB were significantly higher among the cases (n = 22) than among the controls (n = 23)-IgA (60.6% vs. 22.5%), IgM (42.5% vs. 12.5%), IgG (50.6% vs. 17.5%), and polyvalent (75.6% vs. 33.8%)-p < 0.001 for all. The accuracy of the best cut-off points for VAP diagnosis regarding monoclonal and polyvalent ACBs was greater than 95.0% and 93.3%, respectively. Conclusions: The numbers of ACB in EA samples were higher among cases than among controls. Our findings indicate that evaluating ACB in EA is a promising tool to improve the specificity of VAP diagnosis. The technique could be cost-effective and therefore useful in low-resource settings, with the advantages of minimizing false-positive results and avoiding overtreatment.

RESUMO Objetivo: A pneumonia associada à ventilação mecânica (PAVM) é o principal tipo de infecção adquirida no ambiente hospitalar em pacientes em UTIs. O diagnóstico de PAVM é desafiador, principalmente devido a limitações dos métodos diagnósticos disponíveis. O objetivo deste estudo foi determinar se a avaliação de bactérias revestidas por anticorpos (BRA) pode melhorar a especificidade de culturas de aspirado traqueal (AT) no diagnóstico de PAVM. Métodos: Estudo diagnóstico caso-controle envolvendo 45 pacientes sob ventilação mecânica. Amostras de AT foram obtidas de pacientes com e sem PAVM (casos e controles, respectivamente), e verificamos o número de bactérias revestidas com anticorpos monoclonais conjugados com FITC (IgA, IgM ou IgG) ou anticorpo polivalente conjugado com FITC. Utilizando microscopia de imunofluorescência, foi determinada a proporção de BRA em um número fixo de 80 bactérias. Resultados: A mediana das proporções de BRA foi significativamente maior nos casos (n = 22) que nos controles (n = 23) - IgA (60,6% vs. 22,5%), IgM (42,5% vs. 12,5%), IgG (50,6% vs. 17,5%) e polivalente (75,6% vs. 33,8%) - p < 0,001 para todos. A acurácia dos melhores pontos de corte para o diagnostico de PAVM em relação aos BRA monoclonais e polivalentes foi > 95,0% e > 93,3%, respectivamente. Conclusões: O número de BRA em amostras de AT foi maior nos casos que nos controles. Nossos achados indicam que a avaliação de BRA no AT é uma ferramenta promissora para aumentar a especificidade do diagnóstico de PAVM. A técnica pode ser custo-efetiva e, portanto, útil em locais com poucos recursos, com as vantagens de minimizar resultados falso-positivos e evitar o tratamento excessivo.

Production and characterization of monoclonal antibodies against Campylobacter fetus subsp. venerealis / Produção e caracterização de anticorpos monoespecíficos contra Campylobacter fetus subsp. venerealis

Myeloma cells Sp2/0-Ag14 and spleen cells from BALB/c mouse immunized with sonicated Campylobacter fetus subsp. venerealis NCTC 10354 were fused with polyethylene glycol (PEG) for the selection of clones producing antibodies. Clones were obtained by limiting dilution and screened for the production of specific antibodies to C. fetus subsp. venerealis NCTC 10354 by indirect ELISA and western blot against a panel of bacteria: C. fetus subsp. venerealis NCTC 10354, C. fetus subsp fetus ADRI 1812, C. sputorum biovar sputorum LMG 6647, C. lari NCTC 11352, and Arcobacter skirrowii LMG 6621 for the ELISA and C. fetus subsp. venerealis NCTC 10354 and C. sputorum biovar sputorum LMG 6647 for the western blotting. Fifteen clones producing monoclonal antibodies (MAbs) anti-C. fetus subsp. venerealis of the IgM (1) and IgG (14) classes were further screened for species-specificity. Four clones of the 15 obtained were producers of species-specific monoclonal antibodies (MAbs): two were specific for C. fetus subsp. venerealis and two were specific for C. fetus subsp. fetus. None of the clones were reactive against C. sputorum biovar sputorum LMG 6647. All clones recognized a protein with molecular mass of approximately 148 kDa from lysed C. fetus subsp. venerealis NCTC 10354.

Para a produção de anticorpos monoclonais contra Campylobacter fetus subsp. venerealis foram utilizadas as linhagens de células de mieloma Sp2/0-Ag14 e células de baço de camundongos BALB/c imunizados com sonicado de C. fetus subsp. venerealis NCTC 10354. A detecção dos anticorpos monoclonais foi realizada por ELISA indireto utilizando antígeno sonicado de C. fetus subsp. venerealis NCTC 10354. A clonagem foi realizada por diluição limitante e os clones foram caracterizados por ELISA indireto utilizando um painel de bactérias escolhidas em função da prevalência e habitats: C. fetus subsp. venerealis NCTC 10354, C. fetus subsp. fetus ADRI 1812, C. sputorum biovar sputorum LMG 6647, C. lari NCTC 11352 e Arcobacter skirrowii LMG 6621; e no "western blotting" utilizando antígenos sonicados de C. fetus subsp. venerealis NCTC 10354 e C. sputorum biovar sputorum LMG 6647. Foram obtidos 15 clones produtores de anticorpos anti- C. fetus subsp. venerealis das classes IgM (1) e IgG (14). Quatro clones dentre os 15 clones obtidos foram produtores de anticorpos monoclonais espécie-específicos: dois clones reagiram com maior especificidade contra C. fetus subsp. venerealis NCTC 10354 e dois clones reagiram com maior especificidade contra C. fetus subsp. fetus ADRI 1812. Nenhum dos clones reagiu contra C. sputorum biovar sputorum LMG 6647, comprovando a especificidade dos anticorpos monoclonais testados. Todos os clones reconheceram uma proteína de massa molecular de aproximadamente 148 kDa no sonicado de C. fetus subsp. venerealis NCTC 10354.

Antigenic characterization of canine parvovirus isolates from Brazil using specific monoclonal antibodies / Caracterização antigênica de isolados de parvovirus canino do Brasil utilizando monoclonais específicos

Canine parvovirus (CPV) is an emerged pathogen in dogs, first isolated in 1978 in the USA. The original 1978 strain was designated CPV type 2 (CPV-2). However, analysis of CPV isolates in the USA by restriction enzymes and monoclonal antibodies have shown that around the year 1979 a CPV variant strain, designated CPV type 2a (CPV-2a), became widespread. Subsequently, a new antigenic strain, designated CPV type 2b (CPV-2b), was also observed by analysis of CPV isolates from various parts of the world, although the proportion of each strains was different between countries. In this study, the Haemagglutination Inhibition (HI) test with a panel of monoclonal antibodies was used to type canine parvovirus strains in 29 fecal samples collected from symptomatic dogs from 1980 to 1986 and from 1990 to 1995. The results showed a strong predominance of the antigenic type 2a indicating that the CPV epizooty in Brazil followed the same pattern observed in European and Asian countries.

O Parvovírus Canino (CPV) é um patógeno emergente em cães, isolado pela primeira vez em 1978, nos Estados Unidos. A amostra original de 1978 foi designada CPV tipo 2 (CPV-2). Entretanto, análises de isolados de CPV dos Estados Unidos, por enzimas de restrição e anticorpos monoclonais demonstraram que cerca de 1979, uma amostra variante, designada CPV tipo 2a (CPV-2a) tornou-se prevalente. Subseqüentemente, uma nova amostra antigênica, designada CPV tipo 2b (CPV-2b) também foi observada por análises de isolados de CPV de várias partes do mundo, embora a proporção fosse diferente entre os países. Nesse estudo, foi utilizado o teste de Inibição da Hemaglutinação (HI) com um painel de anticorpos monoclonais para a tipagem de 29 amostras fecais de parvovirus canino, coletadas de cães sintomáticos de 1980 a 1986 e de 1990 a 1995. Os resultados indicaram uma forte predominância do tipo antigênico 2a indicando que a epizootia de CPV no Brasil seguiu o mesmo padrão observados na Europa e países Asiáticos.

Undifferentiated head and neck tumors: the contribution of immunohistochemical technique to differential diagnosis

CONTEXTO: As neoplasias indiferenciadas em cabeça e pescoço e base do crânio não são raras. Ocorrem tanto em mucosas como em glândulas salivares, em partes moles e em linfonodos. O diagnóstico histopatológico preciso é fundamental na conduta terapêutica ideal e na caracterização do prognóstico de cada caso. OBJETIVOS: Avaliar a ocorrência destas neoplasias em nosso serviço, sua distribuição conforme o padrão celular, a idade do paciente e a localização do tumor, avaliando-se a freqüência dos casos em que o exame imunoistoquímico foi decisivo para o diagnóstico diferencial conclusivo. TIPO DE ESTUDO: Estudo de corte transversal. LOCAL: Hospital das Clínicas, Universidade Estadual de Campinas, Campinas, São Paulo, Brasil. PARTICIPANTES: Foram estudadas 43 biópsias de neoplasias indiferenciadas diagnosticadas no ambulatório da Disciplina de Otorrinolaringologia, no período de 1990 a 1997. PROCEDIMENTOS: Aplicou-se um painel imunoistoquímico conforme o método complexo avidina-biotina-peroxidase (ABC), dependendo da idade dos pacientes, da localização do tumor e do padrão citoarquitetural das células neoplásicas. O laudo final foi emitido após nova análise conjunta com as lâminas coradas pela técnica da hematoxilina e eosina. VARIÁVEIS ESTUDADAS: Distribuição das neoplasias indiferenciadas de cabeça e pescoço, conforme o padrão celular, a idade do paciente e a localização do tumor. RESULTADOS: Os locais de ocorrência mais comuns foram os linfonodos, 20.9 por cento; faringe e pescoço, 16.3 por cento; seios paranasais, 14.0 por cento e cavidade nasal, 11.6 por cento. Estas neoplasias foram mais prevalentes na sétima década de vida (34.9 por cento), sendo duas vezes mais prevalentes em homens que em mulheres. O exame imunoistoquímico permitiu o diagnóstico conclusivo em 60.5 por cento dos tumores e o sugeriu em 20.9 por cento. Os padrões citoarquiteturais mais comuns foram: células redondas, 51.2 por cento; células epitelióides, 20.9 por cento; células fusiformes, 16.3 por cento; mixóides, 9,30 por cento e células pleomórficas, 2.3 por cento. CONCLUSÃO: Esses achados demonstram o papel fundamental do exame imunoistoquímico no diagnóstico conclusivo nestas neoplasias.

Typing and susceptibility to penicillin of Neisseria meningitidis isolated from patients in Cuba (1993-1999)

The susceptibility to penicillin of 111 Neisseria meningitidis strains was assessed by the agar-dilution procedure and serosubtypes were determined by a whole-cell enzyme-linked immunoassay using monoclonal antibodies reagents. Thirty-five isolates showed reduced sensitivity to penicillin (MIC > or = 0.1 mg/l and <= 1 mg/l) and no resistant strains were detected. The most common phenotype was B:4:P1.15 (77.5 percent) and a rising trend of non-typeable and non-subtypeable strains was detected. The increase in levels of minimal inhibitory concentrations of meningococci to penicillin gives cause for concern and the increase in non-typeable and non-subtypeable isolation demand the use of molecular biology techniques for their typing

Development of monoclonal oligobodies and chemically synthesized oligobodies

Oligonucleotide aptamers obtained using the SELEX procedure can recognize different molecules with high affinity. However, for proteins, this recognition is limited to native conformations and the specificity has not been clearly demonstrated by methods such as Western blotting, immunohistochemistry or immunoprecipitations. Using a library of oligonucleotides and a selection strategy based on high specificity instead of high affinity, we have reported previously the preparation of polyclonal oligobodies, reagents that recognize the protein PP2A in a very specific way. Here we report a method to obtain monoclonal oligobodies. The oligobody developed specifically recognized both native and denatured states of the protein CPD1 used as a model system. We further demonstrate the specificity of the monoclonal oligobody using Western blots, immunohistochemistry, and immunoprecipitation, procedures previously limited only to antibody-based detection. In addition, a confocal microscopy is shown that was obtained using an oligobody made by chemical synthesis using an oligonucleotide synthesizer, being this the first [quot ]synthetic antibody[quot ] reported.

Esclerose sistêmica: depleçäo linfocitária da lâmina própria de delgado / Systemic sclerosis: lymphocytes depletion in lamina propria of small intestine

Objetivo: o objetivo deste estudo foi verificar a presença de subpopulacões linfocitárias na lâmina própria do intestino delgado (MALT) de pacientes com Esclerose Sistêmica. Métodos: foram estudados 15 pacientes do sexo feminimo com diagnóstico de esclerose sistêmica cutânea difusa. O grupo controle foi constituido de dez voluntários saudáveis. Biópsia peroral jejunal na altura do ângulo de Treitz, utilizando uma cápsula de Watson para adultos sob fluorescência, foi realizada em todos os indivíduos. A avaliação imunológica foi feita através da técnica de imunoperoxidade indireta para anticorpos monoclonais anti CD3, CD4 e CD8. Resultados: o número de células expressando CD3, CD4 e CD8 na lâmina própria do intestino delgado dos pacientes estava significativamente diminuído quando comparado ao grupo controle. Conclusão: estes resultados sugerem que as células mononucleares intestinais participam na patogênese da Esclerose Sistêmica.

Evidence for the presence of a kininogen-like species in a case of total deficiency of low and high molecular weight kininogens

Low and high molecular weight kininogens (LK and HK), containing 409 and 626 amino acids with masses of ~65 and 120120 kDa after glycosylation, respectively, are coded by a single gene mapped to the human chromosome 3 by alternative splicing of the transcribed mRNA. The NH2-termini Glu(1)-Thr(383) region, identical in LK and HK, contains bradykinin (BK) moieties Arg(363)-Arg(371). LK, HK and their kinin products Lys-BK and BK are involved in several biological processes. They are evolutionarily conserved and only 7 patients, all apparently normal, have been reported to lack them. In one of these patients (Williams'trait), a codon mutation (Arg(178) r stop) has been blamed for the absence of LK and HK. However, using Western blots with 2 monoclonal anti-HK antibodies, one that recognizes the region common to LK and HK and the other that recognizes only HK, I detected ~110-kDa bands in the plasma of this LK/HK-deficient patient vs ~120-kDa bands in normal human and ape plasmas. With polyclonal anti-Lys-BK antibody, which strongly detects BK eleaved at its COOH-terminus in purified HK, I detected ~110-kDa bands in the normal and the deficient plasmas. Western blots with a monoclonal anti-prekallikrein (PK) antibody showed that surface activation of PK and distribution of PK activation products, both dependent on HK, were similar in these plasmas. These findings suggest that a mutant gene yielded a kininogen-like species possibly involving aberrant mRNA splicing - structurally different from normal HK, but apparently with the capacity to carry out seemingly vital HK functions.

Validación retrospectiva del proceso de purificación del anticuerpo monoclonal Inmunoglobulina Anti-gonadotropina coriónica humana / Retrospective validation of the purification process of immunoglobulin anti-human chorionic gonadotropin monoclonal antibody

Con el objetivo de verificar que el proceso de purificación del anticuerpo monoclonal (AcM) IG1 antigonadotropina coriónica humana (hCG) se mantenía operando bajo condiciones controladas que garantizaban la calidad del producto se llevó a cabo la validación retrospectiva del mismo. Se analizaron los resultados de 21 procesos cromatográficos sucesivos en protein A-Sepharose CL-4B. Se evaluaron los parámetros: recuperación, pureza y actividad inmunológica del producto. Se comprobó, según la información recopilada, que la recuperación estuvo en el rango de 90-98, 16 porciento, con un valor promedio 93,19 porciento, una desviación estándar de 2,70 y un coeficiente de variación de 2,90 porciento, la pureza entre 90 y 99,3 porciento con un valor promedio de 95,48 porciento, una desviación estándar de 2,47 y un coeficiente de variación de 2,59 porciento y la actividad inmunológica determinada por radioinmunoensayo y expresada como ng de hormona marcada unida por milígramos de anticuerpos entre 4,013 y 6,210 ng de hCG marcada unida por mg de AcM, con un valor promedio de 4,72, una desviación estándar de 0,60 y un coeficiente de variación de 12,75 porciento. Se concluyó que el proceso se encontraba transcurriendo bajo las condiciones diseñadas de forma reproducible, lo cual garantiza la calidad del AcM

El anticuerpo monoclonal F4 reconoce en forma bivalente un epítope común a la banda 3 en la membrana de formas madura de eritrocitos infectados con P. falciparum y en la cara interna de eritrocitos normales / F4 monoclonal antibody recognizes in a bivalent way a band 3 common epitope in the membrane of P. falciparum infected erythrocyte mature forms and in the internal face of normal erythrocytes

Se produjeron anticuerpos monoclonales a partir de ratones infectados con merozoítos libres de una cepa colombiana de Plasmodium falciparum (FCB-1) en el grupo de Inmunología del Instituto Nacional de Salud (INS). Estos anticuerpos monoclonales, por medio de la técnica de electrotransferencia (ETF) e inmunodetección enzimática (IDE), reconocían intensamente la banda 3 del eritrocito humano normal y reaccionaban aparentemente de manera cruzada con antígeno del parásito. El eritrocito parasitado por P. falciparum presenta modificaciones principalmente en su membrana. Al respecto existe gran controversia para definir si estas modificaciones provienen de proteínas sintetizadas por el parásito, de modificación de proteínas del huésped como la banda 3 o si hay coexistencia de proteínas sintetizadas por el parásito y de proteínas del huésped modificadas. Se ha demostrado recientemente en la infección por Plasmodium falciparum que los eritrocitos infectados y también los erirocitos no infectados se adhieren a los endotelios vasculares a través de receptores que se encuentran en la membrana produciendo el secuestro de los parásitos y el taponamiento de los vasos sanguíneos lo cual contribuye a las manifestaciones y complicaciones de la enfermedad. Aunque no se conocen las moléculas receptoras específicas implicados en éste proceso, se cree que están implicadas proteínas de la membrana del eritrocito parasitado que son neoantígenos sintetizados por el parásito como también neoantígenos que son proteínas del huésped modificadas por la infección como la banda 3. Con el propósito de contribuir al esclarecimiento del origen de estas modificaciones se quería determinar si el anticuerpo F4 además de reconocer la banda 3 reaccionaba en forma cruzada con un neoantígeno de eritrocitos parasitados con formas maduras de la cepa colombiana FCB-1. Se estudiaron algunas características del anticuerpo monoclonal F4 por medio de ELISA, por inmnofluorescencia indirecta (IFI) de formas vivas en suspención y de formas cuya membrana se permeabilizó por medio de diferentes fijaciones. También se quería determinar si este anticuerpo reconocía proteínas sintetizadas por el parásito por inmunoprecipitación a partir de extracto de cultivos marcados con aminoácidos tritiados. Se encontró que el anticuerpo reconoce por IFI en suspención la membrana de eritrocitos parasitados con formas maduras más no de eritrocitos normales ni de formas anulares...

Generacion de anticuerpos monoclonales contra el virus del papilloma humano / Generation of monoclonal antibodies to human papillomavirus

Los virus del papilloma humano estan asociados estrechamente con el cancer de cuello de utero. Se ha demostrado que los virus 6 y 11 estan asociados con las lesiones premalignas, mientras que los 16 y 18 a las lesiones malignas del cancer cervical. En el presente trabajo se describe la obtencion de un anticuerpo monoclonal murino contra el virus 16 del pailloma humano, utilizando el metodo convencional de fusion somatica, el cual reconoce por inmunohistoquimica sobre cortes de tejido de biopsias de cervix uterino las celulas coilociticas y disqueratosicas ubicadas en las capas mas superficiales del epitelio infectado. La presencia del virus tipo 16 de las muestras analizadas se comprobo por estudios de hibridacion in situ realizadas con anterioridad. El uso de este anticuerpo monoclonal en Anatomia Patologica permitira el diagnostico de la presencia del virus 16 del papiloma humano en aquellas muestras que presenten las atipias celulares caracteristicas de esta enfermedad

Generacion de un anticuerpo monoclonal contra la enzima tiorredoxina / Generation of a monoclonal antibody to the thioredoxin enzyme

Las tiorredoxinas son proteinas de bajo peso molecular de amlia distribucion en diferentes organismos y estan consideradas como transportadoras universales de electrones. En el presente trabajo se describe la generacion de un anticuerpo monoclonal murino que reconoce a la tiorredoxina/factor derivado de la lecemia T del adulto. Utilizando el metodo convencional de fusion somatica se obtuvo un anticuerpo monoclonal que reconoce altos niveles de tiorredoxina en las lineas celulares MP6 y U-266, bajos niveles en linfocitos B en reposo y diferentes tiorredoxinas de diversos origenes, Estadios futuros determinaran el papel que juega esta molecula en el proceso de transformacion maligna del cancer

A rapid and efficient purification method for horse IgG(T) usin a rat monoclonal antibody

1. Louvain rats (IgK-1a) were immunized with horse IgG(T). To generate mAb to IgG(T), popliteal lymph node cells taken from the immunized animals were fused to a non-secreting LOU/C immunocytoma (IR983F). The hybridomas were cultured in HAT -containing medium and cloned under limiting dilution conditions. Supernatants from the growing hybrids were screened by ELISE using plates coated with horse IgG(T) or IgGa+b+c. 2. The anti-IgG(T) mAb obtained was named LO-HoGT-1 (LOU anti-horse IgG(T)). It is an IgG2a rat antibody whose light chain allotype is IgK-1a, and with an affinity constant of 2.9 x 1010 M-1. 3. Ascites was isnduced in LOU (IgK-1b) rats by injecting the hybridoma cells and incomplete Freund's adjuvant ip. To obtain purified mAb, ascitic fluid was applied to a Sepharose anti-rat LOU IgK-1 a chain column. 4. The purified mAb was then coupled to Sepharose. Immunoelectrophoretically pure IgG(T) was obtained by passage of horse serum through this column. The entire procedure took less than 30 min and resulted in a highly purified IgG(T)

Production and characterization of monoclonal antibodies to shark cartilage proteoglycan

1. Two proteoglycans, PG1 and PG2, have been isolated from shark cartilage. Both are highly polydisperse and large (molecular mass: 1-10 x 10**6 Daltons) and contain chondroitin sulfate and keratan sulfate side chains, but PG2 is somewhat smaller tham PG1 and contains less keratan sulfate. 2. Monoclonal antibodies were raised against PG1. Many antibodies were obtained and one of them, MST1, was subcloned and furter characterized. This monoclonal antibody reacts with PG1 and PG2 from shark cartilage and also with aggrecan from bovine trachea cartilage. Chondroitinase AC-treated proteglycans react MST1, indicating that the antibody does not reconize chondroitin sulfate. MST1 also recognizes aggrecan from human cartilage and a proteoglycan from bovine brain (neurocan) but it does reconize proteoglycans from rat Walker tumor, fetal calf muscle and decorin from human myoma. 3. Using MST1 we were able to demonstrate that both PG1 aggregate with hyaluronic acid

Identificación y aislamiento mediante un anticuerpo monoclonal de un antigeno Trypanosoma cruzi específico de utilidad para serodiagnóstico de la enfermedad de Chagas / Identification and isolation by used of an specific antigen monoclonal antibody (T. cruzi) of value in the serodiagnosticin chagas diseases

En este estudio se presentan resultados obtenidos sobre la identificación, aislamiento y utilización de un antígeno T. cruzi específico de peso molecular 24/25 kDA ("Tc-24-25) de utilidad para el serodiagnóstico de la enfermedad de Chagas

Molecular epidemiology of bovine anaplasmosis

Bovine anaplasmosis presents a worldwide distribution. However, specific models for studying the epidemiology of the disease are not available. Epidemiological modeling encounters some difficulties due to a lack of culturing techniques for Anaplasma marginales, the causative agent, as well as for the lack of typing techniques to characterize strains. The chronic carrier state and the population dynamics of mechanical and biological vector also create difficulties. In addition, conventional serology and blood smear diagnostic techniques fail to detect all chronica carriers. Fortunately the needs for the accurate typing of isolates and for detecting chronica carriers made it possible to encourage the development of new tools based on molecular epidemiology principles. A. marginali isolates can now be typed by using panels of monoclonal antibodies, and the genes coding for some major surface proteins can be expressed or analyzed by looking at the nucleotide arrangement level. In the same manner, the latest techniques for detecting A. marginale chronic infections use DNA and RNA probes, and PCR-based methods to detect A. marginali DNA from bovine blood samples with extremely low rickettsaemias. Currently all these new epidemiological tools are being incroporated to experimental models to analyze their applicability for epidemiological studies in the near future

Estudios inmunohistoquímico y ultraestructural del carcinoma de células de Merkel / Immunohistochemical and ultrastructural studies of Merkel`s cells carcinoma

El presente trabajo informa de 7 casos de carcinoma de Merkel (carcinoma neuroendocrino primario) de la piel con análisis inmunohistoquímico y ultraestructural. Del total, 4 eran hombres, 2 mujeres y 1 caso sin antecedentes. La edad varió de 28 a 72 años. El tumor primario medía de 4 a 12 mm y las localizaciones más frecuentes fueron cabeza y extremidades. Histológicamente, se presentó como un tumor dérmico, indiferenciado, de células grandes y con alto índice mitótico. El estudio inmunohistoquímico mostró reacción citoplasmática para enolasa neural específica (NSE), cromogranina A, citoqueratina de alto (AE3) y bajo (AE1) peso molecular; tinción en membranas se observó para antígeno de membrana epitelial (EMA) y en algunos casos, patrón globular paranuclear con AEI y EMA. Al microscopio electrónico, las células mostraban núcleos irregulares y citoplasma con gránulos neuroendocrinos de 80 a 200 nm de diámetro. El carcinoma de células de Merkel es una neoplasia poco frecuente, que afecta a ambos sexos y a todos los grupos de edad. El diagnóstico diferenial histopatológico puede ser difícil y es necesario el análisis complementario inmunohistoquímico y ultraestructural. El pronóstico es malo y el tratamiento depende del estadio clínico al momento del diagnóstico