Caracterização Molecular do Gene que Codifica a Enzima Triparedoxina Peroxidase em Populações de Leishmania spp. Sensíveis e Resistentes ao Antimonial Trivalente

Triparedoxina peroxidase (TxP) é uma enzima que pertence à família das peroxiredoxinas e participa da defesa antioxidante, por metabolizar peróxido de hidrogênio em moléculas de água. Dados da literatura têm mostrado que parasitos resistentes à droga podem aumentar os níveis de TxP junto com outras enzimas,protegendo-os contra o estresse oxidativo. Inicialmente neste trabalho, avaliamos os níveis de mRNA do gene TxP e a expressão da enzima Triparedoxina peroxidase em populações de L. amazonensis, L. braziliensis, L. infantum chagasi e L. guyanensis sensíveis e resistentes ao antimonial trivalente (SbIII). Estas populações apresentam resistência à concentração de SbIII de 4 a 20 vezes maior comparada aos seus respectivos pares sensíveis. O nível de mRNA do gene TxP, determinado por northern blot e RT-PCR quantitativo em tempo real, foi maior nas populações resistentes de L. amazonensis e L. braziliensis, enquanto que o Northern blotting mostrou maior expressão do gene TxP na população resistente de L. guyanensis. Por outro lado,nenhuma diferença foi observada no nível do mRNA do gene TxP nas populações sensíveis e resistentes de L. infantum chagasi. Análises de southern blot mostraram que o gene cTxP não está amplificado no genoma das populações resistentes de Leishmania spp. analisadas.

A expressão proteica foi determinada por ensaios de Western blotting utilizando anticorpo policlonal contra a proteína recombinante TxP de T. cruzi. Análises do alinhamento de aminoácido da proteína TxP de T. cruzi e Leishmania spp. mostraram um alto grau de identidade entre estas sequências. O anticorpo anti-TcTxP reconheceu um polipeptídio de 25 kDa em todas as populações de Leishmania spp. analisadas.Análises de densitometria mostraram que a proteína cTxP está 2 a 4 vezes mais expressa em todas as populações resistentes de Leishmania spp. analisadas. Na segunda parte deste estudo, ensaios funcionais da TxP foram realizados para determinar se a superexpressão da LbTxP nas populações sensíveis e resistentes de L. braziliensise L. infantum chagasi iria alterar o fenótipo de resistência dos parasitos transfectados ao antimonial SbIII. Análises por Western blotting mostraram que o nível de expressão da proteína TxP foi de 2 a 4 vezes maior nos parasitos transfectados quando comparado aos parasitos não-transfectados. Análises de IC50 destes parasitos mostraram que a superexpressão do gene TxP na população de L. braziliensis sensível aumentou 2 vezes a resistência ao SbIII, quando comparado à população parental. Por outro lado, a superexpressão de TxP na população resistente de L. braziliensis reverteu o fenótipo de resistência. Os parasitos antes resistentes, após a transfecção se tornaram muito sensíveis ao SbIII. Além disto, a superexpressão da TxP em populações sensíveis e resistentes de L. infantum chagasi não alterou o fenótipo de resistência ao SbIII. Concluindo, nossos resultados de análise funcional mostraram que a enzima triparedoxina peroxidase está envolvida no fenótipo de resistência de L. braziliensis ao antimonial.

Caracterização Molecular do Gene que Codifica a Enzima Triparedoxina Peroxidase em Populações de Leishmania spp. Sensíveis e Resistentes ao Antimonial Trivalente / Molecular characterization of the gene encoding the enzyme peroxidase tryparedoxin in Leishmania populations spp. Sensíveis and resistant trivalent Antimonial

Triparedoxina peroxidase (TxP) é uma enzima que pertence à família das peroxiredoxinas e participa da defesa antioxidante, por metabolizar peróxido de hidrogênio em moléculas de água. Dados da literatura têm mostrado que parasitos resistentes à droga podem aumentar os níveis de TxP junto com outras enzimas,protegendo-os contra o estresse oxidativo. Inicialmente neste trabalho, avaliamos os níveis de mRNA do gene TxP e a expressão da enzima Triparedoxina peroxidase em populações de L. amazonensis, L. braziliensis, L. infantum chagasi e L. guyanensis sensíveis e resistentes ao antimonial trivalente (SbIII). Estas populações apresentam resistência à concentração de SbIII de 4 a 20 vezes maior comparada aos seus respectivos pares sensíveis. O nível de mRNA do gene TxP, determinado por northern blot e RT-PCR quantitativo em tempo real, foi maior nas populações resistentes de L. amazonensis e L. braziliensis, enquanto que o Northern blotting mostrou maior expressão do gene TxP na população resistente de L. guyanensis. Por outro lado,nenhuma diferença foi observada no nível do mRNA do gene TxP nas populações sensíveis e resistentes de L. infantum chagasi. Análises de southern blot mostraram que o gene cTxP não está amplificado no genoma das populações resistentes de Leishmania spp. analisadas...

A expressão proteica foi determinada por ensaios de Western blotting utilizando anticorpo policlonal contra a proteína recombinante TxP de T. cruzi. Análises do alinhamento de aminoácido da proteína TxP de T. cruzi e Leishmania spp. mostraram um alto grau de identidade entre estas sequências. O anticorpo anti-TcTxP reconheceu um polipeptídio de 25 kDa em todas as populações de Leishmania spp. analisadas.Análises de densitometria mostraram que a proteína cTxP está 2 a 4 vezes mais expressa em todas as populações resistentes de Leishmania spp. analisadas. Na segunda parte deste estudo, ensaios funcionais da TxP foram realizados para determinar se a superexpressão da LbTxP nas populações sensíveis e resistentes de L. braziliensise L. infantum chagasi iria alterar o fenótipo de resistência dos parasitos transfectados ao antimonial SbIII. Análises por Western blotting mostraram que o nível de expressão da proteína TxP foi de 2 a 4 vezes maior nos parasitos transfectados quando comparado aos parasitos não-transfectados. Análises de IC50 destes parasitos mostraram que a superexpressão do gene TxP na população de L. braziliensis sensível aumentou 2 vezes a resistência ao SbIII, quando comparado à população parental. Por outro lado, a superexpressão de TxP na população resistente de L. braziliensis reverteu o fenótipo de resistência. Os parasitos antes resistentes, após a transfecção se tornaram muito sensíveis ao SbIII. Além disto, a superexpressão da TxP em populações sensíveis e resistentes de L. infantum chagasi não alterou o fenótipo de resistência ao SbIII. Concluindo, nossos resultados de análise funcional mostraram que a enzima triparedoxina peroxidase está envolvida no fenótipo de resistência de L. braziliensis ao antimonial...

O uso da associação azitromicina e N-metil glucamina no tratamento da leishmaniose cutânea causada por Leishmania (Leishmania) amazonensis em camundongos C57BL6 / The use of azythromycin and N-methyl glucamine for the treatment of cutaneous Leishmaniasis caused by Leishmania (Leishmania) amazonensis in C57BL6 mice

FUNDAMENTOS: O tratamento de primeira escolha da leishmaniose tegumentar americana é a N-metil-glucamina que tem alta toxicidade, exige administração parenteral e nem sempre cura. A azitromicina mostrou ação in vitro e resultado contraditório na doença humana. OBJETIVO: Verificar se a associação N-metil-glucamina+azitromicina é mais eficaz do que N-metil-glucamina no tratamento da leishmaniose experimental. MÉTODOS: 25 camundongos inoculados com a cepa C57BL/6 de L. (L.) amazonensis foram divididos em dois grupos. Um foi tratado com 400mgSbV/kg/dia de N-metil-glucamina associado a 200mg/kg/dia de azitromicina durante 20 dias, e o outro com N-metil-glucamina, na mesma dose, durante o mesmo tempo. Foi feita avaliação clínica e parasitológica com análise estatística. RESULTADO: Na avaliação clínica, pesquisa de amastigotas e das culturas, não houve diferença estatística. Verificou-se, entretanto, diferença significante no resultado das culturas realizadas através de diluição limitante, que desfavoreceu a associação NMG+ azitromicina. CONCLUSÃO: A associação N-metil-glucamina e azitromicina não demonstrou mais eficácia do que o N-metil-glucamina em uso isolado.

BACKGROUND: The first choice treatment for cutaneous Leishmaniasis is N-methyl glucamine: it has high toxicity, requires parenteral administration and cure is not always reached. Azythromycin showed in vitro action and controversial results in humans with the disease. OBJECTIVE: To verify if the association of N-methyl-glucamine - azythromycin is more effective than N-methyl-glucamine alone for the treatment of experimental Leishmaniasis. METHODS: Twenty-five C57BL/6 mice were inoculated with L. (L.) amazonensis strain and divided into two groups. One group was treated with 400mgSbV/kg/day of N-methyl glucamine and 200mg/kg/day of azythromycin for 20 days and the other group received the same dose of N-methyl glucamine alone during the same period of time. Clinical and parasitological evaluations were submitted to statistical analyses. RESULTS: There was no statistical difference in clinical analysis, in amastigotes investigation and in cultures. There were significant differences in cultures using limiting dilution, which showed lower efficacy of the association N-methyl glucamine -azythromycin. CONCLUSION: N-methyl glucamine-azythromycin association was not more effective than N-methyl glucamine alone.

Disposición farmacocinética de las especies de antimonio en perros después de una dosis de antimoniato de meglumina (Glucantime®) / Pharmacokinetic disposition of antimony species in dogs after a dose of meglumine antimonite (Glucantime®)

Se estudiaron los parámetros farmacocinéticos de las especies de antimonio (pentavalente y trivalente) presentes en el antimoniato de meglumina (Glucantime®), en cuatro perros sanos, después de la administración subcutánea de una dosis única de 90 mg/kg-1. Las muestras sanguíneas fueron analizadas por espectroscopia de absorción atómica. Después de la administración de Glucantime®, el antimonio pentavalente mostró un decaimiento en dos fases, la vida media de eliminación fue de 13,18 h, el volumen aparente de distribución de 30,65 Lkg-1, el área bajo la curva (0-24h) 48,25 μg. h mL-1 y el área bajo la curva (0-∞) μg.h mL-1. Mientras que el antimonio trivalente mostró una fase bien distinguida, con una vida media de eliminación de 16,10 h, un volumen aparente de distribución de 126,5 Lkg-1, valores de el área bajo la curva (0-24h) 10,35 μg.h L-1 y el área bajo la curva (0-∞) 7,35 μg.h mL-1. El porcentaje de conversión sistémica de antimonio pentavalente hacia antimonio trivalente a las 24 horas fue de 23,62%. A pesar del reducido tamaño de la muestra, los resultados obtenidos presentan desigualdad en la farmacocinética de las especies de antimonio en perros, estas podrían explicar, al menos parcialmente, las diferencias en la eficacia terapéutica atribuidas a las especies por separado.

Concomitância de leishmanioses e infecçäo pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV): estudo de quatro casos / Concurrent leishmaniasis and human immunodeficiency virus infection: a study of four cases

Säo apresentados quatro casos de leishmaniose em pacientes com SIDA, sendo dois de leishmaniose visceral e dois com forma cutâneo-mucosa. Lesöes cutâneas e de mucosa oral, disseminadas, estavam presentes nos pacientes com a forma tegumentar da doença. Febre prolongada, hepatoesplenomegalia e pancitopenia foram as manifestaçöes principais da forma visceral. A contagem de linfócitos TCD4+ era baixa em todos os casos. A pesquisa de leishmanias foi positiva no aspirado de medula óssea e na biópsia de lesöes cutâneas e mucosas. Os pacientes responderam ao tratamento com antimoniais pentavalentes e com a anfotericina B. Poucos casos de coinfecçäo leishmaniose e HIV têm sido descritos em nosso meio. Apesar da ampla expansäo de ambas, até agora suas áreas de distribuiçäo geográfica teve pouca superposiçäo. Os autores recomendam a inclusäo desta parasitose no diagnóstico diferencial das doenças oportunistas que acometem indivíduos com SIDA

Mefloquine in treatment of cutaneous leishmaniasis

Três casos de leishmaniose tegumentar em pacientes internados no Hospital Escola da Faculdade de Medicina do Triângulo Mineiro, Uberaba, MG, foram tratados com mefloquina, na dose de 4,2mg/kg/dia por via oral, durante seis dias. Nova série foi repetida três semanas após. Nenhum dos três pacientes foi curado

Amphotericin B lipid complex in the management of antimony unresponsive Indian visceral leishmaniasis.

Fifty-eight Indian patients with visceral leishmaniasis who did not respond or relapsed after 30 days of consecutive sodium stibogluconate therapy were randomised to treatment with amphotericin B lipid complex (ABLC) using a total dose of 7.5 or 10 mg/kg. Treatment induced a prompt clinical response in all patients with resolution of fever and regression in spleen size. Fever and chills developed during ABLC infusion, but it diminished with successive infusions. Fourteen days after treatment, 26 of 28 (93%) patients in the 7.5 mg/kg group and all 30 (100%) in the 10 mg/kg group had splenic aspirate parasite density scores of 0 and were considered apparent clinical and parasitologic responders. Four and three patients in the 7.5 and 10 mg/kg groups respectively relapsed during six months of followup; thus, overall 22 of 28 (79%) patients treated with 7.5 mg/kg and 27 of 30 (90%) treated with 10 mg/kg were definitive cures. All initial non-responders and relapses were retreated successfully with higher dose of ABLC. These results confirm the efficacy of short-course ABLC therapy for antimony-unresponsive Indian patients with visceral leishmaniasis. Since treatment with a total dose of 7.5 mg/kg did not appear to increase efficacy (79% vs. 84% induced by 5 mg/kg in a prior study), initial treatment with a total dose of 5 mg/kg followed by retreatment of any non-responders represents a potentially less costly approach in patients who fail antimony therapy. Though high cure rates are achieved with > or = 10 mg/kg total dose of ABLC, treatment using lower doses with retreatment of non-responders or relapses with higher dose can result in considerable savings.

Avaliação da tolerância e nefrotoxicidade do antimonial pentavalente administrado na dose de 40 mg Sb V/kg/dia, de 12/12 h, por 30 dias na forma cutâneo-mucosa de leishmaniose / The evaluation of the tolerance and nephrotoxicity of pentavalent antimony administered in a dose of 40 mg Sb V/kg/day, 12/12 hr, for 30 days in the mucocutaneous form of leishmaniasis

Foi avaliada a função renal de 11 pacientes com leishmaniose cutâneo-mucosa tratados com antimonial pentavalente na dose de 40mg SbV/kg/dia aplicada de 12/12 horas, em esquema contínuo, durante trinta dias. No estudo, um paciente apresentou insuficiência renal reversível e dois desenvolveram alterações enzimáticas hepáticas e eletrocardiográficas sendo o esquema terapêutico interrompido. Nos demais pacientes observou-se efeitos nefrotóxicos tais como diminuição da taxa de filtração glomerular, diminuição da capacidade de concentração urinária, avaliada por um jejum hídrico de 16 horas e aumento na fração de excreção de sódio. No exame do sedimento urinário observou-se um aumento no número de leucócitos e cilindros. Os resultados encontrados neste estudo sugerem que o tratamento com antimonial pentavalente na dose de 40mg SbV/kg/dia foi menos tolerado em virtude de seus efeitos tóxicos, não parecendo apresentar índice de cura superior ao esquema atualmente preconizado de 20mg SbV/kg/dia.

The renal function of eleven patients with mucocutaneous leishmaniasis was analyzed in a prospective study realized at the School Hospital of University of Brasília. The patients were treated with doses of 40 mg/kg/day of pentavalent antimony (Sb V), in a continuous scheme during thirty days. In this study three patients were excluded, one patient with reversible renal failure and two patients with hepatic and cardiac malfunctions. In the other eight patients, severe nephrotoxic effects were observed, like reduction of glomerular filtration rate, reduction of the urinary concentration capacity, evaluated by a sixteen hours hydric fasting and an increase of sodium fractional excretion. An increase in the number of leucocytes and cylinders were observed at the urinary sediment exam. Finally, the results shows that the treatment with pentavalent antimony in doses of 40 mg Sb/kg/day was less tolerated on account of its renal toxic effects. This scheme seems not be superior than the currently preconized scheme of 20 mg of Sb V/kg/day during 30 days.

Vigencia del N-Metilglucamine en el tratamiento de la leishmaniasis en niños / Vigency of N-Metilglucamine in the treatment of the leishmaniasis in children

La leishmaniasis, frecuentemente afecta la piel de los niños en las áreas rurales de Venezuela. Al Departamento de Pediatría del Hospital Universitario de Caracas y al Instituto de Medicina Tropical de la Universidad Central de Venezuela refieren niños con esta parasitosis. Se les realizan diagnósticos presuntivos, inmunológicos, y parasitológicos; más evaluaciones de química sanguínea, hematología, pruebas hepáticas y renales, electrocardiograma y cardíacas al ingreso y al egreso. 118 niños completaron el estudio, en edades entre ocho meses y 12 años. 57 por ciento procedente del estado Miranda, 18 por ciento del Distrito Federal. En los miembros inferiores se localizó el 51 por ciento de las úlceras y en los superiores el 27 por ciento. Fueron tratados con N-metilglucamine a la dosis de 100 mg/kg/día/10 días; egrasaban y 15 días después se repetía el ciclo. 7 por ciento de los pacientes presentaron dos cruces de proteínas en el sedimento urinario y 6 por ciento elevación de las transaminasas. Ningún paciente fue retirado del estudio por efecto adverso atribuíble al antimonial. Las úlceras cicatrizarón. Este antimonial continúa siendo un medicamento seguro y eficaz en leishmaniasis, pero tiene en contra la necesidad del seguimiento cuidadoso que requieren los pacientes que lo reciben

Leishmaniasis cutánea en Panamá: un breve resumen / Cutaneous leishmaniasis in Panama: a brief summary

El Laboratorio Conmemorativo Gorgas (LCG) se ha dedicado a estudios epidemiológicos sobre Leishmaniasis Cutánea durante las últimas cuatro décadas. Se presenta un corto resumen de los hallazgos efectuados por científicos del LCG durante este período en cuanto a los parásitos, reservorio y vectores