Functional and genomic characterization of three novel cell lines derived from a metastatic gallbladder cancer tumor

BACKGROUND: Gallbladder cancer (GBC) is the most common tumor of the biliary tract. The incidence of GBC shows a large geographic variability, being particularly frequent in Native American populations. In Chile, GBC represents the second cause of cancer-related death among women. We describe here the establishment of three novel cell lines derived from the ascitic fluid of a Chilean GBC patient, who presented 46% European, 36% Mapuche, 12% Aymara and 6% African ancestry. RESULTS: After immunocytochemical staining of the primary cell culture, we isolated and comprehensively characterized three independent clones (PUC-GBC1, PUC-GBC2 and PUC-GBC3) by short tandem repeat DNA profiling and RNA sequencing as well as karyotype, doubling time, chemosensitivity, in vitro migration capability and in vivo tumorigenicity assay. Primary culture cells showed high expression of CK7, CK19, CA 19-9, MUC1 and MUC16, and negative expression of mesothelial markers. The three isolated clones displayed an epithelial phenotype and an abnormal structure and number of chromosomes. RNA sequencing confirmed the increased expression of cytokeratin and mucin genes, and also of TP53 and ERBB2 with some differences among the three cells lines, and revealed a novel exonic mutation in NF1. The PUC-GBC3 clone was the most aggressive according to histopathological features and the tumorigenic capacity in NSG mice. CONCLUSIONS: The first cell lines established from a Chilean GBC patient represent a new model for studying GBC in patients of Native American descent.

Resposta à quimioterapia com benzonidazol em camundongos com tríplice infecção por clones da cepa 21SF (São Felipe / Bahia) do trypanosoma cruzi / Response to chemoterapy with benzonizadol of mice with triple infection with clones of 21SF trypanosoma cruzi strain ( São Felipe/Bahia)

Populações que residem em áreas endêmicas da doença de Chagas são submetidas a múltiplas infecções pelo Trypanosoma cruzi e podem estar infectadas com cepas ou clones com diferentes graus de virulência e susceptibilidade à quimioterapia. Este é um fator importante para o desenvolvimento e morbidade da doença. As cepas de Trypanosoma cruzi representam complexas populações multiclonais, homogêneas ou heterogêneas, com predominância de um clone principal. São biologicamente classificados em Biodemas (Tipos I, II e III) que apresentam diferentes graus de resistência à quimioterapia. Cepas do Tipo I são muito suscetíveis ao tratamento; cepas do Tipo II possuem uma média susceptibilidade (cepa 21SF); cepas de Tipo III são muito resistentes (cepa Colombiana). No presente estudo, é avaliado o resultado do tratamento de camundongos triplamente infectados com clones da cepa 21SF, em comparação com os infectados com a cepa parental. 50 camundongos foram infectados com a cepa 21SF (infecção única). O inóculo foi de 5 x 104 formas tripomastigotas sanguícolas. 80 camundongos foram infectados, sucessivamente, com 3 clones da cepa 21SF (C6, C7 e C8), inóculo: 1x104 formas tripomastigotas (infecção tripla). A infecção simples com cada clone também foi feita. Os camundongos de ambos os grupos foram divididos em dois subgrupos: tratados com Benzonidazol – BZ (100 mg/kg/dia - 60 doses) e controles não tratados. Após 60 dias do final do tratamento, os camundongos sobreviventes foram eutanasiados, por exsanguinação, pós-anestesia; o sangue foi coletado para o exame sorológico de imunofluorescência indireta; testes de cura foram realizados (parasitemia, xenodiagnósticos, hemocultura) e seções do coração e músculo esquelético foram coletadas, fixadas e processadas para o estudo histopatológico em cortes corados com Hematoxilina & Eosina. A PCR foi também usada como uma técnica diagnóstica complementar. Os testes parasitológicos mostraram uma positividade variando de 54,4% nos camundongos infectados com a cepa parental e tratados; 33,4 a 66,7% nos animais com infecção única pelos diversos clones e tratados e 26,7% nos camundongos com infecção tríplice, tratados. Os títulos sorológicos (TIFI) variaram de 1:20 a 1:280 nos infectados com cepa parental tratados com BZ e de 1:640 a 1:1280 para controles não tratados. Os títulos sorológicos na infecção única com cada clone variaram de 1:10 a 1:1280 em camundongos tratados e de 1:160 a 1:1280 nos controles não tratados. A PCR revelou positividade em todos os animais infectados, tratados. O resultado final foi obtido pela combinação dos testes parasitológicos com os títulos sorológicos revelando positividade de 6,6% nos camundongos infectados com a cepa parental e tratados; 0 a 18,2% nos animais com infecção única pelos diversos clones e tratados e 12% nos camundongos com infecção tríplice, tratados. Estudo histopatológico: Os camundongos infectados com a cepa parental apresentaram lesões que variavam de leves a moderadas, na maioria dos casos, predominante no miocárdio (animais tratados e controles não tratados) camundongos submetidos à infecção única por cada clone apresentaram lesões semelhantes aos demonstrados pela infecção com cepa parental. Os camundongos com infecção tripla apresentaram uma exacerbação de lesões, evoluindo para a miocardite crônica. Nestes casos, havia intensas lesões no músculo esquelético; animais tratados apresentaram uma nítida redução das lesões no miocárdio e no músculo esquelético. Os resultados da quimioterapia com Benzonidazol em animais triplamente infectados, considerando os testes parasitológicos e sorológicos, revelaram baixos índices de cura e agravamento das lesões tissulares nos camundongos submetidos a múltiplas infecções com clones obtidos da cepa 21SF.

Probable asociación de los inhibidores de la tirosina quinasa con la persistencia de clones aberrantes con cromosoma Filadelfia negativo / Probable association of tyrosine kinase inhibitors with aberrant clones persistent Philadelphia chromosome negative

Paciente de 43 años diagnosticado con leucemia mieloide crónica en 1998, que fue tratado de forma inicial con interferón alfa. En la terapia posterior adquirió múltiples cambios citogenéticos clonales en células del cromosoma Filadelfia negativas, por lo que se describe el efecto de los inhibidores de la tirosina quinasa de segunda generación sobre esos clones celulares.

T cell clones from Schistosoma haematobium infected and exposed individuals lacking distinct cytokine profiles for Th1/Th2 polarisation

T cell clones were derived from peripheral blood mononuclear cells of Schistosoma haematobium infected and uninfected individuals living in an endemic area. The clones were stimulated with S. haematobium worm and egg antigens and purified protein derivative. Attempts were made to classify the T cell clones according to production of the cytokines IL-4, IL-5 and IFN-gamma. All the T cell clones derived were observed to produce cytokines used as markers for the classification of Th1/Th2 subsets. However, the 'signature' cytokines marking each subset were produced at different levels. The classification depended on the dominating cytokine type, which was having either Th0/1 or Th0/2 subsets. The results indicated that no distinct cytokine profiles for polarisation of Th1/Th2 subsets were detected in these S. haematobium infected humans. The balance in the profiles of cytokines marking each subset were related to infection and re-infection status after treatment with praziquantel. In the present study, as judged by the changes in infection status with time, the T cell responses appeared to be less stable and more dynamic, suggesting that small quantitative changes in the balance of the cytokines response could result in either susceptibility or resistant to S. haematobium infection