RESUMEN
Increased secretion of glucocorticoids is associated with obesity and cortisol secretion is increased in subjects with idiopathic obesity, especially of central distribution. Intercon-version of active cortisol with inactive cortisone is catalysed by the isozymes of 11 beta -HSD activities in different tissues can be assessed by ratio of urinary free cort isol to cortisone. The present study was carried out to evaluate the free cortisol/cortisone ratio in urine of obese children and adolescents to clarify the role of 11 beta-HSD in the pathogenesis of exogenous obesity. Thirty obese children were included in the present study; they were recruited from those attending Diabetic Endocrine Metabolic Pediatric Unit [DEMPU], Children Hospital, Cairo University, for assessment of obesity. Ten apparently healthy, non obese children matched in age and sex, were also included as controls. Urinary free cortisol [UFF] was measured by radio immune assay [RIA] and High performance liquid chromatography [HPLC] while urinary free cortisone [UFE] was measured by HPLC. The obtained results showed higher ratio of UFF/UFE in obese children suggesting that cortisol metabolism may be enhanced in children with higher body fat. This finding is supported by the positive correlation encountered between UFF and both BMI and fat%, which can be attributed to a higher activity of 11 beta-HSD-1 expressed in both subcutaneous and visceral fat with increased reactivation of cortisone to cortisol. This highlights the value of the UFF/UFE in demonstrating 11 beta-HSD activity more than measuring UFF or UFE alone. Finally, HPLC method under adopted conditions was found to be rapid, reliable and specific for measurement of both UFF and UFE
Asunto(s)
Humanos , Masculino , Femenino , Niño , 11-beta-Hidroxiesteroide Deshidrogenasas , Hidrocortisona/orina , Cortisona/orina , Cromatografía Líquida de Alta Presión/métodos , Índice de Masa Corporal , Pruebas de Función de la Tiroides/sangreRESUMEN
A dosagem de cortisol livre na urina (CLU) é um método útil na triagem de pacientes suspeitos de síndrome de Cushing. Os imunoensaios atuais apresentam limitacões que dificultam sua aplicacão e a comparacão de resultados por diferentes ensaios. No presente método para dosagem de cortisol e cortisona livres urinários, baseado em cromatografia líquida com deteccão por espectrômetro de massa em tandem (LC-MS/MS), uma alíquota de urina 24h (200æL) é misturada com solucão contendo quantidade conhecida de cortisol deuterado e extraída on-line em fase sólida (C18). O eluato é transferido para uma segunda coluna C18 (Phenomenex Luna, 3æ, de 50 x 2mm), e o eluato obtido em modo isocrático é aplicado diretamente no MS/MS modelo Quattro Micro, operando no modo positivo de ionizacão química a pressão atmosférica (APCI). Todo o processo é automatizado e a quantificacão é feita por diluicão isotópica com base nas razões das áreas dos picos dos analitos e do padrão interno deuterado. O estudo de especificidade mostrou que nenhum esteróide testado apresenta reatividade cruzada superior a 1 por cento com cortisol ou cortisona. A sensibilidade funcional é <1æg/L para os dois esteróides, e o CV interensaio <8 por cento. Os estudos de recuperacão e de linearidade foram satisfatórios, e a comparacão entre os resultados obtidos para cortisol em 98 amostras de rotina, pelo ensaio em estudo e por um RIE, mostraram correlacão de r= 0,838, sendo os valores obtidos por LC-MS/MS significativamente mais baixos (medianas de 22,0 e 49,4æg/24h, respectivamente) (P<0,0001). Os valores de referência para cortisol foram definidos entre 11 e 43æg/24h, compatíveis com métodos semelhantes recentemente descritos. A dosagem concomitante de cortisona livre urinária permite o estudo da atividade da enzima 11beta-HSD2 e a pesquisa da síndrome do excesso aparente de mineralocorticóides. O método descrito representa a primeira descricão, em nosso meio, de uma nova geracão de métodos para a medida de esteróides hormonais, baseados em processos preparativos automatizados e leitura por espectrometria de massa em tandem.