Sêmen ovino e caprino imunossexado e diluído em meio de conservação à base de água de coco em pó (ACP101/102c) / Ram and goat semen immunosexed and diluted in powdered coconut water-based preservation medium (ACP101/102c)

Sperm sexing aims to separate sperm populations in carriers of the "X" or "Y" chromosome. Currently, flow cytometry is a technique that allows greater accuracy; however, it causes structural changes in sperm, reduces viability, and has a high cost. As a result, other methods have been researched, including immunosexing, which uses monoclonal antibodies to detect sex-specific surface antigens. Thus, the objective of this study was to evaluate the immunosexing technique using a monoclonal antibody against sex-specific protein (HY) in the conservation of ram and goat semen in ACP101/102c. Ejaculates from five rams and five goats were collected with the aid of an artificial vagina; they were evaluated and submitted to the immunosexing protocol, according to the manufacturer's recommendations, using the Monoclonal Antibody Kit specific for mammalian sperm with "Y" chromosomes (HY; HY Biotechnology, Rio de Janeiro, RJ, Brazil). After sexing, the supernatant was resuspended in the cryopreservation diluent: ACP ram (ACP101/102c + 20% egg yolk + 7% glycerol) and ACP goat (ACP101/102c + 2.5% egg yolk + 7% glycerol), packaged in 0.25 mL straws, refrigerated at 4°C, stabilized for 30 min, frozen in liquid nitrogen vapor (-60°C) for 15 min, immersed in liquid nitrogen, and stored in cryogenic cylinders. The samples were evaluated in natura (T1), after immunosexing (T2) and after thawing (T3) for sperm motility subjectively using conventional microscopy (40x). Plasma membrane integrity (IMP) and sperm cell morphology were evaluated by the smear staining technique using eosin-nigrosine dye, and the percentages of healthy and morphologically defect spermatozoa were determined. In the evaluation of ram semen regarding sperm motility and IMP, no statistically significant differences were observed between treatments after sexing in the evaluation of absolute data (P > 0.05), with the difference being observed only between T1 and T2, and T3 (P < 0.05). Regarding the relative percentage and sperm morphology, no statistically significant differences were observed (P > 0.05). Regarding the evaluation of goat semen samples, the motility parameters were consistent with the technique submitted; however, the IMP data did not appear as expected, requiring further evaluation for a better assessment of the technique for this species. The data obtained from ram semen submitted to the immunosexing protocol, regarding the absolute evaluation of motility and IMP, demonstrated that the non-sexed semen (T1) was superior to the sexed treatments (T2 and T3); however, it is noteworthy that freezing started with approximately 50% of the cells, since the immunosexing technique results in a loss of viability of approximately 50% of the sperm, which corresponds to the ratio of sperm carrying the X chromosome. In addition, when the data in this study were transformed into relative values, no statistical differences were observed, indicating that the immunosexing protocol, as well as the freezing protocol, did not significantly affect the quality of ram sperm cells. In relation to the immunosexing of goat semen, future studies should be conducted in vitro to define a more appropriate protocol for the species and, in addition, in vivo studies should be performed to prove the quality of the technique. It was concluded that the immunosexing process using a monoclonal antibody against sex-specific protein (HY) associated with the use of powdered coconut water diluent (ACP101/102c) in the cryopreservation of semen proved to be efficient in the in vitro evaluation of ovine species.(AU)

Sazonalidade na congelabilidade de sêmen bovino / Seasonality in the freezability of bovine semen / Estacionalidad en congelamiento de semen bovino

O objetivo desta revisão foi apresentar e discutir os efeitos da sazonalidade nas características seminais de touros Bos taurus e Bos indicus antes e após o congelação, a fim de possibilitar maior rentabilidade econômica. Apesar da reprodução da espécie bovina não se caracterizar pela sazonalidade, estudos mostram a interferência das estações do ano na qualidade do sêmen de touros. O aumento da temperatura ambiente pode levar a elevação da temperatura testicular, das taxas metabólicas e das exigências de oxigênio, ocasionando alterações na espermatogênese e, por consequência, a um impacto negativo na reprodução. Touros Bos indicus obtêm melhor desempenho na estação mais quente do ano apresentando uma qualidade de sêmen satisfatória em relação a touros Bos taurus. Isso se deve à maior resistência dos zebuínos às altas temperaturas e a peroxidação lipídica causada pelo calor resultando em menor produção de espécies reativas ao oxigênio e menor aumento nos defeitos nas células espermáticas. Desse modo, touros de origem europeia não apresentam um bom desempenho durante alguns períodos mais quentes do ano o que leva a questionar se a relação custo-benefício de aproveitamento do sêmen para criopreservação justifica o processamento do mesmo pelas Centrais de Coleta e Processamento de Sêmen nesta época. Esse fato tem levado algumas empresas a suspender atividades em determinados meses do ano.(AU)

The objective of this review was to present and discuss the effects of seasonality in the semen characteristics of Bos taurus and Bos indicus bulls before and after freezing in order to enable greater economic profitability. Even though the bovine reproduction is not characterized by seasonality, studies have shown the interference of the season on semen quality in bulls. The increase of temperature may lead to increase in testicular temperature, metabolic rates and oxygen requirements. Both thermal and oxidative stress will cause changes in the normal development of spermatogenesis, changing volume, sperm concentration, progressive motility, vigor and morphology of sperm cells, resulting in an economically negative impact on reproduction. Bos indicus bulls presented better performance in the hottest season of the year, showing a satisfactory quality of semen when compared to Bos taurus bulls. This is due to the greater resistance to high temperatures of zebu bulls and lipid peroxidation caused by the heat resulting in lower production of species reactive to oxygen and smaller increases in defects in sperm cells. Thus, European bulls, such as Bos Taurus, do not present a good performance in some of the hottest periods of the year, which leads to questioning if the cost-effective use of semen cryopreservation justifies its processing by the Semen Collection and Processing Centers during these periods. This fact has led some national centers for semen suspend activities in certain months of the year.(AU)

El objetivo de esta revisión ha sido presentar y discutir los efectos de la estacionalidad en las características del semen de toros Bos taurus y Bos indicus pre y post congelación, con el fin de proporcionar mayor rentabilidad económica. A pesar de la reproducción vacuna no caracterizarse por la estacionalidad, estudios muestran la interferencia de las estaciones del año en la calidad del semen de toros El aumento de la temperatura ambiente puede conducir a elevada temperatura testicular, de las tasas metabólicas y de las exigencias de oxígeno, ocasionando alteraciones en la espermatogénesis y, por lo tanto, a un impacto negativo en la reproducción. Toros Bos indicus presentaron mejor rendimiento en la temporada más calurosa del año, presentando calidad de semen satisfactoria en comparación con toros Bos taurus. Esto es debido a mayor resistencia del ganado cebú a las altas temperaturas y la peroxidación de lípidos causada por el calor, que resulta en menor producción de especies reactivas al oxígeno y menos defectos en las células espermáticas. Así, toros de origen europea no presentan buen desempeño durante algunos períodos más calurosos del año, lo que lleva a cuestionar si la relación costo beneficio de aprovechamiento del semen para criopreservación justifica la tramitación del mismo por las Centrales de Recogida y Procesamiento de Semen en este periodo. Este hecho ha llevado a algunas empresas a suspender las actividades en ciertos meses del año.(AU)

Primer informe en Uruguay de la vitrificación de embriones como alternativa real a la técnica de congelación lenta / First report in Uruguay on vitrification of embryos as a real alternative to slow freezing

Introducción: la vitrificación es una técnica de criopreservación de las denominadas "rápidas". En comparación con los tradicionales procesos de congelación lenta, la estrategia de vitrificación permite la eliminación total de la formación de cristales tanto intracelular como extracelularmente. Permite poner las células directamente en el crioprotector y sumergirlas en N2 líquido. Su aplicación en el mundo ha ido creciendo exponencialmente y se puede aplicar tanto a ovocitos como a embriones en cualquier estadio. Objetivos: revisión de la técnica de vitrificación y presentación de la experiencia de dos años en el Centro Iberoamericano de Reproducción Asistida, la primera en Uruguay. Material y método: se incluyeron 17 pacientes de las que se han vitrificado y desvitrificado embriones. Se usó el método comercial Cryotop con las soluciones de vitrificación de Kitazato. Resultados: con una media de embriones vitrificados de 2,71 (±0,69) por paciente, la tasa de supervivencia global de los embriones tras la desvitrificación fue de 93,4%. Con una media deembriones transferidos de 2,41 ±0,62), la tasa final de embarazo fue de 47,1%. La edad de las pacientes en las que se logra embarazo es menor (media 30,0 ±2,51) que las que no lo logran.Conclusiones: la vitrificación como método de criopreservación se muestra prometedor y como buen sustituto de las técnicas de congelación lentas, debido a su alta tasa de éxito, su fiabilidad y la rapidez de ejecución, con resultados reproducibles.

Introduction: vitrification is a cryopreservation technique that forms part of the so called "fast" cryopreservation techniques. Compared to traditional slow freezing processes, vitrification enables the total elimination of both intracellular and extracellular crystal formation. It allows for placing the cells directly on the cryoprotector and submersing them in liquid nitrogen. Its application around the world has exponentially grown and the technique may be applied both to ovocytes and embryos at all stages. Objectives: to carry out a review of the vitrification technique, the first one to be conducted in Uruguay, and to present the two-year experience at the Ibero-American Center for Assisted Reproduction. Method: we included 17 patients in our study, the embryos of which have been vitrified and unvitrified. We used the commercial Cryotop method with the Kitazato vitrification solutions. Results: with an average of 2,71 (±0,69) vitrified embryos per patients, global embryo survival rate after vitrification was 93,4%. With an average of 2,41 (±0,62) embryos transferred , the final pregnancy rate was 47,1%. The average age of patients who succeeded in getting pregnant is lower (average 30,0 ±2,51) than those who fail to get pregnant. Conclusions: vitrification as a cryopreservation method appears to be a promising technique and seems to be a good substitute for show freezing technique, due to its high-success rates, its reliability and execution speed, with replicable results.

Introdução: a vitrificação é uma técnica de criopreservação do grupo das chamadas técnicas "rápidas". Comparada com os processos tradicionais de congelação lenta, a vitrificação permite eliminar totalmente a formação de cristais tanto intra como extracelulares. Permite também colocar as células diretamente no crioprotetor e submergi-las em N2 líquido. Em todo o mundo sua aplicação vem crescendo exponencialmente e pode ser utilizada tanto com ovócitos como a embriões em qualquer estágio. Objetivos: revisão da técnica de vitrificação e apresentação da experiência de dois anos no Centro Iberoamericano de Reprodução Assistida, a primeira no Uruguay. Material e método: foram incluídas 17 pacientes que cujos embriões haviam sido vitrificados e desvitrificados. O método comercial Cryotop com soluções de vitrificação de Kitazato foi utilizado. Resultados: A média de embriões vitrificados foi de 2,71 (±0,69) por paciente com uma taxa de sobrevivência global dos embriões depois da desvitrificação de 93,4%. Com uma média de embriões transferidos de 2,41 (±0,62), a taxa final de gravidez foi de 47,1%. A idade das pacientes que engravidaram (média 30,0 ±2,51) era menor que a das que não engravidaram. Conclusões: a vitrificação se apresenta como um método de criopreservação prometedor e um bom substituto das técnicas de congelação lenta devido às altas taxas de sucesso, sua confiabilidade e rapidez para sua execução, com resultados reproduzíveis.

Avanços tecnológicos da criopreservação de ovócitos / Technological advances in oocytes criopreservation

Apresenta-se uma revisão atualizada sobre a criopreservação de ovócito e sua importância em reprodução assistida. O presente trabalho tem como ênfase vantagens e desvantagens dos métodos utilizados para congelamento de gametas, efeito dos crioprotetores intracelulares e extracelulares, além da aplicabilidade da técnica na fertilidade feminina e na manutenção da biodiversidade animal.

It presents an updated review of oocyte cryopreservation and its importance in assisted reproduction. Th is work has an emphasis on advantages and disadvantages of the methods used for freezing gametes, the eff ects of intracellular and extracellular cryoprotectants, and the applicability of the technique in female fertility and in maintaining animal biodiversity

Transplante de tecido ovariano / Ovarian tissue transplant

O congelamento de tecido ovariano para ser transplantado é um procedimento que pode reservar a função reprodutiva e endócrina desse órgão no futuro. Constitui uma alternativa para pacientes jovens com câncer e submetidas a quimioterapia, sem prole constituída, que desejam engravidar. Embora a lesão celular e as modificações moleculares possam ocorrer em decorrência do processo de congelamento e de descongelamento, há relatos de transplantes bem sucedidos tanto em animais quanto em seres humanos. A técnica de congelamento pode ter aplicações nos programas de Reprodução Humana, além de poder ser útil para evitar eventuais repercussões do hipoestrogenismo em mulheres que foram ooforectomizadas precocemente devido ao tratamento de neoplasias.

Congelamento de óvulos / Oocyte cryopreservation

A Medicina Reprodutiva tem feito notáveis avanços tecnológicos, ajudando muitos casais que até há pouco tempo não conseguiriam concretizar o sonho de ter filhos. O congelamento de óvulos é um dos mais recentes avanços nesta área e como todos os outros que vieram anteriormente, está passando por um período de questionamento, próprio das novas técnicas. O primeiro caso de gravidez utilizando-se óvulo congelado ocorreu em 1986. Durante todos esses anos passados, e até há pouco tempo, os resultados eram muito precários com uma taxa de gravidez baixa, ao redor de 1 porcento. Atualmente, com o aprimoramento da técnica de congelamento dos óvulos as taxas de gravidez já alcançam 20 porcento, e acreditamos ser uma ótima alternativa para a preservação da fertilidade feminina que pode ser indicada em casos selecionados

Evaluación de la función arterial mediante estudios in vivo e in vitro: validación de homoinjertos arteriales criopreservados / Evaluation of arterial function by means of studies in vivo and in vitro: validation of cryopreserved arterial homografts

Introducción: buscando reducir las diferencias entre la función de condución (FC) y amortiguamiento (FA) de las prótesis vasculares y las arterias nativas, la utilización de homoinjertos criopreservados es una alternativa creciente interés. El Instituto Nacional de Donación y Trasplante de Organos, Tejidos y Células ha utilizado técnicas de criopreservación de vasos sanguíneos para ser utilizados como sustitutos vasculares. Objetivos: 1) Evaluar la capacidad de la metodología de criopreservación utilizada para mantener la capacidad funcional de homoinjertos vasculares cripreservados/descongelados (C/D). 2) Evaluar la similitud funcional de los homoinjertos C/D y otros sustitutos actualmente utilizados (venas safenas y politetrafluoretileno expandido (ePTFE)), con las arterias de potenciales receptores. Método: se midieron de forma no invasiva presión (tonometría), espesor parietal (ecografía)en carótidas de pacientes normotensos, se midió presión, diámetro y espesor en segmentos arteriales carotídeos frescos y criopreservados, y venas safenas de donantes multiorgánicos, y en prótesis de ePTFE. Se calculó la FC como 1/Zc (Zc: impedancia característica), y FA como n/E (E, n: módulo elástico y viscoso). Resultados: en ambas condiciones hemodinámicas, los homoinjertos frescos y criopreservados no mostraron diferencias biomecánicas ni funcionales. En condiciones de normotensión e hipertensión los homoinjertos C/D presentaron la mayor similitud biomecánica y funcional con las arterias de pacientes. Conclusión: la criopreservación permitió mantener la capacidad funcional de homoinjertos vasculares. Los homoinjertos C/D mostraron la mayor similitud funcional con arterias de potenciales receptores.