NEDD4-1 deficiency impairs satellite cell function during skeletal muscle regeneration

BACKGROUND: Satellite cells are tissue-specific stem cells primarily responsible for the regenerative capacity of skeletal muscle. Satellite cell function and maintenance are regulated by extrinsic and intrinsic mechanisms, including the ubiquitin-proteasome system, which is key for maintaining protein homeostasis. In this context, it has been shown that ubiquitin-ligase NEDD4-1 targets the transcription factor PAX7 for proteasome-dependent degradation, promoting muscle differentiation in vitro. Nonetheless, whether NEDD4-1 is required for satellite cell function in regenerating muscle remains to be determined. RESULTS: Using conditional gene ablation, we show that NEDD4-1 loss, specifically in the satellite cell population, impairs muscle regeneration resulting in a significant reduction of whole-muscle size. At the cellular level, NEDD4-1-null muscle progenitors exhibit a significant decrease in the ability to proliferate and differentiate, contributing to the formation of myofibers with reduced diameter. CONCLUSIONS: These results indicate that NEDD4-1 expression is critical for proper muscle regeneration in vivo and suggest that it may control satellite cell function at multiple levels.

Mechanisms by which exercise training benefits patients with copd mecanismos pelo qual o treinamento de exercício beneficia pacientes com dpoc running title: exercise training / Mecanismos pelos quais o treinamento de exercício beneficia pacientes com o título dpoc running: treinamento de exercício / Mecanismos por los que el entrenamiento de ejercicio beneficia a los pacientes con epoc mecanismos por los que el entrenamiento de ejercicio beneficia a los pacientes con epoc running title: exercise training

The clinical consequences of chronic obstructive pulmonary disease (COPD) include fatigue, dyspnea and progressive impairment of exercise capacity. It also produces significant systemic consequences such as nutritional depletion, physical deconditioning, systemic inflammation, and structural and functional changes in the respiratory and locomotor muscles. Regular exercise provides improvements in the health of patients with stable COPD and can relieve the symptoms, increasing the exercise capacity and improving the quality of life, while also reducing hospitalization and, to some extent, the risk of morbidity and mortality. Training with progressive exercises is associated with metabolic and neurohumoral adaptations, heart rate variability, with adaptations in the pulmonary and skeletal muscles, as well as the inflammatory, cardiovascular and respiratory systems. This review will focus on current knowledge of the mechanisms by which physical training can provide beneficial effects in COPD patients. Results: After analyzing the titles, abstracts and content, out of 500 articles found, 489 were excluded, leaving 11 articles. Studies have shown the beneficial effect of aerobic training on COPD. Conclusion: Physical training should be considered a therapeutic option in patients with COPD, regardless of being terrestrial or aquatic, as it can have beneficial effects on the systems.

As consequências clínicas da doença pulmonar obstrutiva crônica (DPOC) são: fadiga, dispnéia e comprometimento progressivo da capacidade do exercício, além disso, também produz consequências sistêmicas significativas como depleção nutricional, descondicionamento físico, inflamação sistêmica, mudanças estruturais e funcionais de músculos respiratórios e locomotores. O treinamento físico regular traz como beneficíos efeitos da melhoria da saúde em pacientes com DPOC estável e pode aliviar os sintomas, melhorar a capacidade de exercício e a qualidade de vida, reduzir a hospitalização e, em certa medida, o risco de morbi-mortalidade. Já o treinamento com exercícios progressivos está associado a adaptações metabólicas, neurohumorais, variabilidade da frequência cardíaca, inflamatórias, dos músculos pulmonares e esqueléticos, cardiovasculares e respiratórias. Esta revisão enfocará o conhecimento atual dos mecanismos pelos quais o treinamento físico pode ter efeitos benéficos em pacientes com DPOC. Resultados: Após análise dos títulos, resumos e conteúdo, dos 500 artigos encontrados, 489 foram excluídos, restando 11 artigos. Estudos têm demonstrado o efeito benéfico do treinamento aeróbico na DPOC. Conclusão: O treinamento físico deve ser considerado uma opção terapêutica em pacientes com DPOC, independente de ser terrestre ou aquático, pois pode ter efeitos benéficos nos sistemas.

Las consecuencias clínicas de la enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC) incluyen fatiga, disnea y deterioro progresivo de la capacidad de ejercicio. También produce importantes consecuencias sistémicas como el agotamiento nutricional, el desacondicionamiento físico, la inflamación sistémica y los cambios estructurales y funcionales en los músculos respiratorios y locomotores. El ejercicio regular proporciona mejoras en la salud de los pacientes con EPOC estable y puede aliviar los síntomas, aumentando la capacidad de ejercicio y mejorando la calidad de vida, al tiempo que reduce la hospitalización y, en cierta medida, el riesgo de morbilidad y mortalidad. El entrenamiento con ejercicios progresivos se asocia a adaptaciones metabólicas y neurohumorales, a la variabilidad de la frecuencia cardíaca, con adaptaciones en los músculos pulmonares y esqueléticos, así como en los sistemas inflamatorio, cardiovascular y respiratorio. Esta revisión se centrará en el conocimiento actual de los mecanismos por los que el entrenamiento físico puede proporcionar efectos beneficiosos en los pacientes con EPOC. Resultados: Tras analizar los títulos, resúmenes y contenido, de los 500 artículos encontrados se excluyeron 489, quedando 11 artículos. Los estudios han demostrado el efecto beneficioso del entrenamiento aeróbico en la EPOC. Conclusiones: El entrenamiento físico debe considerarse una opción terapéutica en pacientes con EPOC, independientemente de que sea terrestre o acuático, ya que puede tener efectos beneficiosos sobre los sistemas.

Anthropometric and dietary assessment of patients with glycogenosis type i / Avaliação antropométrica e dietética de pacientes com glicogenose tipo i

ABSTRACT Objective: To perform anthropometric and dietary evaluation of patients with glycogenosis type Ia and Ib. Methods: This cross-sectional study is composed of a sample of 11 patients with glycogenosis divided into two subgroups according to the classification of glycogenosis (type Ia=5 and type Ib=6), aged between 4 and 20 years. The analyzed anthropometric variables were weight, height, body mass index, and measures of lean and fat body mass, which were compared with reference values. For dietary assessment, a food frequency questionnaire was used to calculate energy and macronutrients intake as well as the amount of raw cornstarch consumed. Mann-Whitney U test and Fisher's exact test were performed, considering a significance level of 5%. Results: Patients ingested raw cornstarch in the amount of 0.49 to 1.34 g/kg/dose at a frequency of six times a day, which is lower than recommended (1.75-2.50 g/kg/dose, four times a day). The amount of energy intake was, on average, 50% higher than energy requirements; however, carbohydrate intake was below the adequacy percentage in 5/11 patients. Short stature was found in 4/10 patients; obesity, in 3/11; and muscle mass deficit, in 7/11. There were no statistical differences between the subgroups. Conclusions: In patients with glycogenosis type I, there was deficit in growth and muscle mass, but no differences were found between the subgroups (Ia and Ib). Although the diet did not exceed the adequacy of carbohydrates, about 1/3 of the patients presented obesity, probably due to higher energy intake.

RESUMO Objetivo: Realizar avaliação antropométrica e dietética de pacientes com glicogenose tipos Ia e Ib. Métodos: Estudo transversal composto de uma amostra de 11 pacientes com glicogenose divididos em dois subgrupos de acordo com a classificação da glicogenose (tipo Ia=5; tipo Ib=6), com idades entre 4 e 20 anos. As variáveis antropométricas analisadas foram peso, estatura, índice de massa corporal e medidas de massa magra e gorda, que foram comparadas com valores de referência. Para avaliação dietética, foi utilizado um questionário de frequência alimentar para cálculo de ingestão de energia e macronutrientes, além da quantidade de amido cru ingerida. Realizaram-se testes U de Mann-Whitney e exato de Fisher, com nível de significância de 5%. Resultados: Os pacientes ingeriram amido cru na quantidade de 0,49 a 1,34 g/kg/dose na frequência de seis vezes ao dia, inferior à dosagem preconizada (1,75-2,50 g/kg/dose quatro vezes ao dia). A quantidade de energia consumida foi, em média, 50% a mais que as necessidades, contudo o consumo de carboidratos foi abaixo da porcentagem de adequação em 5/11 pacientes. Baixa estatura ocorreu em 4/10 pacientes, obesidade em 3/11 e déficit de massa muscular em 7/11. Não houve diferença estatística entre os subgrupos. Conclusões: Em pacientes com glicogenose tipo I, houve déficit de crescimento e de massa muscular, mas não diferença significante entre os subgrupos (Ia e Ib). Embora a dieta não tenha ultrapassado a adequação de carboidratos, 1/3 dos pacientes apresentou obesidade, provavelmente pela maior ingestão de energia.

Effects of different frequencies of physical training on electron transport chain and oxidative damage in healthy mice

The present study investigated the effect of different frequencies (three and five times a week) on electron transport chain and oxidative stress after 8 weeks of run training. Methods: Eighteen male mice (CF1, 30-35g) were distributed into the following groups (n=6): untrained (UT); trained three-time per week (T3) and trained five- time per week (T5). All training sessions were at the same intensity and duration (45min/day) in a treadmill for small animals. Forty-eight hours after the last training session, the animals were killed by decapitation and quadriceps (red portion) was removed and stored at -70ºC. Succinate dehydrogenase (SDH), complexes I, II, II-III, IV and hydroperoxides were measured. Results: Training sessions for five times per week were more effective in increasing the mitochondrial respiratory chain enzyme activities (SDH, complexes I, II, II-III, IV) as well as in decreasing the formation hydroperoxides than sessions performed for three times training per week (p<0.05). Conclusion: Our findings clearly showed that a higher the frequency of training session promotes a greater activity of the electron transport chain and consequently reduces the oxidative stress in healthy animals.(AU)

Morphological and morphometric analysis of skeletal muscle between male and female young adult Colossoma macropomum (Characiformes: Serrasalmidae)

This study aimed to evaluate muscle organization in tambaqui in order to describe the muscle growth process. We analyzed the morphometric pattern of fibers from white muscle of young-adults (300 days) by smaller diameter. The organization of white muscle exhibited a typical morphological pattern found in other fish species. Heavier animals showed higher frequency of larger diameter fibers (>50 m ) and smaller animals had higher frequency of smaller diameter fibers ( 20 m ) (P =0.005). However, both animals showed the same frequency of intermediate diameter fibers (20-50 m ). Body weight showed a positive correlation with muscle diameter fiber (r=0.45), being 20-50 m the diameters that contributed the most to animal weight (P 0.0001). A weak correlation between fiber diameter and animal sex was observed (r=0.2). Females showed higher frequency of large fiber diameters (>50 m ) than males. However, there was no difference between body weight and sex (P =0.8). Our results suggest that muscle growth is by hypertrophy and hyperplasia due to a mosaic appearance from different diameters fibers, which is characteristic of large size fish species.

O objetivo deste trabalho foi avaliar a organização muscular em tambaqui, a fim de descrever o processo de crescimento muscular. Foi analisado o padrão morfométrico das fibras do músculo branco de animais com 300 dias de idade usando o método de diâmetro menor. O músculo branco apresentou uma organização morfológica padrão encontrado em peixes. Animais de maior peso apresentaram maior frequência de fibras de maior diâmetro (> 50 m ) e os animais de menor peso apresentaram maior frequência de fibras de menor diâmetro ( 20 m ) (P = 0,005). Entretanto, ambos os animais, com maior e menor peso, apresentaram frequências semelhantes de fibras de diâmetro intermediário (20-50 m ). O parâmetro peso corporal mostrou correlação positiva com o diâmetro da fibra muscular (r = 0,45), sendo as fibras de diâmetro intermediários (20-50 m ) que mais contribuíram para o peso do animal (P 0,0001). Fêmeas apresentaram maior frequência de fibras de maior diâmetro (>50 m ) que machos. Observou-se uma fraca correlação entre o diâmetro da fibra e o sexo dos animais (r = 0,2). Apesar de fraca, a correlação estimada é corroborada pela fibras de grandes diâmetros (> 50 m ) serem mais frequente nas fêmeas que nos machos. No entanto, não houve diferença entre o peso corporal dos animais aos 300 dias de idade e sexo (P = 0,8). Os resultados encontrados sugerem que o crescimento muscular ocorre por hipertrofia e hiperplasia, caracterizado pela aparência em mosaico de fibras de diferentes diâmetros, característico de peixes de grande tamanho.

Regulation of Pax7 protein levels by caspase-3 and proteasome activity in differentiating myoblasts

The transcription factor Pax7 negatively regulates the activity of the muscle regulatory transcription factor MyoD, preventing muscle precursor cells from undergoing terminal differentiation. In this context, the ratio between Pax7 and MyoD protein levels is thought to be critical in allowing myogenesis to proceed or to maintain the undifferentiated muscle precursor state. We have previously shown that Pax7 is subject to rapid down regulation in differentiating myoblasts, via a proteasome-dependent pathway. Here we present evidence indicating that Pax7 is also subject to caspase-3-dependent regulation. Furthermore, simultaneous inhibition of caspase-3 and proteasome activity induced further accumulation of Pax7 protein in differentiating myoblasts. These results suggest that at early stages of muscle differentiation, Pax7 levels are regulated by at least two independent mechanisms involving caspase-3 and proteasome activity.

Coloração da gordura e qualidade da carne de ovelhas de descarte abatidas em distintos estágios fisiológicos / Fat coloring and meat quality of culling ewes slaughtered at distinct physiological stages

Avaliaram-se a qualidade física do músculo Longissimus lumborum de ovelhas de descarte da raça Santa Inês, abatidas em diferentes estágios fisiológicos, a cor da gordura subcutânea desse músculo e as possíveis correlações entre as variáveis de qualidade da carne. Utilizaram-se 21 ovelhas, distribuídas nos seguintes tratamentos: T1= ovelhas que permaneceram por 60 dias em lactação com seus respectivos cordeiros e abatidas um dia após o desmame das crias; T2= ovelhas que permaneceram por 60 dias em lactação com seus respectivos cordeiros e mais um período aproximado de 30 dias sem os cordeiros e posteriormente abatidas; e T3= ovelhas que não pariram durante o ano. A cor da carne e da gordura subcutânea não foram influenciadas pelo estágios fisiológico dos animais no momento do abate, com exceção da luminosidade da carne (T1= 41,13; T2= 37,56 e T3= 38,12 L*). A qualidade física da carne apresentou pouca variação entre os tratamentos, porém a força de cisalhamento (T1= 4,08; T2=2,86 e T3=2,35 kgf/cm²) e as perdas por cocção (T1=31,97; T2=35,70 e T3= 31,91 por cento) da carne diferiram entre os tratamentos. Não se observou alta correlação entre a maioria das características avaliadas.

The physical quality of the Longissimus lumborum muscle of Santa Inês culled ewes slaughtered at different physiological stages was evaluated as well as the color of the subcutaneous fat of the same muscle, and the correlations between meat quality traits. Twenty-one ewes were randomly allotted in the following treatments: T1= ewes which remained in lactation for 60 days with their respective lambs and slaughtered one day after weaning of the lambs; T2= ewes which remained in lactation for 60 days with their respective lambs, followed by an additional period of 30 days without the lambs and slaughtered afterwards; and T3= non pregnant ewes. The colors of meat and subcutaneous fat were not influenced by the physiological stage of the animals at the moment of slaughtering, except meat luminosity (T1= 41.13; T2= 37.56 and T3= 38.12 L*) . The physical quality of the meat presented little variation between treatments; however, shear force (T1= 4.08; T2=2.86 and T3=2.35 kgf/cm2) and losses by cooking (T1=31.97; T2=35.70 and T3= 31.91 percent) were affected by treatments. No high correlation between most of the evaluated traits was observed.

Efeito da desnutrição protéica pré e pós-natal sobre a morfologia, a diferenciação e o metabolismo do tecido muscular estriado esquelético em ratos / The effects of prenatal and postnatal malnutrition on the morphology, differentiation, and metabolism of skeletal striated muscle tissue in rats

OBJETIVO: Estudar características morfológicas, metabolismo e habilidades contráteis do músculo submetido a desnutrição protéica pré e pós-natal. MÉTODOS: Distribuição dos animais em dois grupos: controle, dieta normoprotéica (GC; n = 15; 5/5/5) e desnutrido, dieta hipoprotéica (GD; n = 15; 5/5/5), observados respectivamente no sétimo, 14º e 28º dia do período experimental. Foram avaliados massa corporal total, peso, habilidades contráteis e a morfologia do músculo tibial anterior. Amostras de tecidos com 8 m de espessura de ratos com idades de 7, 14 e 28 dias, corados por hematoxilina e eosina, e outros submetidos aos métodos histoquímicos nicotinamida adenina tetrazólio redutase (NADH-TR) e miofibrilar (m-ATPase) (pH = 4,4). RESULTADOS: Os pesos corporal e muscular apresentaram-se menores nos grupos desnutridos. Aos 7 dias de desnutrição, o músculo apresentou fibras com menor diâmetro, maior polimorfismo e maior teor de tecido conjuntivo endomisial. Nas histoquímicas, tipos de fibras sem delimitação segura. Aos 14 dias de desnutrição, fibras menores, mais polimórficas, muitas com núcleos centrais e moderado teor de tecido conjuntivo endomisial. Quanto à contração, a reação m-ATPase evidenciou fibras lentas e rápidas. A reação NADH-TR revelou os tipos de fibras slow oxidative, fast oxidative glycolytic e fast glycolytic. Aos 28 dias de desnutrição, fibras menores, agrupadas com contornos variáveis. Quanto ao tipo de contração e metabolismo, os três tipos de fibras apresentaram limites de reconhecimento indistinto. CONCLUSÃO: Os resultados experimentais sugerem que, além da redução no número de fibras, a desnutrição promove um retardamento na diferenciação das características morfológicas, metabólicas e contráteis dos tipos de fibras musculares esqueléticas em ratos na fase de crescimento.

OBJECTIVE: To study the contractile properties, metabolism and morphological characteristics of muscles submitted to prenatal and postnatal protein malnutrition. METHODS: Animals were distributed into two groups: Control, normoprotein diet (CG; n = 15; 5/5/5), and Malnourished, hypoprotein diet (MG; n = 15; 5/5/5), and examined on the 7th, 14th, and 28th days of the experiment. Total body mass, weight, and the contractile properties and morphology of the anterior tibial muscle were assessed. Several 8 µm-thick tissue samples were taken from 7, 14, and 28 day old rats and stained with HE or subjected to NADH-TR or m-ATPase (pH = 4.4) techniques. RESULTS: Body and muscle weight were lower in the malnourished group. On the 7th day of malnutrition, muscle samples exhibited fibers with smaller diameter, higher polymorphism and higher endomysial conjunctive tissue content. Histochemical methods were unable to precisely determine the types of fiber present. On the 14th day, there were smaller muscle fibers, more polymorphism, many of them with central nuclei and moderate endomysial conjunctive tissue content. With reference to contractile properties, the m-ATPase reaction identified both slow and fast fibers. The NADH-TR reaction revealed the following types of fiber: slow oxidative (SO), fast oxidative glycolytic (FOG) and fast glycolytic (FG). On the 28th day smaller, bunched muscle fibers varying shapes. All three types of fiber exhibited unclear recognition limits with respect to contraction and metabolism. CONCLUSION: Our experimental results suggest that, in addition to the reduction in numbers of fibers, malnutrition retards the differentiation of the morphological, metabolic, and contractile characteristics of skeletal muscle fibers in growing rats.

A Utilização da dinamometria isocinética nas ciências do esporte e reabilitação / Isokinetic dynamometry in sports and rehabilitation sciences

Aspectos relativos à qualidade dos testes e instrumentos de medida utilizados na prática e pesquisa de profissionais da área de esportes e reabilitação têm ganhado crescente importância. Ao mesmo tempo, os avanços tecnológicos no desenvolvimento de dinamômetro seletromecânicos para a medida da função muscular têm permitido mensurações mais precisas de diversos parâmetros musculares. O objetivo desse trabalho foi descrever as contribuições da dinamometria isocinética para a avaliação do desempenho muscular, bem como considerar fatores importantes para a adequada utilização dessa tecnologia e interpretação dos resultados.Foram revisados e discutidos aspectos referentes ao funcionamento do dinamômetro isocinético, os protocolos de avaliação utilizados, os parâmetros musculares avaliados, a análise dosdados isocinéticos e a interpretação de resultados, considerando questões relativas à confiabilidade e validade dos métodos. Foram ainda discutidas outras possibilidades de teste oferecidaspela dinamometria isocinética além das convencionais e foram feitas considerações sobre otreinamento isocinético. De acordo com a revisão realizada, para interpretação adequada dos resultados, a escolha de protocolos deve ser respaldada pelos dados de confiabilidade relatadosna literatura. Adicionalmente, a realização de testes isocinéticos e a utilização dos dados devem levar em consideração os métodos apropriados de análise e fatores que podem influenciar os resultados. Em relação ao treinamento isocinético, também devem ser consideradas questões funcionais. Quando esses fatores são levados em consideração, a utilização do dinamômetro isocinético é adequada para os propósitos de avaliação, treinamento e pesquisa nas ciências doesporte e reabilitação.

During the last years, aspects relative to the quality of the tests and instruments used by professionals of sports and rehabilitation in practice and research have gained increased importance. Meanwhile, technological advances in the development of electromechanical dynamometers for muscle performance testing have permitted more precise measures of several muscular parameters. The objective of this paper was to describe the contributions of isokinetic dynamometry for assessment of muscle performance, as well as to consider important factors for the adequate utilization of this technology and interpretation of results. Several factors which include functioning of the isokinetic dynamometer, assessment protocols, muscle performance parameters obtained by dynamometry and data analysis and interpretation of results were revised and discussed, considering issues of reliability and validity. Additionally, other possibilities of use for assessment as well as isokinetic training were also discussed. According to the review of the literature, for the adequate interpretation of results, the choice of protocols should be guided by available evidence of reliability. Moreover, isokinetic testing and data utilization should consider the appropriate methods of analysis and the factors that could influence the results. In regard to isokinetic training, functional issues should also be taken into account. Provided that these factors are considered, the utilization of the isokinetic dynamometer is adequate for the purposes of assessment, training and research in the field of sports and rehabilitation sciences.

The Union between gracilis and sartorius muscles in leontopithecus: morphofunctional analysis

RESUMEN: El Tití León Dorado, (Leontopithecus rosalia) es un primate (especie de los Tamarinos y Titíes) de la foresta atlántica brasileña en serio riesgo de extinción. Poco se conoce acerca de su anatomía, específicamente de las uniones musculares. Debido a ello, con el objetivo de comprender la locomoción de éste y otros primates, estudiamos la morfología y morfometría de los músculos grácil y sartorio y la relación entre ellos, en 3 especies de Leontopithecus rosalia. Se examinaron 18 animales adultos, de ambos sexos, sin anormalidades físicas en la región estudiada. El material pertenece a la colección del Centro de Primatología de Rio de Janeiro, Brasil. Los miembros posteriores fueron disecados hasta el nivel de los músculos grácil y sartorio, donde se efectuó la morfometría, obteniéndose, entre los músculos mencionados un área para su análisis histológico. Describimos la morfología de los músculos grácil y sartorio. Se obtuvieron valores promedio de la morfometría muscular y se estudió histológicamente la unión entre esos músculos. El análisis morfológico y morfométrico permite sugerir parámetros descriptivos de esos músculos. El análisis histológico permite concluir que las fibras del músculo grácil y del músculo sartorio no están fusionadas sino que se mantienen juntas a través de tejido conjuntivo, así, se insertan en el lado medial de la tibia. Funcionalmente, creemos que los músculos grácil y sartorio contribuyen a una activa contención de la articulación de la rodilla y sobre la biomecánica de los miembros posteriores de esos primates, conocidos como corredores.

Influence of the neural tube/notochord complex on MyoD expression and cellular proliferation in chicken embryos

Important advances have been made in understanding the genetic processes that control skeletal muscle formation. Studies conducted on quails detected a delay in the myogenic program of animals selected for high growth rates. These studies have led to the hypothesis that a delay in myogenesis would allow somitic cells to proliferate longer and consequently increase the number of embryonic myoblasts. To test this hypothesis, recently segmented somites and part of the unsegmented paraxial mesoderm were separated from the neural tube/notochord complex in HH12 chicken embryos. In situ hybridization and competitive RT-PCR revealed that MyoD transcripts, which are responsible for myoblast determination, were absent in somites separated from neural tube/notochord (1.06 and 0.06 10-3 attomol MyoD/1 attomol á-actin for control and separated somites, respectively; P<0.01). However, reapproximation of these structures allowed MyoD to be expressed in somites. Cellular proliferation was analyzed by immunohistochemical detection of incorporated BrdU, a thymidine analogue. A smaller but not significant (P = 0.27) number of proliferating cells was observed in somites that had been separated from neural tube/notochord (27 and 18 for control and separated somites, respectively). These results confirm the influence of the axial structures on MyoD activation but do not support the hypothesis that in the absence of MyoD transcripts the cellular proliferation would be maintained for a longer period of time