Use of ELISA based on NcSRS2 of Neospora caninum expressed in Pichia pastoris for diagnosing neosporosis in sheep and dogs / Utilização de um ELISA baseado em NcSRS2 de Neospora caninum expressa em Pichia pastoris para diagnóstico de neosporose em ovinos e cães

Neosporosis is a disease caused by the protozoon Neospora caninum that leads to significant economic losses in many countries. In the present study, we report on use of the recombinant protein NcSRS2 of N. caninum expressed in Pichia pastoris in an indirect immunoenzymatic assay (ELISA) for diagnosing neosporosis infection in sheep and dogs. We observed that the ELISA test yielded specificity of 94.5% and sensitivity of 100% for sheep and specificity of 93.3% and sensitivity of 100% for dogs. We observed that the sensitivity was higher than shown by the indirect fluorescent antibody test, and this was confirmed by means of Western blot. The results from this study suggest that the recombinant protein expressed in P. pastoris is a suitable antigen for use in immunodiagnosis to detect N. caninum in two important species exposed to this parasitosis.

A neosporose é uma doença causada pelo protozoário Neospora caninum que leva a perdas econômicas importantes em muitos países. No presente estudo, é descrita a utilização da proteína recombinante NcSRS2 de N. caninum expressa em Pichia pastoris em um ensaio imunoenzimático indireto (ELISA) para o diagnóstico de infecção por Neospora em ovelhas e cães. Observou-se, que utilizando-se um ELISA, o teste produziu uma especificidade de 94,5% e uma sensibilidade de 100% para ovinos; e uma especificidade de 93,3% e sensibilidade de 100% para cães. Uma maior sensibilidade foi observada em relação à IFI que foi confirmada por Western blot. Os resultados deste estudo sugerem que a proteína recombinante expressa em P. pastoris é bom antígeno para ser utilizado no diagnóstico imunológico para detectar N. caninum em duas espécies importantes expostas a esta parasitose.

Prevalence and risk factors associated with anti-Toxoplasma gondii antibodies in sheep from Bahia state, Brazil / Prevalência e fatores de risco associados a anticorpos anti-Toxoplasma gondii em ovinos da Bahia, Brasil

In this study, we aimed to determine the prevalence of Toxoplasma gondii antibodies and identify risk factors associated with this infection in sheep from the southern region of Bahia state. Between February and December 2010, 795 sheep from 31 farms located in nine municipalities were tested. We found seroprevalence of 30.2% (240/795), with titers of 64 (38.3%), 256 (34.2%), 1,024 (18.3%), and 4,096 (9.2%) by Indirect Fluorescent Antibody Test (IFAT). Seropositive sheep were detected in all farms sampled. Univariate statistical analysis detected association between T. gondii seropositivity and the variables age, use of fresh food mainly, water source, stocking rate, production system, presence and number of cats on the farm, and transit of cats (p < 0.05). In the logistic regression model, transit of cats (p = 0.001), production system (p = 0.007), and age (p = 0.027) were identified as risk factors associated with T. gondii infection.

Objetivou-se com este estudo determinar a prevalência de anticorpos anti-Toxoplasma gondii e identificar os fatores de risco associados á infecção em ovinos no sudeste do Estado da Bahia. De fevereiro a dezembro de 2010, 795 ovinos de 31 propriedades localizadas em nove municípios foram analisados. A soroprevalência foi de 30,2% (240/795), com títulos de 64 (38,3%), 256 (34,2%), 1.024 (18,3%) e 4.096 (9,2%) pela Reação de Imunoflorescência Indireta (RIFI). Ovinos positivos foram detectados em todas as fazendas estudadas. Na análise estatística univariada detectou-se associação entre a soropositividade e idade, uso de alimentação fresca, fonte de água, sistema de produção, presença e número de gatos na fazenda e o transito de gatos (p < 0,05). No modelo de regressão logística, transito de gatos (p = 0,001), sistema de produção (p = 0,007) e idade (p = 0,027) foram identificados como fatores de risco associados á infecção por T. gondii.

Prevalence and risk factors associated to ovine toxoplasmosis in northeastern Brazil / Prevalência e fatores de risco associados à toxoplasmose ovina no nordeste do Brasil

In this study, we aimed to determine the prevalence and risk factors associated to Toxoplasma gondii infection in sheep from northeastern Brazil. A total of 932 ovine serum samples from 54 properties in 19 municipalities of the state of Sergipe were collected and assayed using indirect fluorescent antibody test. The assay used antibodies against Toxoplasma gondii (IFAT-IgG) with a cutoff point of 1:64. We observed that 28.22% (263/932) of the ovine samples were serum-reactive. In a logistic regression, factors such as consumption of water directly from the source, consumption of water from a deep well, and age below 12 months were associated with protection; whereas factors such as presence of cats on the property, presence of slatted floor, and use of exchanged or borrowed breeding males were associated with infection. The studied area can be considered endemic for toxoplasmosis, so it is necessary to adopt preventive and control measures because this zoonotic infection poses risks to public health.

Objetivou-se determinar a prevalência e os fatores associados á infecção por Toxoplasma gondii em ovinos do Nordeste brasileiro. Foram processadas 932 amostras de soro de ovinos procedentes de 54 propriedades de 19 municípios do Estado de Sergipe e analisadas pela reação de imunofluorescência indireta para pesquisa de anticorpos contra Toxoplasma gondii (RIFI-IgG), com ponto de corte de 1:64. Observou-se que 28,22% (263/932) dos ovinos foram sororeagentes. Na regressão logística não condicional, ingestão de água direto da fonte, ingestão de água de poço profundo e idade inferior a 12 meses foram fatores associados á proteção; enquanto que a presença de gato na propriedade, presença de aprisco ripado e troca ou empréstimo de machos reprodutores foram identificados como fatores associados á infecção. Ao considerar a região de estudo como endêmica para a doença, cabe a adoção de medidas preventivas e de controle, uma vez que por apresentar caráter zoonótico a infecção destes animais representa riscos á saúde pública.

Serodiagnosis of Echinococcosis by ELISA Using Cystic Fluid from Uzbekistan Sheep

According to increase of travel, the cases of imported echinococcosis have been increasing in Korea. The present study was undertaken to develop a serodiagnostic system for echinococcosis in Korea. For diagnosis of echinococcosis, the fluid of Echinococcus granulosus hydatid cysts was collected from naturally infected sheep in Uzbekistan. Also serum samples of infected patients who were surgically confirmed were collected in a hospital in Tashkent, Uzbekistan. According to the absorbance of 59 echinococcosis positive and 39 negative control serum samples, the cut-off value was determined as 0.27. The sensitivity and specificity of ELISA with hydatid fluid antigen were 91.5% and 96%, respectively. The antigen cross-reacted with the serum of some cysticercosis or clonorchiasis patients. However, immunoblot analysis on the cystic fluid recognized antigenic proteins of 7-, 16-, and 24-kDa bands in their dominant protein quantity and strong blotting reactivity. In conclusion, the present ELISA system using hydatid cyst fluid antigen from Uzbekistan sheep is sensitive and specific for diagnosis of echinococcosis cases.

Toxoplasma gondii antibodies sheep in Lages, Santa Catarina, Brazil, and comparison using IFA and ELISA / Anticorpos toxoplásmicos em ovinos de Lages, Santa Catarina, Brasil, e comparação utilizando RIFI e ELISA

Toxoplasmosis in sheep is a disease of great importance in veterinary medicine, which causes economic losses in livestock and has a great impact on human health, since consumption of infected meat facilitates transmission of zoonotic infections. Blood samples from sheep (n = 360) were collected from 13 farm properties in the municipality of Lages, Santa Catarina, to estimate the prevalence of toxoplasmosis and identify risk factors associated with Toxoplasma gondii infection. T. gondii, antibodies were investigated by means of the indirect immunofluorescence assay (IFA) and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Animals infected with T. gondii were found on 100% of the farms. IFA detected 56.9% (205/360) and ELISA 42.5% of the infected sheep. Breed was the only risk factor associated with the presence of T. gondii antibodies. ELISA showed sensitivity of 61%, specificity of 82% and kappa of 0.41, which was considered moderate. This allows use of ELISA as an alternative technique for diagnosing T. gondii in sheep.

A toxoplasmose ovina é uma doença parasitária de elevada importância em medicina veterinária e em saúde pública, acarretando prejuízos na produção animal, gerados pelas perdas reprodutivas e econômicas, além de sua implicação na saúde humana, já que o consumo de carne infectada facilita a transmissão zoonótica. Para determinar a prevalência e identificar fatores de risco para a infecção por T. gondii em ovinos de Lages, Santa Catarina, amostras de sangue (n = 360) foram coletadas em 13 propriedades. Cada criador respondeu a um questionário para permitir a identificação dos fatores de risco da infecção. A pesquisa de anticorpos foi realizada por meio da Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI > 64) e do Ensaio Imunoenzimático Indireto (ELISA). Em 100% das propriedades foram encontrados animais positivos. Pela RIFI, 205 (56,94%) ovinos apresentaram anticorpos contra T. gondii e pelo ELISA, 153 (42,50%). Considerando-se as técnicas sorológicas e a análise estatística, foram fatores de risco pelo ELISA: a idade, a fonte de água e a categoria animal; e pela RIFI, o tipo racial. Foi constatada sensibilidade de 61%, especificidade de 82% e concordância Kappa de 0,41 entre o ELISA e a RIFI (1:64), considerada moderada, permitindo indicar o ELISA como técnica adequada para o diagnóstico de T. gondii na espécie ovina.

Acute phase proteins: a potential approach for diagnosing chronic infection by Trypanosoma vivax / Proteínas de fase aguda: uma possível abordagem para diagnóstico de infecção crônica por Trypanosoma vivax

The present study aimed to assess potential changes in acute phase proteins in sheep experimentally infected with Trypanosoma vivax. There were studied eight male sheep, four used as controls and four infected with 10(5) T. vivax trypomastigotes. Blood samples were collected at two points times before infection and then at 5,7, 9, 11, 13, 15, 20, 30, 45, 60, 75, 90, 105 and 120 days post-infection (dpi). Blood samples were centrifuged and allotted, and acute phase proteins were then separated by electrophoresis on acrylamide gel containing sodium dodecyl sulfate. Protein concentrations were determined by computer-assisted densitometry. Total protein was determined by colorimetric biuret method. Trypanosomes were counted daily using a 5 mL aliquot of blood smear on a glass slide under a 22 × 22 mm coverslip. Parasites were counted in 100 microscopic fields (40× magnification), and then multiplied by a correction factor. The results were expressed as parasites per mL of blood. For statistical analyses, we used the Wilcoxon test at 5% significance level. There was found a reduction in several acute phase proteins and increase in antitrypsin and transferrin. This finding can be used for the diagnosis of T. vivax infection, especially in chronic infection.

O objetivo do presente estudo foi verificar possíveis alterações nas proteínas de fase aguda em ovinos infectados experimentalmente com Trypanosoma vivax. Para tanto, foram utilizados oito ovinos machos, sendo quatro usados como controle e quatro infectados com 10(5) tripomastigotas de T. vivax. Colheram-se amostras de sangue em dois tempos antes da infecção e, posteriormente, aos 5, 7, 9, 11, 13, 15, 20, 30, 45, 60, 75, 90, 105 e 120 dias após a infecção (dpi); após centrifugação e aliquotização das amostras. As proteínas de fase aguda foram separadas por eletroforese em gel de acrilamida, contendo dodecil sulfato de sódio, e suas concentrações foram determinadas através de densitometria computadorizada. A dosagem de proteína total foi realizada pelo método colorimétrico do biureto. A contagem dos tripanossomas foi realizada diariamente, utilizando-se uma alíquota de 5 µL de sangue disperso em lâmina de microscopia, sob lamínula de 22 × 22 mm, contando-se os parasitos em 100 campos microscópicos, com objetiva de 40×, multiplicados pelo fator de correção do microscópio, e o resultado expresso em parasitos por mL de sangue. Para a análise estatística, empregou-se o teste de Wilcoxon a 5% de probabilidade. Foi observada a diminuição de diversas proteínas de fase aguda e aumento de antitripsina e transferrina que podem ser utilizadas para auxiliar no diagnóstico da infecção por T. vivax, principalmente na fase crônica da infecção.

Sample type is vital for diagnosing infection with peste des petits ruminants virus by reverse transcription PCR

Peste des petits ruminants (PPR) diagnosis from suspected samples from sheep and goats was carried out. Buffy coat, tissues, and oculo-nasal swabs were analyzed using nucleoprotein (NP3/NP4) and fusion protein (F1/F2) gene primers, respectively. Analysis of the sample types and primer set revealed that buffy coat are the best type of samples for PPR diagnosis and the use of two set of primers will increase the number of positives.

Serological survey of Neospora caninum in small ruminants from Pernambuco State, Brazil / Inquérito sorológico de Neospora caninum em pequenos ruminantes do estado de Pernambuco, Brasil

Neospora caninum infection is an important cause of bovine abortion as well as neonatal mortality in goats and sheep. A serological survey for antibodies against N. caninum in goats and sheep was carried out in the municipality of Ibimirim, PE, Northeastern Brazil. The imunnofluoresce antibody test showed that 26.6 percent (85/319) of the goats and 64.2 percent (52/81) of the sheep were positive. Serologic reactivity was associated with age in goats (p < 0.01) and sheep (p > 0.05), with increasing rates in older animals. These results indicate exposure to N. caninum among small ruminants in the study area.

A infecção por Neospora caninum é uma importante causa de abortos em bovinos, assim como mortalidade neonatal em caprinos e ovinos. Uma pesquisa sorológica de anticorpos anti-N. caninum foi realizada no município de Ibimirim (PE, Brasil). Os resultados ao teste de imunofluorescência revelaram que 26,6 por cento (85/319) dos caprinos e 64,2 por cento (52/81) dos ovinos foram positivos. A reatividade à sorologia foi associada com a idade nos caprinos (p < 0,01) e ovinos (p > 0,05), com maior ocorrência nos animais mais velhos. Estes resultados indicam exposição a N. caninum entre pequenos ruminantes na área estudada.

Prevalence of Neospora caninum antibodies in sheep flocks of Uberlândia county, MG / Prevalência de anticorpos anti-Neospora caninum em rebanhos de ovinos do município de Uberlândia, MG

Neosporosis is a parasitic disease that occurs in sheep and is associated with reproductive failure. The aim of this study was to verify seroprevalence of Neospora caninum antibodies in 12 sheep flocks in Uberlândia county, Minas Gerais, Brazil, using Indirect Immunofluorescence Assay (IFA). A total of 334 sheep blood samples were analyzed and an epidemiologic questionnaire was applied for each farm in order to correlate with risk factors of neosporosis: gender, age, breed, abortion problems, contact with cattle and dogs, and presence of wild canids. The prevalence of Neospora caninum antibodies in sheep was 8.1 percent, with titers ranging from 50 to 3200 and 83.3 percent of farms detected at least one ovine reactive. There was statistically significant difference in flocks with abortion problems associated with the presence of Neospora caninum antibodies (p < 0.05).

A neosporose é uma doença parasitária que acomete os ovinos e está associada a perdas reprodutivas. O objetivo deste estudo foi verificar a prevalência de anticorpos anti-Neospora caninum em 12 rebanhos de ovinos do município de Uberlândia, MG, utilizando a Técnica de Imunofluorescência Indireta (RIFI). Foram analisadas 334 amostras de sangue e, em cada propriedade, aplicou-se um questionário epidemiológico para avaliar os fatores de risco envolvidos na transmissão desse protozoário: sexo, idade, raça, problemas de aborto, contato com bovinos e caninos e presença de canídeos silvestres. A prevalência de anticorpos anti-Neospora caninum em ovinos foi de 8,1 por cento, com títulos variando de 50 a 3200 e 83,3 por cento das propriedades apresentaram pelo menos um ovino reagente. Houve diferença estatística significativa para rebanhos com problemas de aborto associados à presença de anticorpos anti-Neospora caninum (p < 0,05).

Valor da aspartato transaminase no diagnóstico precoce da intoxicação crônica por cobre em ovinos / Value of the ast on the early diagnosis of chronic cooper poisoning sheep

Através da medida da aspartato transaminase (E.C.2.6.1.1.) (AST), foi realizado, por dois anos consecutivos, o controle de 110 ovinos expostos em feira internacional, procurando-se detectar animais, prestes a desencadear crise hemolítica, devida a intoxicação crônica por cobre (ICC). No primeiro ano, ocorreram óbitos por ICC, e a medida da AST revelou taxas elevadas no sangue dos animais. Metade dos animais que apresentaram níveis de AST superiores a 600 UI/I morreram em crise hemolítica. Sugere-se que o manejo, o estresse da viagem e da feira, aliados à grande quantidade de ração ingerida, desencadearam a crise. No segundo ano, não ocorreram mortes dos animais e constatou-se a diminuição dos níveis enzimáticos de AST no sangue. Os dados obtidos sugerem que a medida da AST é um bom indicador do desencadeamento da crise hemolítica em ovinos submetidos a dietas ricas em cobre.