RESUMEN
Recentemente, desenvolvemos um novo ensaio quimiluminescente disparado por hidrolases sobre 2-metil-1-propenilbenzoato (MPB) na presença de `H IND. 2ï`O IND. 2ï e peroxidase de raiz forte (HRP) (YAVO, et al. (1996) Anal. Biochem., v. 234, p. 215-220). A hidrólise de MPB, catalisada por esterase, origina o 2-metil-1-propenol, que é oxidado por HRP/`H IND. 2ï`O IND. 2ï produzindo acetona triplete. Neste trabalho, acompanhamos a hidrólise do MPB por esterases leucocitárias, esterases plasmáticas, além da determinação quimiluminescente de conjugado de peroxidase (HRP-IgG) através de reação acoplada com MPB/esterase/`H IND. 2ï`O IND. 2ï. Dentre as esterases leucocitárias, somente a esterase presente nos monócitos hidrolisou o MPB, indicando a aplicação analítica deste ensaio na distinção de leucemia monocíticas...
Asunto(s)
Butirilcolinesterasa/metabolismo , Diagnóstico Clínico , Leucocitos Mononucleares , Neutrófilos , Peroxidasas/metabolismo , Precipitación Química , Ensayo de Inmunoadsorción Enzimática , Esterasas/farmacología , Hidrólisis , Mediciones Luminiscentes , Técnicas de Laboratorio Clínico/métodosRESUMEN
El procedimiento propuesto para la localización de carboxiesterasas en gel de poliacrilamida está adaptado de la técnica colorimétrica de Talcott. Se basa en el acoplamiento de la hidrólisis de etil-carboxiésteres debido a esterasas, a la reducción de un colorante de tetrazolio. Se obtienen resultados satisfactorios usando diferentes sustratos de interés general y toxicológico como el acetato de etilo, malonato de etilo, ftalato de etilo y malatión. Se ensayaron preparados enzimáticos de insectos con este procedimiento y dieron en cada caso nuevos patrones de esterasas. Usado independientemente o en combinación con el método de tinción de alfa-naftil acetado y fast blue B, provee un mayor conocimiento sobre la especificidad de este grupo complejo de enzimas