Effects of cryoprotectants and low temperatures on hatching and abnormal embryo development of Prochilodus lineatus (Characiformes: Prochilodontidae)

This study evaluated the effect of the cryoprotectants and the low temperatures on the embryonic development of Prochilodus lineatus, describing their main morphological alterations. On chilling sensitivity test, the survival rates at the twenty somites stage (20S) were 53.6% at 0ºC, and 100% in 5ºC. To test toxicity, the embryos were exposed to a graded series of 1,2-Propanediol (PROP), dimethyl sulfoxide (Me2SO4) and glycerol (GLY), terminating in a solution of high osmolarity. There was no significant difference in the embryos survival of toxicity test between series of PROP and Me2SO4 in the 6S and 20S. In the cooling protocols, were evaluated the effects of low temperature associated with cryoprotectants. At 5ºC, PROP showed survival rates above 75% in the gastrula stage (G) and above 90% in the 6S and 20S stages. High rates of abnormalities were observed, and the most recurrent were: small bodies, fins presenting uncontrolled cell growth, membrane rupture, and retraction. These results demonstrate the need to use cryoprotectant solutions, even when there is no ice nucleation, and, on the other hand, shows that high cryoprotectant concentrations promote numerous morphological lesions, compromising normal embryonic development.(AU)

Este estudo avaliou os efeitos dos crioprotetores e das baixas temperaturas no desenvolvimento embrionário de Prochilodus lineatus, descrevendo suas principais alterações morfológicas. Nos testes de sensibilidade ao frio, as taxas de sobrevivência, no estágio de vinte somitos (20S), foram de 53,6% a 0ºC e 100% a 5ºC. Nos testes de toxicidade, os embriões foram expostos a uma série graduada dos crioprotetores: 1,2-Propanediol (PROP), dimetilsulfóxido (Me2SO4) e glicerol (GLY), terminando em uma combinação de alta osmolaridade. Não houve diferença significativa na sobrevivência dos embriões nas séries do PROP e Me2SO4 nos estágios de 6S e 20S. Nos protocolos de resfriamento, foram avaliados os efeitos da baixa temperatura associados as séries crioprotetoras. A 5ºC, o PROP apresentou taxas de sobrevivência acima de 75% no estádio de gástrula (G) e acima de 90% nos estádios 6S e 20S. Foram observadas altas taxas de anormalidades sendo as mais recorrentes: corpos pequenos, nadadeiras apresentando crescimento celular descontrolado, ruptura da membrana e retração vitelínica. Estes resultados demonstram a necessidade do uso das soluções crioprotetoras, mesmo não havendo nucleação de gelo e, em contrapartida, demonstra que as elevadas concentrações crioprotetoras promovem numerosas lesões morfológicas, comprometendo o desenvolvimento embrionário.(AU)

Efeitos da idade da matriz leve e do período de armazenamento de ovos incubáveis no rendimento de incubação / Effects of ages of light breeder hens and storage period of hatchable eggs on the incubation efficiency

Avaliaram-se os efeitos da idade das matrizes leves e do período de armazenamento dos ovos sobre o rendimento de incubação. Foram utilizados 7.224 ovos da linhagem Dekalb, distribuídos de acordo com delineamento experimental inteiramente casualizado, sendo a altura de bandeja uma covariável. Os tratamentos foram definidos pelas idades das matrizes (32 e 57 semanas de idade) e o período de armazenamento dos ovos (três, cinco e sete dias), totalizando seis tratamentos com 14 repetições. A idade das aves influenciou o peso do ovo. Houve aumento na perda de peso dos ovos das matrizes de 32 e 57 semanas de idade, durante o armazenamento (10,48 e 14,16 por cento, respectivamente) e na transferência (10,40 e 12,07 por cento, respectivamente). Verificou-se maior taxa de eclosão (86,90 por cento) em ovos produzidos pelas matrizes novas. Independentemente da idade da matriz, à medida que aumentou o período de armazenamento, houve diminuição na taxa de eclosão dos ovos férteis (86,06 e 82,39 por cento, para as matrizes de 32 e 57 semanas de idade, respectivamente). As matrizes com 57 semanas de idade produziram pintos mais pesados e com menor relação peso do pinto/peso do ovo.

The effects of ages of light breeder hens and storage period of hatchabe eggs on the incubation efficiency were evaluated. A total of 7,224 Dekalb hatching eggs were assigned according to the sample random design, and the hatching tray height was considered a co-variable. The treatments were defined according to the breeder hens ages (32 and 57-week-old) and the period of storage of eggs (three, five, and seven days), with 14 replications. The age of the hen affected the weight of the eggs. There was loss of weight of the eggs of 32 and 57-week-old breeder hens during storage (10.48 and 14.16 percent, respectively) and transference (10.40 and 12.07 percent, respectively) according to the aging of the breeder hen. Eggs produced by the younger breeder hens had a higher hatching rate; however, no matter the age of the breeder hen, there was a decrease of the hatching rate of fertile eggs (86.06 and 82.39 percent, for the 32 and 57-week-old breeder hens, respectively) whenever the storage period was increased. The 57-weekold breeder hens produced heavier chicks and lower chick/egg weight coefficient.

Desempenho de novilhas Holandês na produção de embriões F1 Holandês-Zebu, em condições tropicais / Performance of Holstein heifers for F1 Holstein-Zebu embryo production, in tropical conditions

A produção in vivo de embriões bovinos é uma alternativa para a formação e manutenção de rebanhos mestiços F1 destinados à produção de leite. Objetivou-se estudar o potencial de utilização de novilhas da raça Holandês, mantidas em pasto e suplementadas, como doadoras de embrião, nas épocas de verão e inverno. Procederam-se superovulação e coleta de embriões em sete novilhas em cada época. Foram obtidos os dados climáticos, a temperatura retal e a frequência respiratória das doadoras. No verão, observou-se maior índice de temperatura e umidade (ITU) às 6h, 12h e 18h, bem como maior (P0,05) na média de estruturas recuperadas (20,14±17,47 vs. 8,57±9,40), embriões viáveis (14,57±11,91 vs. 7,14±7,24) e congeláveis (13,28±11,39 vs. 6,57±6,24) obtidos no inverno e no verão, respectivamente. Sob as condições estudadas, novilhas da raça Holandês podem ser utilizadas para a produção de embriões F1, tanto no verão, quanto no inverno.

In vivo embryo production (embryo transfer) is an alternative for F1 dairy herds formation and maintenance. The aim of this study was to evaluate the potential of utilization of grazing and supplemented Holstein heifers as embryo donors in summer or winter. Superovulation was performed in seven heifers on each season. Climatic parameters, as well as rectal temperature and respiratory rate of donors were measured. Temperature and humidity index (THI) was higher (p0.05). Holstein heifers can be used as embryo donors in both summer and winter, under the given conditions.

Produçäo de embriöes a partir do desenvolvimento de oócitos imaturos in vitro: valor de estimulaçäo curta com FSH / In vitro development of immature oocytes to viable embryos: brief ovarian stimulation with FSH

OBJETIVO: Avaliar os recentes avanços nas técnicas de maturaçäo oocitária que têm possibilitado o desenvolvimento de embriöes a partir de oócitos imaturos. Desta forma objetivamos avaliar a maturaçäo ovular, taxas de fertilizaçäo e desenvolvimento embrionário em oócitos imaturos aspirados sob pequenas doses de estímulo gonadal. MATERIAL E MÉTODOS: 8 mulheres entre 28 e 39 anos foram submetidas a estimulaçäo com urofolitrofina purificada (Metrodin) e seus oócitos coletados quando pelos menos 2 deles atingiram diâmetro médio de 10mm. Os oócitos coletados foram cultivados em meio TCM-199 suplementado com soro sintético. Metrodin, Profasi (hCG) e Piruvato, ambiente controlado a 37 graus Celsius e concentraçäo de CO2 a 5 por cento por 24 até 72h. Após avaliaçäo da maturidade ovular, procedeu-se a ICSI e transferência de embriöes morfologicamente normais por via transcervical para cavidade uterina. RESULTADOS: 43 oócitos coletados de 7 pacientes foram submetidos a maturaçäo in vitro. Em uma das pacientes näo evidenciou presença de oócitos. Observou-se desenvolvimento até primeiro corpúsculo polar em 27 (63 por cento) ocócitos, sendo que destes, 17 (63 por cento) fertilizaram e 15 (88 por cento) apresentaram clivagem em seu seguimento. Como resultado, obtivemos 1 gravidez após 6 transferências (1/6 - 17 por cento por transferência) que resultaram em gestaçäo viável, com evoluçäo normal, atualmente no segundo trimestre. CONCLUSÖES: Estes resultados demonstram a viabilidade de cultura e conseqüente maturaçäo in vitro de oócitos imaturos, observando-se resultados em termos de taxas de fertilizaçäo, clivagem e gravidez, próximas as encontradas em ciclos induzidos até o completo desenvolvimento ovular.

Desenvolvimento, in vitro, de blastômeros isolados e embriöes humanos, pós-biopsia, no período pré-implantaçäo / Development, in vitro, of isolated blastomeres and human embryos, pos biopsy, in preimplantation period

Embriöes humanos normalmente fertilizados foram biopsiados, em estágio de clivagem, no dia 3 após fertilizaçäo in vitro (estágio de 6 a 10 células). Vinte e oito embriöes tiveram 1 blastômero removido e 19 embriões, 2 blastômeros, que foram colocados em co-cultura com os embriöes biopsiados. Embriöes e blastômeros foram analisados diariamente para avaliaçäo do desenvolvimento morfológico até o dia 6, quando o número de células foi contado, através de marcaçäo nuclear. No total, 53 por cento dos embriões biopsiados (25/47), atingiram o estágio de blastocisto entre o dia 5 e o dia 6, e a proporçäo foi a mesma, independente do número de células removidas. O número total de células no estágio de blastocisto (56,2 ñ 3,0; 64,7 ñ 5,5) e o número de células do trofectoderma (45,4 ñ 3,5; 44,0 ñ 5,7) e do embrioblasto (14,0 ñ 1,2; 16,6 ñ 1,8) näo foram significantemente diferente nos embriões que tiveram 1 ou 2 células removidas, respectivamente. Setenta e dois por cento dos blastômeros dividiram-se pelo menos uma vez, no período de 3 dias em cultura, e 50 por cento dividiram-se mais de uma vez. O número total de células após 3 dias em cultura foi de 4,8 ñ 0,51 por blastômero quando uma célula foi removida, e 8,3 ñ 1,0 quando duas células foram removidas. Cinquenta e cinco por cento dos blastômeros cavitaram neste período. Dos blastômeros removidos de embriöes que se desenvolveram até o estágio de blastocisto, 92 por cento sofreram divisäo e 76 por cento cavitaçäo. Naqueles removidos de embriöes que näo se desenvolveram até o estágio de blastocisto, 50 por cento sofreram divisäo (p<0,002) e 32 por cento cavitaçäo (p<0,003). Oito por cento dos blastômeros do primeiro grupo e 41 por cento dos blastômeros do segundo, näo sofreram divisäo ou cavitaçäo (p<0,008). Concluindo, a remoçäo de 1 ou 2 blastômeros, pela técnica de biopsia de embriöes humanos em estágio de 8 células, näo afeta adversamente o desenvolvimento embrionário, sendo que näo existe diferença em se remover 1 ou 2 células; blastômeros isolados, biopsiados de embriöes humanos em estágio de 8 células, possuem a capacidade de proliferar, formar cavidade e diferenciar em células do trofectoderma, in vitro, quando mantidos em co-cultura com os embriöes de origem e; blastômeros de um mesmo embriäo possuem um desenvolvimento sincrônico e equivalente, mesmo quando isolados e cultivados externamente ao embriäo de origem...

Effect of embryo density and growth factors on in vitro preimplantation development of mouse embryos

Embryo development depends on maternal and embryonic factors that may regulate genetic programs in early development. Effects of growth factors on proliferation, differentiation and morphogenesis along embryogenesis have been documented. However, studies have not established the role of growth factors in the preimplantational period. The purpose of this study was to investigate the possible effects of growth factors and embryo density on mouse preimplantation development in vitro. Two-and eight-cell CF-1 embryos were cultured individually or in groups of ten in HTF medium, alone or with EGF, TGF-beta1 and IGF-I. Cleavage rate varied greatly with growth factors and increased significantly when eight-cell embryos were cultured in groups. On the other hand, when two-cell embryos were cultured in group, the cleavage rate was slower than that obtained when embryos were individually cultured. The differentiation rate increased significantly in two-cell embryos cultured in groups (p<0.05). EGF, TGF-beta1 and IGF-I increased differentiation rates significantly in two-cell embryos individually cultured for 68 hours. The combination of EGF and TGF-beta1 increased the differentiation rates significantly. The other combinations were not effective in modifying this parameter. Hatching rates increased in embryos cultured in groups (p<0.05). TGF-beta1 decreased this parameter significantly in two-or eight-cell embryos cultured in groups (p<0.05). The data described in this report suggest that preimplantational mouse embryos produce some factor or factors that enhance its development, specially the differentiation and hatching rates. However, a functional role for polypeptide growth factors during preimplantational development has to be determined.

Respuesta superovulatoria en ganado Bos indicus y Bos taurus bajo condiciones tropicales, y efecto del desarrollo y calidad del embrión sobre el porcentaje de gestación / Superovulatory response in Bos indicus and Bos taurus cattle under tropical conditions, and effect of embryo development and quality on pregnancy rate

El presente estudio se realizó en condiciones de campo en 4 ranchos de la zona centro del estado de Yucatán. Los objetivos fueron, en primer lugar; evaluar la respuesta superovulatoria entre ganado Bos indicus y Bos taurus, y entre vacas y novillas; en segundo lugar, investigar el efecto del desarrollo y la calidad de los embriones transferidos sobre el porcentaje de gestación de las receptoras. Para esto, se superovularon 30 animales con hormona foliculoestimulante (FSH-P) y se transfirieron 88 embriones a un número igual de receptoras. El 83.3 por ciento de las donadoras (n=25), respondió satisfactoriamente al tratamiento superovulatorio, de éstas, se obtuvo en promedio 8.2 ñ 5.3 embriones recuperados por donadora, de los cuales 6.9 ñ 4.1 fueron embriones transferibles. Los animales Bos indicus presentaron un mayor promedio de embriones recuperados (p<0.10) y embriones transferibles por donadora (p>0.05) (11.6 ñ 7.9 y 7.8 ñ 4.2, respectivamente), que los animales Bos taurus (7.1 ñ3.6 y 6.6 ñ4.1, respectivamente). Al evaluar estos indicadores entre vacas y novillas, no se encontró diferencia en el promedio de los embriones recuperados por donadora (8.0 ñ 6.7 vs 8.3 ñ3.2, respectivamente: P>0.05); sin embargo, se observó cierta superioridad de las novillas en el promedio de embriones transferibles (7.9 ñ 3.8 vs 6.6 ñ 4.2, respectivamente), sin que esta diferencia sea significativa (P>0.05). El porcentaje global de gestación para las 88 receptoras fue de 51.1 por ciento (n=45), el porcentaje de gestación fue mayor cuando se transfirieron embriones en estadio de blastocisto (53.3 por ciento) que cuando se transfirieron en estadio de mórula (38.4 por ciento) (P>0.05), y también cuando se transfirieron embriones de calidad excelente (63.4 por ciento), comparados con los embriones de calidad buena, regular (44.8 por ciento y 44.4 por ciento, respectivamente: P>0.05) y mala (22.2 por ciento: P>0.05)

Influência da radiaçäo ionizante (bomba de cobalto) em embriöes de coelha na fase de pré-implantaçäo: influência no número de mitoses atípicas e no grau de desenvolvimento do pólo / Influence of ionizing radiation (CO60) in pre-implant rabbit embryos: influence on atypic mitotic index and on pole development grade

Neste estudo avaliou-se o efeito da radiaçao ionizante em 12 coelhas (65 embrioes), em três diferentes momentos da gravidez: no momento do cruzamento / ovulaçao (hora zero), dois dias após, e quatro dias após, com duas diferentes doses de irradiaçao, cinco cGy e 10 cGy. Seis coelhas (36 blastocistos) foram usadas como controles. O momento do cruzamento foi considerado a hora "zero". Após seis dias (+60 minutos) os embrioes de cada coelha foram obtidos por lavagem do útero com meio de cultura. Os embrioes foram fixados em metanol por 48 horas, e corados com hematoxilina ácida de Mayer. Os seguintes parâmetros foram estudados: a) influência no número de mitoses atípicas; b) influência no grau de desenvolvimento do pólo embrionário. Nao se encontrou malformaçoes grosseiras do pólo embrionário. O número de mitoses atípicas foi alterado tanto pelo momento quanto pela dose irradiada. O grau de desenvolvimento do pólo embrionário relacionou-se com o momento da irradiaçao (atrasando-o), mas a dose irradiada nao influiu neste parâmetro.

The effect of serum on in vitro maturation, in vitro fertilization and steroidogenesis of bovine oocytes co-cultured with granulosa cells

The influence of fetal calf serum alone (fcs) or associated with proestrous (FCS + PCS), ESTROUS (FCS + ECS) or metaestrous (FCS + MCS) cow serum added to the culture medium and of the steroids produced by co-cultured granulosa cells were evaluated in terms of the in vitro maturation (IVM) and fertilization (IVF) of bovine oocytes. Supplementation of the medium with 9FCS + ECS and FCS + MCS resulted in higher proportions of oocytes that reached metaphase II (96.0 per cent and 93.3 per cent, respectively) and in higher proportion of embryos that reached the four- and eight-cell/morula stages (51.9 per cent and 65.6 per cent, respectively), whereas the supplementation with FCS and FCS + pcs resulted in only 79.2 per cent and 67.5 per cent, respectively, of matured oocytes nd 26.7 per cent and 34.4 per cent, respectively, of cleaved embryos. These findings show that the best IVM and IVF were obtained at lower concentrations of estradiol produced by co-cultured granulosa cells (supplementation with FCS + ECS: 10.3 ng/ml and FCS + MCS: 2.1 ng/ml), whereas the worst results in IVM and IVF occurred at higher concentrations of estradiol that were obtained with FCS (33.1 ng/ml) and FCS + PCS (19.9 ng/ml) supplementation. These data suggest an inhibitory effect of estradiol on resumption of oocyte meiosis in vitro

Efectos de la dehidroepiandrosterona sobre el desarrollo embrionario en ratas / Dehydroepiandrosterone effects on rats embryo development

La dehidroepiandrosterona (DHEA) y su ester sulfato (DHEA-S) son los esteroides más abundantes producidos por la corteza suprarrenal. A pesar de que sus funciones específicas no han sido claramente establecidas, se sabe que un aumento en los niveles séricos de la DHEA-S puede ir asociado con anovulación o con muerte fetal. El objetivo de este trabajo fue estudiar el efecto de la administración de la DHEA en dosis de 20 mg/Kg de peso (experimentales) o el vehículo (controles) durante los días 5º al 8º (implantación), 9º al 14º (embriogénesis) y 15º al 19º (crecimiento fetal). El día 20º, los úteros se extrajeron, se fijaron, se pesaron y luego, se disecaron los fetos, se pesaron y se estudiaron macroscópicamente. Cuando la DHEA se administró durante los períodos de implatación y embriogénesis no se obtuvieron fetos a términos. Durante la última etapa (días 15º al 19º), la DHEA produjo una disminución significativa (p<0,0001) en el peso fetal (1,84 gr/feto vs 2,11 gr/feto control), sin alteración de su viabilidad. Los resultados demuestran que la administración de la DHEA durante las etapas de implantación y embriogénesis inhibe total y selectivamente el desarrollo del embrión, mientras que, durante la etapa de crecimiento fetal, la DHEA reduce el peso de los fetos sin alterar su anatomía macroscópica externa.

Dehidroepiandrosterona y preñez en la rata / pregnancy and dehydroepiandrosterone in rats

Se estudió en ratas el efecto de la DHEA sobre la preñez. El esteroide se administró durante los primeros 5 días de la preñez y al decimoquinto día las ratas fueron sacrificadas. Las ratas que recibieron la DHEA en dosis de 5 mg/kg no se inhibió la preñez y en las tratadas con 10 y 20 mg/kg los porcentajes de preñez fueron del 27 por ciento y 0 por ciento , respectivamente. Al 5 día, los niveles séricos de estradiol, progesterona y testosterona, obtenidos en las ratas tratadas con DHEA, fueron más elevados que en las cotroles. El número de blastocistos normales se redujo significativamente. Estos resultados demuestran que la administración de DHEA durante los primeros días de la preñez inhibe la blastogénesis y que este efecto, dosis dependiente, no parece ser debido a una falta de soporte hormonal sino más bien a una acción directa de la DHEA sobre el embrión.

Controle de qualidade e treinamento técnico com embriöes bovinos para laboratórios de FIV / IVF laboratory quality control and staff training through the development of bovine embryos

Com o intuito de investigar um controle de qualidade eficiente e de baixo custo para o laboratório de fertilizaçäo in vitro (FIV), além de treinar adequadamente o pessoal envolvido no trabalho, desemnvolvemos uma técnica de controle de qualidade através de embriöes bovinos. Seiscentos e vinte e dois oócitos bovinos foram aspirados de ovários de vaca, retirados imediatamente após a morte em frigorífico. Observou-se que, após a fertilizaçäo in vitro, 373 oócitos apresentavam divisäo em diversos estágios de desenvolvimento até mórula. Comparando-se com o controle de qualidade através de embriöes de camundongo, que é o método adotado internacionalmente nos laboratórios de FIV, observou-se eficácia similar, além de menor custo com relaçäo às técnicas e condiçöes de cultura