Detección de virus influenza A, B y subtipos a (H1N1) pdm09, A (H3N2) por múltiple rt-pcr en muestras clínicas / Detection of influenza A, B and subtypes A (H1N1) pdm09, A (H3N2) viruses by multiple qrt-pcr in clinical samples

RESUMEN Objetivos. Estandarizar la técnica de reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real (RT-PCR) múltiple para la detección de virus influenza A, B y tipificación de subtipos A (H1N1) pdm09, A (H3N2) en muestras clínicas. Materiales y métodos. Se analizaron 300 muestras de hisopado nasofaríngeo. Esta metodología fue estandarizada en dos pasos: la primera reacción detectó el gen de la matriz del virus de influenza A, gen de la nucleoproteína del virus influenza B y el gen GAPDH de las células huésped. La segunda reacción detectó el gen de la hemaglutinina de los subtipos A (H1N1) pandémico (pdm09) y A (H3N2). Resultados. Se identificaron 109 muestras positivas a influenza A y B, de las cuales 72 fueron positivas a influenza A (36 positivas a influenza A (H1N1) pdm09 y 36 positivos a influenza A (H3N2)) y 37 muestras positivas a influenza B. 191 fueron negativas a ambos virus mediante RT-PCR en tiempo real multiplex. Se encontró una sensibilidad y especificidad del 100% al analizar los resultados de ambas reacciones. El límite de detección viral fue del rango de 7 a 9 copias/µL por virus. Los resultados no mostraron ninguna reacción cruzada con otros virus tales como adenovirus, virus sincitial respiratorio, parainfluenza (1,2 y 3), metapneumovirus, subtipos A (H1N1) estacional, A (H5N2) y VIH. Conclusiones. La RT-PCR múltiple demostró ser una prueba muy sensible y específica para la detección de virus influenza A, B y subtipos A (H1N1, H3N2) y su uso puede ser conveniente en brotes estacionales.

ABSTRACT Objectives. To describe the clinical and epidemiological characteristics of patients diagnosed with epidermolysis bullosa (EB) at the Instituto Nacional de Salud (INSN) in Lima, Peru; a National Reference Center for this disease. Material and methods . Observational, descriptive and transversal study. We reviewed the clinical histories and laboratory tests of patients diagnosed with EB treated in INSN from 1993 to 2015. Results. 93 patients were registered. The average age was 7.9 ± 5.6 years; 53.8% (n = 50) were boys. Clinical forms corresponded to dystrophic EB with 41 (44.1%) cases, simple EB with 39 (41.9%) union EB cases with 8 (8.6%) and Kindler syndrome with 4 (4.3%) cases. The clinical form could not be identified in a case. A total of 48 cases (51.6%) came from Lima and Callao, and 45 cases (48.4%) from other provinces of the country. Extracutaneous manifestations involved gastrointestinal (44.1%), ocular (37.6%), odontogenic (87.1%), and nutritional (79.6%) involvement, as well as pseudosindactilia (16.1%). Chronic malnutrition (71.6%), acute malnutrition (17.6%) and anemia (62.4%) were found. Mortality corresponded to 6 cases (6.5%). Conclusions. 93 cases of EB were reported in INSN, the predominant clinical presentation was the dystrophic form.

Vigilancia de serotipos en infecciones invasivas por Haemophilus influenzae en la Argentina en la era de la vacuna conjugada contra el serotipo b durante el período 2005-2010 / Surveillance of Haemophilus influenzae serotypes in Argentina from 2005 to 2010 during the Haemophilus influenzae type b conjugate vaccine era

La introducción de la vacuna contra Haemophilus influenzae tipo b en los programas de inmunización de muchos países produjo una reducción marcada en la incidencia de enfermedad invasiva causada por este serotipo y en su portación y un incremento de otros tipos capsulares y de aislamientos no capsulados. Se estudiaron 313 aislamientos de H. influenzae recuperados de sitio estéril, provenientes de pacientes pediátricos y adultos con enfermedad invasiva atendidos en 90 hospitales de la Red Nacional de Laboratorios para Meningitis e Infecciones Respiratorias Agudas Bacterianas durante el período 2005-2010. Las patologías más frecuentes fueron neumonía, 40,3 % (n = 126), meningitis, 30,0 % (n = 94) y bacteriemia, 26,5 % (n = 83). En los pacientes pediátricos (n = 279), la mayor frecuencia de aislamientos correspondió a menores de 2 años, 74,5 % (n = 208). Con respecto a la distribución de tipos, el 61,3 %, correspondió a H. influenzae no capsulados (n = 192); el 20,1 % al b (n = 63); 11,2 % al a (n = 35); 4,8 % al f y 2,6 % a otros. En meningitis predominaron H. influenzae capsulados mientras que en neumonía y bacteriemia resultaron dominantes los tipos no capsulados. Se determinó el biotipo en 306 aislamientos. Todos los aislamientos de tipo a correspondieron al biotipo II; el 66,7 % de los tipo b pertenecieron al biotipo I. Mediante las técnicas de aglutinación en lámina y PCR se estudiaron 220 aislamientos; la concordancia entre ambas fue de 0,982 (IC: 0,92-1,00). En el último año se encontró un aumento significativo del tipo b, lo cual indica la importancia de mantener la vigilancia clínica y laboratorial de la enfermedad invasiva por H. influenzae.

The introduction of the Haemophilus influenzae type b vaccine in the immunization programs of many countries has greatly reduced this invasive disease and the carriage caused by this serotype, also increasing other capsular types and non-capsular isolations. There were 313 isolations of H. influenzae under study, which were recovered from a sterile site coming from pediatric and adult patients carrying the invasive disease. Patients were treated at 90 different hospitals belonging to the Red Nacional de Laboratorios para Meningitis e Infecciones Respiratorias Agudas Bacterianas (National Lab Network for Meningitis and Acute Bacterial Respiratory Infections) from 2005 to 2010 for the following disorders: pneumonia, 40.3% (n = 126), meningitis, 30.0% (n = 94) and bacteremia, 26.5% (n = 83). In pediatric patients (n = 279), the highest frequency of isolations corresponded to children under the age of 2 years, 74.5% (n = 208). Regarding type distribution, 61.3% corresponded to non-capsular H. influenzae (n = 192), 20.1% to type b (n = 63), 11.2% to type a (n = 35), 4.8% to type f, and 2.6% to other types. Capsular H. influenzae was predominant in meningitis whereas non-capsular H. influenzae in pneumonia and bacteremia. The biotype was determined in 306 isolations. The totality (100%) of type a (n = 35) was biotype II whereas 66.7% of type b (n = 63) was biotype I. Slide agglutination and PCR tests were used in 220 isolations. There was a match of 0.982 (IC: 0.92-1.00) between them. During the last year, there was a great increase in type b, showing the importance of clinical and laboratory-based surveillance of the invasive disease caused by H. influenzae.

Repeated Serum Alkaline Phosphatase Measurements in the Treatment of Childhood Acute Bone and Joint Infections with High Doses of Antibiotics

No abstract available.

Impact of Haemophilus influenzae type b conjugate vaccine on bacterial meningitis in the Dominican Republic / Impacto de la vacuna conjugada contra Haemophilus influenzae tipo b sobre la meningitis bacteriana en la República Dominicana

OBJECTIVES: Widespread use of Haemophilus influenzae type b (Hib) vaccines has dramatically reduced the burden of Hib disease throughout the Americas. Few studies have evaluated the impact of Hib vaccination on non-culture-confirmed disease. This study analyzed trends in probable bacterial meningitis before and after the introduction of Hib vaccine in the Dominican Republic and estimated vaccine effectiveness against Hib meningitis. METHODS: Meningitis cases among children < 5 years of age were identified from admission records of the main pediatric hospital in Santo Domingo during 1998-2004. Laboratory criteria were used to classify meningitis cases with probable bacterial etiology; confirmed cases had positive bacterial culture or antigen detection in cerebrospinal fluid. Cumulative incidence rates of confirmed and probable bacterial meningitis were calculated for children living in the National District. Confirmed cases of Hib meningitis were enrolled in a case-control study with age- and neighborhood-matched control children to calculate vaccine effectiveness. RESULTS: Before vaccine introduction, annual rates of meningitis with probable bacterial etiology were 49 cases per 100 000 children < 5 years old; Hib accounted for 60 percent of confirmed bacterial cases. During 2002-2004, after vaccine introduction, annual rates of probable bacterial meningitis were 65 percent lower at 16 cases per 100 000, and Hib accounted for 26 percent of confirmed cases. Rates of Hib meningitis and probable bacterial meningitis with no determined etiology declined by 13 and 17 cases per 100 000, respectively. CONCLUSIONS: Introduction of Hib vaccine substantially reduced the incidence of confirmed and probable bacterial meningitis in the Dominican Republic. The estimated impact of Hib vaccination was twice as great when non-culture-confirmed disease was included.

OBJETIVOS: El uso generalizado de la vacuna contra Haemophilus influenzae tipo b (Hib) ha permitido reducir radicalmente la carga de enfermedad por Hib en las Américas. Pocos estudios han evaluado el impacto de la vacunación contra Hib sobre los casos no confirmados mediante cultivo. En este estudio se analizaron las tendencias en el número de casos probables de meningitis bacteriana antes y después de la introducción de la vacuna contra Hib en la República Dominicana y se estimó la eficacia de la vacuna contra la meningitis. MÉTODOS: Se identificaron los casos de meningitis en niños menores de 5 años a partir de los registros de ingreso del principal hospital pediátrico de Santo Domingo entre 1998 y 2004. Los casos de meningitis con probable etiología bacteriana se clasificaron según criterios de laboratorio; los casos confirmados contaban con cultivo bacteriano positivo o detección de antígenos específicos en el líquido cefalorraquídeo. Se calcularon las tasas de incidencia acumulada de casos confirmados y probables de meningitis en los niños que vivían en el Distrito Nacional. Los casos confirmados de meningitis por Hib se incorporaron a un estudio de casos y controles -pareados según la edad y el barrio de residencia- para calcular la eficacia de la vacuna. RESULTADOS: Antes de la introducción de la vacuna, la tasa anual de meningitis de posible etiología bacteriana era de 49 casos por 100 000 niños menores de 5 años; de los casos confirmados de origen bacteriano, 60 por ciento fue por Hib. En el período 2002-2004, después de la introducción de la vacuna, la tasa anual de meningitis de posible etiología bacteriana fue de 16 casos por 100 000, es decir 65 por ciento más baja, y 26 por ciento de los casos confirmados correspondieron a Hib. Las tasas de meningitis por Hib y de posible origen bacteriano de etiología desconocida se redujeron en 13 y 17 casos por 100 000, respectivamente. CONCLUSIONES: La introducción de la vacuna...

Diseño y evaluación de una reacción de polimerasa en cadena (RPC) múltiple, para la identificación de bacterias causantes de meningitis aguda en líquido cefalorraquídeo de niños chilenos / Multiplex PCR assay in spinal fluid to identify simultaneously bacterial pathogens associated to acute bacterial meningitis in Chilean children

Background: Acute bacterial meningitis (ABM) is a serious disease that needs rapid diagnosis for an accurate treatment. The most important etiological agents are: Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitidis and Haemophilus influenzae type b. Overall pathogen detection rate in patients with ABM in Chile is 83 percent. Aim: To evaluate a Polymerase Chain Reaction (PCR) protocol for simultaneous detection of several pathogens in patients with ABM. Material and methods: We designed and evaluated a multiplex PCR protocol for simultaneous specific genes identifications of S pneumoniae (¡ytA and ply genes), N meningitidis (ctrA, crgA) and H influenzae (bexA) in cerebrospinal fluid (CSF) samples from pediatric patients with suspected diagnosis of ABM. Sensitivity, specificity and minimum detection levels of DNA were determined. Amplifications ofrDNA 16S gene was done to confirm extraction of bacterial DNA. Results: Ninety nine CSF samples were studied, 90 from children with fever and negative CSF culture, and 9 from ABM and positive culture patients. The PCR protocol had a sensitivity of 89 percent, specificity of 100 percent, positive predictive value 100 percent and negative predictive value 99 percent. Conclusions: We observed a high concordance (89 percent) between bacteriological cultures and the PCR protocol results. This diagnostic tool could increase identification of agents in specific settings such as patients previously treated with antibiotics.

Oropharyngeal colonization by Haemophilus influenzae in healthy children from Taubaté (São Paulo), prior to the Haemophilus influenzae type b vaccination program in Brazil

Haemophilus influenzae é um dos mais importantes agentes bacterianos de otites e sinusites. Em crianças menores de seis anos de idade não vacinadas contra o H. influenzae do tipo b (Hib), essa bactéria é uma das principais causadoras de meningite, pneumonia e sepse. O objetivo deste estudo foi determinar a prevalência da colonização da orofaringe de crianças previamente saudáveis por H. influenzae e Hib e avaliar o perfil de suscetibilidade desses microorganismos a um grupo seleto de antimicrobianos, que habitualmente são utilizados para tratar as infecções respiratórias agudas. MÉTODO: Foram colhidos swabs da orofaringe de 987 crianças menores de seis anos de idade que freqüentavam 29 creches da cidade de Taubaté (São Paulo, Brasil), entre julho e dezembro de 1998, para realização de culturas de H. influenzae e antibiograma. RESULTADOS: A prevalência de portadores do H. influenzae foi de 17,4% e somente 5,5% das cepas isoladas eram produtoras de beta-lactamase. A prevalência de portadores do Hib foi alta, com média de 7,3% (variando entre 0.0 e 33,3%). CONCLUSÕES: A baixa prevalência da colonização por cepas resistentes às penicilinas indica que não é necessário substituir esses antibióticos para tratar empiricamente as otites e sinusites causadas por H. influenzae em Taubaté.

Latex agglutination test in the diagnosis of pyogenic meningitis.

Samples of cerebrospinal fluid (n=204) from pediatric patients with clinically suspected pyogenic meningitis were examined by direct microscopy, bacterial culture and Latex Agglutination Test (LAT). Latex Agglutination Test was done for detection of antigen of Streptococcus pneumoniae and Haemophilus influenzae type b. Among 38 LAT positive cases, culture and/or gram stain was positive in only 20 cases and 18 cases were detected exclusively by LAT. Besides, LAT was useful in detecting the pre-treated cases as 11 out of 55 samples from pre-treated cases were positive by LAT in comparison to culture and/or Gram stain which detected only 4 of 55 cases. LAT is simple, rapid and more reliable test.

Etiology of bacterial meningitis among children aged 2-59 months in Salvador, Northeast Brazil, before and after routine use of Haemophilus influenzae type b vaccine

OBJETIVO: Descrever a freqüência dos agentes etiológicos de meningite bacteriana (MB) em amostra das crianças com idade entre 2 e 59 meses, em Salvador, Nordeste do Brasil, com ênfase na freqüência de MB de etiologia indeterminada (MBEI), antes, durante e após a implementação da imunização rotineira de lactentes com vacina para Haemophilus influenzae tipo b (Hib). MÉTODO: Variáveis demográficas, clínicas e liquóricas (LCR) foram coletadas da ficha de cada paciente com idade entre 2 e 59 meses, cujo exame de LCR foi realizado no Laboratório de LCR - Fundação José Silveira, entre janeiro de 1989 e dezembro de 2001. Cada exame de LCR foi realizado por completo conforme os métodos padronizados. O diagnóstico etiológico foi baseado ou em cultura e ou teste de aglutinação em látex. Quando o agente foi identificado apenas no GRAM, o diagnóstico foi descritivo. MBEI foi definida como glicose < 40mg / dl, proteína > 100 mg / dl, celularidade global > 20 células / mm3 e percentual de neutrófilos > 80%. RESULTADOS: Dos 1519 pacientes, 894 (58,9%) tiveram exames normais e MB foi diagnosticada em 95 (6,2%). Os agentes etiológicos foram: Hib (44,2%), meningococo (13,7%), bacilos Gram-negativos (11,6%), Mycobacterium tuberculosis (6,3%), pneumococo (4,2%), outros agentes (4,2%); MBEI foi diagnosticada em 15,8% dos casos de MB. Ao analisar a freqüência da MBEI e por Hib entre todos os exames realizados a cada ano, os picos foram registrados em 1989 (5,3%) e 1990 (16,9%), respectivamente, diminuindo para 0,7% e 0% em 2001. CONCLUSÃO: É possível que a implementação do uso da vacina conjugada para Hib durante a década de 1990 tenha decrescido não apenas a ocorrência da meningite por Hib mas também a MBEI.

Meningitis bacteriana aguda / Acute bacterial meningitis

Objetivo: describir las causas, evolución y complicaciones de la meningitis bacteriana aguda. Pacientes y método: en una encuesta retrospectiva a 14 unidades de cuidados intensivos pediátricos se registraron 358 pacientes que reunían los criterios de diagnóstico de meningitis bacteriana aguda (MBA) durante 1996. Resultados: en 36,6 por ciento la etiología fue Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae en 19,8 por ciento y Haemophilus influenzae tipo b en 16 por ciento. En 21 por ciento no se aisló el agente. La letalidad fue 3,5 por ciento para N. meningitidis; 14 por ciento para S. pneumoniae y 3 por ciento para H. influenzae tipo b. De las 358 pacientes, 21 por ciento se hospitalizaron en sala común durante toda su evolución. Las complicaciones más frecuentes fueron falla circulatoria o choque (35 por ciento), convulsiones (22 por ciento) e hipertensión intracraneana (18 por ciento). Se uso asistencia respiratoria mecánica en 31 por ciento de los pacientes, variando su empleo de 9 a 71 por ciento según centro. Fallecieron 23 pacientes (6,3 por ciento), 40 por ciento antes de 24 h desde el ingreso, 60,8 por ciento por hipertensión intracraneana y enclavamiento encefálico, 30,8 por ciento por falla circulatoria. Conclusión: los niños con meningitis bacteriana aguda deben ingresar a unidades de cuidados intensivos en las primeras 24 horas. Se requiere uniformar criterios de asistencia mecánica a la respiración