Thermotolerance of Histoplasma capsulatum at 40 °C predominates among clinical isolates from different Latin American regions

ABSTRACT The yeast phase of 22 Histoplasma capsulatum clinical isolates from Mexico, Argentina, Colombia, and Guatemala and three reference strains, one from Panama and two from the United States of America (USA), were screened for thermosensitivity characteristics using different analyses. Growth curves at 0, 3, 6, 12, 24, and 30 h of incubation at 37 and 40 °C, the growth inhibition percentage at 40 °C, and the doubling time at 37 and 40 °C were determined for all yeasts studied. Most of the isolates examined exhibited thermotolerant phenotypes at 40 °C, whereas a thermosensitive phenotype at 40 °C was only detected in the Downs reference strain from the USA. Growth inhibition values lower than 33.8% supported the predominance of the thermotolerant phenotype at 40 °C. The doubling time means found for the different isolates were 5.14 h ± 1.47 h at 37 °C and 5.55 h ± 1.87 h at 40 °C. This is the first report to underscore the predominance of thermotolerant and delayed doubling time phenotypes in H. capsulatum clinical isolates from different regions of Latin America.

Conservación de cultivos fúngicos de alto riesgo de Histoplasma y Cryptococcus / Preservation of high risk fungal cultures of Histoplasma and Cryptococcus

Introducción: las colecciones de cultivos microbianos son las encargadas de garantizar el material biológico requerido para el desarrollo de las ciencias biológicas. Entre los métodos de conservación de cultivos fúngicos, la inmersión en agua destilada, por su bajo costo y sencillez, constituye una ventajosa alternativa. Objetivo: evaluar la utilidad de este método de conservación en los cultivos fúngicos de Histoplasma y Cryptococcus. Métodos: se realizó una evaluación del estado de conservación de las especies de mayor riesgo biológico, pertenecientes a los géneros Histoplasma y Cryptococcus de la colección de cultivos de hongos del Instituto de Medicina Tropical "Pedro Kourí". Se analizaron 102 cepas conservadas en agua destilada, de las cuales 92 por ciento estaba preservado por más de 10 años. Resultados: los porcentajes de recuperación para H. capsulatum, C. neoformans y C. gattii fueron 64,3; 79,1 y 100 por ciento, respectivamente. Se demostró que este método de conservación resulta satisfactorio para cultivos fúngicos en laboratorios de recursos limitados. Se implementó sobre plataforma web una base de datos digital con la información de interés de la colección. Se hizo una valoración de la importancia del estricto cumplimiento de las medidas de bioseguridad para el trabajo de las colecciones, especialmente frente a patógenos de alto riesgo. Conclusiones: la conservación de cultivos de hongos en agua destilada es un método de gran utilidad en laboratorios de recursos limitados. El trabajo de las colecciones de cultivos debe considerarse una actividad imprescindible para enfrentar los nuevos retos del desarrollo de las ciencias biomédicas.

Introduction: culture collections are responsible for providing the microbial resources for development of biological sciences. Storage in distilled water is one of the easiest and least expensive method for long-term fungal preservation. Objective: to evaluate the usefulness of this preservation method in fungal culture of Histoplasma and Cryptococcus. Methods: the preservation condition of the highest biological risk species from Histoplasma y Cryptococcus genera, included in the fungal culture collection of "Pedro Kourí" Institute of Tropical Medicine in Havana, was evaluated in this study. One hundred and two strains stored in distilled water, 92 percent of which had been preserved for more than 10 years, were analyzed. Results: the percentages of recovered strains from H. capsulatum, C. neoformans and C. gattii were 64.3 percent; 79.1 percent and 100 percent respectively. This method of preservation proved to be satisfactory for fungal culture in labs with limited financial resources. A web-based database with interesting information about the collection was made. The importance of strict compliance with the biosafety measures in these collections, particularly with high risk pathogens. Conclusions: preservation of fungal cultures in distilled water is a very useful method for laboratories with limited resources. Culture collections should be assumed as an essential activity in order to solve increasing challenges in the development of biomedical sciences.

Evaluating fungi indoor presence in homes through viable and non-viable sampling / Evaluación de la presencia de hongos en el interior de domicilios a través de muestreo viable o no viable

Moulds are common and important allergens. They are more abundant outdoors but patients affected by mould allergy stay indoors much longer than outdoors. So, indoor sampling could help to assess the influence of the concentration of allergens in allergic symptoms. The aim of this study was to assess the relative efficiencies of two air sampling methods, viable and non viable, for the quantification of airborne indoor fungi in the homes of patients sensitized to Alternaria. Furthermore, outdoor sampling was carried out to compare results. Samples were taken over six months in Badajoz (SW Spain). Two houses were selected according to the presence of allergic patients to Alternaria. They were sampled once a month using both viable and non viable personal samplers at solar noon. A Burkard personal sampler was used to record spores and a Sampl’air AES Chemunex sampler was used for colonies. Three rooms were selected in each home: living room, kitchen and bathroom. Temperature and relative humidity were registered at each sample. Outdoor sampling was performed one day per week at the Faculty of Science, using a seven day Burkard sampler for spores and the same personal sampler for colonies. On average, 200-300 CFU/ m3 were found from more than 40 taxa identified. The highest number of colonies was recorded in the kitchen, then in the bathroom and finally in the living room. Nevertheless, there were minor differences between rooms. The houses studied showed a similar temporal pattern, with maximum values in December and minimum in January. Cladosporium colonies showed statistical differences between homes, but these differences were not found with Alternaria, Aspergillus or Penicillium colonies. Differences between rooms appeared for Alternaria colonies and Cladosporium herbarium spores. Temperature was positively correlated in most cases and relative humidity negatively with Alternaria spores.

Los hongos son alérgenos comunes e importantes. Son más abundantes en exteriores pero los pacientes afectados por alergia a los hongos permanecen en interiores mucho más tiempo que en exteriores. Por esto, el muestreo en interiores puede ayudar a evaluar la influencia de la concentración de alérgenos en los síntomas de la alergia. El objetivo de este trabajo ha sido valorar la eficiencia relativa de dos métodos de muestreo del aire, viable y no viable, para la cuantificación de hongos aerovagantes de interiores en hogares de pacientes sensibilizados a Alternaria. Adicionalmente, se ha realizado un muestreo en exteriores para comparar los resultados. Las muestras se tomaron durante seis meses en Badajoz (SO de España). Dos casas fueron seleccionadas de acuerdo a la presencia de pacientes alérgicos a Alternaria spp. Fueron muestreadas hacia el mediodía de forma mensual utilizando simultáneamente captadores personales con métodos viables y no viables. Un captador personal Burkard se utilizó para el registro de las esporas y un captador Sampl’air AES Chemunex para las colonias de hongos. Se seleccionaron tres habitaciones en cada casa, el salón, la cocina y el cuarto de baño. La temperatura y la humedad relativa fueron registradas en cada muestreo. El muestreo en el exterior se llevó cabo un día a la semana en la Facultad de Ciencias utilizando un captador Burkard 7-day para las esporas y el mismo captador personal para las colonias. En promedio se encontraron 200-300 CFU/m3 pertenecientes a más de 40 taxones identificados. El mayor número de colonias fue registrado en la cocina, luego en el cuarto de baño y finalmente en el salón. Sin embargo las diferencias entre las habitaciones fueron mínimas. Las casas estudiadas mostraron un patrón temporal similar, con valores máximos en Diciembre y mínimos en Enero.

Brote de histoplasmosis en la Escuela de Cadetes de la Base Aérea de Morón, Provincia de Buenos Aires, República Argentina / Histoplasmosis outbreak in Morón, Buenos Aires Province, Argentina

Se describe un brote de histoplasmosis que afectó a 6 cadetes de la Fuerza Aérea Argentina, sin antecedentes patológicos previos. Todos consultaron por problemas respiratorios después de haber limpiado un hangar. En ese recinto se encontraron abundantes deyecciones de animales, presuntamente de palomas y murciélagos. Los pacientes sufrieron fiebre, mialgias, taquipnea y tos no productiva. Las radiografías y tomografías de tórax mostraron imágenes pulmonares micronodulares, engrosamiento de los tabiques interalveolares y adenopatías hiliares. Todos tuvieron una evolución favorable y no requirieron tratamiento antifúngico. Las pruebas de inmunodifusión y contrainmunoelectroforesis con antígenos de Histoplasma capsulatum fueron positivas, al igual que las intradermorreacciones con histoplasmina. Se recogieron 5 muestras de tierra del lugar, las que fueron inoculadas por vía intraperitoneal a 20 hámsteres. De los cultivos de hígado y bazo de dichos animales se consiguió aislar la fase micelial de H. capsulatum. La cepa aislada se comparó con las obtenidas de 12 pacientes argentinos utilizando perfiles genéticos y se observó un clado único con más de 96% de similitud, lo que confirma la homogeneidad de las cepas argentinas. Si bien la histoplasmosis es endémica en la Pampa húmeda, este es el primer brote totalmente documentado al sur del paralelo 34°.

An histoplasmosis outbreak affecting 6 previously healthy Air Force cadets is herein presented. The patients suffered from fever and respiratory symptoms after having cleaned an abandoned hangar soiled with pigeons and bat droppings. They all presented fever, myalgia, tachypnea, and nonproductive cough. Chest X-ray and CT scan studies showed disseminated reticulonodular images affecting both lungs. Hiliar adenomegalies were also observed. All patients achieved a favourable outcome without antifungal treatment. Both serologic tests searching for specificic antibodies (immunodiffusion and counterimmunoelectrophoresis) and histoplasmin skin tests were positive in all cases. Five soil samples mixed with pigeons and bat droppings were collected from the hangar. Suspensions of these samples were inoculated into 20 hamsters by intraperitoneal injection; mycelial phase of H. capsulatum was isolated from liver and spleen cultures. The genetic profile of this strain was compared with 12 isolates obtained from Argentinean patients, and a great degree of homogeneity was observed (> 96% similarity). Although histoplasmosis is endemic in the wet Pampas, this is the first epidemic outbreak reported south of the 34th parallel.

Levaduras asociadas con el hábitat natural de Histoplasma capsulatum en Guerrero, México / Yeasts associated to natural habitat of Histoplasma capsulatum in Guerrero, Mexico

Objetivo: En el presente trabajo, primero que sobre el tema se ha realizado en México, se registran las especies de levaduras encontradas en diferentes sustratos colectados en espacios cerrados y abiertos (que representan los nichos ecológicos en que se desarrolla Histoplasma capsulatum var. capsulatum). Material y métodos: Los sustratos a partir de los cuales se hizo el aislamiento de levaduras se obtuvieron en distintas localidades de los municipios de Quechultenango y Olinalá, en el estado de Guerrero. Resultados y discusión: De guano de murciélago muestreado en grutas y cuevas se aislaron Candida Catenulata, C. ciferrii, C famata, C. guillermondii y Rhodotorula spp.; del suelo de una mina únicamente se aisló C. ciferril. Las especies C. albicans, C. ciferrii y C. tropicalis se aislaron de suelo con excretas de gallináceas, y C. famata, Cryptococcus albidus var. albidus, Trichosporon beigelii t Trichosporon spp. de suelo con excretas de gallo. Del intestino de murciélagos insectívoros únicamente se aisló C. famata, y, de murciélagos polinívoros C. lipolytica, Cr. abidus var. albidus y Trichosporon spp. De cada una de estas especies se mencionan sus características distintivas, así como los diferentes ambientes y sustratos de los cuales han sido aisladas

Hongos filamentosos asociados con el hábitat natural de Histoplasma capsulatum en Guerrero, México / Filamentous fungi associated to natural habitat of Histoplasma capsulatum in Guerrero, Mexico

Objetivo: Se determinaron los hongos filamentosos asociados a los ambientes y sustratos de donde se ha aislado Histoplasma capsulatum, a partir de muestras de guano e intestino de murciélagos, así como de excretas de aves de corral Material y métodos: Las muestras procedieron de varias grutas y otras localidades de Guerrero, México, principalmentes de juxtlahuaca y Olinalá. Resultados y discusión: Del guano de murciélago se aislaron, además de H. capsulatum, ascomicetas como Aphanoascus fulvescens, Gymnascella citrina, Gymnoascus dankaliensis (Onygenales) y Cheatomidium fimeti (Sordariales); Hongos conidiales, como Aspergillus flavo-furcatis, A. terreus, A. terreus var. aureus, varias especies no determinadas de Penicillium, Malbranchea aurantiaca y Sporothrix sp. De las excretas de gallo de pelea se aisló Phoma sp. Del intestino de murciélagos insectívoros, hematófagos, nectarívoros y frugívoros se aislaron varias especies de hongos conidiales, como Aspergillus candidus, A. flavofurcatis, A. sulphureus, A. sydowii, A. terreus, A. versicolor, Apergillus sp., M. aurantiaca, Gliomastis murorum y Scopulariopsis sp.; y sólo un ascomicete, Ch. fimeti. Se comentan ciertas propiedades biológicas de los hongos encontrados, la mayoría de ellos registrados por primera vez por estos sustratos y ambientes en México

I. El murciélago como reservorio y responsable de la dispersión de Histoplasma capsulatum en la naturaleza. II. Papel de los marcadores moleculares del hongo aislado de murciélagos infectados / I. Bats as reservoirs and responsible of histoplasma capsulatum spreading in nature. II. the role of molecular markers of the fungus isolated from infected bats

Objetivo: El presente trabajo refiere datos acerca de los aislamientos positivos y caracterización de cepas de Histoplasma capsulatum en murciélagos infectados y capturados en los estados de Guerrero, Morelos y Oaxaca: Pteronotus parnellii; P. dauyi; Myotis californicus; Mormoops megalophylla; Natalus stramineus; Artibeus hirsutus; Leptonycteris nivalis y L. Curasoae. Aportaciones sobre el aislamiento del hongo en murciélagos infectados: Para el estado de Oaxaca se aportan nuevos registros de infección de murciélagos por H. capsulatum en P. parnellii, P. dauyi y L. curasoae, siendo las dos últimas especies nuevos registros para el mundo. Los datos indican un alto riesgo de infección en murciélagos que utilizan cuevas con bóvedas bajas, relieve accidentado y abundantes depósitos de guano. Polimorfismo genético de H. capsulatum aislado de murciélagos infectados: Se analizaron los patrones polimórficos del DNA del hongo aislado de doce mulciélagos infectados, capaturados en Guerrero y Morelos, utilizando el polimirfismo del DNA amplificado al azar por la reacción en cadena de la polimerasa (RAPD-PCR), método conocido por su alta sensibilidad. Se encontraron dos patrones polimórficos diferentes en los doce aislados de H. capsulatum obtenidos de murciélagos infectados, que podrían representar marcadores moleculares del hongo para las áreas geografícas estudiadas, además de asociarse con los desplazamientos de los murciélagos en estas áreas. Conclusiones: Se sugiere el papel de los murciélagos como reservorios y responsables de la dispersión de H. capsulatum en la naturaleza, en relación al uso de refugios permanentes (cuevas), a su hábitos alimentarios, y sus desplazamientos y migraciones

Estrategias del Histoplasma capsulatum para evadir los mecanismos citocidas de los fagocitos / Strategies of Histoplasma capsulatum to circumvent the cytocidal mechanisms of phagocytes

A pesar de que la proliferación de Histoplasma capsulatum dentro de los macrófagos está restringida por el desarrollo de la inmunidad mediada por células, y de que no existe una aparente falla en la capacidad fungicida de los macrófagos, bajo ciertas circunstancias, el H. capsulatum puede desenvolverse en este medio intracelular, el cual provee las condiciones nutricionales para el crecimiento del hongo y además, la posibilidad de acceso a otros órganos por las vías linfáticas y hemáticas. Pese a sucrecimiento intracelular, el medio interno dentro de los fagocitos es complejo y frecuentemente hostil al microorganismo. Los patógenos intracelulares deben superar una serie de obstáculos con el fin de prevenir su posible destrucción. En el presente artículo se revisan las estrategias de H. capsulatum para escapar a las agresiones del hospedero, desde el momento en que el parásito se encuentra sobre la superficie de la células hospedera hasta su sobrevivencia dentro de ésta. Además, se destacan los avences contemporáneos de los mecanismo de escape, utilizados por H. capsulatum, para facilitar su sobrevivencia en el medio ambiente intracelular

Estudio comparativo de dos sistemas de hemocultivos en micosis sistémicas asociadas al SIDA / Two blood culture systems for the detection of fungemia in AIDS patients: a comparative study

Se realizó un estudio comparativo de dos métodos de hemocultivos para hongos en pacientes VIH positivos que presentaban fiebre prolongada o una micosis sistémica confirmada. La técnica convencional consistió en sembrar 5-10 ml de sangre venosa en frascos con caldo tripteina-soya y polianetol sulfonato de sodio como anticoagulante. A los 7 y 14 días de incubación a 37-C se realizaron repiques en medios de agar-miel de Sabouraud y agar-infusión de cerebro y corazón. El método de centrifugación-lisis se llevó a cabo con 5 a 10 ml de sangre venosa heparinizada, se separó el plasma por centrifugación: el sedimento fue tratado con una solución de saponina al 0.5%, después de obtenida la lisis, la muestra fue nuevamente centrifugada y el material restante se sembró en agar-miel de Sabouraud y agar-infusión de cerebro y corazón, la incubación se realizó a 28-C y 37-C. Fueron estudiadas 288 muestras, que se procesaron simultáneamente por los dos sistemas. La técnica convencional permitió el aislamiento de Cryptococcus neoformans en el 7.9%de los materiales, en tanto que el Histoplasma capsulatum, fue aislado en el 1%. El sistema de centrifugación-lisis recuperó el C. neoformans en el 7.3%de los hemocultivos y el H. capsulatum en el 3.8%. El lapso medio para el aislamiento e identificación de ambos hongos disminuyó 7 días, con el método de centrifugación-lisis. Esta última técnica resultó ser más simple, más rápida y más sensible que el procedimiento convencional. Se comprobaron fungemias en el 86.2%de los casos de criptococosis y en el 70.5%de las histoplasmosis asociadas al SIDA

A medium for inducing conversion of Histoplasma capsulatum var. capsulatum into its yeast-like form

Histoplasma capsulatum var. capsulatum is a dimorphic fungus that, under special conditions, converts from its more common mycelial form to a yeast-like form. Achieving this conversion, however, has been problematical for researchers. The present study tested conversion rates in ten Histoplasma capsulatum var. capsulatum strains using seven culture media, four of wich were conventional and three novel. One of our novel media, MLGema, induced complete conversion, of two strains within five days of incubation at 35 degrees centigrades, and of all strains that eventually converted by the time of the second subculturing transfer, under defined experimental conditions. MLGema is also inexpensive and easy to produce

Distribuiçäo das Pontes de infecçäo do Histoplasma capsulatum var. capsulatum em Rio da Prata, Município do Rio de Janeiro / Distribution of sources of infection of Histoplasma capsulatum var. capsulatum in Rio da Prata, a municipality of Rio de Janeiro (RJ)

Demonstra-se o índice de contaminaçäo do solo pelo Histoplasma capsulatum var. capsulatum, na localidade de Rio da Prata, área periurbana com características rurais, do Município do Rio de Janeiro. A análise de 111 amostras do solo coletadas em diferentes locais determinou 8 (7,2%) amostras positivas, todas obtidas de galinheiros, em um dos quais também foi observado guano de morcegos. O elevado nível de contaminaçäo do solo nesta regiäo pode ser comparado aos níveis observados em áreas endêmicas de histoplasmose nos EUA