Cutaneous parasitism in patients with American visceral leishmaniasis in an endemic area

Abstract INTRODUCTION: Visceral leishmaniasis (VL) represents a public health concern in several areas of the world. In the American continent, VL transmission is typically zoonotic, but humans with active VL caused by Leishmania infantum are able to infect sandflies. Thus, individuals with cutaneous parasitic infections may act as reservoirs and allow interhuman transmission. Additionally, the skin may be responsible for reactivation of the disease after therapy. This study's objective was to evaluate cutaneous parasitism in humans with VL in an American endemic area. METHODS: A cross-sectional hospital-based study was conducted in northeast Brazil from October 2016 to April 2017. Biopsies of healthy skin for histopathology and immunohistochemistry were performed prior to treatment in all study patients. RESULTS: Twenty-two patients between the ages of five months to 78 years were included in the study. Seven patients (31.8%) tested positive for HIV. Only one patient had cutaneous parasitism, as confirmed by immunohistochemistry prior to treatment. Parasitism was not detected after treatment. CONCLUSIONS: Cutaneous parasitism in the healthy skin of humans with visceral leishmaniasis, although unusual, may be a source of infection for phlebotomine sandflies.

Clinical-dermatological, histological abnormalities and prevalence of Trypanosoma caninum and Leishmania infantum in dogs from Midwest region of Brazil / Anormalidades clínico-dermatológicas, histológicas e prevalência de Trypanosoma caninum e Leishmania infantum em cães da região Centro-Oeste do Brasil

Abstract Leishmania infantum is a trypanosomatid that causes parasitic dermatopathy in dogs. Trypanosoma caninum is another trypanosomatid, which infects the skin of dogs, although cutaneous abnormalities are absent. This study aimed to investigate the occurrence of T. caninum infection and its associated cutaneous and histological changes and compare it with the occurrence of L. infantum infection in dogs. The study included 150 dogs, of which T. caninum infection was identified in 3 (2%) and L. infantum infection in 15 (10%) of them, with no association (p>0.05) of these infections with the breed, gender, age, or cutaneous abnormalities. The cutaneous abnormalities were based on 1 (4.8%) and 12 (57.1%) dogs infected by T. caninum and L. infantum, respectively. The dermatohistopathological abnormalities in the dogs infected with T. caninum included mild perivascular lymphohistioplasmacytic infiltrates in the clinically asymptomatic ones, while in those with dermatological abnormalities, acanthosis, epidermal orthokeratotic hyperkeratosis, melanomacrophages, and co-infection with Microsporum sp. and Trichophyton sp. were observed. InL. infantum infected, the histopathological findings included chronic granulomatous inflammatory infiltrates and structures compatible with amastigotes. Despite the low frequency of T. caninum infection, our findings suggest that this trypanosomatid, unlike L. infantum, does not cause any macroscopic skin abnormalities.

Resumo Leishmania infantum é um tripanosomatídeo que causa dermatopatia parasitária em cães. Trypanosoma caninum é outro tripanosomatídeo, que infecta a pele de cães, embora anormalidades cutâneas sejam ausentes. Este estudo teve como objetivo investigar a ocorrência da infecção por T. caninum e suas alterações cutâneas e histológicas associadas e compará-las com a ocorrência da infecção por L. infantum em cães. O estudo incluiu 150 cães, dos quais a infecção por T. caninum foi identificada em 3 (2%) e a infecção por L. infantum em 15 (10%) deles, sem associação (p>0,05) dessas infecções com a raça, sexo, idade ou anormalidades cutâneas. As alterações cutâneas foram observadas em 1 (4,8%) e 12 (57,1%) cães infectados por T. caninum e L. infantum, respectivamente. As anormalidades dermato-histopatológicas nos cães infectados por T. caninum incluíram infiltrados linfo-histioplasmocitários perivasculares leves nos clinicamente assintomáticos, enquanto naqueles com anormalidades dermatológicas, foram observados acantose, hiperqueratose ortoqueratótica epidermal e melanomacrófagos e co-infecção por Microsporum sp. e Trichophyton sp. Nos cães infectados por L. infantum, os achados histopatológicos incluíram infiltrados inflamatórios granulomatosos crônicos e estruturas compatíveis com amastigotas. A despeito da baixa frequência da infecção por T. caninum, nossos achados sugerem que esse tripanosomatídeo, diferentemente de L. infantum, não causa anormalidades macroscópicas na pele.

Neutrophils, eosinophils, and mast cells in the intestinal wall of dogs naturally infected with Leishmania infantum / Neutrófilos, eosinófilos e mastócitos na parede intestinal de cães naturalmente infectados com Leishmania infantum

Abstract Visceral leishmaniasis (VL) is a disease caused by the protozoa Leishmania infantum and can cause an inflammatory reaction in the gastrointestinal tract, however the role of granulocytic cells (neutrophils, eosinophils, and mast cells) in the intestine of dogs infected is not fully understood. We performed a quantitative analysis these cells in the intestinal wall of dogs with canine visceral leishmaniasis (CVL). Twenty dogs were assigned to one of three groups: group 1 (G1, n=8), dogs with CVL and L. infantum amastigotes in the intestine; group 2 (G2, n=9), dogs with CVL but without intestinal amastigotes; and group 3 (G3, n=3), uninfected dogs (control group). Granulocytic cells were counted in the crypt-villus unit (mucosa), submucosa, and muscle layer of the intestinal mucosa. Cell counts were higher in the intestinal wall of dogs from G2 followed by G1 and G3 (p≤0.05). In G1, there was a low inverse correlation between parasite burden of the small intestine and granulocyte counts (r= -0.1, p≤0.01). However, in G2 dogs, mast cell and eosinophil numbers showed positive correlation (r=0.85, p≤0.01). The granulocytic cell hyperplasia observed in the intestine of L. infantum-infected dogs suggests that these cells may be involved in the cell-mediated immune response for parasite elimination.

Resumo A leishmaniose visceral (LV) é uma doença causada pelo protozoário Leishmania infantum e pode causar uma reação inflamatória no trato gastrointestinal, entretanto o papel das células granulocíticas (neutrófilos, eosinófilos e mastócitos) no intestino de cães infectados não é totalmente compreendido. Neste estudo realizamos uma análise quantitativa dessas células na parede intestinal de cães com LV. Vinte cães foram distribuídos em três grupos: grupo 1 (G1, n=8), cães com LV e amastigotas de L. infantum no intestino; grupo 2 (G2, n=9), cães com LV, mas sem amastigotas intestinais; e grupo 3 (G3, n=3), não infectados (grupo controle). Células granulocíticas foram contadas na unidade cripta-vilo (mucosa), submucosa e camada muscular da mucosa intestinal. Observamos hiperplasia dessas células na parede intestinal de cães do G2, seguidas das G1 em relação ao G3 (p≤0,05). No G1, houve uma correlação inversa baixa entre a carga parasitária do intestino delgado e a contagem de granulócitos (r= -0,1; p≤0,01). No entanto, nos cães do G2, os números de mastócitos e eosinófilos apresentaram correlação positiva (r=0,85; p≤0,01). A hiperplasia de células granulocíticas observada no intestino de cães infectados por L. infantum sugere que essas células podem estar envolvidas na resposta imune mediada por células para a eliminação do parasita.

Estudo piloto sobre imunomodulação na leishmaniose visceral murina: bloqueio da sinalização de IL-10 e uso de IL-1 / Pilot study on immunomodulation in murine visceral leishmaniasis: blockade of IL-10 signaling and use of IL-12

INTRODUÇÃO: A leishmaniose visceral (LV) é uma doença infecto-parasitária e é considerada negligenciada, segundo a organização mundial de saúde. O cão e o homem fazem parte da manutenção do ciclo da infecção. O crescente aumento de animais infectados acarreta em um problema de saúde pública, pois representa eminente risco de infeção para os humanos. Na LV, a resposta imune celular é suprimida favorecendo a replicação do parasito nos macrófagos e a exacerbação da doença. Estudos apontam que esta supressão pode estar relacionada à secreção da interleucina-10 (IL-10), pois esta tem o papel de regular o excesso de resposta inflamatória, inibindo a produção de IL-12. OBJETIVO: Nesta pesquisa, propõese produzir e purificar plasmídeos codificando receptor de IL-10 e IL-12 murinos, bem como produzir e purificar o receptor de IL-10 murino na forma solúvel no sistema baculovíruscélulas de inseto, visando avaliar os efeitos de substâncias imunomoduladoras em camundongos infectados com Leishmania infantum/chagasi, com o intuito de desenvolver um método imunoterápico para cães com LV. METODOLOGIA: Na primeira parte deste trabalho, camundongos BALB/c foram infectados com L. infantum/chagasi, por via venosa e em seguida foram injetados quatro vezes, com intervalo de 7 dias entre as doses, com salina (G1), pcDNA3.1 (plasmídeo controle) (G2), pcDNA3.1mIL-12 (G3), pcDNA3.1mIL-10R1 (G4) e pcDNA3.1mIL-12+ pcDNA3.1mIL-10R1 (G5), por via intramuscular, seguida de eletroporação. Os efeitos da administração dos plasmídeos foram avaliados através da análise histológica do fígado e baço e pela determinação da carga parasitária do baço por PCR em tempo real. Na segunda parte deste trabalho foi produzida e purificada através do sistema baculovírus-célula de inseto, a proteína rmusIL-10R1. Além disso, foi realizado o ensaio de atividade biológica em células MC/9 para avaliar se a proteína produzida e purificada possui atividade funcional. RESULTADOS: A administração de plasmídeos codificadores do receptor de IL-10R1 em associação com IL-12 seguida de eletroporação apresentou efeitos sistêmicos nos grupos G3 e G5, como presença de granulomas maduros no parênquima hepático e nos espaços portais, intenso infiltrado inflamatório no parênquima hepático, aumento do centro germinativo no tecido esplênico e redução da carga parasitária. O rendimento obtido da proteína produzida e purificada foi de 678 µg por litro de cultivo. CONCLUSÃO: Os efeitos observados na primeira parte do trabalho podem ser atribuídos somente à ação da IL-12 e não do receptor de IL-10. Na segunda etapa do trabalho evidenciou-se que a proteína rmusIL-10R1 não foi capaz de bloquear a sinalização mediada por IL-10 murina

INTRODUCTION: Visceral leishmaniasis (VL) is an infectious-parasitic disease and is considered neglected, according to the World Health Organization. The dog and the man are part of maintaining the cycle of infection. The increasing numbers of infected animals have a public health problem, as it represents an imminent risk of infection for humans. In LV, the cellular immune response is suppressed favoring the replication of the parasite in the macrophages and the exacerbation of the disease. Studies indicate that this suppression may be related to the secretion of interleukin-10 (IL-10), since it has the role of regulating the excess inflammatory response, inhibiting the production of IL12. PURPOSE: In this research, it is proposed to produce and purify murine IL-10 and IL-12 receptor encoding plasmids, as well as to produce and purify the murine IL-10 receptor in the soluble form of the baculovirus-insect cells system, in order to evaluate the effects of immunomodulatory substances in mice infected with Leishmania infantum / chagasi, with the aim of developing an immunotherapeutic method for dogs with VL. METHODOLOGY: In the first part of this work, BALB / c mice were infected with venom intravenous L. infantum and then injected four times, with 7 days between doses, with saline (G1), pcDNA3.1 (G2), pcDNA3.1mIL-12 (G3), pcDNA3.1mIL-10R1 (G4) and pcDNA3.1mIL-12 + pcDNA3.1mIL-10R1 (G5), followed by electroporation. The effects of plasmid administration were assessed by histological analysis of the liver and spleen and determination of spleen parasite load by real-time PCR. In the second part of this work the rmusIL-10R1 protein was produced and purified through the baculovirus-insect cell system. In addition, the biological activity assay was performed on MC / 9 cells to assess whether the produced and purified protein has functional activity. RESULTS: Administration of IL-10R1 receptor-encoding plasmids in association with IL-12 followed by electroporation showed systemic effects in the G3 and G5 groups, such as presence of mature granulomas in the hepatic parenchyma and portal spaces, intense inflammatory infiltrate in the hepatic parenchyma , increase of the germinal center in the splenic tissue and reduction of the parasitic load. The yield of the produced and purified protein was 678 µg per liter of culture. CONCLUSION: The effects observed in the first part of the work can be attributed only to the action of IL-12 and not the IL-10 receptor. In the second stage of the work it was shown that the rmusIL-10R1 protein was not able to block murine IL-10 mediated signaling.

Aspectos clínicos e laboratoriais associados ao óbito na leishmaniose visceral / Clinical and laboratory aspects associated with death in visceral leishmaniasis

A leishmaniose visceral (LV) é grave problema de saúde pública no Brasil, onde permanece com elevadas taxas de letalidade a despeito das tentativas de controle. OBJETIVO: Identificar aspectos clínicos e laboratoriais admissionais associados ao óbito na LV. MATERIAIS E MÉTODOS: trata-se de estudo de corte transversal retrospectivo incluindo os pacientes admitidos no Hospital Couto Maia (Salvador/Ba) com diagnóstico de LV entre janeiro de 2010 e dezembro de 2014. Variáveis epidemiológicas, clínicas e laboratoriais admissionais foram coletadas em instrumento padronizado e analisadas no software Stata® versão 13.0 na comparação entre os grupos de desfecho clínico (DC) de alta hospitalar (n=106) ou óbito (n=12). RESULTADOS: Predominaram pacientes do sexo masculino (62,7%), da faixa etária pediátrica (53,4%), de procedência da área urbana de municípios do interior da Bahia com baixo Índice de Desenvolvimento Humano e de apresentação clínica clássica com hepatoesplenomegalia febril e citopenias. A letalidade média foi de 10,2%, superior a partir dos 40 anos de idade. As principais causas de óbito declaradas foram insuficiências renal e hepática/hepatite, sepse/choque séptico, choque não especificado e coagulação intravascular disseminada. Comorbidades ocorreram em 19,5% dos pacientes e foram associadas ao DC óbito (p=0,043), assim como a presença de dor abdominal (p=0,022), sangramentos mucosos (p=0,034), edema (p=0,029), icterícia (p=0,000), redução do sensório (p=0,001), crepitação pulmonar (p=0,014), bulhas arrítmicas (p=0,027), coinfecção bacteriana (p=0,019) e alterações eletrocardiográficas (p=0,001). Apresentaram associação óbito níveis de plaquetas < 81.000/mm³ (p=0,004), albumina ≤ 2,2g/dL (p=0,032), ureia > 37 mg/dL (p=0,009), bilirrubinas totais > 0,9 mg/dL (p=0,001), bilirrubina direta > 0,4mg/dL (p=0,002), atividade de protrombina ≤ 45% (p=0,008) e creatinina elevada para a idade (p=0,003). Os escores obtidos nos modelos prognósticos clínico (EC) e clinicolaboratorial (ECL) adotados pelo Ministério da Saúde do Brasil apresentaram concordância com o DC; EC ≥ 4 e ECL ≥ 6 foram significativamente associados ao óbito nesta amostra, com maior força de associação para o último (p=0,000). CONCLUSÕES: O perfil clínico da amostra foi concordante com a literatura, porém algumas variáveis classicamente associadas ao óbito na LV não se mostraram significantes, ou se fizeram em diferentes pontos de corte, o que pode ter se devido a variações populacionais ou ao delineamento do estudo, requerendo pesquisas mais robustas para a sua verificação. Os resultados para as pontuações nos EC e ECL nesta amostra refletem a importância de sua realização enquanto ferramenta de estratificação de risco dos pacientes diagnosticados com LV. Espera-se que este estudo possa contribuir no diagnóstico situacional da doença na população local e na identificação de questões-chave a serem aprofundadas através de diferentes metodologias

INTRODUCTION: Visceral leishmaniasis (VL) is a major public health problem in Brazil, where it persists with elevated fatality rates despite of controlling measures. AIM: Identify clinical and laboratorial admission aspects associated to death in VL. MATERIAL AND METHODS: It's a cross-sectional retrospective study including patients admitted to the Hospital Couto Maia (Salvador/Ba) with a diagnosis of VL between January 2010 and December 2014. Epidemiological, clinical and laboratory admission variables were collected in a standardized instrument and analyzed in the software Stata ® version 13.0 in the comparison between groups of clinical outcome (CO), discharge (n=106) or death (n=12). RESULTS: predominated male patients (62.7%), pediatric age (53.4%), origin of the urban area of municipalities in the interior of Bahia with low Human Development Index and classical clinical presentation with hepatosplenomegaly feverish and cytopenias. The average fatality rate was 10.2%, higher than 40 years of age. The main declared causes of death were renal and liver insufficiencies/hepatitis, sepsis/septic shock, unspecified shock and disseminated intravascular coagulation. Comorbidities were referred in 19.5% of patients and was associated with the CO (p=0.043), as well as the presence of abdominal pain (p=0.022), mucosal bleeding (p=0.034), edema (p=0.029), jaundice (p=0.000), sensory reduction (p = 0.001), lung crepitation (p=0.014), arrhythmic cardiac sounds (p=0.027), bacterial coinfection (p=0.019) and electrocardiographic abnormalities (p=0.001). Presented death association platelet levels < 81,000/mm ³ (p=0.004), serum albumin ≤ 2, 2 g/dL (p=0.032), urea > 37 mg/dL (p=0.009), total bilirubin > 0.9 mg/dL (p=0.001), direct bilirubin > 0, 4 mg/dL (p=0.002), prothrombin activity < 45% (p=0.008) and serum creatinine elevated to the age (p=0.003). The scores obtained in clinical (CP) and clinicolaboratorial (CLP) predictor models adopted by the Ministry of Health of Brazil showed agreement with the CO; CP ≥ 4 and CLP ≥ 6 were significantly associated with death in this sample, with greater strength of association for the last (p=0.000). CONCLUSIONS: the clinical profile of the sample was concordant with the literature, though some variables classically associated with death in VL showed no significant, or if made in different cut-offs, which may be due to population variations or study design, requiring more robust research for verification. The results for the CP and CLP scores in this sample reflect the importance of their achievement as a risk stratification tool of patients diagnosed with VL. It is hoped that this study will help in situational diagnosis of the disease in local population and in the identification of key issues to be deepened through different methodologies

Diversidade clínica e tratamento da leishmaniose visceral / Clinical diversity and treatment of visceral leishmaniasis

A leishmaniose visceral (LV) é causada por protozoários do gênero Leishmania, sendo as duas principais espécies: Leismania (Leishmania) donovani e Leishmania (Leishmania) infantum, as quais tem ocorrência geográfica diversa e estão relacionadas com diversidade de manifestações clinicas e de resposta terapêutica. Notadamente, a LV que ocorre, principalmente, na Índia Sudão, Sudão do Sul, Bangladesh e Etiópia é causada pela espécie L. donovani, enquanto nas Américas e em algumas regiões da África e Europa, a espécie causadora é a L. infantum. A LV causada pela L. (L.) donovani tem um espectro clínico variando de comprometimento visceral à lesão cutânea que ocorre após um episódio de LV, que é a leishmaniose dérmica póskalazar (PKDL), manifestações esta que não é muito frequente na LV causada pela L. infantum. Ademais, a resposta terapêutica é divergente entre essas espécies, visto que na LV causada por L. donovani há pobre resposta ao antimonial pentavalente, configurando um padrão de resistência elevado, enquanto que na LV causada pela L. infantum essa informação não é muito clara. Neste artigo abordamos a diversidade clínica e a resposta terapêutica da LV causada principalmente por L. infantum, que é de ocorrência nas Américas.

Visceral leishmaniasis (VL) is caused by protozoa of the genus Leishmania, of the species Leismania (Leishmania) donovani and Leishmania (Leishmania) infantum, which occur in different geographic regions and are related to the diversity of clinical manifestations and therapeutic response. Notably, VL occurring mainly in India, Sudan, South Sudan, Bangladesh and Ethiopia is caused by L. donovani, while in the Americas and in some regions of Africa and Europe is caused by L. infantum. Visceral leishmaniasis caused by L. donovani has a clinical spectrum ranging from visceral involvement to cutaneous lesion that occurs after a VL episode, which is post-kala-azar-dermal-leishmaniasis (PKDL), which is not very frequent in the VL caused by L. infantum. In addition, the therapeutic response is divergent among these species, since in VL caused by L. donovani there is poor response to pentavalent antimony, setting a high resistance pattern, whereas in VL caused by L. infantum this information is not very clear. In this article, we discuss the clinical diversity and therapeutic response of VL caused mainly by L. infantum, which is occurring in the Americas.

Leishmania donovani infection activates Toll-like receptor 2, 4 expressions and Transforming growth factor-beta mediated apoptosis in renal tissues

Abstract The present study was aimed to identify the underlying mechanisms of improper renal function in Leishmania donovani infection that causes VL. Mice (BALB/c) were infected with L. donovani and different parameters for proteinuria were assessed. The levels of superoxide anion (O2 -), hydrogen peroxide (H2O2), lipid peroxidation (MDA), inflammatory cytokines, and toll-like receptor (TLR) 2 and 4 expression were found significantly elevated at 60th day in these animals and declined at 90th day post infection. However, TGF-β and caspase 3 activities were higher at 90th day in comparison to 60th day post infection. These findings suggested that exacerbated inflammatory conditions correlate with abnormal renal functions in L. donovani infection, which is further augmented by activated TLRs expressions by circulating leishmanial antigens. Further, the increased levels of TGF-β and caspase 3 at 90th day suggested TGF-β mediated apoptotic cell death of renal and other cells during later stages of disease that may eventually result in release of host and parasitic factors in urine during visceral leishmaniasis.

Obtenção e caracterização de uma cepa atenuada de Leishmania Infantum mediante deleção do gene Kharon1

Apesar da vacinação ser considerada a melhor estratégia para prevenir a infecção por Leishmania, não existe até o momento nenhuma vacina segura e eficaz para uso humano disponível. As vacinas atenuadas, consideradas padrão-ouro para proteção contra patógenos intracelulares, têm sido largamente estudadas como estratégia de imunização contra as leishmanioses. Dessa forma, com o objetivo de obter uma cepa atenuada de Leishmania, foi realizado o nocaute do gene Kharon1 (Kh1) em L. infantum, o qual foi descrito como sendo essencial para citocinese das formas amastigotas de L. mexicana.Os mutantes LiKh1-/- foram obtidos com sucesso por meio de recombinação homóloga e a deleção de ambas as cópias do gene foi confirmada por PCR, qPCR e Southern blot. Em seguida foram também obtidos mutantes complementados nos quais o gene Kh1 foi reinserido nos parasitos LiKh1-/- (add back).Apesar das formas promastigotas dos mutantes LiKh1-/- não apresentaram alteração do crescimento quando comparadas com LiWT, parasitos LiKh1-/- apresentam alteração morfológica, que não é detectada nos parasitos complementados. Apesar de Kh1 estar indiretamente relacionado com o transporte de glicose, os mutantes LiKh1-/- não apresentaram alteração da captação de glicose e nem alteração na sensibilidade ao antimônio

Por outro lado, as formas amastigotas de LiKh1-/- foram incapazes de manter a infecção em macrófagos humanos ou murinos, formando estruturas multinucleadas que não sobrevivem por mais de 16 dias in vitro. A análise do ciclo celular dos mutantes demonstrou que as amastigotas LiKh1-/- apresentam retenção em G2/M, confirmando que os mutantes LiKh1-/- apresentaram defeito na citocinese. Os parasitos deficientes em Kh1 também possuem menor capacidade de manter a infecção in vivo, até mesmo em camundongos imunossuprimidos. A deleção do gene Kh1 não interferiu na produção de óxido nítrico pelos macrófagos peritoneais murinos.Os resultados obtidos in vitro e in vivo nesse trabalho demonstram que os parasitos LiKh1-/- apresentam fenótipo atenuado, devido à alteração na divisão celular. Esses parasitos poderão ser futuramente testados como potenciais candidatos vacinais contra as leishmanioses

Avaliação da confiabilidade entre dois observadores em exames citopatológico e imunocitoquímico de aspirado de medula óssea no diagnóstico da leishmaniose visceral canina / Reliability evaluation between two evaluators in the cytopathologic and immunocytochemical exams from bone marrow aspirate in the canine visceral leishmaniasis diagnosis

Visceral leishmaniasis is a zoonosis in which the dog appears as the main source of infection in urban areas. Its diagnosis is complex and the cytopathological exam is a fast and cheap alternative to parasite direct visualization and its sensitivity can be increased by immunocytochemistry, though with a higher cost. The accuracy of such methods is dependent on the microscopist's experience and therefore, this study evaluated the reliability of such techniques between two observers, from bone marrow aspirates of 50 dogs from an endemic area for the disease. The parasitological culture in Novy-MacNeal-Nicolle medium was used as the reference standard. Among the main findings, the sensitivities obtained by observers I and II were respectively 62.5% and 37.5%, while specificities were 81.1% and 100%. On immunocytochemistry evaluation, the sensitivity was 0% for both evaluators and the specificity 97.3% and 100%. The agreement between evaluators was weak (κ = 0.167) for the cytopathological test and it could not be evaluated for immunocytochemistry, for which there was no detection by the evaluator II. The agreements among the diagnostic methods and the standard reference for the observer I were reasonable (κ = 0.364) for cytopathological examination and bad (κ = -0.041) for immunocytochemistry. For observer II, such agreement could be assessed only for the cytopathological test, being moderate (κ = 0.497). The results point to the possible expertise difference between evaluators, with the evaluator II demonstrating greater experience when interpreting the citopathological test. Although there was the expected sensitivity increase with immunocytochemistry, the technique used in this study was not effective for the diagnosis of infection, regardless of the evaluator.(AU)

Correlation study and histopathological description of intestinal alterations in dogs infected with Leishmania infantum / Estudo de correlação e descrição histopatológica das lesões intestinais de cães infectados com Leishmania infantum

Abstract The aim of this work was a correlation study and histopathological description of alterations associated with the presence of Leishmania infantumamastigote in the intestinal wall of dogs infected with canine visceral leishmaniasis (CVL). Three groups were used: G1 (n = 8), comprising naturally infected dogs with CVL with amastigotes of L. infantum in the small and large intestines; G2 (n = 9), infected dogs with CVL, without intestinal amastigotes; and G3 (n = 3), uninfected dogs. Histochemistry and immunohistochemistry methods were used for histopathology and amastigotes identification. 47.1% (8/17) of dogs from G1 group had amastigotes in the mucosa, submucosa and muscle layers of the small and large intestines and it was observed a prominent inflammatory reaction characterized by chronic infiltration of mononuclear cells: macrophages, lymphocytes and plasma cells. Comparison between the groups showed only a significant difference in relation to mucosal microscopic structural alterations in dogs from G1 in relation to G2 and G3. Parasite burden showed significant correlations with the microscopic alterations and clinical status of dogs in G1. By the conclusion, the inflammatory reactions caused by the parasites in the intestines might have contributed towards alterations in digestive processes, worsening the dogs’ clinical status of CVL.

Resumo O objetivo foi realizar um estudo de correlação e descrição histopatológica das lesões associadas à presença de amastigotas de Leishmania infantum na parede intestinal de cães infectados com leishmaniose visceral canina (LVC). Os cães foram subdivididos em três grupos: G1 (n = 8) cães naturalmente infectados com LVC e com amastigotas de L. infantum no intestino; G2 (n = 9) com LVC, mas sem o parasitismo intestinal; e G3 (n = 3) cães não infectados. Métodos histoquímicos e imunoistoquímicos foram utilizados para a histopatologia e a identificação das amastigotas, respectivamente. 47,1% (8/17) dos cães infectados (grupo G1) apresentavam formas amastigotas na mucosa, submucosa e camada muscular do intestino delgado e grosso, destacando-se uma reação inflamatória caracterizada por infiltrado crônico de células mononucleares; macrófagos, linfócitos e plasmócitos. Observou-se uma diferença significativa somente com relação às alterações estruturais microscópicas intestinais nos cães do G1 quando comparadas com G2 e G3. A intensidade parasitária intestinal teve correlação significativa com as alterações microscópicas e os sinais clínicos dos cães do G1. Concluiu-se que as amastigotas de L. infantum por causarem reações inflamatórias na parede intestinal dos cães podem ter contribuído para as alterações dos processos digestórios, agravando ainda mais o quadro clínico dos animais.

Contribuição para o desenvolvimento de uma vacina contra leishmaniose visceral canina / Contribution to the development of a vaccine against canine visceral leishmaniasis

A Leishmaniose visceral (LV) é uma doença infecciosa e parasitária que se encontra em expansão no Brasil. A espécie que causa a doença no Brasil é a Leishmania infantum. O cão é o principal reservatório do parasita. Uma vacina contra leishmaniose visceral canina (LVC) pode favorecer o controle da doença. Este trabalho tem como objetivo contribuir para o desenvolvimento de uma vacina contra LVC.OBJETIVO: O estudo do primeiro capítulo visou o desenvolvimento de um modelo para a avaliação de antígenos candidatos à vacina contra LVC. METODOLOGIA: Um experimento foi realizado para obtenção de cães resistentes a LVC. Os linfócitos dos animais deveriam ser capazes de reconhecer antígenos otencialmente úteis para o desenvolvimento de uma vacina. Para isso, uma cepa de L.infantum foi isolada de cão naturalmente infectado e doente (Camaçari, Bahia). Seis cães adultos e sadios foram inoculados com 1x108 formas promastigotas em fase estacionária de cultura por via dérmica e acompanhados por dois anos.RESULTADOS: Os animais apresentaram: 1) área de induração e ulceração rasa no local da inoculação do parasita com cura espontânea em um período inferior a três meses, 2) ausência de manifestações clínicas e de alterações hematológicas e bioquímicas séricas, 3) produção baixa e flutuante de anticorpos da classe IgG reativos a antígenos de Leishmania, 4) resposta linfoproliferativa (em 4 de 6 cães) frente a estimulação com antígenos de Leishmania, 5)produção baixa de IFN-γ em um ensaio realizado com sangue total incubado por 24h com antígenos de Leishmania (4 de 5 cães), 6) carga parasitária baixa em aspirado de baço,detectada por PCR em tempo real. CONCLUSÃO: Os animais desenvolveram uma forma subclínica da infecção ao lado de resposta imune humoral e celular fracas.OBJETIVO: No segundo capítulo foi testado um ensaio de avaliação da produção de citocinas por células de sangue de cães naturalmente infectados por Leishmania infantum. O quantiFERON modificado permite a avaliação in vitro e de maneira rápida da produção de citocinas contra Leishmania em animais de área endêmica. METODOLOGIA: Antígeno solúvel e antígenos recombinantes de L. infantum (rLci2-NT-5R-CT e rLci2-NT-CT) foram produzidos e utilizados no ensaio para a estimulação do sangue total de27 cães de área endêmica e não endêmica para LVC por 24h. O plasma foi coletado e a produção das citocinas caninas IFN-γ, IL-2, IL-6, IL-10 e TNF-α foram quantificadas. RESULTADO:Devido a problemas técnicos não foi possível avaliar os dados obtidos e,consequentemente,não foi possível caracterizar grupos de animais susceptíveis e resistentes.OBJETIVO: No terceiro capítulo, a carga parasitária e aspectos histológicos em diferentes regiões do baço de cães com LVC foi analisada.METODOLOGIA: A carga parasitária e alterações histológicas no baço de 6 cães com LVC foram avaliados por amostragem de três secções inferior, média e superior do órgão...

INTRODUCTION: Visceral Leishmaniasis (VL) is an infectious parasitic disease which is increasing in Brazil. The species that causes the disease in Brazil is Leishmaniainfantum. The dog is the main reservoir of the parasite. A canine visceral leishmaniasis vaccine (CVL) may favor the control of the disease. This paper aims to contribute to the development of a vaccine against CVL. OBJECTIVE: The first chapter study aimed the development of a model for the evaluation of candidate antigens for a vaccine against CVL. An experiment was conducted to obtain resistant dogs to CVL. Lymphocytes of these animals should be able to recognize potentially useful antigens for a vaccine development. METHODOLOGY: For this, a strain of L. infantum was isolated from naturally infected and sick dog (Camaçari, Bahia). Six dogs and healthy adults were intradermally inoculated with 1 x 108 promastigotes in the stationary phase culture and were followed for two years. RESULTS: The animals showed: 1) induration area and shallow ulceration in parasite inoculation site with spontaneous healing in a period of less than three months, 2) absence of clinical symptoms and hematological and biochemical changes, 3) low and floating production of antibodies IgG reactive to Leishmania antigens, 4) lymphoproliferative response (in 4 of 6 dogs) compared to stimulation with leishmanial antigens, 5) low IFN-γ in a test performed on whole blood incubated for 24 h with antigen Leishmania (4 of 5 dogs), 6) a low parasite load in spleen aspirates, detected by realtime PCR. CONCLUSION: These animals developed a subclinical form of the infection alongside with a weakspecific humoral and cellular immune response and weak cell. OBJECTIVE: The second section was tested in a trial evaluating cytokine production by blood cells of dogs naturally infected with Leishmaniainfantum. The modified QuantiFERON allows evaluation both in vitro and quickly production of cytokines against Leishmania in animals in an endemic area. METHODOLOGY: Soluble antigen and recombinant antigens of L. infantum (rLci2-5R-NT-CT and rLci2-NT-CT) were produced and used in the assay for the stimulation of whole blood of 27 animals from endemic and nonendemic area for LVC for 24h. Plasma was collected and cytokine production of canine IFNγ, IL-2, IL-6, IL-10 and TNF-α cytokines were quantified. RESULTS: Due to technical some problems, it was not possible to characterize groups of animals susceptible and resistant in relation to modified QuantiFERON assay results. OBJECTIVE: In the third chapter, the parasite load and histological aspects in different regions of the spleen of dogs with CVL were analyzed. METHODOLOGY: The parasite load and histological changes in the spleen of 6 dogs with CVL were evaluated by sampling three sections of the spleen (lower, middle and upper section of the organ)...

Avaliação hematológica, bioquímica e clínica do uso de de dietilditiocarbamato(DETC) no tratamento in vitro e in vivo da leishmaniose visceral canina natural e experimental / Hematological, biochemical and clinical evaluation of the use of diethyldithiocarbamate (DETC) in the in vitro and in vivo treatment of natural and experimental canine visceral leishmaniasis

INTRODUÇÃO: A Leishmaniose Visceral (LV) é uma zoonose causada pelo protozoário Leishmania infantum, e tem o cão como reservatório doméstico. Nessa espécie, a leishmaniose visceral canina (LVC) é caracterizada por um amplo espectro de sinais clínicos, variando de acordo com a resposta imune do animal parasitado, o que dificulta o seu diagnóstico. Na busca de um tratamento eficaz, os cães são submetidos a vários agentes terapêuticos e protocolos. Embora alguns protocolos resultem em melhora dos sinais clínicos, as recidivas são frequentes. Além disso, a detecção do parasito na pele dos cães tratados faz com que sua participação no ciclo de transmissão continue, inclusive com risco de infecção de humanos e seleção de cepas resistentes às drogas de referência. Um dos fármacos que já demonstraram ação contra a Leismania é o Dietilditiocarbamato (DETC), um potente inibidor de Superóxido Dismutase (SOD), enzima que atua facilitando a sobrevivência de parasitos intracelulares. OBJETIVO: Os objetivos deste estudo foram testar o DETC, in vitro e in vivo, para o tratamento contra LVC e desenvolver um algoritmo que auxilie no diagnóstico clínico da doença. MÉTODOS: Nos ensaios in vitro foram utilizadas células mononucleares de sangue periférico de cães saudáveis. Nos ensaios in vivo foram utilizados 10 cães experimentalmente infectados e 16 naturalmente infectados com Leishmania infantum...

INTRODUCTION: Visceral Leishmaniasis (VL) is a zoonosis caused by Leishmania infantum, and has the dog as domestic reservoir. In this species, canine visceral leishmaniasis (CVL) is characterized by a broad spectrum of clinical signs, varying with the immune response of parasitized animals, which complicates the diagnosis. In the search for an effective treatment, the dogs are subjected to various therapeutic agents and protocols. Although some protocols result in improvement of clinical signs, recurrences are frequent. Furthermore, the detection of the parasite in the skin of treated dogs makes participation in the transmission cycle to continue, including the risk of human infection and selection of resistant strains to the reference drugs. One of drugs that have shown activity against Leishmania is diethyldithiocarbamate (DETC), a potent inhibitor of superoxide dismutase (SOD), an enzyme that acts facilitating survival of intracellular parasites. AIM: This study aimed to test the DETC, in vitro and in vivo for the treatment against LVC and develop an algorithm to assist in clinical diagnosis of disease. METHODS: In vitro tests Mononuclear cells from peripheral blood of healthy dogs were used. To in vivo assays were used 10 experimentally infected dogs and 16 naturally infected with Leishmania infantum...

Avaliação da eficácia de coleiras impregnadas com deltametrina no controle e prevenção da leishmaniose visceral canina em área endêmica / Evaluation of the effectiveness of collars impregnated with deltamethrin in the control and prevention of canine visceral leishmaniasis in endemic area

INTRODUÇÃO: A leishmaniose visceral (LV) é uma zoonose de grande importância na saúde pública, causada pela Leishmania infantum. No Brasil, o parasito é transmitido pela picada do Lutzomyia longipalpis e o cão é considerado o principal reservatório doméstico. As medidas de controle da LV apresentam limitações que comprometem a sua eficácia. Assim, novas estratégias precisam ser implementadas. A utilização de coleiras impregnadas com deltametrina a 4% têm apresentado resultados promissores na proteção individual de cães contra a picada do vetor flebotomíneo e como medida de controle em regiões endêmicas da Europa. Entretanto, ainda são escassos os estudos de campo que avaliaram a eficácia da utilização da coleira como medida de controle da LV em áreas onde o Lu. longipalpis é o vetor responsável pela transmissão. OBJETIVO: Avaliar a eficácia da utilização de coleiras impregnadas com deltametrina a 4% em cães, no controle e prevenção da leishmaniose visceral canina (LVC) em uma área endêmica do Brasil. MATERIAL E MÉTODOS: Um estudo experimental longitudinal foi realizado em Camaçari - BA...

INTRODUCTION: Visceral leishmaniasis (VL) is a zoonosis of great importance in public health, caused by Leishmania infantum. In Brazil, the parasite is transmitted by the bite of Lutzomyia longipalpis and the dog is considered the main domestic reservoir. The VL control measures have limitations that impair its efficacy. Thus, new strategies need to be implemented. The use of collars impregnated with deltamethrin 4% have shown promising results in personal protection dogs against the bite of the sandfly vector and as a control measure in endemic regions of Europe. However, there are few field studies that evaluated the efficacy of using the collar as LV control measure in areas where Lu. longipalpis is the vector responsible for transmition. OBJECTIVE: To evaluate the efficacy of using collars impregnated with deltamethrin to 4% in dogs for control and prevention of canine visceral leishmaniasis (CVL) in an endemic area of Brazil. MATERIAL AND METHODS: A longitudinal experimental study was carried out in Camaçari-BA...

Evaluation of 17-AAG as a chemotherapeutic potential for the treatment of visceral leishmaniasis in experimentally infected hamsters / Evaluation of 17-AAG as a chemotherapeutic potential for the treatment of visceral leishmaniasis in experimentally infected hamsters

A leishmaniose é causada por protozoários do gênero Leishmania. Considerada endêmica em diversos países, incluindo o Brasil, o tratamento dessa doença consiste na utilização de agentes quimioterápicos. No entanto, esses fármacos apresentam diversos efeitos colaterais, alto custo e aumento progressivo de falha terapêutica com baixas taxas de cura. Tendo em vista a necessidade para desenvolvimento de novos compostos anti-Leishmania, ensaios realizados anteriormente por nosso grupo evidenciaram o potencial do 17 - allylamino 17 - demethoxygeldanamycin (17-AAG) no tratamento in vivo da leishmaniose cutânea (LC). Esse composto inibe a atividade ATPásica da proteína de choque térmico 90 (HSP90), que no parasito é conhecida por exercer funções essenciais. Como consequência, sua inibição pode levar à morte do parasito, resultando no controle da doença. Assim, nosso estudo avaliou o potencial do 17-AAG no tratamento da leishmaniose visceral (LV) utilizando hamster como modelo experimental. Este modelo foi utilizado, pois apresenta características clínico-patológicas semelhantes às observadas em humanos com calazar. Inicialmente foi realizado um ensaio de toxicidade com o 17-AAG utilizando doses intraperitoneais de 20 ou 40 mg/kg diariamente ou em dias alternados, totalizando quinze aplicações. O esquema terapêutico causou toxicidade no fígado dos animais tratados com ambas às doses e no rim dos animais tratados com 40mg/kg. Todos os animais que receberam 40mg/kg e 80% daqueles que receberam 20mg/kg vieram a óbito no final dos dois esquemas terapêutico. Com o intuito de reduzir a toxicidade e avaliar o potencial leishmanicida do 17-AAG, experimentos subsequentes foram realizados utilizando doses menores de 5 ou 10 mg/kg de 17-AAG em intervalos maiores de três dias, totalizando sete aplicações. Os animais do estudo apresentavam alterações bioquímicas e hematológicas, antes mesmo de iniciar o tratamento, permanecendo com essas alterações durante todos os períodos avaliados, que foram igualmente observadas nos animais do grupo controle não tratados com 17-AAG. Com o intuito de avançar na avaliação de toxicidade e eficácia do tratamento, outro ensaio foi realizado utilizando doses de 10 ou 20 mg/kg de 17-AAG em dias alternados, totalizando sete aplicações. A análise histopatológica mostrou que os hamsters tratados não apresentaram alterações em fígado e rim adicionais às observadas no grupo controle. Esses achados mostram que o tratamento com 17-AAG foi tóxico somente para as células hepáticas dos animais, quando aplicado em doses mais elevadas e em intervalos de tempos curtos. Em doses mais baixas e intervalos maiores, as análises histopatológicas do fígado e rim dos animais revelaram alterações similares às causadas pelo diluente. Quando os hamsters foram tratados com as doses toleradas de 10 ou 20 mg/kg de 17-AAG em dias alternados, o 17-AAG não foi capaz de reduzir a carga parasitária no baço, fígado ou linfonodo desses animais. Em conjunto, esses dados mostram que os hamsters não representam um modelo adequado para teste com 17-AAG, pois os mesmos não toleraram doses elevadas deste fármaco que seriam necessárias para o controle da infecção, indicando a necessidade da utilização de outro modelo experimental nos estudos de tratamento da LV

Avaliação do exame imuno-histoquímico para o diagnóstico de Leishmania spp. em amostras de tecidos caninos / Evaluation of immunohistochemical technique for the diagnosis of Leishmania spp. in canine tissues samples

No Brasil, as leishmanioses representam um importante problema de saúde pública pela sua elevada incidência, ampla distribuição geográfica e marcante aumento na transmissão associados à urbanização da doença. Cães são considerados os principais reservatórios da leishmaniose visceral (LV) no ambiente urbano, tornando-se fundamental o aprimoramento do diagnóstico dadoença nessa espécie. Este estudo objetivou a avaliação da técnica de imuno-histoquímica (IHQ) para o diagnóstico de Leishmania spp. em amostras de diferentes tecidos de cães recebidas no Núcleo de Patologia Quantitativa do Instituto Adolfo Lutz (NPQ-IAL). Amostras de tecidos coletadas de 134 cães, provenientes de municípios do Estado de São Paulo, positivos para LV por teste rápido(TR DPP®-Bio-Manguinhos), ensaio imunoenzimático-EIE/Elisa (Bio-Manguinhos) e pela reação em cadeia de polimerase, foram submetidas a marcação IHQ específica, em duplicata. A reação de IHQ apresentou sensibilidade de 98,51 %, especificidade de 100,00 % e acurácia de 98,61 %. A maior positividade foi detectada nas amostras de baço. O índice Kappa foi de 0,84 entre os resultados da análise dos tecidos em duplicata. A técnica de IHQ pode ser utilizada como uma técnica rotineirapara o diagnóstico das leishmanioses caninas, sendo padronizada e implantada no NPQ-IAL.

In Brazil, leishmaniasis represents an important public health problem due to its high incidence, wide geographic distribution and marked increase in transmission associated to the urbanization of the disease. Dogs are considered the main reservoirs of visceral leishmaniasis (VL) in the urban environment, making it fundamental to improve the diagnosis of this species. This study aimed at the evaluation of the immunohistochemical technique (IHC) for the diagnosis of Leishmania spp. In samples of different dog tissues received at the Adolfo Lutz Institute's Quantitative Pathology Center (NPQ-IAL). Tissue specimens collected from 134 dogs, from municipalities in the State of São Paulo, positive for LV by rapid test (TR DPP®-Bio-Manguinhos), enzyme-linked immunosorbent assay (EIE / Elisa (Bio-Manguinhos) and the chain reaction of Polymerase, were subjected to specific IHQ labeling, in duplicate. The IHQ reaction showed sensitivity of 98.51%, specificity of 100.00% and accuracy of 98.61%. The highest positivity was detected in spleen samples. The Kappa index was 0.84 between the results of the tissue analysis in duplicate. The IHC technique can be used as a routine technique for the diagnosis of canine leishmaniasis, being standardized and implanted in the NPQ-IAL.

Brote urbano de leishmaniasis visceral en Neiva, Colombia / Urban outbreak of visceral leishmaniasis in Neiva (Colombia)

Objetivo Estudiar clínica y epidemiológicamente focos de leishmaniasis visceral (LV) urbana en Neiva (Colombia). Materiales y Métodos Seis niños consultaron por hepato-esplenomegalia. Presentaban anemia y leucopenia. Se realizó biopsia por aspiración de medula ósea (5 pacientes) y de bazo (1 paciente). Se hizo búsqueda activa de casos en la comunidad y de anticuerpos anti-Leishmania infantum por inmunofluorescencia indirecta (IFI) en los sintomáticos y en reservorios caninos (IFI, rK39). Se hicieron visitas domiciliarias para educación comunitaria y búsqueda de vectores. Los pacientes recibieron Miltefosina, Anfotericina B o Glucantime®. Resultados Se confirmó LV en siete niños. En seis, el aspirado de medula ósea o bazo demostró amastigotes. La IFI fue positiva en 4 pacientes y negativa en 3. Un niño se detectó por búsqueda activa comunitaria, con clínica de LV, confirmada por IFI (1:32). La miltefosina no fue útil en 6 de los 7 casos. La Anfotericina B liposomal o deoxicolato, curó 6 pacientes y el Glucantime® uno. La seroprevalencia en 1182 caninos (IFI y rK39) fue de 6.1 %; los animales positivos fueron sacrificados. Se demostró Lu. longipalpis, vector de LV, en el peridomicilio. Conclusiones Demostramos LV urbana en dos comunas de Neiva. La confirmación diagnóstica incluyó aspiración de medula ósea e IFI. La Miltefosina no fue útil. La Anfotericina B liposomal fue la terapia ideal. Para controlar la LV es necesario hacer BAC, educación comunitaria, control de vectores y reservorios.(AU)

Objective Characterize the foci of visceral leishmaniasis infection in Neiva with a clinical and epidemiological approach. Materials and Methods Six children consulted medical services with hepatosplenomegaly. They were found to have anemia and leukopenia. The diagnosis was performed by bone marrow (five patients) and spleen (1 patient) aspiration. An active search for cases was carried out in the community. Anti-Leishmania infantum antibodies were also sought out using indirect immunofluorescence (IIF) in symptomatic patients and in dogs (IFI, rK39). House calls were made in order to carry out educational activities and to collect disease vectors. Patients received miltefosine, amphotericin B or Glucantime®. Results LV was confirmed in seven children. In six of them, the bone marrow or spleen aspirate contained amastigotes. The IIF was positive in 4 patients and negative in 3. One child was detected throught the active community search, confirmed by the clinic with IIF (1:32). Six patients were cured with liposomal amphotericin B (o deoxycholate) and one patient was cured with Glucantime®. The canine seroprevalence in 1182 dogs was 6.1% (IFI and rK39); the positive animals were destroyed. L. longipalpis was found in the houses. This is the principal vector of LV in Colombia. Conclusions The study showed that two zones of Neiva have children infected with LV. Diagnostic confirmation must include aspiration of bone marrow and IIFs. Treatment with miltefosine was not helpful, but liposomal amphotericin B is an ideal therapy. To control LV, active case searching, community education and vector and reservoir control is necessary.(AU)

Kidney involvement in leishmaniasis ? a review

Leishmaniasis is an infectious disease caused by protozoa of the genus Leishmania transmitted by insects of the genus Lutzomyia sp. or Phlebotomus sp. The main syndromes are cutaneous leishmaniasis, mucocutaneous leishmaniasis, visceral leishmaniasis (kala-azar) and post-kala-azar dermal leishmaniasis. This article reviews kidney involvement in cutaneous and visceral leishmaniasis, highlighting the aspects of their pathophysiology, clinical manifestations, histopathological findings, outcome and treatment.

Morphological changes and parasite load of the adrenal from dogs with visceral leishmaniasis / Alterações morfológicas e carga parasitária da adrenal de cães com leishmaniose visceral

The objective of this study was to analyze morphological changes and parasite loads in the adrenal gland from 45 dogs with visceral leishmaniasis (VL). The animals were from the Zoonosis Control Center of Araçatuba, state of São Paulo, which is an endemic region for the disease. These animals were euthanized due to positive diagnoses of VL. The dogs were classified into asymptomatic, oligosymptomatic and symptomatic groups. The parasite load was determined by immunohistochemistry, using VL-positive dog hyperimmune serum. Nine dogs showed an inflammatory infiltrate composed, predominantly, of plasma cells and macrophages. However, only eight dogs showed macrophages with amastigote forms of the parasite, immunolabeled in the cytoplasm. The medullary and reticular layers were the most affected areas, possibly due to a favorable microenvironment created by hormones in these regions. The density of parasites in the glandular tissue was not associated with clinical signs of VL (P > 0.05). However, the presence of the parasite was always associated with the presence of a granulomatous inflammatory infiltrate. This gland may not be an ideal place for the parasite's multiplication, but the presence of injuries to the glandular tissue could influence the dog's immune system, thus favoring the parasite's survival in the host's different organs.

O objetivo deste estudo foi analisar as alterações morfológicas e a carga parasitária da glândula adrenal de 45 cães com leishmaniose visceral (LV). Os animais eram provenientes do Centro de Controle de Zoonoses (CCZ) de Araçatuba (SP), região endêmica para a doença. Esses animais são submetidos à eutanásia, devido ao diagnóstico positivo para LV. Os cães foram classificados nos grupos assintomático, oligossintomático e sintomático. A determinação da carga parasitária foi feita por imuno-histoquímica, com utilização de soro hiperimune de cão positivo para LV. Em nove cães, verificou-se um infiltrado inflamatório, composto predominantemente por plasmócitos e macrófagos. Entretanto, apenas oito cães apresentaram macrófagos com formas amastigotas do parasito imunomarcadas em seu citoplasma. As camadas medular e reticulada foram as mais afetadas, possivelmente por um microambiente favorável criado pelos hormônios nestas regiões. A densidade de parasitos no tecido glandular não foi relacionada com os sinais clínicos de LV (P > 0,05). No entanto, a presença do parasito sempre esteve associada à presença de infiltrado inflamatório granulomatoso. Possivelmente, essa glândula não é um sítio ideal para a multiplicação do protozoário, mas a presença de injúrias no tecido glandular poderia influenciar o sistema imune do cão, favorecendo a sobrevivência do parasito nos diferentes órgãos do hospedeiro.

DISTINCT CELLULAR MIGRATION INDUCED BY Leishmania infantum chagasi AND SALIVA FROM Lutzomyia longipalpis IN A HEMORRHAGIC POOL MODEL / Migração celular distinta induzida por Leishmania infantum chagasi e saliva de Lutzomyia longipalpis em um modelo de pool hemorrágico

Recruitment of a specific cell population after Leishmania infection can influence the outcome of the disease. Cellular migration in response to Leishmania or vector saliva has been reported in air pouch model, however, cellular migration induced by Leishmania associated with host's blood and vector saliva in this model has not been described. Herein we investigated cellular migration into air pouch of hamster after stimulation with combination of L. chagasi and host's blood and Lutzomyia longipalpis saliva. Migration induced by saliva was 3-fold more than those induced by L. chagasi alone. Additionally, L. chagasi associated with blood and saliva induced significantly even more leukocytes into air pouch than Leishmania alone. L. chagasi recruited a diverse cell population; however, most of these cells seem to have not migrated to the inflammatory exudate, remaining in the pouch lining tissue. These results indicate that L. chagasi can reduce leukocyte accumulation to the initial site of infection, and when associated with vector saliva in the presence of blood components, increase the influx of more neutrophils than macrophages, suggesting that the parasite has developed a strategy to minimize the initial inflammatory response, allowing an unlimited progression within the host. This work reinforces the importance of studies on the salivary components of sand fly vectors of leishmaniasis in the transmission process and the establishment of the infection.

O recrutamento de uma população de células específicas após infecção por Leishmania pode influenciar o resultado da doença. A migração celular em resposta a Leishmania ou saliva do vetor tem sido reportada utilizando o modelo da bolsa de ar subcutânea, entretanto, a migração celular induzida por Leishmania associada com o sangue do hospedeiro e saliva do vetor neste modelo ainda não foi descrita. Neste trabalho foi investigada a migração celular no modelo da bolsa de ar subcutânea em hamster após a estimulação com a combinação de L. chagasi, sangue do hospedeiro e saliva de Lutzomyia longipalpis. A migração induzida por saliva foi três vezes maior do que a induzida por L. chagasi sozinha. Adicionalmente, L. chagasi associada com sangue e saliva induziu significativamente ainda mais leucócitos no exsudato inflamatório do que o estímulo com Leishmania sozinha. L. chagasi recrutou uma população de células distintas, no entanto, a maioria dessas células parece não ter migrado para o exsudato inflamatório, permanecendo no tecido da bolsa de ar. Estes resultados indicam que L. chagasi pode reduzir o acúmulo de leucócitos para o local inicial da infecção e que quando associada à saliva do vetor e na presença de componentes do sangue aumenta o influxo de mais neutrófilos do que macrófagos, sugerindo que o parasito desenvolveu uma estratégia para minimizar a resposta inflamatória inicial, permitindo uma progressão ilimitada dentro do hospedeiro. Este trabalho reforça a importância de mais estudos sobre os componentes da saliva dos vetores das leishmanioses no processo de transmissão e no estabelecimento da infecção.

Isotipos de anticorpos anti-leishmania no soro e expressão de citocinas no baço de cães naturalmente infectados com Leishmania infantum / Isotypes of anti-leishmania antibodies in serum and cytokine expression in the spleen of dogs naturally infected with Leishmania infantum

Neste estudo foi analisada a distribuição de isotipos de imunoglobulinas IgG1, IgG2 e IgE envolvidas na resposta a Leishmania no soro e a expressão de mRNA para IFN-g e IL-4 in situ no baço de cães naturalmente infectados com L.infantum com diferentes perfis de susceptibilidade ou resistência à doença. A atividade sérica de anticorpos do isotipo IgG1 contra Leishmania tendeu a ser maior nos animais com teste cutêneo da Leishmanina negativo e com parasitismo esplênico (grupo infectado potencialmente susceptível, 0,424±0,401) que nos outros grupos: com teste cutêneo da Leishmanina positivo e ausência de parasitismo esplênico (grupo infectado potencialmente resistente, 0,226±0,114), ou com ambos teste cutêneo da Leishmanina e cultura esplênica positivos (grupo em fase indeterminada da doença, 0,234±0,125) ou com ambos os parâmetros negativos (grupo potencialmente não infectado, 0,159±0,044). Essa diferença não foi, contudo estatisticamente significante (ANOVA, P=0,1450). IgG2 específica anti-Leishmania foi maior (ANOVA P=0,0001)...

We analyzed the distribution immunoglobulin isotypes IgG1, IgG2 and IgE involved in the response to Leishmania and the mRNA expression for IFN-g and IL-4 in situ in the spleen of dogs naturally infected with IgG1 antibody anti-Leishmania serum activity was higher in animals with negative Leishmanin skin test and splenic parasitism (infected and potencially susceptible to VL group, 0,424±0,401) than in other groups: positive Leishmanin skin test and negative splenic parasitism (infected and potentially resistant to VL group, 0,226±0,114), or both positive Leishmanin skin test and slpenic parasitism (infected with undefined susceptibility status group, 0234±0,125) or both negative parameters (non-infected group, 0159±0,044). This difference however was not statistically significant (ANOVA, P=0145)...