Isolamento e caracterização de células-tronco obtidas de corações de camundongos adultos / Isolation and characterization of stem cells from hearts of adult mice

O uso de células-tronco representa uma alternativa para o tratamento das doenças que acometem o coração, devido à capacidade que essas células indiferenciadas têm de preservar sua própria população e de se diferenciar em células dos diversos tecidos, incluindo o cardíaco. Nesse trabalho comparamos as características de células-tronco isoladas a partir do tecido cardíaco e da medula óssea de camundongos transgênicos para a proteína fluorescente verde (GFP). As células-tronco cardíacas e da medula óssea apresentaram característica morfológica fibroblastóide e imunofenotípica de células-tronco mesenquimais, com alta expressão dos marcadores CD44, CD90, CD73, Sca-1 e baixa expressão dos marcadores de células hematopoiéticas. A análise citogenética revelou um cariótipo poliplóide a partir da terceira passagem das células-tronco isoladas do coração e da medula-óssea. A capacidade de diferenciação em vários tipos celulares, tais como adipócitos, osteócitos e condrócitos, também foi avaliada nas células-tronco de ambas as fontes. Tanto as células-tronco isoladas do coração como da medula óssea foram capazes de se diferenciar nessas três linhagens. Quando estimuladas com 5’azacitidina para testar o potencial cardiomiogênico das células isoladas do coração e da medula óssea, apenas as células-tronco cardíacas passaram a expressar alguns marcadores de cardiomiócitos, tais como troponina T cardíaca e GATA-4...

Stem cells are undifferentiated cells with the ability of self-renewal and differentiation into different cell types, with the potential to treat heart diseases. In the present study we compared the characteristics of stem cells isolated from the heart to bone marrow stem cells, both obtained from EGFP transgeneic mice. Cardiac and bone marrow stem cells presented fibroblastic morphology and an immunophenotype compatible with mesenchymal stem cells – high expression of CD44, CD90, CD73, Sca-1 and low expression of of hematopoietic lineage markers. Cytogenetic analysis demonstrated polyploid karyotypes after the third passage of the stem cells isolated from heart and bone marrow. Both bone marrow and heart stem cells were able to differentiate into adipocytes, osteocytes and chondrocytes. In order to test the potential of differentiation into cardiomyocytes, cells were stimulated with 5’azacytidine and only cardiac stem cells expressed heart-specific markers: cardiac T troponin and GATA-4...

Terapia celular da pseudoartose / Cell therapy of pseudarthrosis

OBJETIVO: Analisar a segurança e a eficácia da infusão percutânea no foco da pseudoartrose do aspirado de medula óssea total e da infusão de células mononucleares purificadas e concentradas. MÉTODOS: Foram tratados seis pacientes portadores de pseudoartrose de tíbia ou de fêmur. Quatro receberam infusão do aspirado de medula óssea autóloga total obtida da crista ilíaca e dois receberam o aspirado de medula óssea autóloga processada com Sepax®. Não foi alterado o método de fixação primária ou exposto o foco da pseudoartrose. Realizou-se exame físico e avaliação radiográfica 2, 4 e 6 meses após o procedimento. Após a consolidação, foi avaliado o grau de satisfação do paciente. RESULTADOS: Não verificamos qualquer complicação decorrente dos procedimentos. No primeiro grupo (aspirado total) a consolidação foi obtida entre três e vinte e quatro semanas e, no segundo grupo (Sepax®), entre 12 e 16 semanas. O grau de satisfação dos pacientes teve a média aumentada de 2,75 para 9 no grupo I e de 1 para 8,5 no grupo II (p=0,0156). CONCLUSÃO: Concluímos que o tratamento das pseudoartroses com os métodos avaliados mostraram-se eficazes e seguros independente do método de estabilização utilizado. Nível de Evidência II, Estudo Prospectivo Comparativo.

OBJECTIVE: To assess the safety and efficiency of cell therapy for pseudarthrosis. Implant of the bone marrow aspirate was compared to mononuclear cells purified extemporaneously using the Sepax® equipment. METHODS: Six patients with nonunion of the tibia or femur were treated. Four received a percutaneous infusion of autologous bone marrow aspirated from the iliac crest, and two received autologous bone marrow mononuclear cells separated from the aspirate with the Sepax®. The primary fixation method was unchanged, and the nonunion focus was not exposed. Physical examination and radiographies were performed 2, 4 and 6 months after the treatment by the same physician. After consolidation of the fracture the satisfaction of the patients was estimated using the adapted QALY scale. RESULTS: No complications occurred as a result of the referred procedures. Bone consolidation was obtained in all cases within 3 to 24 weeks. The degree of patient satisfaction before and after bone consolidation was assessed, with the average value increasing from two to nine (p=0.0156). CONCLUSION: We conclude that the proposed method is effective and safe for the treatment of nonunion of long bones regardless of the stabilization method used. Level of Evidence II, Prospective Comparative Study.

Avaliação da função diastólica após o transplante autólogo, intracoronário, de células mononucleares da medula óssea em pacientes submetidos à angioplastia primária / Left ventricle diastolic function after intracoronary autologous bone marrow mononuclear cells transplantation in patients treated primary angioplasty

Objetivo:Avaliar o impacto do transplante autólogo de células mononucleares da medula óssea(TACMMO) sobre a função diastólica(FD) do ventrículo esquerdo, através do ecocardiograma(ECO) COM Doppler Tecidual(DT). Métodos: Estudo randomizado e aberto. Foram incluídos 9 pacientes(7 homens), admitidos no Hospital Pró-Cardíaco com IAM com supradesnivelamento do segmento ST e submetidos a angioplastia primária coronariana com sucesso. Estavam entre o 3° e 5° dias pós-infarto, com disfunção segmentar no ECO e defeito fixo de perfusão maior que 10 por cento na área relacionada ao infarto na cintigrafia de repouso. Foram acompanhados por 3 meses e distribuídos aleatoriamente em 2 grupos: grupo tratado com TACMMO (GT; n igual 6) e grupo controle(GC, n igual 3). O ECO foi arquivado digitalmente e analisado de forma "cega". Foi estudado o fluxo diastólico mitral(FDM), incluindo-se os picosE, A e relação E/A. Ao DT avaliaram-se os picos E' e A' do anel mitral(AM) lateral(E'lat e A'lat) e septal(E's e A's), além das relações E'lat/A'lat, E's/A's entre os picos E e E'lat(E/E'). Resultados: No GT, normalizou-se o FDM em 2 pacientes. No GC piorou o FDM em 1 paciente, sem melhora nos outros 2. Ao DT, ocorreu normalização da FD em 3 pacientes no AM septal, sem melhora no GC. O E'lat diminuiu no GC e aumentou no GT. A E'lat não mudou no GC e aumentou no GT. A E/E' aumentou no GC e diminuiu no GT. Conclusões: Nos pacientes estudados, a FD analisada pelo FDM e pelo DT apresentou melhor evolução no grupo com TACMMO

Bone marrow stem cells and their role in angiogenesis

The degree of symptomatology of a patient with peripheral arterial disease dictates the kind of treatment. Despite the known therapies, some patients continue to have pain with ambulation, which affects their quality of life. The therapeutic implications of the angiogenic growth factors were identified by the pioneering studies of Folkman et al. 2 decades ago. Further investigations established the possibility of the use of formulations of recombinant angiogenic growth factors, with the objective of developing or increasing the network of collaterals in animal models of chronic myocardial or limb ischemia. Researches suggest that primitive stem cells with whole bone marrow possess greater functional plasticity, capable of contributing to regeneration of ischemic limb muscle and vascular endothelium by adult stem cells. Local autologous marrow stromal cells implantation induces a neovascular response resulting in a significant increase in blood flow to the ischemic limb. In this article we review the studies that have established how the implantation of bone marrow cells into ischemic limbs increases collateral vessel formation.

Transplante celular: análise funcional, imunocitoquímica e histopatológica em modelo experimental de miocardiopatia isquêmica utilizando diferentes células / Cellular transplant: functional, immunocytochemical and histopathologic analysis in an experimental model of ischemic heat disease using different cells

OBJETIVO: Apresentar os resultados funcionais, imunocitoquímicos e histopatológicos, in vitro ou em espécimes cardíacas após isolamento, cultura e co-cultura de células tronco mesenquimais, células mioblásticas esqueléticas e transplantadas e co-transplantadas em animais de laboratório com miocardiopatia isquêmica e fração de ejeção do ventrículo esquerdo menor de 40 por cento. MÉTODO: Foram empregados 72 ratos Wistar, divididos em quatro grupos de acordo com o meio de cultura ou das células injetáveis: Grupo controle em que foi injetado apenas o meio de cultura (22 ratos); Grupo de células tronco mesenquimais (17 ratos); Grupo de células mioblásticas esqueléticas (16 ratos) e grupo co-cultura (17 ratos). Nos estudos imunocitoquímicos, as células foram marcadas com anti-vimentina, anti-desmina e anti-miosina. Nos estudos histopatológicos, as lâminas foram coradas com Tricômio de Gomori e identificados neovasos e tecido muscular. Na análise funcional, foi medida a fração de ejeção do ventrículo esquerdo em dois momentos do seguimento, uma semana após o infarto do miocárdio e um mês após a injeção. RESULTADOS: A fração de ejeção do ventrículo esquerdo entre os quatro grupos não apresentou diferença estatística significante (P=0,276), o ecocardiograma de seguimento demonstrou diferença estatística significante (P=0,001). Essa diferença ocorreu entre o grupo controle e o grupo de células mioblásticas esqueléticas (P=0,037), entre o grupo controle e o grupo co-cultura (P<0,001) e o grupo de células tronco mesenquimais e o grupo co-cultura (P=0,025). Quando se compararam as medidas obtidas dos dois ecocardiogramas em cada grupo, encontrou-se diferença no grupo controle (P=0,005) para pior e no grupo co-cultura (P=0,006) para melhor. No estudo imunocitoquímico in vitro, identificou-se células tronco mesenquimais quando marcou-se com anti-vimentina e células musculares, com anti-desmina. Nas espécimes cardíacas, identificou-se tecido muscular marcada com anti-desmina e células mioblásticas esqueléticas marcadas com anti-miosina rápida. No estudo histopatológico, observaram-se novos vasos no grupo de células tronco mesenquimais, no grupo de células mioblásticas esqueléticas, tecido muscular e angiogênese e miogênese no grupo co-cultura. CONCLUSAO: A fração de ejeção do ventrículo esquerdo melhorou no grupo em que foram injetadas células musculares, mais acentuadamente no grupo co-cultura.

Primeros transplantes de médula ósea en Bolivia / First transplants of medula osea in Bolivia

El trasplante de médula óasea es un procedimiento que ha mejorado la sobrevivencia libre de enfermedad de patologías oncohematológicas. El presente trabajo describe los primeros transplantes de médula ósea en Bolivia.En noviembre de 2002 se realizó en Bolivia el primer transplante alogénico de hermano consanguineo HLA compatible en pacientes de sexo masculino de 24 años de edad, con diagnóstico le leucemia mieloide crónica en fase crónica. El acondicionamiento fue con thiotepa, ciclofosfamida y fludarabina, seguido de transplante de 2.7 x 10 células mononucleadas por Kg/peso. Para profilaxis de rechazo al injerto (GVHD) recibió metotrexate, ciclosporina y metilprednisolona. Presentó GVHD grado I al día +13. La recuperación de neutrófilos mayor a 500/ml y plaquetas mayores a 20.000/ml fue al día +14. Actualmente (marzo 2004)el paciente esta libre de enfermedaad en remisión molecular completa. Otro paciente dae 40 años de edad, se sexo masculino, con diagnóstico de Linfoma linfoblástico con bulky abdominal, de alto riesgo realizó tratamiento poliquimioterápico según protocolo LLA-BOL2000Adulto (adriamicina, vincristina, dexametasona, ciclofisfamida, citarabina, etopósido, metotrexate y prednisona) logrando remisión parcial de bulky abdominal. En julio de 2002 se realizó la obtención de células progenitoras de tejido hematopoyético que fueron congeladas con DMSO a -80°C; seguido de acondicionamiento con protocolo BEAM (BCNU, etopósido, ara-C y melphalan) y reinfusión de 1.9 x10 células mononucleadas por Kg/peso. La recuperación de neutrófilos mayor a 500 /ml se presentó el día +14 y plaquetas mayor a 20.000/ml el día +12. Actualmente después de 21 meses, el paciente se encuentra sano libre de enfermedad.

Estudo randomizado comparativo do transplante alogênico de medula óssea e células progenitora periférica, mobilizada por G-CSF, näo manipulada em neoplasias hematológicas

Resumo: Este é um estudo randomizado, desenvolvido com base alogênica de medula óssea (MO) e aqueles de células progenitoras periféricas (CPP), os quais säo utilizados no tratamento de doenças hematológicas malignas. Para tal, deu-se ênfase à pega, à doença do enxerto contra o hospedeiro (DECH) aguda e crônica, bem como às sobrevidas dos pacientes. De 02/1995 até 10/1997, 40 pacientes receberam um transplante HLA adêntico, originado da MO (grupo A) ou CPP (grupo B). O total de pacientes avaliáveis no final do estudo foi de 19 (gurpo A) e 18 (grupo B), respectivamente. A mediana de idade foi de 35 anos (17-56) no grupo A e 29,5 (9-51) no grupo B (P=0,17). O regime de condicionamento utilizado foi Bu (16)/Cy(120) em 16 pacientes no grupo A e 17 no grupo B; Bu(16)/Cy(120)/VP-16(40) em 3 pacientes no grupo A e Cy (120)/irradiaçäo corporal total (ICT)(13,2Gy) em 1 paciente no grupo B. A profilaxia da DECH utilizada foi ciclosporina (CSP)/Metotrexato em 16 pacientes no grupo A e em pacientes no grupo B; e 3 pacientes receberam CSP/prednisona no grupo A, As CPP foram mobilizadas com G-CSF, 10ug/kg/dia, durante 5 dias e colhidas no quinto dia, em uma única sessäo de aférese, na maioria dos pacientes. O conteúdo mediano de células CD34+x10.6/kg/receptor foi de 5,26(1,19-15,55) no grupo A e 4,71(1,26-71,61) no grupo (P=0,40). A mediana de dias para se atingir o número absoluto de neutrófilos (NAN)>0,5 x 10/foi de 18(13-30) no grupo A e 16(11-25)no grupo B(P=0,15).

Estudio citogenético en médula ósea de 26 casos de leucemia mieloide crónica en pacientes del Hospital San Juan de Dios / Cytogenetic study in Bone Marrow of twenty six cases of Leukemia Myeloid Chronic in patients of the Hospital San Juan de Dios

Se presentan los resultados citogenéticos obtenidos en médula ósea de veintiseis pacientes con leucemia mieloide crónica. Veintiun pacientes fueron tratados, con el medicamento quimioterapéutico convencional, tres con alfa interferón y dos recibieron transplante de médula ósea. Se inicia la importancia de las técnicas citogenéticas en este tipo de paciente y en la valoración de resultados de estos tratamientos.

Aplasia medular y embarazo: presentación de un caso / Aplastic anaemia and pregnancy: presentation a case

La anemia aplásica se caracteriza por la desaparición de los precursores hematopoyéticos de la médula ósea, descenso de los eritrocitos, granulocitos y plaquetas circulantes. Su etiología no puede identificarse en la mayoría de los casos, y sus características clínicas son la consecuencia directa de este déficit de elementos formes sanguíneos. Aunque es extraordinariamente rara en el embarazo, es una grave complicación. El diagnóstico antes del embarazo se asocia con una mayor sobrevida de la madre y de la descendencia. Se trata de paciente de 37 años de edad; VG, IIc, IP, IA. Con embarazo de 35 semanas más cinco días por FUR y ECO-OBST y diagnóstico de aplasia medular desde marzo de 1991 en tratamiento con prednisona 60 mgr/día

Efectos de la osteosíntesis medular sobre la eritropoyesis / Effects of medular osteosynthesis on erithropoiesis

Una preocupación general de los ortopedistas al colocar un clavo intramedular consiste en la lesión de la médula ósea, lo que pudiera afectar la eritropoyesis. Con el propósito de revisar lo anterior, los autores efectuaron osteosíntesis con clavo Colchero intramedular con pernos en 39 pacientes con 23 fracturas (8 de fémur y 15 de tibia), 15 no uniones (3 de fémur y 12 de tibia) y una dismetría congénita de tibia. Para saber si la lesión de la médula ósea afectaba o no la eritropoyesis, se analizó en cada uno de los pacientes el comportamiento de los reticulocitos, precursores de los eritrocitos, encontrando que no sólo no hubo alteración en estas células, sino un aumento en los 15 primeros días, volviendo después a la normalidad. El estudio se dividió en tres etapas: prequirúrgica, quirúrgica y posquirúrgica, ésta última con un seguimiento de 15, 30, 60 y 90 días. Se añadió un grupo control de 60 personas no fracturadas.

Transplante autologo de medula ossea / Autologous bone marrow transplantation

La chimiotherapie a autes doses (CHD) suive d'auto-greffe de moelle osseuse (AGMO) est une technique de traitement antineoplasique quia connu un develeppement important ces dernieres annees. Um certain nombre de principes sont a la base de sa realisation.

Trasplante de médula ósea. Revision de actualidad

El transplante de médula ósea en el humano, tiene como objetivo el proporcionar al receptor un sistema hematopoyético nuevo que funcione permanentemente después de la administración de dosis supraletales de agentes quimiorradioterapéuticos utilizados como condicionamiento o preparación para el trasplante del mismo. El procedimiento debe efectuarse en un receptor que padezca una de las entidades (neoplasias hematológicas o de otro tipo, enfermedades congénitas o adquiridas de la médula ósea) en las cuales ésta plenamente demostrada su utilidad y que disponga de un donante histocompatible. La evidencia de funcionamiento de la nueva médula ósea se obtiene entre 14 y 28 días después de su infusión y en el período de aplasia se debe administrar soporte hematológico, nutricional y antibioticoterapia para mentener al receptor. Dentro de las complicaciones se debe mencionar la "enfermedad del injerto contra el huesped", el rechazo del injerto, la recurrencia de la enfermedad y las infecciones.

Médula anclada: aspectos ortopédicos

Presentamos los resultados ortopédicos de 27 pacientes con síndrome de médula anclada tratados en nuestra práctica hospitalaria y privada. Veinte fueron liberados neuroquirúrgicamente y once recibieron correcciones ortopédicas en miembros y columna. Los resultados expresados en mejoría de síntomas son comparativos con los presentados en la literatura mundial. Enfatizamos la necesidad de un diagnóstico con técnicas actualizadas y la necesidad de un abordaje multidisciplinario