RESUMEN
Actinobacillus pleuropneumoniae is an important primary pathogen in pigs, in which it causes a highly contagious pleuropneumoniae. In our previous study, apxIA gene amplified from A. pleuropneumoniae Korean isolate by PCR with primer designed based on the N- and C-terminal of the toxin was cloned in TA cloning vector and sequenced. The nucleotide sequences of apxIA gene was reported to GeneBank with the accession numbers of AF363361. Identity of the Apx IA from the cloned gene in E. coli was proved by SDS-PAGE and Western blot. Yeast has been demonstrated to be an excellent host for the expression of recombinant proteins with uses in diagnostics, therapeutics and vaccine productions. Therefore, to use the yeast as a delivery system in new oral subunit vaccine, apxIA gene was subcloned into Saccharomyces cerevisiae, and ientified the expression of Apx IA protein. First, apxIA gene was amplified by PCR with the primers containing BamHI and SalI site at each end. Second, the DNA digested with BamHI and SalI was ligated into YEpGPD-TER vector, and transformed into S. cerevisiae 2805. Third, after identification of the correctly oriented clone, the 120-kDa of Apx IA protein expressed in S. cerevisiae 2805 was identified by SDS-PAGE and Western blot.
Asunto(s)
Animales , Actinobacillus pleuropneumoniae/genética , Proteínas Bacterianas/biosíntesis , Western Blotting/veterinaria , Clonación Molecular , ADN Bacteriano/química , Electroforesis en Gel de Poliacrilamida/veterinaria , Proteínas Hemolisinas , Pleuroneumonía Contagiosa/microbiología , Reacción en Cadena de la Polimerasa/veterinaria , Saccharomyces cerevisiae/genética , Porcinos , Enfermedades de los Porcinos/microbiologíaRESUMEN
Actibacillus pleuropneumonia (App) es el agente causal de la pleuroneumonía contagiosa porcina (PCP), este microorganismo puede ser clasificado en 12 serotipos o puede ser no tipificable. Se aislaron 81 cepas de A. Pleuropneumoniae de pulmones neumónicos de cerdo. Todas las cepas fueron serotipificadas por coagulación (CoA) y hemoaglutinación indirecta (HI), 43 cepas (53 por ciento) fueron clasificadas en el mismo serotipo por las dos técnicas, 31 correspondieron al serotipo 1, nueve al serotipo 5 y una de los serotipos 3, 4 y 6. Catorce cepas poliaglutinaron al usar CoA, pero fueron clasificadas en el serotipo 1 por la HI. El 13 por ciento de las cepas fueron clasificadas en diferente serotipo por cada una de las pruebas usadas. Finalmente, 13 cepas fueron no tipificables por la HI y clasificadas en diferentes serotipos por la CoA. Se sugiere el uso de la CoA para la tipificación rutinaria, mientras que la HI se recomienda para la identificación final de los aislamientos. En relación con los serotipos identificados, los resultados de esta investigación coinciden con lo registrado por otros autores, ya que de 81 cepas, 45 correspondieron al serotipo 1, y nueve al serotipo 5; lo que confirma que estos dos serotipos son los más frecuentemente aislados en México