Eficiência de duas técnicas de recuperação de espermatozoides epididimários de cães e avaliação seminal pós-criopreservação / [Efficiency of two techniques for recovering epididymal spermatozoids from dogs and seminal evaluation post cryopreservation]

O objetivo deste trabalho foi avaliar a recuperação de espermatozoides epididimários de cães castrados, utilizando as técnicas de fluxo retrógrado (FR) e flutuação (FL) em diluidor Tris-gema, antes e após a criopreservação. Foram coletados 30 complexos testículo-epididímos (CTE), sendo 15 para FR e 15 para FL, e, logo após a recuperação dos espermatozoides, foram analisadas as alterações morfológicas nessas células espermáticas. Após a adição do diluidor, foram avaliados os parâmetros de motilidade total (MOT) e vigor (V) espermáticos. O sêmen pós-criopreservado foi submetido ao teste de termorresistência nos tempos T0, T30, T60 e T90 minutos, além da avaliação das membranas plasmática e acrossomal por sondas fluorescentes. Não houve diferença estatística entre as técnicas quanto à MOT e ao vigor no sêmen diluído (FR-MOT: 82,3% e V: 3,4; FL-MOT: 79,6% e V: 3,2) e pós-criopreservado (FR-MOT: 34% e V: 2,8; FL-MOT: 30% e V: 2,7). A partir do T30, houve diferença significativa quanto à MOT e ao vigor nas técnicas utilizadas, e o tempo também prejudicou o acrossoma espermático a partir do T30. Conclui-se que as técnicas de recuperação de espermatozoides epididimários de cães castrados, testadas neste trabalho, podem ser utilizadas para refrigeração e criopreservação de sêmen.(AU)

The objective of this work was to evaluate the recovery of epididymal spermatozoa from castrated dogs using retrograde flow (FL) and flotation (FL) techniques in Tris-egg yolk diluent, before and after cryopreservation. Thirty testicle-epididymal complexes (CTE) were collected, 15 for FR and 15 for FL and soon after spermatozoid recovery, morphological changes in these spermatic cells were analyzed. After addition of the diluent, the parameters of total motility (MOT) and vigor (V) were evaluated. The post-cryopreserved semen was submitted to thermoresistance (TTR) test at T0, T30, T60 and T90 minutes, as well as the plasma and acrosomal membrane evaluation by fluorescent probes. There was no statistically significant difference between techniques tested for MOT and vigor in the diluted semen (FR-MOT: 82.3% and V: 3.4, FL-MOT: 79.6% and V: 3.2) and post-cryopreserved (FR-MOT: 34% and V: 2.8, FL-MOT: 30% and V: 2.7). From the T30 there was a significant difference regarding MOT and vigor in the used techniques, and the time also damaged the spermatic acrosome from the T30. It is concluded that the epididymal spermatozoa recovering techniques from castrated dogs, tested in this study, can be used for semen refrigeration and cryopreservation.(AU)

Effect of sperm selection techniques in frozen/thawed cat spermatozoa on sperm motility analyzed by CASA system / Efecto de técnicas de selección espermática en espermatozoides congelados/descongelados de gato sobre la motilidad espermática analizada mediante sistema CASA

SUMMARY: Freeze/thawing process reduces sperm survival and fertilizing ability of cat spermatozoa, with sperm motility being the most sensitive sperm parameter altered, due to cryo-damage. In this context, swim-up and density gradient processing methods can help to recover high motile and normal spermatozoa. Maximizing the use of frozen semen sample is essential, especially in endangered felids or high value cats in which sample size, number of samples or access to semen collection is reduced. To our knowledge, there is no previous report describing an in depth analysis of sperm motility improvement, after sperm selection techniques in frozen cat semen. Accordingly, we evaluated the effect of percoll gradient (PG) and swim up (SU) sperm selection techniques on sperm motility parameters and sperm recovery rate in frozen/thawed spermatozoa of domestic cat. Next, we evaluated the individual effect of the cat over sperm motility after PG sperm selection of frozen/thawed spermatozoa. SU and PG improved significantly all sperm motility parameters of frozen/thawed cat spermatozoa compared to simple washing. However, PG allows better sperm recovery from the original frozen sample and works mostly homogeneously among individual cats. This new information could help to maximize the use of frozen semen in endangered felids or high value domestic cats for its subsequent application on in vitro fertilization and artificial insemination.

RESUMEN: El proceso de congelación/descongelación reduce la sobrevivencia espermática y la habilidad para fertilizar en los espermatozoides de gato, siendo la motilidad espermática el parámetro más sensiblemente alterado debido al daño por frío. En este contexto, los métodos de procesamiento de swim-up y gradiente de densidad pueden ayudar a recuperar los espermatozoides normales y de alta motilidad. Maximizar el uso de una muestra de semen congelado es esencial, especialmente en felinos amenazados o en gatos de alto valor en los cuales el tamaño de muestra, número de muestras o el acceso a la colecta de semen son reducidos. Para nuestro conocimiento, no hay reportes previos que describan un análisis profundo del mejoramiento de la motilidad luego de técnicas de selección espermática en semen congelado de gato. De acuerdo a esto, evaluamos el efecto de las técnicas de selección espermática gradiente de percoll (PG) y swim up (SU) sobre los parámetros de motilidad y porcentaje de recuperación de espermatozoides congelados/descongelados de gato doméstico. Luego, evaluamos el efecto individual del gato sobre la motilidad espermática luego de la selección espermática con PG en espermatozoides congelados/descongelados. SU y PG mejoraron significativamente todos los parámetros de motilidad espermática de los espermatozoides congelados/descongelados comparado con el lavado simple. Sin embargo, PG permitió una mejor recuperación de espermatozoides desde la muestra congelada original y funcionó en su mayoría de manera homogénea entre los gatos individualmente. Esta nueva información puede ayudar a maximizar el uso del semen congelado en felinos amenazados o en gatos de alto valor para su posterior aplicación en fecundación in vitro e inseminación artificial.

Kinematic and spermatic recovery after selection by centrifugation in colloid solutions of ovine cryopreserved semen / Cinética e recuperação espermática após seleção por centrifugação em soluções coloidais de sêmen ovino criopreservado

Frozen and thawed ovine semen undergo morphological and functional changes that prevent or decrease the efficiency of fertilization. Sperm selection methods seek to improve the quality and viability of the fertilizing materials. Four sperm selection methods were employed, using two silica colloidal solutions coated with silane (silica colloidal-silane) or by polyvinylpyrrolidone (silica colloidal-PVP), and varying the volume of colloidal solution. Sperm kinematic and sperm recovery were evaluated by means of CASA. The protocols using silica colloidal-silane showed higher total motility (TM), progressive motility (PM) and percentage of rapid sperm (%RAP) compared to the methods employing silica colloidal-PVP and to the samples prior to sperm selection. The silica colloidal-PVP had greater sperm recovery compared to the silica colloidal-silane. Only the method using 4mL of silica colloidal-PVP was not efficient in selecting samples with better quality compared to the samples analyzed prior to sperm selection. The methods using lower volumes of colloidal solution did not differ from those using higher volumes and the best results were shown by the method with 1mL silica colloidal-silane. The results found in the study indicated greater efficiency of the silica colloidal-silane solution for sperm selection of thawed ovine semen when compared to selection using silica colloidal-PVP. The method using 1mL of silica colloidal-silane was equally efficient to the method with higher volume, presenting itself as an alternative to process samples with lower sperm concentration.(AU)

O sêmen ovino congelado e descongelado sofre alterações morfofuncionais que impossibilitam ou diminuem a eficiência na fecundação. Os métodos de seleção espermática visam melhorar a qualidade e a viabilidade do material fecundante. Foram utilizados quatro métodos de seleção espermática utilizando duas soluções de sílica coloidal revestida por silano (sílica coloidal-silano) ou por polivinilpirrolidona (sílica coloidal-PVP), variando o volume de solução coloidal. Foram testadas a cinética espermática no CASA e a recuperação espermática. Os protocolos utilizando sílica coloidal-silano apresentaram maior motilidade total (MT), motilidade progressiva (MP) e porcentagem de espermatozoides rápidos (% RAP) quando comparados aos métodos utilizando a sílica coloidal-PVP e às amostras antes da seleção espermática. A sílica coloidal-PVP teve maior recuperação espermática quando comparada à sílica coloidal-silano. Somente o método utilizando 4mL de sílica coloidal-PVP não foi eficiente na seleção de amostras com melhor qualidade quando comparado às amostras analisadas antes da seleção espermática. Os métodos utilizando menores volumes de solução coloidal não diferiram dos métodos de maior volume, sendo a sílica coloidal-silano com 1mL o método que apresentou os melhores resultados. Como conclusão, os resultados encontrados no trabalho apontaram a maior eficiência da sílica coloidal-silano em selecionar sêmen ovino congelado e descongelado quando comparado à seleção em sílica coloidal-PVP. O método utilizando 1mL de sílica coloidal-silano foi igualmente eficiente ao método com maior volume, sendo uma alternativa para processar amostras com baixa concentração espermática.(AU)

Biometria testicular, eletroejaculação e características seminais de caititus, Tayassu tajacu Linnaeus, 1758 (Mammalia, Artiodactyla, Tayassuidae) mantidos em cativeiro na Amazônia Oriental / Testicular biometry, electroejaculation and seminal features of captive collared peccaries (Tayassu tajacu Linnaeus, 1758, Artiodactyla, Tayassuidae) raised in the Eastern Amazon

Estudos relacionados à obtenção e avaliação de sêmen de Tayassu tajacu são escassos, sendo necessárias pesquisas a respeito. Os objetivos do estudo foram avaliar a biometria testicular de caititus adultos cativos, testar a eficiência da eletroejaculação para obtenção de sêmen e avaliar suas características seminais ao longo do ano. Procedeu-se à eletroejaculação em oito animais adultos e as amostras de sêmen colhidas foram avaliadas quanto às características físicas e morfológicas. Os animais tinham testículo esquerdo com 3,8 ± 0,4 cm X 2,6 ± 0,3 cm e 2,3 ± 0,2 de consistência, e testículo direito com 3,8 ± 0,5 cm X 2,7 ± 0,3 cm e 2,3 ± 0,2 de consistência. A taxa de sucesso nas colheitas foi de 75,21%. O sêmen possuiu: volume 0,81 ± 0,86 mL, concentração 137,44 ± 153 x 106 sptz mL-1, pH 7,92 ± 0,73, motilidade 52,66 ± 28,79%, vigor 2,2 ± 0,8, integridade de membrana plasmática 55,84 ± 28,55%, defeitos maiores 22,87 ± 12,93%, defeitos menores 9,11 ± 5,88% e defeitos totais 31,52 ± 13,81%. Os animais apresentaram simetria testicular, a eletroejaculação se mostrou eficiente para a obtenção de ejaculados em caititus e as flutuações observadas na produção seminal não foram suficientes para caracterizá-los como animais de reprodução sazonal.

Research development in semen collection and sperm evaluation of Tayassu tajacu are necessary. The aims of this research were to evaluate testicular biometry of captive collared peccaries, test electroejaculation for semen collection and evaluate seminal characteristics during the year. Eight animals were submitted to electroejaculation and semen samples were evaluated according their physical and morphological characteristics. Left testicles measured 3.8 ± 0.4 cm X 2.6 ± 0.3 cm and presented 2.3 ± 0.2 of consistence, while right testicles were 3.8 ± 0.5 cm X 2.7 ± 0.3 cm and presented 2.3 ± 0.2 of consistence. Success rate on semen collections achieved 75.21%. Semen presented 0.81 ± 0.86 mL (volume), 137.44 ± 153 x 106 sptz mL-1 (sperm concentration), 7.92 ± 0.73 (pH), 52.66 ± 28.79% (sperm motility), 2.2 ± 0.8 (vigour), 55.84 ± 28.55% (plasmatic membrane integrity), 22.87 ± 12.93% (primary defects), 9.11 ± 5.88% (secondary defects) and 31.52 ± 13.81% (overall defects). Seminal characteristics showed no expressive variation along the year. Testicular symmetry was observed, electroejaculation was an efficient method to semen collection and slight mensal oscillations of seminal quality were not enough to characterize collared peccaries as seasonal reproductive animals.