Effect of doses and administration routes of 9R vaccine on protection of Japanese quails against experimental infection with Salmonella Gallinarum / Efeito das doses e vias de administração da vacina 9R na proteção de codornas japonesas contra infeccção experimental com Salmonella Gallinarum

Coturniculture has increased significantly in the last decades. There are several pathogens that can affect these birds. Among the diseases, fowl typhoid stands out as a disease with a potentially great impact to the poultry industry. The objective of this the study was to evaluate the effect of doses and administration routes of live 9R vaccine on protection of Japanese quails against experimental infection with Salmonella Gallinarum (SG). Two hundred and fifty birds were used, divided into five groups: G1, oral vaccination with one dose; G2, oral vaccination with 2 doses; G3, subcutaneous vaccination with one dose; G4, subcutaneous vaccination with two doses and G5 not vaccinated. All birds from all five groups were challenged with SG at an age of 45 days. SG was quantified in the periods of one, four, seven and twelve days after the challenge. The presence of clinical signs and macroscopic lesions of the disease were observed. The groups vaccinated by subcutaneous route had a higher egg production and lower mortality rate. Birds receiving a dose of the vaccine by subcutaneous route also showed lower amount of SG in the liver and spleen seven days after the challenge.(AU)

A coturnicultura tem aumentado significativamente nas últimas décadas. Existem vários patógenos que podem afetar essas aves. Entre as doenças, o tifo aviário se destaca como uma doença de grande impacto para a indústria avícola. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito de doses e vias de administração da vacina viva 9R na proteção de codornas japonesas contra infecção experimental por Salmonella Gallinarum (SG). Foram utilizadas duzentos e cinquenta aves, divididas em cinco grupos: G1, vacinação oral com uma dose; G2, vacinação oral com 2 doses; G3, vacinação subcutânea com uma dose; G4, vacinação subcutânea com duas doses e G5 não vacinado. Todas as aves dos cinco grupos foram desafiadas com SG aos 45 dias de idade. A SG foi quantificada nos períodos de um, quatro, sete e doze dias após o desafio. Foi observada a presença de sinais clínicos e lesões macroscópicas da doença. Os grupos vacinados por via subcutânea apresentaram maior produção de ovos e menor taxa de mortalidade. Aves recebendo uma dose da vacina por via subcutânea também apresentaram menor quantidade de SG no fígado e baço sete dias após o desafio.(AU)

Genes de virulência e diversidade genética em Salmonella spp. isoladas de amostras de origem suína / Virulence genes and genetic diversity in Salmonella spp. isolated from samples of swine origin

A diversificação da produção industrial de alimentos de origem suína e o intercâmbio comercial de animais e seus derivados destinados ao consumo humano podem ser importantes disseminadores de sorovares de Salmonella spp. na cadeia alimentar. Objetivou-se avaliar em 86 cepas de Salmonella spp., isoladas em granja de terminação e no abate de suínos, a ocorrência de três genes de virulência (invA, agfA e lpfA), bem como a similaridade genética entre elas. A ocorrência do gene invA foi verificada em 100% das amostras. O gene lpfA foi detectado em 80,23% (69/86) das cepas, não foi detectado em S. Panama e estava presente em todas as cepas de S. Infantis. O gene agfA foi detectado em 63,95% (55/86) das amostras. S. Agona apresentou positividade para todos os genes de virulência estudados. A análise de homologia entre as cepas agrupou os diferentes sorovares em clusters. A similaridade foi independente do local de isolamento, o que demonstra a presença de clones ao longo da cadeia de produção e a existência de multiplicidade de fontes para a infecção dos animais, como a ração, e a contaminação cruzada das carcaças. A pesquisa de genes de virulência e a avaliação da proximidade gênica permitem a caracterização e um maior entendimento sobre cepas de Salmonella circulantes na cadeia produtiva de suínos e, assim, podem subsidiar medidas de controle durante o processo produtivo com o objetivo de garantir a saúde do consumidor...

The diversification of industrial food production of swine origin and trade of animals and their derivatives for human consumption may be important disseminators of serovars of Salmonella spp. in the food chain. This study aimed to evaluate 86 strains of Salmonella spp. isolated form in the finishing and slaughter of pigs, the occurrence of three virulence genes (invA, agfa and lpfA), as well as the genetic similarity between them. The occurrence of gene invA was observed in 100% of the samples. The gene lpfA was detected in 80.23% (69/86) strains and is not detected in S. Panama, but present in all strains of S. Infantis. The gene agfA was detected in 63.95% (55/86). S. Agona was positive for all virulence genes studied. The analysis of homology between the different serovars grouped the isolates in clusters. The similarity was regardless of the location of isolation, demonstrating the presence of clones along the production chain and that there are multiple sources for the infection of animals, such as feed, and cross-contamination of carcasses. A survey of virulence genes and evaluation of gene proximity allow characterization and better understanding of Salmonella strains circulating in the pig production chain, thus being able to support control measures during the production process in order to ensure consumer health...

Regulatory T-cell vaccination independent of auto-antigen

To date, efforts to treat autoimmune diseases have primarily focused on the disease symptoms rather than on the cause of the disease. In large part, this is attributed to not knowing the responsible auto-antigens (auto-Ags) for driving the self-reactivity coupled with the poor success of treating autoimmune diseases using oral tolerance methods. Nonetheless, if tolerogenic approaches or methods that stimulate regulatory T (Treg) cells can be devised, these could subdue autoimmune diseases. To forward such efforts, our approach with colonization factor antigen I (CFA/I) fimbriae is to establish bystander immunity to ultimately drive the development of auto-Ag-specific Treg cells. Using an attenuated Salmonella vaccine expressing CFA/I fimbriae, fimbriae-specific Treg cells were induced without compromising the vaccine's capacity to protect against travelers' diarrhea or salmonellosis. By adapting the vaccine's anti-inflammatory properties, it was found that it could also dampen experimental inflammatory diseases resembling multiple sclerosis (MS) and rheumatoid arthritis. Because of this bystander effect, disease-specific Treg cells are eventually induced to resolve disease. Interestingly, this same vaccine could elicit the required Treg cell subset for each disease. For MS-like disease, conventional CD25+ Treg cells are stimulated, but for arthritis CD39+ Treg cells are induced instead. This review article will examine the potential of treating autoimmune diseases without having previous knowledge of the auto-Ag using an innocuous antigen to stimulate Treg cells via the production of transforming growth factor-beta and interleukin-10.

Paralelos entre métodos fenotípicos, imunológicos e genotípicos para detecção rápida de Salmonella spp em matrizes alimentares sem contaminção experimental: avaliação em condições reais e simultâneas de uso / Parallels between phenotypic, genotypic and immunological methods for rapid detection of Salmonella spp in non-contaminated food matrices: evaluation in real conditions of use

Salmonella spp é um dos microrganismos patogênicos de relevância em alimentos. Sua detecção em alimentos por metodologia de cultura é trabalhosa e demorada, o que explica a grande variedade de sistemas automatizados e kits para detecção rápida desse patógeno existentes no mercado. Muitos desses métodos alternativos são validados por organizações internacionalmente reconhecidas, mas tais validações têm sido efetuadas em condições laboratoriais artificiais e com matrizes alimentares experimentalmente contaminadas, dificilmente refletindo a realidade de um laboratório de rotina de análises microbiológicas de alimentos. Nesse trabalho, avaliou-se o desempenho de sete métodos rápidos alternativos genotípicos e imunológicos, usados simultaneamente para detecção de Salmonella spp em 244 amostras de alimentos sem contaminação experimental, empregando o método de cultura ISO 6579:2002 como método de referência. Os métodos avaliados foram BAX Salmonella, VIDAS Salmonella, Transia Plate Salmonella Gold, VIP Salmonella, TECRA UNQUIQUE SALMONELLA, Singlepath Salmonella e 1-2 Test. O nível de detecção para cada método também foi-determinado. O método de referência detectou 50 amostras (20,5%) positivas para Salmonella spp. Nas condições em que o trabalho foi realizado, a porcentagem de concordância dos resultados positivos obtidos pelos métodos alternativos avaliados, em relação aos obtidos pelo método ISO 6579:2002 variou de 42,3% a 100%, dependendo do método avaliado e da matriz alimentar analisada...

Monoclonal antibody-based dot-blot ELISA for the detection of Salmonella in foods.

Monoclonal antibody (MAb) produced to polysaccharides in the LPS molecule of salmonellae was used in a dot-blot ELISA for detecting Salmonella in 873 food samples, ie 100 fresh chicken, 261 frozen chicken, 78 pork, 84 beef, 100 hen eggs, 100 duck eggs, 50 sea-mussels, 50 shrimps and 50 squids in comparison with the conventional culture method. Salmonella culture from foods involved the following steps: pre-enrichment, enrichment in selective medium, isolation on selective and indicator media, followed by biochemical and serological identification of appropriate colonies, respectively. The whole culture procedure took 5 days. Food samples from the selective enrichment medium were also subjected to the MAb-based dot-blot ELISA. The whole procedure of dot-blot ELISA took less than 2 hours. Among 873 food samples, salmonellae could be recovered from 7.4% of the samples by the bacterial isolation method (16% of fresh chicken, 8.8% of frozen chicken, 24.4% of pork, 3.6% of beef and 2% each of hen eggs and duck eggs, respectively). Salmonella derby were predominant among pork samples while S.paratyphi B biovar java predominated in chicken. The MAb-based dot-blot ELISA were positive in 19.5% of the food samples, i.e. 30% of fresh chicken, 27.6% of frozen chicken, 34.6% of pork, 21.4% of beef, 20% of shrimp, 16% of sea-mussels, 2% of hen eggs and 4% of duck eggs. The sensitivity and specificity of the MAb-based dot-blot ELISA compared to the bacterial culture method were 81.5% and 85%, respectively. The discrepancy of the data between the culture method and the dot-blot ELISA might be due to the fact that the culture method could detect only living cells at numbers that gave at least one isolated colony on the selective/differential plate while the dot-blot ELISA detects any form of Salmonella antigen. The monoclonal antibody-based dot-blot ELISA offers several advantages over the conventional bacterial culture method when it is used for screening of Salmonella contamination in foods, especially export foods. These include rapidity, cost-effectiveness and simplicity (the dot-blot ELISA does not need highly trained personnel or equipment, in contrast to the culture method). The test can be performed in field conditions and the result can be read visually. It also offers multisample analysis at one time which renders more samples of food for screening possible, thus false negative results are fewer which, in turn, assures the quality of the export food in a cost-saving, short time frame.

Monoclonal antibodies against protein antigens of salmonellae causing paratyphoid fever and their diagnostic application.

Hybrid clones producing monoclonal antibodies (MAbs) specific for Salmonella paratyphi A (72 clones), S. paratyphi B (9 clones) and S. paratyphi C (8 clones) were produced by using the affinity purified Salmonella protein (Bp) as immunogens. MAbs to S. paratyphi A and S. paratyphi B reacted specifically with the 52 kDa homologous flagellin protein components while those to S. paratyphi C reacted with a 61 kDa flagellin protein component. The MAbs against S. paratyphi A and S. paratyphi B were used to establish a double antibody sandwich ELISA for detection of the 52 kDa flagellin antigens in serum samples from patients with acute paratyphoid A and paratyphoid B fever. With this assay system, 6.25 ng per ml of flagellin antigens of S. paratyphi A and S. paratyphi B could be detected. However, the assay system could not detect the flagellin antigens in patients' sera. The presence of IgM antibodies to the 52 kDa antigens of S. paratyphi A and S. paratyphi B in the acute sera from paratyphoid A or paratyphoid B patients suggested that the 52 kDa protein components of both salmonellae are good immunogens for human and might be used as antigens for early diagnosis of paratyphoid A and paratyphoid B fever.

Imunoensaios enzimáticos aplicados à detecçäo de Salmonella em alimentos / Enzyme immunoassays applied for detection of Salmonella in food

O desenvolvimento dos imunoensaios enzimáticos (ELISA) aplicados à detecçäo de Salmonella em alimentos foi revisto, com ênfase sobre os pontos críticos que podem afetar o desempenho e aceitaçäo do método, tais como: produçäo de anti-soros policlonais e monoclonais anti-Salmonella, tipos de ELISA aplicados à detecçäo de Salmonella, sensibilidade e técnica de elevaçäo, Kits disponíveis e situaçäo oficial do método atualmente

Estudio comparativo entre el uso del método de Spicer-Edwards y la relación de coaglutinación para identificación de antígenos de Salmonella / Comparative study between Spicer-Edwards method and a coagglutination method to detect Salmonella antigen

Se realizó un estudio comparativo para la identificación de antígenos flagelares de Salmonella empleando el método de aglutinación en tubo con sueros de Spicer-Edwards y la reacción de coaglutinación utilizando proteína A de Staphylococcus aureus Cowan 1 (NCTC 8530). Se tipificaron por ambos métodos 39 serotipos de Salmonella pertenecientes a ocho serogrupos del esquema antigénico de Kauffman-White. Cada uno de los serogrupos incluía salmonelas de los diferentes serotipos monofásicos y bifásicos. El análisis estadístico de los resultados demostró que la reacción de coaglutinación tuvo mayor sensibilidad y especificidad para la detección de antígenos flagelares que la reacción clásica de aglutinación en tubo. El uso de menor cantidad de antisueros para detectar antígenos de Salmonella sin pérdida de sensibilidad y/o especificidad en la prueba de coaglutinación representa un ahorro importante para laboratorios clínios y de investigación epidemiológica que requieren de la identificación de estos microorganismos

Antigen sharing of Salmonella typhi non-flagellar proteins with other salmonellae and some shigellae and Escherichia coli.

Cathodal moving protein components were identified in agarose gel electrophoresis of the Veronal buffer extract of a non-motile strain of S. typhi (8393, Colindale). Rabbit antiserum was raised against these cationic proteins; it had both agglutinating and precipitating activity. A total of 80 salmonella strains belonging to serogroups A, B, C1, C2, D, E1 and E2 including 26 S. typhi and 10 S. paratyphi A were tested against this antiserum in a slide agglutination test; all strains were agglutinated. Among 94 other bacterial strains tested, the antiserum agglutinated all 16 strains of Shigella flexneri, 2 of 5 Shigella sonnei, 5 of 34 E. coli and 1 of 8 Citrobacter species. These results show that there is antigenic sharing of the non-flagellar proteins of S. typhi with many other salmonellae as well as with some shigellae and E. coli.

Análise microbiológica de misturas prontas destinadas ao tempero de alimentos (tempero pronto) / Microbiological quality of ready-to-use food seasonings

Cinquenta amostras de misturas prontas destinadas ao tempero de alimentos, denominadas "Tempero pronto", a venda nos supermercados da cidade de Säo Paulo, foram submetidas a análise microbiológica para verificaçäo da presença de bactérias causadoras de toxinfecçöes alimentares e para determinaçäo dos níveis de contaminaçäo por microrganismos deteriorantes. Estes produtos säo compostos principalmente de cebola, alho, tomate, óleo, salsinha, pimentäo e diversos condimentos (sal, pimenta do reino, orégano, entre outros). Em nenhuma das amostras foi detectada a presença de Salmonella sp, Staphylococcus aureus, Escherichia coli (como também coliformes fecais) e clostrídios sulfito-redutores. Bacillus cereus e bolores e leveduras foram detectados em 5 amostras, em níveis inferiores a 300 UFC/g. Bactérias esporulantes anaeróbias também näo foram observadas. As bactérias esporulantes anaeróbias também näo foram observadas. As bactérias aeróbias mesófilas variaram entre 10**1 e 10**5 UFC/g, as bactérias aeróbias termófilas e as bactérias esporulantes aeróbias mesófilas entre 10**1 e 10**4UFC/g