The direct and indirect effects of the pneumococcal conjugated vaccine on carriage rates in children aged younger than 5 years in Latin America and the Caribbean: a systematic review / Efeitos diretos e indiretos da vacina pneumocócica conjugada no estado de portador em crianças menores de 5 anos, na América Latina e no Caribe: uma revisão sistemática

ABSTRACT Objective To demonstrate the impact of pneumococcal conjugate vaccine in Streptococcus pneumoniae carriage status in children younger than 5 years in Latin America and the Caribbean. Methods A systematic literature review was carried out on the direct and indirect effects of pneumococcal vaccine in the carriage status, after implementation in childhood immunization programs. Studies carried out in children younger than 5 years were selected from the PubMed® and Virtual Health Library databases, and data collected after implementation of pneumococcal vaccine in Latin America and the Caribbean, between 2008 and 2018. Results From 1,396 articles identified, 738 were selected based on titles and abstracts. After duplicate removal, 31 studies were eligible for full-text reading, resulting in 6 publications for analysis. All selected publications were observational studies and indicated a decrease in the carriage and vaccine types, and an increase in the circulation of non-vaccine serotypes, such as 6A, 19A, 35B, 21 and 38. We did not identify changes in the antimicrobial resistance after vaccine implementation. Conclusion A decrease in the carriage status of vaccine types and non-vaccine types was detected. The continuous monitoring of pneumococcal vaccine effect is fundamental to demonstrate the impact of the carriage status and, consequently, of invasive pneumococcal disease, allowing better targeting approaches in countries that included pneumococcal vaccine in their immunization programs. Our study protocol was registered in PROSPERO (www.crd.york.ac.uk/prospero) under number CRD42018096719.

RESUMO Objetivo Demonstrar o impacto das vacinas pneumocócicas conjugadas no estado de portador de Streptococcus pneumoniae em crianças menores de 5 anos na América Latina e no Caribe. Métodos Foi realizada revisão sistemática da literatura sobre os efeitos diretos e indiretos da vacina pneumocócica no estado de portador em crianças menores de 5 anos, após a implantação da vacina nos calendários de imunização infantil. A partir de dados da PubMed®e da Biblioteca Virtual da Saúde, foram selecionados estudos de portador em crianças menores de 5 anos, com dados coletados após implementação da vacina de 2008 a 2018, na América Latina e no Caribe. Resultados Dos 1.396 artigos identificados, 738 foram selecionados mediante leitura de títulos e resumos. Após a extração dos duplicados, 31 foram elegíveis para leitura do texto completo, restando 6 artigos para análise. Todos os estudos selecionados eram observacionais e indicavam diminuição do portador e tipos vacinais, e aumento da circulação de sorotipos não vacinais, como 6A, 19A, 35B, 21 e 38. Não foi observada alteração na resistência antimicrobiana após a introdução da vacina. Conclusão Detectou-se redução no estado de portador, dos tipos vacinais e não vacinais. O monitoramento contínuo do efeito das vacinas pneumocócicas é fundamental, para demonstrar o impacto do estado de portador e, consequentemente, da doença pneumocócica invasiva, permitindo o melhor direcionamento nas ações em saúde para os países que incluíram a vacina no calendário de imunização. Nosso protocolo de estudo foi registrado no PROSPERO (www.crd.york.ac.uk/prospero) sob o número CRD42018096719.

Performance evaluation of an indirect immunofluorescence kit for the serological diagnosis of dengue / Avaliação do desempenho de kit de imunofluorescência indireta para o diagnóstico sorológico de dengue

ABSTRACT Objective: To evaluate the performance of indirect immunofluorescence for serological diagnosis of dengue virus in a population with high prevalence of arboviruses. Methods: Two-hundred serum samples from patients with clinical suspicion of dengue fever were tested by immunoenzymatic and indirect immunofluorescence assay BIOCHIP® mosaic. Specificity, sensitivity and Kappa coefficient were calculated. Discordant samples were tested by polymerase chain reaction for confirmation. Results: Of the 200 samples, 20% were positive and 80% negative for anti-dengue virus IgM antibodies in the immunoenzymatic test. Of the 40 positives, 25% were negative in indirect immunofluorescence. Of these ten discordant results, only 20% were also negative in the polymerase chain reaction (PCR). Of the 160 negatives in the immunoenzymatic test, 5% were positive in indirect immunofluorescence. Of these nine discordant results, 33% were positive in the PCR. The Kappa coefficient was 0.7 (0.572-0.829). Sensitivity and specificity of indirect immunofluorescence were respectively 75% and 94%. For anti-dengue virus IgG antibodies, of the 200 samples, 15.5% were positive and 84.5% were negative in the immunoenzymatic test. Of the 31 positives, 12.9% were negative in indirect immunofluorescence. Of these four discordant results, 25% were negative in the PCR. Of the 169 negatives, 8% were positive in indirect immunofluorescence. Of these 14 discordant results, 64% were also positive in the PCR. The Kappa coefficient was 0.695 (0.563-0.83). Sensitivity and specificity of indirect immunofluorescence were 87.1% and 91.7%, respectively. Conclusion: For diagnosis of acute infection, the immunoenzymatic test is enough, and the use of additional methods is not warranted. Replacing the immunoenzymatic test by indirect immunofluorescence would compromise the sensitivity for IgM. However, indirect immunofluorescence can distinguish three arboviruses simultaneously, an advantage during concomitant epidemics.

RESUMO Objetivo: Avaliar o desempenho da imunofluorescência indireta no diagnóstico sorológico de dengue em uma população com alta prevalência de arboviroses. Métodos: Duzentas amostras de soro de pacientes com suspeita clínica de dengue foram testadas por ensaio imunoenzimático e imunofluorescência indireta mosaico BIOCHIP®. Foram calculados especificidade, sensibilidade e coeficiente Kappa. Nas amostras discordantes, realizou-se reação em cadeia da polimerase como método confirmatório. Resultados: Das 200 amostras, 20% foram positivas e 80% negativas para IgM antivírus da dengue no ensaio imunoenzimático. Das 40 positivas, 25% foram negativas na imunofluorescência indireta. Destas dez negativas, apenas 20% eram também negativas na reação em cadeia da polimerase. Das 160 negativas no ensaio imunoenzimático, 5% foram positivas na imunofluorescência indireta. Por fim, dentre as nove discordantes, 33% tiveram vírus da dengue detectado na reação em cadeia da polimerase. O coeficiente Kappa foi 0,70 (0,57-0,82). Sensibilidade e especificidade por imunofluorescência indireta foram, respectivamente, 75% e 94%. Para IgG antivírus da dengue, de 200 amostras, 15,5% foram positivas e 84,5% negativas no ensaio imunoenzimático. Das 31 positivas, 12,9% foram negativas na imunofluorescência indireta. Destas quatro discordantes, 25% apresentaram vírus da dengue não detectado na reação em cadeia da polimerase. Das 169 negativas, 8% foram positivas na imunofluorescência indireta. Destas, 64% foram positivas também na reação em cadeia da polimerase. O coeficiente Kappa foi 0,695 (0,56-0,83). Sensibilidade e a especificidade por imunofluorescência indireta foram, respectivamente, 87,1% e 91,7%. Conclusão: Ensaio imunoenzimático seria suficiente para diagnóstico sorológico de infecção aguda, não justificando a incorporação da imunofluorescência indireta. Substituir ensaio imunoenzimático pela imunofluorescência indireta poderia comprometer a sensibilidade para IgM. Contudo, a imunofluorescência indireta auxilia diferenciar três arboviroses simultaneamente, sendo vantajoso em epidemias concomitantes.

Primer Consenso Argentino para la Estandarización de la Determinación de Anticuerpos Anti-Nucleares por Inmunof uorescencia Indirecta-HEp-2 / First Argentine Consensus for Standardization of Antinuclear Antibodies by Indirect Immunofluorescence-HEp-2 / Primeiro Consenso Argentino para a Padronizagáo da Determinagáo de Anticorpos Antinucleares por Imunofluorescéncia Indireta-HEp-2

La presencia de anticuerpos antinucleares (AAN) es el denominador común de muchas enfermedades autoinmunes sistémicas y su significancia clínica depende de la metodología utilizada en su determinación. En la actualidad, la inmunofluorescencia indirecta (IFI) utilizando células HEp-2 como sustrato es la técnica más usada. Siendo un procedimiento subjetivo se deben optimizar los métodos de estandarización de las distintas variables involucradas, para asegurar la calidad de los resultados obtenidos. El uso de este sustrato permite la descripción no sólo de patrones de fluorescencia nucleares sino también citoplasmáticos y de diferentes organelas. El 29 de agosto de 2008 se llevó a cabo en Buenos Aires el Primer Consenso Argentino para la Estandarización de la Determinación de AAN por IFI-HEp-2, con la participación de 28 expertos. Se discutieron los aspectos metodológicos más importantes y se decidió llamar a la determinación "anticuerpos anti núcleo-citoplasmáticos". Se consensuó la sigla representativa de la determinación, el nombre en español de los diferentes patrones y el uso de controles de calidad internos y externos. La unificación de criterios llevará a la optimización de los resultados y a su correcta interpretación.

Antinuclear antibodies (ANA) are a common feature of many systemic autoimmune diseases. Their clinical significance depends on working conditions. Nowadays, indirect immunofluorescence (IFI), using HEp-2 cells as substrate, is the most used assay. Since IFI is a subjective method, different variables should be strictly standardized to assure the quality of the results. By using HEp-2 cells, not only a nuclear fluorescent pattern will be described but also cytoplasmic and different organelle patterns. In order to standardize the operative procedures, the 1st Argentine Consensus for AAN IFI HEp-2 determination took place in Buenos Aires on August 29, 2008, with 28 experts as participants. The most important methodological aspects were discussed and the assay was decided to be named: anti nuclear- cytoplasmic antibodies. Consesus was also CAICYThed about the acronym for the determination, the Spanish names for the different patterns and the use of internal and external quality controls. Using common criteria will improve the quality of the results and optimize assay interpretation.

A presenga de anticorpos antinucleares (AAN) é o denominador comum de muitas doengas autoimunes sistémicas e sua significancia clínica depende da metodologia utilizada em sua determinagáo. Na atualidade, a imunofluorescéncia indireta (IFI) utilizando células HEp-2 como substrato é a técnica mais utilizada. Sendo um procedimento subjetivo devem ser otimizados os métodos de padronizagáo das diferentes variáveis envolvidas, para garantir a qualidade dos resultados obtidos. O uso deste substrato permite a descrigáo náo apenas de padróes de fluorescéncia nucleares mas também citoplasmáticos e de diferentes organelas. Em 29 de agosto de 2008, foi levado a cabo, em Buenos Aires, o Primeiro Consenso Argentino para a Padronizagáo da Determinagáo de AAN por IFI-HEp-2, com a participagáo de 28 especialistas. Foram discutidos os aspectos metodológicos mais importantes e se decidiu chamar a determinagáo de "anticorpos antinúcleo-citoplasmáticos". Foi estabelecida por consenso a sigla representativa da determinagáo, o nome em espanhol dos diferentes padróes e o uso de controles de qualidade internos e externos. A unificagáo de critérios levará a otimizago dos resultados e a sua correta interpretagáo.

Validación de métodos serológicos que se emplean para el diagnóstico de enfermedades reumáticas definidas: Lupus erimatoso sitémico (LES) / Validation of methods serológicos that are used for the diagnosis of defined rheumatic illnesses: Lupus erimatoso sitémico

En el presente trabajo se aplicó un método estadístico no convencional para validar los substratos empleados para detectar anticuerpos antinucleares por inmunofluorescencia indirecta (FANA), comparado con la preuba confirmatoria de ELISA indirecto que mide Anticuerpos anti-dsDNA. Se determinó que los substratos: (línea celular BHK_21 y cortes criostáticos de higado o riñon de rata Ratus novergicus) tenían la misma sensibilidad y valor predictivo negativo (100 por ciento) La línea celular BHK-21 demostró tener mayor especificidad 69 por ciento, valor predictivo positivo 75,8 por ciento, eficiencia 84,3 por ciento y concordancia con los resultados emitidos por la técnica de ELISA (0,81) "muy buena" según el índice de KAppa. Se encontró que el patrón fluorescente difuso a título 1/32 está presente sistemáticamente en todas las muestras tanto positivas comonegativas para anti-ds-DNA. Se demostró que utilizar la línea celular BHK-21 (que reemplaza a la línea tradicional Hep-2), como sustrato "FANA", resulta ser el método taniz, mas eficiente, sensible, específico y de mayor concordancia con los resultados emitidos por un método confirmado para LES, que mide anti-ds-DNA.

Field evaluation of latex agglutination test for detecting urinary antigens in visceral leishmaniasis in Sudan

A latex agglutination test to detect urinary antigens for visceral leishmaniasis [VL] was studied. In 204 patients with suspected VL, KAtex had a sensitivity of 95.2% with good agreement with microscopy smears but poor agreement with 4 different serology tests. It was also positive in 2 confirmed VL cases co-infected with HIV. In all KAtex-positive confirmed cases actively followed up after treatment, the test became negative 1 month after completion of treatment. While KAtex had a specificity of 100% in healthy endemic and non-endemic controls, the direct agglutination test [DAT] was positive in 14% of the KAtex-negative healthy endemic controls. KAtex is a simple addition to the diagnostics of VL particularly at field level and as a complementary test for the diagnosis of VL in smear-negative cases with positive DAT results

Estandarización de una prueba de inmunofluorescencia indirecta para IgG / Standarization of an IFAT for IgG anti- Toxoplasma in mice

Se describe un técnica de inmunoflurescencia indirecta (IFI) para la detección de IgG anti-toxoplasma en ratón. La técnica reveló infecciones en el ratón a partir de inoculaciones de 10 taquizoitos de Toxoplasma gondii. En muestras de pacientes, se detectó infección en un líquido amniótico de una paciente con toxoplasmosis adquirida en el embarazo y en un líquido cefalorraquídeo de una paciente con toxoplasmosis cerebral. La técnica de inoculación en ratón y su detección por IFI es un complemento para el diagnóstico en el líquido amniótico o en el inmunosuprimido y es una herramienta valiosa para el aislamiento y caracterización de cepas de Toxoplasma

Empleo del serodiagnóstico para detectar amebiasis invasiva en niños con disentería / Application of serodiagnosis to detect invasive amoebiasis in children with dysentery

La amebiasis es una parasitosis que afecta al 10 por ciento de la población mundial. Nueve de cada 10 infecciones son causadas por E. dispar, pero es diagnosticada y tratada como E. histolytica, por presentar quistes iguales. En cambio la infección por E. histolytica es invasiva, sintomática y presenta anticuerpos séricos específicos antiameba. La OMS recomienda el diagnóstico diferencial, dado que el tratamiento es innecesario si la infección es causada por E. dispar. Se evaluó la utilidad de las técnicas de la inmunofluorescencia indirecta (IFI) y el enzimoinmunoanálisis en fase sólida (ELISA) para el diagnóstico diferencial de estas infecciones. Se estudiaron 65 niños asistidos clasificados según clínica y examen coproparasitológico en: Grupo 1-A: asintomáticos, con coproparasitológicos negativos; Grupo 1-B: asintomáticos y con al menos un enteroparásito en el coproparasitológico; Grupo 2-A: con disentería, sospecha clínica de amebiasis y sin trofozoítos y/o quistes de E. histolytica / E. dispar en el coproparasitológico; Grupo 2-B: con disentería, sospecha clínica de amebiasis y con quistes y/o trofozoítos de E. histolytica / E. dispar en el coproparasitológico. Se realizaron exámenes coproparasitológicos directos y seriados y en muestras de suero se practicaron los inmuoensayos ELISA e IFI para la detección de anticuerpos específicos antiameba. Se observó que no hubo reactividad inespecífica con otras infecciones parasitarias y que la serología resultó reactiva cuando se hallaron trofozoítos hematófagos, patognomónicos de E. histolytica. La serorreactividad en los pacientes con quistes y/o trofozoítos no patognomónicos es fuertemente indicativa de una infección reciente. La probabilidad de tratarse de una infección remota es baja, ya que la proporción de anticuerpos específicos estudiada en 50 pacientes del grupo asintomático fue nula. Ambas técnicas presentaron resultados homólogos, a excepción de uno de los pacientes estudiados en quien, por serología, se pudo detectar una infección activa, pese a no haber sido detectada por el examen coproparasitológico. Se concluye que el empleo de técnicas de ELISA e IFI es una herramienta útil para mejorar el diagnóstico de invasión amebiana, permite aplicar una terapia acorde a las recomendaciones de la OMS y evita el tratamiento en infecciones por E. dispar

Control y mejoramiento de la precisión en la titulación de anticuerpos antinucleares / Control and improvement of precision for titration of antinuclear antibodies

Con la intención de mejorar la precisión y sensibilidad de la medición de los anticuerpos antinucleares (ANA) por Inmunofluorescencia Indirecta, se organizó un programa de intercambio de sueros para evaluar resultados de los diferentes laboratorios de inmunología de la ciudad de Córdoba. La comparación entre los distintos participantes mostró una gran variabilidad, con diferencias de más de siete títulos para un mismo suero. En una etapa posterior, la obtención y procesamiento de un suero para ser usado como valor de referencia y la estandarización de pautas de trabajo, condujo a mejorar la sensibilidad reproducibilidad de los ANA, observándose la desaparición de valores falsos positivos y falsos negativos en los laboratorios que acataron las pautas sugeridas. El costo del programa de intercambio fue mínimo y los beneficios obtenidos fueron satisfactorios

Evaluación de la inmunofluorescencia indirecta como prueba suplementaria para el diagnóstico de la infección por HIV-1 / Evaluation of indirect inmunofluorescence as a confirmatory test for the diagnosis of HIV-1 infection

Se comparó la eficiencia diagnóstica de la inmunofluorescencia indirecta (IFI) como método confirmatorio de la infección por HIV-1 en muestras de suero de 362 personas con conductas de alto y bajo riesgo. El panel compuesto por 220 positivos, 122 negativos y 20 indeterminados por Western blot (WB) fue ensayado por una técnica de IFI desarrollada en nuestro laboratorio. La sensibilidad calculada fue 98,63 por ciento y la espicificidad 98,36 por ciento, indicando que la IFI es un método alternativo para la confirmación de la presencia de anticuerpos contra el HIV-1. Dado que su costo es menor que el 10 por ciento comparado con el del WB, se justifica su introducción en el algoritmo de diagnóstico serológico de HIV-1. Se observó también una relación directa entre la reactividad de las proteínas del WB y los resultados de IFI. En 15 muestras con resultado indeterminado por WB e inespecífico por IFI, las bandas más observadas fueron la p24 seguida de la gp160; por otro lado los anticuerpos contra las glicoproteínas virales son los que presentan mayor frecuencia en las muestras positivas débiles, demostrando su alto valor predictivo