Padronização de um ELISA indireto a partir da utilização de uma proteína de superfície do vírus da anemia infecciosa equina como antígeno para o diagnóstico dessa enfermidade / Standardization of an indirect ELISA using a surface protein of the equine infectious anemia virus as an antigen for the diagnosis of this disease

A anemia infecciosa equina é uma importante enfermidade que acomete os equídeos em todo o mundo, se apresentando de forma aguda, crônica e assintomática causando grandes prejuízos para a economia tanto para criadores que vivem do trabalho desses animais quantos aos criadores que investem no melhoramento das raças, impedindo o acesso ao mercado tanto nacional quanto internacional. O Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento considera o IDGA como teste oficial para diagnóstico dessa enfermidade, porém essa técnica é demorada e muita vez acaba sendo subjetiva, dependendo da experiencia particular de cada Laboratorista. Além de não conseguir detectar animais no início da infecção. Logo, a necessidade de se buscar novas técnicas como o ELISA indireto que aperfeiçoem o tempo de análise dos resultados, facilita a automação e obtém resultados confiáveis. O estudo realizado teve como objetivo padronizar uma técnica de ELISA indireto utilizando uma proteína de envelope viral GP90 como antígeno para diagnóstico da anemia infecciosa equina. Avaliando o desempenho do teste a partir da sensibilidade, especificidade e valores preditivos positivo e negativo. Os valores obtidos foram: 91,11%, 93,33%, 91,11% e 93,33% respectivamente. Concluiu-se que o teste apresenta bom desempenho, além da possibilidade de detectar amimais positivos no início da infecção.

Equine infectious anemia is an important disease that affects horses all over the world, presenting in an acute, chronic and asymptomatic way, causing great damage to the economy, both for breeders who live off the work of these animals and for breeders who invest in the improvement of breeds, preventing access to both national and international markets. The Ministry of Agriculture, Livestock and Food Supply considers AGID to be the official test for diagnosing this disease, but this technique takes time and often ends up being subjective, depending on the particular experience of each laboratory worker. In addition to not being able to detect animals at the beginning of the infection. Therefore, the need to seek new techniques such as indirect ELISA that improve the time of analysis of results, facilitate automation and obtain reliable results. The aim of this study was to standardize an indirect ELISA technique using a GP90 viral envelope protein as an antigen for the diagnosis of equine infectious anemia. Evaluating test performance based on sensitivity, specificity and positive and negative predictive values. The values obtained were 91.11%, 93.33%, 91.11 and 93.33 respectively. It was concluded that the test performs well, in addition to the possibility of detecting positive animals at the beginning of the infection.

Clostridioides difficile: achados epidemiológicos em animais domésticos em um Hospital Veterinário Universitário em ­ Teresina, PI / Clostridioides difficile: epidemiological findings in domestic animals in a University Veterinary Hospital in Teresina, PI

O objetivo deste estudo foi analisar a prevalência de Clostridioides difficile e suas toxinas (A/B) nas fezes de animais domésticos de um Hospital Veterinário Universitário de Teresina - PI. A detecção de C. difficile e suas toxinas foi realizada por meio de um ensaio imunoenzimático, denominado C. Diff Quik Chek Complete® (TECHLAB), capaz de detectar antígeno Glutamato Desidrogenase (GDH) e as toxinas A/B produzidas pelo bacilo, realizado em amostras fecais de cães (C. lupus) e e gatos (Felis catus) coletadas entre agosto de 2019 a setembro de 2020. Um total de 54 amostras fecais foram analisadas, das quais 16 foram positivas para C. difficile (29,63%). 68,75% (11/16) pertenciam a caninos, enquanto 31,25% (5/16) a felinos. Amostras diarreicas e não diarreicas foram utilizadas para o estudo e uma maior prevalência do bacilo pôde ser identificada em amostras diarreicas (33%). Nenhuma das amostras apresentou toxinas do patógeno. Os achados deste estudo evidenciam que C.difficile está presente no estado do Piauí. Foi possível identificá-lo em todas as espécies e em amostras diarreicas ou não, demonstrando que essa infecção pode se manifestar de formasintomática e assintomática, levantando a possibilidade de infecção cruzada entre o animal e seu tutor.

The aim of this study was to analyze the prevalence of Clostridioides difficile and its toxins (A/B) in the feces of domestic animals at a University Veterinary Hospital in Teresina - PI. The detection of C. difficile and its toxins was performed by an immunogenic enzyme, called C. Diff Quik Chek Complete® (TECHLAB), capable of detecting antigen glutamate dehydrogenase (GDH) and A/B toxins produced by this bacillus, performed in fecal samples of dogs (C. lupus) and cats (Felis catus) collected between August 2019 and September 2020.:54 stools were analyzed, of which 16 were positive for C. difficile (29.63%). 68.75% (11/16) belonged to canines, while 3.25% (5/16) to felines. Diarrheal and non-diarrheal diseases are used for the study and a higher prevalence of bacillus can be identified in diarrheal diseases (33%). None of the samples present pathogen toxins. The results of this study show that C. difficile is present in the state of Piauí. It can be identified in all species and in diarrheal or non-diarrheic samples, demonstrating that this infection can be symptomatic and asymptomatic, giving the possibility of cross-infection between the animal and its owner.

Serological and molecular detection of Theileria equi in horses from Sinop, Mato Grosso state, Brazil / Detecção sorológica e molecular de Theileria equi em equinos oriundos de Sinop, Mato Grosso, Brasil

Equine piroplasmosis is the most important tick-borne disease to affect horses in Brazil. Theileria equi is one of the causative agents of equine piroplasmosis. Chronic cases are expected, in which the animals show no apparent signs of infection and remain asymptomatic but constitute a source of the infectious agent that ticks can spread. This study was conducted across 81 ranches located in the municipality of Sinop, State of Mato Grosso, Brazil. A sample calculation was performed to estimate the apparent prevalence of T. equi among horses. A total of 1,853 animals were included in the sampling analysis based on the information available from the Institute of Agricultural and Livestock Defense of Mato Grosso State. The serological analysis of 367 serum samples using an indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) to detect anti-T. equi antibodies revealed that 337 animals were positive, representing a frequency of 90.70%. The molecular analysis to amplify the EMA-1 gene showed positivity in 20 of 89 tested samples. The fragments of four samples were sequenced and analyzed to determine their similarities to sequences from other species, based on sequences deposited at GenBank. All showed 100% similarity with T. equi. Our study represents the first report of T. equi antibodies among the equids in north-central region of Mato Grosso, revealing the widespread distribution of seropositive animals.

A piroplasmose equina é a doença transmitida por carrapatos mais importante em cavalos no Brasil. Theileria equi é um dos agentes causadores da piroplasmose equina. São esperados casos crônicos, nos quais os animais não apresentam sinais aparentes de infecção e permanecem assintomáticos, mas constituem uma fonte de infecção e disseminação por carrapatos. Este estudo foi realizado em 81 fazendas localizadas no município de Sinop, Estado de Mato Grosso, Brasil. Um cálculo amostral foi realizado para estimar a prevalência aparente de T. equi entre cavalos. No total, 1.853 animais foram incluídos na análise amostral com base nas informações disponíveis no Instituto de Defesa Agropecuária do Estado de Mato Grosso. A análise sorológica de 367 amostras de soro por meio de ensaio imunoenzimático indireto (ELISA) para detecção de anticorpos anti-T. equi revelou que 337 animais eram positivos, representando uma frequência de 90,70%. A análise molecular para o gene EMA-1 mostrou positividade em 20 das 89 amostras testadas. Os fragmentos de quatro amostras foram sequenciados e analisados para determinar suas semelhanças com sequências de outras espécies, a partir das sequências depositadas no GenBank. Todos mostraram 100% de similaridade com T. equi. Nosso estudo representa o primeiro relato de anticorpos contra T. equi entre os equídeos na região centro norte de Mato Grosso, revelando a ampla distribuição de animais soropositivos.

Fauna flebotomínica e soroprevalência para leishmaniose visceral canina em área urbana na região Centro-Oeste do Brasil / [Phlebotomine fauna and seroprevalence for canine visceral leishmaniasis in urban area from Central-West region of Brazil]

A leishmaniose visceral americana (LVA) é uma zoonose de transmissão vetorial na qual o cão tem papel importante na epidemiologia da doença. No Brasil, a elevada prevalência da infecção em cães está diretamente correlacionada com o aumento no risco de ocorrência de casos de LVA. O objetivo deste estudo foi investigar a fauna flebotomínica e verificar a soroprevalência da leishmaniose visceral canina (LVC) na localidade Pedra 90, no município de Cuiabá. Para o levantamento entomológico, armadilhas CDC foram utilizadas de agosto de 2014 a julho de 2015. Na avaliação sorológica dos cães, o teste imunocromatográfico DPP LVC foi utilizado para a triagem das amostras, enquanto o ensaio imunoenzimático (EIE) para o diagnóstico da LVC (Bio-Manguinhos) foi empregado como teste confirmatório. O trabalho vem acrescentar à fauna flebotomínica do município de Cuiabá as espécies Lu. andersoni, Lu. braziliensis, Lu. bourrouli e Lu. scaffi, não registradas em publicações anteriores. Além disso, entre as espécies de flebotomíneos com importância médica, Lu. cruzi, Lu. flaviscutellata e Lu. whitmani foram capturadas. No inquérito canino, a prevalência de LVC observada na localidade Pedra 90 foi de 1,14%, indicando que a região pode ser considerada como área de transmissão.(AU)

American visceral leishmaniasis (AVL) is a vector-borne zoonosis in which the dog has an important role in the epidemiology of the disease. In Brazil, a high prevalence of canine infection is directly correlated with an increased risk of occurrence of AVL. The aim of this study was to investigate the phlebotomine fauna and seroprevalence of canine visceral leishmaniasis in Pedra 90 region of Cuiabá municipality. For the entomological survey, CDC traps were used from August 2014 to July 2015. In the serological evaluation of dogs, the immunochromatographic test DPP LVC was employed for screening the samples while enzyme-linked immunosorbent assay (Bio-Manguinhos) was used as a confirmatory assay. The previously unreported phlebotomine species Lu. andersoni, Lu. braziliensis, Lu. bourrouli, and Lu. scaffi were added to the phlebotomine fauna of Cuiabá. In addition, the medically important phlebotomine species Lu. cruzi, Lu. flaviscutellata, and Lu. whitmani were identified. The canine survey revealed the prevalence of 1.14% for canine visceral leishmaniasis in the Pedra 90 region, the region being considered a transmission area.(AU)

Hematological findings and factors associated with feline leukemia virus (FeLV) and feline immunodeficiency virus (FIV) positivity in cats from southern Brazil / Achados hematológicos e fatores associados a positividade pelo vírus da leucemia felina (felv) e vírus da imunodeficiência felina em gatos do sul do Brasil

Using a retrospective study, 493 cats tested for FeLV and FIV were selected for analysis of the association between hematologic findings and positivity at immunoassay test. Individual and hematologic variables were assessed considering the influence of results using univariate and multivariate logistic regression analysis. Out 153 of the 493 cats were positive for FeLV (31%), 50 were positive for FIV (10.1%) and 22 were positive for both FIV and FeLV (4.4%). Multivariate analysis detected significant associations between FeLV infection and age below 1 year (p=0.01), age from 1 to 10 years (p=0.03), and crossbreed (p=0.04). Male cats were more likely to be FIV-positive (p=0.002). Regarding hematological changes, FeLV-positive cats have higher odds to anemia, leukopenia and lymphopenia than FeLV-negative cats. FIV-positive cats are more likely to have anemia than negative. Identification of associated factors related to animal status and correlation of hematological disorders with infection by retroviruses in cats could be useful for detecting these retroviral diseases in cats.(AU)

Através de um estudo retrospectivo, 493 gatos testados para FeLV e FIV foram selecionados para análise da associação entre as alterações hematológicas e a positividade no teste imunoenzimático. Variáveis individuais e hematológicas foram consideradas para verificar a influência dos resultados utilizando análise de regressão logística univariada e multivariada. Um total de 153 de 493 gatos avaliados foram positivos para o FeLV (31%), 50 foram positivos para o FIV (10,1%) e 22 foram positivos para FIV e FeLV (4,4%). Análise multivariada detectou uma associação significativa entre a infecção pelo FeLV e a idade abaixo de 1 ano (P=0,01), idade entre 1 a 10 anos (P=0,03) e raça mista (P=0,04). Gatos machos foram mais predispostos a serem positivos para FIV (P=0,002). Com base nas alterações hematológicas, gatos positivos para o FeLV tem maior odds para apresentar anemia, leucopenia e linfopenia que os negativos. Gatos positivos para FIV possuem maiores chances de apresentarem anemia que os gatos negativos. A identificação dos fatores associados à infecção relacionados ao perfil do animal e a correlação com os distúrbios hematológicos com a infecção, pode ser útil para detecção das doenças retrovirais em gatos.(AU)

Characterization of an IgM-like immunoglobulin from silver catfish (Rhamdia quelen) serum and its use for the production of polyclonal antibodies and development of immunoassays / Caracterização de imunoglobulina similar a IgM em soros de jundiás (Rhamdia quelen) e sua utilização para a produção de soro policlonal e desenvolvimento de imunoensaios

Knowledge on fish immunoglobulin (Ig) characteristics and the availability of monoclonal or polyclonal antibodies to fish Igs are essential to evaluate the humoral immune response and the Ig distribution on leukocyte cells. We demonstrated that silver catfish serum Ig is composed of one immunodominant H chain with approximately 75k Da and one L chain with approximately 28 kDa, similar to human IgM. Rabbit polyclonal antibodies to the catfish IgM-like Ig recognized both the H and L chain and were useful in developing an indirect ELISA to measure the production of antibodies in fish immunized with bovine serum albumin. Dot blot and western blot cross-reactivity studies indicated a wide degree of epitope sharing amongst Ig from several Siluriformes and Characiformes fish indigenous to Brazilian rivers. In these fish species, polyclonal antibodies reacted mostly with the H chain. The results presented here are central to the development of tools and strategies to investigate the antibody production to inoculated antigens and tissue distribution of Ig molecules in native fish species. Furthermore, because of the wide range of cross-reactivity, polyclonal antibodies to silver catfish IgM-like Ig might be used to develop immunoassays to measure the humoral immune response in other fish species.(AU)

Informações sobre as características das imunoglobulinas (Ig) de peixes e a disponibilidade de anticorpos mono ou policlonais são essenciais para avaliar a resposta imune humoral e a distribuição leucocitária de Igs. Nesse trabalho nós demonstramos que a Ig do soro de jundiás é composta por uma cadeia pesada (H) imunodominante, de aproximadamente 75kDA e de uma cadeia leve (L) de aproximadamente 28 kDa, similar à IgM humana. Anticorpos policlonais produzidos contra a Ig do jundiá reconheceram a cadeia H e L e permitiram o desenvolvimento de um ELISA indireto para mensurar a produção de anticorpos em peixes imunizados com albumina sérica bovina. Estudos de reatividade cruzada, por meio de Dot blot e western blot, indicaram um alto grau de compartilhamento de epitopos entre as Igs de diversos peixes Siluriformes e Caraciformes nativos do Brazil. Nestas espécies de peixes, os anticorpos policlonais reconheceram principalmente a cadeia H. Os resultados deste estudo são fundamentais para o desenvolvimento de ferramentas e estratégias para investigar a produção de anticorpos subsequente à imunização e a distribuição tecidual de Igs em peixes nativos. Além disso, devido ao compartilhamento de epitopos entre as espécies de peixes avaliadas, os anticorpos policlonais anti Ig do jundiá poderão ser usados para desenvolver ensaios imunoenzimáticos para avaliar a resposta imune humoral nestas espécies.(AU)

The role of alveolar type II cells in swine leptospirosis / O papel das células alveolares tipo II na leptospirose suína

This study aimed to investigate a possible relationship between alveolar type II cells and the inflammatory response to infection with Leptospira spp., and thus comprise a further element that can be involved in the pathogenesis of lung injury in naturally infected pigs. The study group consisted of 73 adult pigs that were extensively reared and slaughtered in Teresina, Piauí state, and Timon, Maranhão state, Brazil. The diagnosis of leptospirosis was made using the microscopic agglutination test (MAT) aided by immunohistochemistry and polymerase chain reaction. The MAT registered the occurrence of anti-Leptospira antibodies in 10.96% (8/73) of the pigs. Immunohistochemistry allowed for the visualization of the Leptospira spp. antigen in the lungs of 87.67% (64/73) of the pigs. There was hyperplasia of bronchus-associated lymphoid tissue and circulatory changes, such as congestion of alveolar septa, parenchymal hemorrhage and edema within the alveoli. Lung inflammation was more intense (p = 0.0312) in infected animals, which also showed increased thickening of the alveolar septa (p = 0.0006). Evaluation of alveolar type II (ATII) cells using an anti-TTF-1 (Thyroid Transcription Factor-1) antibody showed that there were more immunostained cells in the non-infected pigs (53.8%) than in the infected animals (46.2%) and that there was an inverse correlation between TTF-1 positive cells and the inflammatory infiltrate. There was no amplification of Leptospira DNA in the lung samples, but leptospiral DNA amplification was observed in the kidneys. The results of this study showed that a relationship exists between a decrease in alveolar type II cells and a leptospire infection. Thus, this work points to the importance of studying the ATII cells as a potential marker of the level of lung innate immune response during leptospirosis in pigs...

Setenta e três suínos adultos de criação extensiva, abatidos em Teresina, no estado do Piauí e Timon, no estado do Maranhão, constituíram o grupo de estudo. O diagnóstico da leptospirose foi realizado utilizando a técnica de soroaglutinação microscópica (MAT), auxiliada por imunoistoquímica e reação em cadeia pela polimerase. A SAM registrou a ocorrência de anticorpos anti-leptospiras em 10,96% (8/73) dos suínos. A imunoistoquímica permitiu a visualização de antígenos de Leptospira spp. em pulmões de 87,67% (64/73) dos suínos. Havia hiperplasia do tecido linfoide associado ao brônquio e alterações circulatórias como, congestão do septo alveolar, hemorragia parenquimatosa e edema no interior de alvéolos. Os focos de inflamações pulmonares eram mais numerosos (p=0,0312) nos animais infectados, bem como o espessamento do septo alveolar (p=0,0006). A quantificação de células alveolares tipo II marcadas pelo anticorpo anti-TTF-1 (Thyroid Transcription Factor-1) mostrou que existia mais células imunocoradas em suínos não infectados (53,8%) comparados aos infectados (46,2%) e uma correlação inversa em relação ao infiltrado inflamatório. Não houve amplificação de DNA de Leptospira spp. em amostras de tecido pulmonar, no entanto DNA leptospiral foi observado em rim. Os resultados deste estudo mostraram que existe uma relação entre a diminuição das células alveolares tipo II e a infecção por leptospiras. Dessa forma, este trabalho aponta para a importância do estudo dessas células, como um provável marcador da modulação da resposta imune inata do pulmão na leptospirose em suínos...

Inquérito sorológico para leptospirose em cães da Ilha da Marambaia, Rio de Janeiro, Brasil / Serologic survey for leptospirosis in dogs Marambaia Island, Rio de Janeiro, Brazil

A leptospirose é uma zoonose endêmica de distribuição mundial causada por bactérias do gênero Leptospira com inúmeros sorovares distintos, dificultando sua caracterização. A maioria dos casos cursa com sinais e sintomas inespecíficos, sendo muitas vezes confundida com viroses. Exibe caráter sazonal em regiões tropicais em que há alta incidência de períodos chuvosos, afetando tanto a população urbana quanto a rural. No Brasil a doença tem grande importância social e econômica. Acomete além do homem, animais silvestres e domésticos, sendo os roedores sinantrópicos os principais reservatórios urbanos e o cão, potencial fonte de infecção para o homem. O presente estudo teve como objetivo realizar o primeiro inquérito sorológico para leptospirose em cães na Ilha da Marambaia, município de Mangaratiba, Rio de Janeiro, onde não há registro de casos em humanos nem em animais além da busca de casos humanos nos registros do SINAN e também avaliar as características ambientais da região. Possíveis casos de leptospirose canina foram investigados a partir de fichas clínicas com dados dos animais. Foram analisadas 234 amostras sanguíneas de cães coletadas em dois períodos: No decorrer dos anos de 2009 e 2012 em inquérito sobre leishmaniose visceral na ilha. A investigação foi realizada a partir da técnica de aglutinação microscópica (MAT), considerada internacionalmente como o, “padrão ouro” para o diagnóstico de leptospirose. O procedimento foi executado no Laboratório Nacional de Referência de Leptospirose (LNRL-CC/OMS), localizado no instituto Oswaldo Cruz (FIOCRUZ), no Rio de Janeiro. Do total de amostras estudadas, 2,56% (6/234) apresentaram reação positiva ao MAT para os sorovares Australis, Copenhageni e Patoc, com titulações que variaram de 80 a 640. O sorovar mais prevalente foi o Australis 66,66% (04/06), seguido pelo Copenhageni (01/06) e Patoc (01/06), ambos com a mesma frequência de 16,67%.

Este foi um estudo preliminar na região e os dados indicam a possibilidade de circulação de Leptospira sp. embora não haja casos clínicos relatados. Os resultados encontrados podem indicar ainda possíveis reservatórios que devem ser confirmados em estudos posteriores. É importante frisar que além de detectarmos baixa incidência em cães, a região possui um ambiente propício para manutenção do micro-organismo. A precariedade do saneamento, a presença de animais silvestres, o movimento irrestrito de cães somados aos dados sorológicos encontrados sugerem a possibilidade de circulação de bactérias entre os cães e possíveis reservatórios no ambiente silvestre.

Produção de antígeno e separação da proteína p28 por microfiltragem seriada para sorodiagnóstico da artrite encefalite caprina por ensaio imunoenzimático / Production of antigen and p28 protein separation by microfiltration serial for serodiagnosis of caprine arthritis encephalitis by enzyme immunoassay

Este estudo teve como objetivo produzir um antígeno (Ag) a partir de cultura de células de membrana sinovial caprina (MSC) infectadas com o vírus de artrite encefalite caprina (CAEV), pela técnica de microfiltração seriada, substituindo a ultracentrifugação em colchão de sacarose (UCCS) para utilização em ELISA indireto (ELISA-i). Amostras de 188 soros caprinos, que previamente foram testados pelo Western blot (WB) com Ag UCCS, foram submetidas à análise pelo ELISA-i com o novo antígeno produzido, que mostrou concordância de 92% em relação ao antígeno UCCS. A sensibilidade e a especificidade do ELISA em relação ao WB foram de 95,6% e 88,5%, respectivamente. A nova técnica, criada a partir de microfiltrações, mostrou-se efetiva e de baixo custo para o diagnóstico sorológico de anticorpos para CAEV em comparação ao antígeno ultracentrifugado, e constitui uma alternativa viável para produção de antígeno purificado de lentivírus de pequenos ruminantes.

This study aimed to produce an antigen (Ag) from the culture of goat synovial membrane cells (MSC) infected by CAEV through serial microfiltering technique replacing ultra ultracentrifugation in sacarosis Mattress (UCCS) for the indirect diagnosis ELISA tests (i ELISA). Samples of 188 sera from goats previously examined by Western Blot (WB) with Ag UCCS were submitted to analysis by i ELISA with new antigen produced, demonstrating an accordance of 92% in relation to UCCS antigen. The specificity and sensitivity relating to WB were of 95,65% and 88, 5% respectively. The new technique created from the microfiltering is effective and with low cost for the serological antibodies diagnosis of CAEV comparing to the ultracentrifuged one, presenting, therefore, as a viable alternative for purified antigen of lentivirus in small ruminants.

Associação entre Mycoplasma spp. e ácaros do conduto auditivo de bovinos / Mycoplasmas species associated with the ear mites in cattle

Esse estudo foi realizado com o objetivo de verificar a associação entre micoplasmas e ácaros (Raillietia auris e R. flechtmanni) no conduto auditivo de bovinos. Foram realizadas lavagens no conduto auditivo externo de 60 bovinos abatidos no Estado do Rio de Janeiro, Brasil. Para a lavagem dos condutos auditivos foi utilizada solução salina tamponada (PBS, pH 7.2) em seringas estéreis de 60mL. Para o isolamento de micoplasmas foram utilizados pools de ácaros por animal, lavados sucessivamente em 1mL de meio Hayflick modificado. Os lavados dos ácaros foram diluídos de 10-1 até 10-5 e repicados em meio Hayflick modificado, sólido e líquido e incubados a 37°C por 48-72 horas em microaerofilia. A identificação das espécies de micoplasmas foi realizada pelo teste da imunoperoxidase indireta (IPI). Verificou-se alta prevalência de ácaros do gênero Raillietia spp. 76,7% (46/60). O parasitismo por ácaros e micoplasmas foi verificado em 40 animais (74,1%), sendo esta associação significativa (p<0,001). Dos ácaros processados para isolamento de micoplasmas, 193 foram fêmeas e 25 machos. A frequência de Mycoplasma em Raillietia spp. foi de 81,2% (177/218) (p<0.001). Das fêmeas identificadas, 52,3% (101/193) foram R. auris e 47,7% (92/193) R. flechtmanni. A frequência de Mycoplasma nas fêmeas de R. auris foi de 75,2% (76/101) e na espécie R. flechtmanni foi de 88% (81/92) (P<0.05). As espécies de micoplasmas tipificadas pela IPI nos ácaros Raillietia auris foram: M. alkalescens 6,9%, M. arginini 3,4%, M. bovirhinis 9,2%, M. conjunctivae 18,4%, M. mycoides mycoides LC 8,0%, M. capricolum 5,7%. Em R. flechtmanni as espécies de micoplasmas identificadas foram: M. alkalescens 12,2%, M. arginini 1,0%, M. bovirhinis 18,9%, M. bovis 2,2%, M. conjunctivae 21,0%, M. mycoides mycoides LC 11,0% e M. capricolum 4,4%. As espécies de micoplasmas identificadas no conduto auditivo externo dos bovinos foram as mesmas presentes nos ácaros R. auris e R. flechtmanni. Os resultados confirmam que o conduto auditivo externo de bovinos é um habitat de Mycoplasma spp., incluindo espécies potencialmente patogênicas para os rebanhos, além dos ácaros R. auris e R. flechtmanni estarem associados com esses molicutes carreando-os em seu organismo.

This study was carried out to assess the association between of mycoplasmas species with ear mites Raillietia auris and R. flechtmanni in the external ear canal of 60 bovines at slaughter time from the State of Rio de Janeiro, Brazil. Steril syringes (60ml) loaded with buffer solution (PBS, pH 7.2) were used for the ear canal flushing. Were processed 218 mites for mycoplasma isolation. A pool of mites from each sampled bovine was washed five times sucessively in 1mL of liquid modified Hayflick´s medium. The washed mites obtained were diluted up to 10-1 at 10-5, inoculated in liquid and solid Hayflick´s media and incubated at 37ºC for 2-3 days, being the plates put into jar for the obtention of microaerofilia condition. The Typical colonies were typified by the indirect imunoperoxidase test (IPI) with paper discs satured with hyperimmune rabbit sera. In the studied bovine high prevalence was verified Raillietia spp. 76.7% (46/60). The parasitism by mycoplasmas and mites was verified in 40 animals (74.1%), this association was significant (p<0.001). Among the mites processed for isolation mycoplasmas 193 were female and 25 males. The frequency of Mycoplasma in Raillietia spp. was of 81.2% (177/218) (p<0.001). Of the females identified 52.3% (101/193) were R. auris and 47.7% (92/193) were R. flechtmanni. The frequency of Mycoplasma in the females of R. auris was of 75.2% (76/101) and 88% (81/92) in R. flechtmanni (P<0.05). The mycoplasmas species typified by IPI in the Raillietia auris mites were M. alkalescens 6.9%, M. arginini 3.4%, M. bovirhinis 9.2%, M. conjunctivae 18.4%, M. mycoides mycoides LC 8.0%, M. capricolum 5.7%. In the R. flechtmanni mites mycoplasmas species typified were M. alkalescens 12.2%, M. arginini 1.0%, M. bovirhinis 18.9%, M. bovis 2.2%, M. conjunctivae 21.0%, M. mycoides mycoides LC 11.0% e M. capricolum 4.4%. The species of identified mycoplasmas in the external ear canal bovine and mites were exactly the same. The results confirm that the external ear canal cattle's ear canal is also a mycoplasmas source, including potentially pathogenic species for cattle, and these mollicutes are closely related with mites Raillietia spp. that is carrier and this agent in your organism.

Effect of oxytocin infusion on luteal blood flow and progesterone secretion in dairy cattle

The objective of this study was to investigate the effects of oxytocin infusion on corpus luteum (CL) function during early to mid-diestrus by measuring luteal size (LS) and luteal blood flow (LBF) along with plasma levels of progesterone (P4) and prostaglandin metabolites (13,14-dihydro-15-keto-prostaglandin F2alpha, PGFM). On day (D) 7 of the estrus cycle (D1 = ovulation), seven cows received 100 IU of oxytocin (OXY) or placebo (PL) following a Latin square design. LS and LBF increased in both groups over time and no differences were observed between the groups. PGFM did not differ either within the groups over time or between the groups at any time point. P4 of the OXY group was higher compared to that of the the PL group 360 min after the infusion (p = 0.01) and tended to be higher at the time points 450 min, 48 h, and 72 h (all p = 0.08). Results from this study support the hypothesis that OXY is not directly involved in the mechanism(s) governing blood flow of the CL and has no remarkable effects either on luteal size or P4 and PGFM plasma levels. Further investigation is needed to elucidate the role of OXY in CL blood flow during early and late luteal phases.

Rotavírus bovino: fatores de risco, prevalência e caracterização antigênica de amostras em rebanhos leiteiros no estado de São Paulo / Rotavirus in cattle: risk factors, prevalence and antigenic characterization from dairy calves' samples in São Paulo State, Brazil

O estudo de prevalência da infecção por rotavírus em bezerros abrangeu 51 rebanhos leiteiros, escolhidos ao acaso, localizados em uma região produtora de leite do estado de São Paulo. Entre 31 de maio e 20 de outubro de 2003, foram colhidas 103 amostras de fezes de bezerros com diarreia e 308 amostras de animais sem diarreia, com idade entre um e 45 dias. As amostras foram analisadas pelas técnicas de ensaio imunoenzimático (EIE) e eletroforese em gel de poliacrilamida (PAGE). Pelo EIE foi observada prevalência de rotavírus de 21,6 por cento (11/51) nos rebanhos e 6,7 por cento (27/404) nos bezerros. Foram diagnosticados animais infectados por rotavírus tanto em bezerros diarreicos (18,4 por cento; 19/103) quanto em bezerros assintomáticos (2,7 por cento; 8/301). A maior frequência de infecção foi determinada em bezerros com idade entre um e 15 dias, sendo estabelecida uma relação inversa entre a frequência de positividade e a idade dos animais (P<0,05). Além da idade, o sistema de alimentação - fornecimento manual do leite ou bezerro com a mãe, o tipo de instalação - baias individuais ou baias coletivas - e o tamanho do rebanho -, número de matrizes foram fatores que influenciaram significativamente a frequência da infecção (P<0,05). O RNA extraído de 27 amostras pelo PAGE foi classificado em sete eletroferótipos, indicando grande diversidade genômica de rotavírus. A genotipagem das amostras positivas para rotavírus foi realizada pelo método de transcrição reversa-reação da polimerase em cadeia, destacando a presença de infecções pelos genótipos G6P[5] e G10P[11].

The study on rotavirus infection prevalence in calves was undertaken in 51 dairy cattle herds, randomly selected, in a dairy area in the state of São Paulo. One hundred and three samples of feces from calves with diarrhea and 308 samples of feces from calves free from the disease, age ranging from 1 to 45 days, were collected from May 31st to October 20th 2003. Stool samples were analyzed through immunoenzymatic assay techniques (IEA) and polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE). Rotavirus prevalence rate of 21.6 percent (11/51) was detected by IEA in cattle herds and 6.7 percent (27/404) in calf population. Rotavirus infection was diagnosed in calves with diarrhea (18.4 percent; 19/103) and in clinically healthy calves (2.7 percent; 8/301). The highest infection frequency was found in calves aged 1 to 15 days. There is an inverse relationship between positive frequency and age of animals (P<0.05). Factors which may affect rotavirus prevalence in herds, such as type of meals (manual milk supply or calf with dame), enclosure (individual or collective pens), herd size (number of matrixes) and age have been analyzed by the chi-square test, and significantly affected infection frequency (p<0.05). RNA from 27 positive samples by PAGE were classified in seven electrophorotypes and showed the rotavirus' extensive genomic diversity. Rotavirus positive samples genotyping was undertaken through the reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR), underpinning infections by special genotypes G6P[5] and G10P[11].

Detecção do grupo mycoplasma mycoides por imunoperoxidase indireta (IPI) e PCR-REA em conduto auditivo de bovinos / Detection of mycoplasma mycoides cluster by indirect immunoperoxidase (IPI) and PCR-REA in the ear canal of bovines

O Grupo Mycoplasma mycoides (GMM) foi diagnosticado por PCR-REA e imunoperoxidase indireta (IPI) em amostras de lavados de conduto auditivo de bovinos no Estado do Rio de Janeiro, Brasil. 60 bovinos foram selecionados aleatoriamente. As lavagens foram feitas com uso de seringas estéreis contendo um volume de 60 mL de solução salina tamponada (PBS pH 7.2). As amostras obtidas foram estocadas em glicerol (1:2) e congeladas a 20ºC até uso. Estas amostras foram diluídas até 10-5 e repicadas em meio Hayflick modificado, sólido e líquido, sendo incubados a 37ºC por 48-72 horas. As placas foram mantidas em microaerofilia e observadas diariamente, para visualização das colônias típicas em ôovo-fritoõ. Das 60 amostras cultivadas, 48 (80,00 por cento) foram positivas para Mycoplasma spp. A prevalência obtida para o GMM na IPI foi de 20,0 por cento (12/60) enquanto na PCR-REA foi de 41,7 por cento (25/60). Das cepas tipificadas pela IPI 58,3 por cento (7/12) foram M. mycoides subsp. mycoides LC e 41,7 por cento (5/12) foram M. capricolum. Na PCR-REA o grupo M. mycoides foi confirmado pela visualização de um amplicon de 785bp, compatível com este grupo. O valor encontrado no teste Kappa para associação entre estes testes foi de 0,14 (P>0,05. Na clivagem do produto da PCR com a enzima de restrição AluI, de cepas de referências e dos isolados de ouvido os fragmentos obtidos foram de 81, 98, 186 e 236pb, mas não de 370pb, que é específica para o agente da Pleuropneumonia Contagiosa Bovina. A presença de espécies de micoplasmas no conduto auditivo de bovinos assintomáticos representa um risco para propagação de Mycoplasma spp. entre rebanhos bovinos no Brasil.

Mycoplasma mycoides cluster (MMC) was diagnosed by polimerase chain reaction-restriction endonuclease analysis (PCR-REA) and indirect immunoperoxidase (IPI), both, carried out in flushing from external ear canal, collected from bovine at slaughter time in the State of Rio de Janeiro, southeastern, Brazil. A total of 60 bovines were randomly selected. Sterile syringes (60mL) loaded with buffer solution (PBS, pH 7.2) were used for the ear canal flushing. The obtained samples were stored in glycerol (1:2) and frozen at -20ºC until use. These specimens were diluted up to 10-5, inoculated in liquid and solid modified Hayflickïs media and incubated at 37ºC for 2-3 days. The plates were kept in a microaerophilia condition and examined every two days under a stereomicroscope for the presence of typical colonies ôfried-eggõ. In this study, 35 strains selected in agreement with their biochemistry and physiologic proprieties, were used. From the 60 cultivated samples, 48 (80.00 percent) were positive for Mycoplasma spp. Under IPI the prevalence obtained for MMC was 20.0 percent (12/60) while by PCR-REA it was 41.7 percent (25/60). The IPI typing of these isolates resulted in 58.3 percent (7/12) for M.mycoides mycoides LC and 41.7 percent (5/12) for M. capricolum. PCR-REA for MMC was confirmed by the amplicon size of 785bp, compatible with this group. The Kappa value for the association between these two tests was 0.14 (p>0.05). After restriction analysis with AluI in all MMC strains the fragments size obtained were of 81, 98, 186 and 236bp, but not of 370bp that is compatible with Mycoides mycoides mycoides SC of bovine type. The presence of mycoplasmas species in the ear canal of asymptomatic bovines represent a risk of subsequent propagation of Mycoplasma spp. among bovine herds in Brazil.

Fisiopatología y respuesta inmune de ovinos experimentalmente infectados con Echinococcus granulosus / Pathophysiology and immune response in sheep experimentally infected with Echinococcus granulosus

La respuesta inmune a la infección por Echinococcus granulosus en el ovino ha sido poco estudiada. El objetivo del presente trabajo fue aportar información sobre la fisiopatología y la respuesta inmune a la infección experimental con E. granulosus en ovinos. Se inocularon experimentalmente ovinos con tres dosis distintas de huevos de E. granulosus, evaluándose la repuesta inmune por seguimiento mediante enzimo inmuno ensayo con tres preparaciones antigénicas (líquido hidatídico total, fracción purificada de líquido hidatídico total y fracción lipoproteica purificada) durante 500 días. Se sacrificaron animales en forma escalonada para observar macroscópica y microscópicamente el desarrollo del parásito. La respuesta inmune se detectó a partir de los 10 días y se mantuvo durante el período de observación, resultando inicialmente proporcional a la carga de huevos inoculados, y disminuyendo las diferencias con el tiempo. Se identificaron quistes fértiles a los 10 meses post inoculación y oncósferas vivas 500 días post inoculación. La respuesta de anticuerpos en el ovino a la infección por E. granulosus fue anterior a la formación de líquido hidatídico y resultó generada por la movilidad de la oncósfera. La temprana fertilidad identificada histológicamente indica que la alimentación de canes con vísceras de ovinos jóvenes puede producir ciclos de infección. La presencia de oncósferas vivas en el hígado, por su parte, aporta información sobre la patogenia de la enfermedad y permite expresar hipótesis sobre las causas de nuevas operaciones en el hombre luego de la extirpación de un quiste hidatídico lo que podría liberar el freno inmunitario sobre dichas oncósferas.

The immune response to Echinococcus granulosus in sheep has not been extensively investigated. The objective of this study was to increase the information on the physiopathology of E. granulosus and the immune response elicited in sheep. Animals were experimentally inoculated with three different doses of E. granulosus eggs and the immune response was evaluated over 500 days using enzyme immunoassay with three antigenic preparations: total hydatid fluid, purified fraction of hydatid fluid and purified lipoprotein fraction. Sheep were slaughtered at different intervals to observe the macroscopic and microscopic development of the parasite. Immune response was detected at 10 days and was maintained throughout the observation period, being initially proportional to the load of inoculated eggs and then decreasing over time. Fertile cysts were identified 10 months after inoculation and live onchosphere 500 days after inoculation. Antibody response to E. granulosus in sheep preceded hydatid fluid formation and was generated by the mobility of the onchosphere. Early histological identification of fertile cysts indicates that feeding dogs with viscera of young sheep can produce cycles of infection. Furthermore, the presence of live onchosphere in the liver here found contributes to a better knowledge of the pathogenesis of this disease it could be hypothetically considered as a cause for the repeated surgeries necessary in man after the extirpation of a hydatid cyst.

Perfil sorológico para circovírus suíno tipo 2 em granjas comerciais de suínos no Brasil / Serological profiles to porcine circovirus type 2 antibodies in Brazil

A técnica de imunoperoxidase em monocamada de células (IPMC) para demonstração de anticorpos contra o circovírus suíno tipo 2 (CVS2) foi empregada para a investigação sorológica em oito granjas de suínos destinadas à produção comercial. Das 240 amostras de soros testadas, 229 (95,4%) foram reagentes com títulos que variaram de 20 até 10.240. Títulos de anticorpos foram detectados nas faixas etárias de duas a três semanas até animais acima de 24 semanas e encontrados em granjas com e sem a síndrome multissistêmica do definhamento (SMD). A média dos títulos de anticorpos revelou diferenças estatísticas (P<0,05) nas faixas etárias de 11 a 13 e 14 a 22 semanas nos animais oriundos de granjas com e sem a SMD. Os resultados refletem a importância de conhecer o perfil sorológico do rebanho e assegurar a implantação de um efetivo cronograma de vacinação contra o CVS2.

The immunoperoxidase in monolayer cells (IPMC) technique for the demonstration of antibodies against type 2 porcine circovirus (PCV2) was used for the serological investigation in eight industrial swine farms. Out of the 240 tested sera, 229 (95,4%) were reactive with titers which varied from 20 up to 10.240. Titers of antibodies were detected in pigs from two to three weeks of age up to above 24 weeks of age, and were observed in farms with and without clinical signs indicative of the post-weaning multisystemic wasting syndrome (PMWS). Analysing the mean titers, statistical differences (P<0.05) were evidentiated in two age intervals, of 11 to 13 and 14 to 22 weeks of age. The results indicate the importance of determining the serological profiles of commercial swine herds, in order to enable the implantation of effective hygiene and vaccination protocols for PCV2 prevention.

Rapid detection of Salmonella sp. in pork samples using fluorescent in situ hybridization: a comparison with VIDAS®-SLM system and ISO 6579 cultural method / Detecção rápida de Salmonella sp. em amostras de suinos por hibridação in situ fluorescente: comparação com o sistema VIDAS®-SLM e com o método de cultura ISO 6579

This study reports the use of the fluorescent in situ hybridization (FISH) with Sal3 probe for Salmonella detection in swine carcasses inner surface (swab); and in the correspondent samples of ileum, ileocolic, and mandibular lymph nodes; and tonsils, after dilution (1:10) in buffered peptone water and a pre-enrichment step (37(0)C, 18h). In order to evaluate the efficiency of FISH, 235 naturally contaminated samples were simultaneously tested by the cultural method (ISO 6579) and by the Vitek Immuno Diagnostic Assay System (VIDAS®) - Salmonella (SLM) system. The cultural method identified 39 positive samples. From these, VIDAS®- SLM only detected 23. FISH identified 115 positive samples. This difference was highly significant (P<0.001). From positive samples, 32 were also confirmed by the cultural method. The results indicate FISH as a promising tool for rapid Salmonella detection in samples of pork and swine carcasses

Descreve-se a utilização da técnica de hibridação in situ fluorescente (FISH), utilizando a sonda Sal3, para detecção de Salmonella na superfície interna de carcaças de suínos (zaragatoa), em amostras correspondentes de íleo, linfonodos ileocólicos, linfonodos mandibulares e amígdalas, após terem sido diluídas (1:10) e submetidas a uma fase de pré-enriquecimento em água peptonada tamponada (a 37ºC, 18h). Para avaliar a eficácia do método FISH, analisaram-se 235 amostras naturalmente contaminadas, usando o método de cultura ISO 6579 e o sistema Vitek Immuno Diagnostic Assay System (VIDAS®)- Salmonella (SLM), simultaneamente. O método de cultura identificou 39 amostras positivas, das quais o método VIDAS®-SLM detectou apenas 23. O método FISH identificou 115 amostras positivas. A diferença entre os métodos foi altamente significativa (P<0.001). Das amostras positivas, 32 foram confirmadas pelo método de cultura. Os resultados indicam que a FISH constitui uma promissora técnica de detecção rápida de Salmonella em amostras de suínos abatidos para consumo

Circadian variations of serum thyroxine, free thyroxine and 3,5,3'triiodothyronine concentrations in healthy dogs

This study was to determine the daily fluctuation of serum thyroxine (tT4), free thyroxine (fT4), 3,5,3'-triiodothyronine (T3) concentrations in healthy dogs. Thyroid function of these dogs was evaluated on the basis of results of TSH response test. Samples for the measurement of serum tT4, fT4, and T3 concentrations were obtained at 3- hour intervals from 8 : 00 to 20 : 00. Serum tT4, fT4, and T3 concentrations were measured by the enzyme chemiluminescent immunoassay (ECLIA). Mean T3 concentrations had no significant differences according to the sample collection time during the day. Mean tT4 and fT4 concentrations at 11 : 00 were 3.28 +/- 0.86 microgram/dl and 1.30 +/- 0.37 ng/dl, respectively and mean tT4 and fT4 at 14:00 were 3.54 +/- 1.15 microgram/dl and 1.35 +/- 0.12 ng/dl, respectively. These concentrations were significantly high compared with tT4 and fT4 concentrations at 8:00, which were 1.75 +/- 0.75 microgram/dl and 0.97 +/- 0.25 ng/dl, respectively (p < 0.05). According to the sample collection time, mean tT4 and fT4 concentrations changed with similar fluctuation during the day. Based on these results, it was considered that measurement of serum tT4 and fT4 concentrations from 11 : 00 to 14 : 00 might more easily diagnose the canine hypothyroidism in practice.

Ensaio imunoenzimático comercial no diagnóstico sorológico das infecçöes por herpesvírus bovino 1 / A commercial enzyme immune assay in serodiagnosis of bovine herpesvirus 1 infections

Avaliou-se o desempenho de um ensaio imunoenzimático, obtido de fonte comercial, na identificaçäo de anticorpos contra herpesvírus bovino tipo 1 (BHV-1), induzidos tanto por infecçäo natural quanto por vacinaçäo, em 1000 amostras de soros sanguíneos de bovinos. A análise comparativa dos resultados obtidos no sistema avaliado e na técnica padräo de soroneutralizaçäo mostrou uma concordância de 97,05 por cento (K=0,94) entre as duas metodologias de diagnóstico sorológico.

Enterite hemorrágica causada por Escherichia coli em leitöes desmamados criados ao ar livre / Haemorrhagic enteritis caused by Escherichia coli in wraned piglets mared outdoors

Foram estudados dois surtos de enterite hemorrágica em leitöes desmamados, de um sistema de criaçäo de suínos ao ar livre, instalado no sul do Brasil. Colheu-se material para exames parasitológico, bacteriológico, anátomo e histopatológico e histoquímico utilizando-se a técnica de imunoperoxidase de animais clinicamente examinados. Nos surtos identificou-se Escherichia coli como agente causador da enterite. As amostras de E. coli isoladas foram soroagrupadas como 0141:K85ab, K88ab e 045:K"E65" (primeiro surto) e 0138:81, 0141:K85ab e 0115:K"V165" (segundo surto). Em cortes histológicos de várias partes do intestino delgado dos leitöes, onde se isolou 0141:K85ab, K88ab; 0141:K85ab e 0138:K81, examinados pela técnica de imunoperoxidase, observaram-se bactérias especificamente coradas e aderidas ao epitélio intestinal